发明内容

本发明的第一方面提供了一种式IV的化合物：

以及其盐和溶剂化物，其中：

R²和R^2’为H；

R⁶和R⁹独立地选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、NRR’、硝基、Me₃Sn以及卤素；

其中R和R’独立地选自任选取代的C_1-12烷基、C_3-20杂环基以及C_5-20芳基；

并且

(a)R⁷选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、NRR’、硝基、Me₃Sn以及卤素；

R^7’选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、NRR’、硝基、Me₃Sn以及卤素；或

(b)R⁷和R⁷'一起形成一个基团，其为：(i)-O-(CH₂)_n-O-，其中n为7至16；或(ii)-O-(CH₂CH₂O)_m-，其中m为2至5；

R″为C_3-12亚烷基，所述链可被一个或多个杂原子，例如O、S、NR^N2(其中R^N2为H或C_1-4烷基)，和/或芳环，例如苯或吡啶中断；

Y和Y'选自O、S或NH；

R^6’和R^9’分别选自与R⁶和R⁹相同的基团；

并且

(i-a)R¹⁰和R¹¹一起在它们所结合的N原子与C原子之间形成双键；或

(i-b)R¹⁰为H并且R¹¹选自OH和OR^A，其中R^A为C_1-4烷基；或(i-c)R¹⁰和R¹¹均为H；

并且

(ii-a)R²⁰和R²¹一起在它们所结合的N原子与C原子之间形成双键；或

(ii-b)R²⁰为H并且R²¹选自OH和OR^B，其中R^B为C_1-4烷基；或(ii-c)R²⁰和R²¹均为H。

本发明的第二方面包括一种具有式I的化合物：

以及其盐和溶剂化物，其中：

Y、Y’、R”、R²、R^2’、R⁶、R^6’、R⁷、R^7’、R⁹和R^9’如本发明的第一方面中所定义；

R^11b选自OH、OR^A，其中R^A为C_1-4烷基；并且

R^L为用于连接至细胞结合剂的接头，其选自：

(iiia)：

其中

Q为：

其中Q^X是使得Q为氨基酸残基、二肽残基或三肽残基；

X为：

其中a＝0至5，b＝0至16，c＝0或1，d＝0至5；

G^L为用于连接至配体单元的接头；以及

(iiib)：

其中R^L1和R^L2独立地选自H和甲基，或与它们所结合的碳原子一起形成亚环丙基或亚环丁基；并且e为0或1；

并且：

(a)R³⁰和R³¹一起在它们所结合的N原子与C原子之间形成双键；或

(b)R³⁰为H并且R³¹选自OH和OR^B，其中R^B为C_1-4烷基；

(c)R³⁰和R³¹均为H；或

(d)R³¹为OH或OR^B，其中R^B为C_1-4烷基并且R³⁰选自：

(i)

(ii)

(iii)其中R^Z选自：

(z-i)

(z-ii)OC(＝O)CH₃；

(z-iii)NO₂；

(z-iv)OMe；

(z-v)葡萄糖醛酸苷；

(z-vi)NH-C(＝O)-X₁-NHC(＝O)X₂-NH-C(＝O)-R^ZC，其中-C(＝O)-X₁-NH-和-C(＝O)-X₂-NH-代表天然氨基酸残基并且R^ZC选自Me、OMe、CH₂CH₂OMe和(CH₂CH₂O)₂Me。

本发明的第三方面提供了式II的缀合物：

L-(D^L)_p(II)

其中L为配体单元(即，靶向剂)，D^L为式I’的药物接头单元：

其中R²、R^2’、R⁶、R⁷、R⁹、R^11b、Y、R”、Y’、R^6’、R^7’、R^9’、R³⁰和R³¹如本发明的第二方面中所定义；

R^LL为用于连接至细胞结合剂的接头，其选自：

(iiia)：

其中Q和X如第一方面中所定义并且G^LL为连接至配体单元的接头；以及

(iiib)：

其中R^L1和R^L2如第一方面中所定义；

其中p为1至20的整数。

下文更全面地描述的配体单元为结合至靶标部分的靶向剂。配体单元可以，例如，特异性地结合细胞组分(细胞结合剂)或其他目标靶分子。配体单元可以是，例如，蛋白质、多肽或肽，如抗体、抗体的抗原结合片段，或其他结合剂，如Fc融合蛋白。

本发明的第四方面提供了本发明的第三方面的缀合物在制造用于治疗增殖性疾病的药物中的用途。第四方面还提供了用于治疗增殖性疾病的本发明的第三方面的缀合物。第四方面还提供了一种治疗增殖性疾病的方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量的本发明的第二方面的缀合物。

本领域的普通技术人员能够容易地确定候选缀合物是否治疗任何特定细胞类型的增殖性病状。例如，可以方便地用来评估由特定化合物提供的活性的测定描述于以下实施例中。

本发明的第五方面提供了本发明的第三方面的缀合物的合成，其包括将本发明的第二方面的化合物(药物接头)与配体单元缀合。

式IV的化合物是由第三方面的缀合物释放的弹头。

定义

取代基

如本文所用的短语“任选取代的”涉及可为未取代的或可为取代的亲本基团。

除非另外指明，否则如本文所用的术语“取代的”涉及携带一个或多个取代基的亲本基团。术语“取代基”在本文中以常规意义使用并且是指共价连接至亲本基团或在适当时与亲本基团融合的化学部分。多种取代基是众所周知的，并且它们的形成和引入到各种亲本基团中的方法也是众所周知的。

取代基的实例在下面更详细地描述。

C_1-12烷基：如本文所用的术语“C_1-12烷基