一种红腰豆酶解多肽及其促进创面愈合的用途
阅读说明：本技术 一种红腰豆酶解多肽及其促进创面愈合的用途 (Red kidney bean enzymolysis polypeptide and application thereof in promoting wound healing ) 是由 鲍会梅 曹兴玉 于 2021-08-09 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种红腰豆酶解多肽及其促进创面愈合的用途。本发明提供了一种来源于红腰豆的酶解多肽,采用的酶为碱性蛋白酶,其分子量为20～30kDa,该酶解多肽可以有效促进人皮肤成纤维细胞的增殖,因此具有促进创面愈合的作用,具有开发制备成促进创面愈合的药物或者化妆品的前景。(The invention discloses a red kidney bean enzymolysis polypeptide and application thereof in promoting wound healing. The invention provides an enzymolysis polypeptide from red kidney beans, the adopted enzyme is alkaline protease, the molecular weight of the alkaline protease is 20-30 kDa, and the enzymolysis polypeptide can effectively promote the proliferation of human skin fibroblasts, so that the enzymolysis polypeptide has the effect of promoting wound healing and has the prospect of developing and preparing medicines or cosmetics for promoting wound healing.)
技术领域
本发明属于食品化学领域，具体涉及一种红腰豆酶解多肽及其促进创面愈合的用途。
背景技术
红腰豆(Phaseolus vulgarisLinn.)是豆类中营养较为丰富的一种，含丰富的维他命A、B、C及E，也含丰富的抗氧物、蛋白质、食物纤维及铁质、镁、磷等多种营养素，有补血、增强免疫力、帮助细胞修补及防衰老等功效。
目前，对红腰豆中高分子量化学成分研究较多的为多糖。现有技术表明，红腰豆中的多糖是红腰豆的主要活性成分，而多糖是一类具有多种生物活性功能的高分子化合物，具有多种药理活性特性，如延缓衰老、调节免疫细胞、抗病毒、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤、抗血栓、降血糖和血脂等特性(参考文献：黎英等，超声波辅助酶法提取红腰豆多糖工艺优化，农业工程学报，2015年8月第31卷第15期)。
蛋白质也是食物、尤其种子类食物中非常重要的一类成分。但是，食物中的蛋白质成分分子量高，难以被人体直接吸收利用。
酶解是一种研究利用蛋白质的重要方法，酶解后形成的多肽克服了蛋白质分子量过大的缺陷，吸收利用效果较好。但是，不可否认的是，由于酶解的不确定性，酶解后的多肽是否具有活性存在极大的不确定性，这增加了研究人员的研究难度。
为了充分利用红腰豆的资源优势，挖掘开发红腰豆的商业价值，特提出本发明创造。
发明内容
本发明的目的在于提供一种红腰豆酶解多肽及其促进创面愈合的用途。
本发明技术方案为：
一种红腰豆酶解多肽，为红腰豆中的一种分子量20～30kDa的酶解多肽。
进一步地，所述酶为碱性蛋白酶。
更进一步地，所述的红腰豆酶解多肽通过如下步骤制备：
碱提酸沉提取总蛋白：取适量红腰豆粉末，加适量水混合配成混合液，用氢氧化钠溶液调节混合液pH＝10.2，水浴提取，离心取上清液，用盐酸溶液调节pH＝5.5，离心收集沉淀，将沉淀用去离子水洗涤；
碱性蛋白酶酶解：称取适量总蛋白，加适量水配成混合液，用氢氧化钠溶液调节混合液pH＝8.5，控制温度为50℃，加入碱性蛋白酶酶解，酶解结束后于沸水浴灭酶，离心取上清液；
超滤：按照说明书使用小型切向流超滤系统进行超滤分级，将上述上清液依次通过20、30kDa分子量的超过滤膜进行分离，收集分子量为20～30kDa的组分，冷冻干燥。
更更进一步地，碱提酸沉提取总蛋白步骤中的离心条件为4500r/min转速离心20min。
更更进一步地，碱性蛋白酶酶解步骤中加酶量以底物计算为5000U/g。
更更进一步地，碱性蛋白酶酶解步骤中酶解时间为120min，酶解过程中每隔10min测定pH并调节pH＝8.5。
更更进一步地，碱性蛋白酶酶解步骤中离心条件为12000r/min离心10min。
上述红腰豆酶解多肽用于制备促进人皮肤成纤维细胞增殖的药物或者化妆品的用途。
上述红腰豆酶解多肽用于制备促进创面愈合的药物或者化妆品的用途。
本发明技术效果为：
本发明提供了一种来源于红腰豆的酶解多肽，采用的酶为碱性蛋白酶，其分子量为20～30kDa，该酶解多肽可以有效促进人皮肤成纤维细胞的增殖，因此具有促进创面愈合的作用，具有开发制备成促进创面愈合的药物或者化妆品的前景。
附图说明
图1为各组细胞增殖活力的柱状图对比。
具体实施方式
实施例1：
1、原料、仪器和试剂
将成熟的红腰豆种子烘干、粉碎，过60目筛，备用。
Labscale TFF System小型切向流超滤系统购自美国Millipore公司。
水均为去离子水，碱性蛋白酶购自北京索莱宝科技。
2、制备方法
碱提酸沉提取总蛋白：取适量红腰豆粉末，按料液比1:10(g:mL)加水混合配成混合液，用1mol/L的氢氧化钠溶液调节混合液pH＝10.2，60℃水浴提取3h，然后以4500r/min转速离心20min取上清液，用1mol/L的盐酸溶液调节pH＝5.5，以4500r/min转速离心20min收集沉淀，将沉淀用去离子水洗涤3次。
碱性蛋白酶酶解：称取适量总蛋白，按料液比1:10(g:mL)加水混合配成混合液，用1mol/L的氢氧化钠溶液调节混合液pH＝8.5，控制温度为50℃，加入碱性蛋白酶酶解，加酶量以底物计算为5000U/g，酶解时间为120min，酶解过程中每隔10min测定pH并调节pH＝8.5。酶解结束后于沸水浴下灭酶10min，12000r/min离心10min取上清液。
超滤：按照说明书使用小型切向流超滤系统进行超滤分级，将上述上清液依次通过10、20、30kDa分子量的超过滤膜进行分离，依次制备得到分子量为≤10、10～20、20～30和≥30kDa的组分，将分子量10～20、20～30kDa的组分分别冷冻干燥得到酶解多肽A和酶解多肽B。
酶解多肽A和酶解多肽B于4℃保存，用于实施例2活性测试。
实施例2：
1、实验方法
将对数生长期的人皮肤成纤维细胞(HSFs)消化，用DMEM培养基重悬制成1×105个/mL悬液，以1×104个/孔接种于96孔板中，每孔100μL，分为多肽A低浓度组、多肽A高浓度组、多肽B低浓度组、多肽B高浓度组和对照组，培养24h后，多肽A低浓度、高浓度组分别更换为含有100、200μg/mL酶解多肽A的DMEM培养基继续培养，多肽B低浓度、高浓度组分别更换为含有100、200μg/mL酶解多肽B的DMEM培养基继续培养，对照组更换为新鲜的DMEM培养基继续培养。继续培养48h后，吸弃培养液，PBS洗涤2～3次，每孔加入100μL浓度为0.5mg/L的MTT溶液，孵育4h，小心吸弃孔内液体，每孔加100μL DMSO，振荡10min，在酶标仪490nm波长下测定各孔光吸收值OD490nm，根据公式计算细胞增殖活力：
细胞增殖活力＝多肽组OD490nm/对照组OD490nm×100％。
2、实验结果
各组细胞增殖活力如表1、图1所示，100、200μg/mL酶解多肽A对HSFs的促增殖活性不明显，100、200μg/mL酶解多肽B可以有效促进HSFs增殖，且可见剂量效应。
表1各组细胞增殖活力
本领域技术人员知道，人皮肤成纤维细胞是人体皮肤细胞的重要组成部分，皮肤成纤维细胞是参与创面修复的主要修复细胞，其功能正常与否直接影响创面肉芽组织生成和创面愈合(参考文献：何秀娟等，皮肤成纤维细胞在创面愈合中的研究进展，中华损伤与修复杂志，2021年第16卷第1期)。本发明研究结果表明，本发明提供的酶解多肽B可以有效促进人皮肤成纤维细胞的增殖，因此具有促进创面愈合的作用，具有开发制备成促进创面愈合的药物或者化妆品的前景。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：富锌酵母多肽及其制备方法、应用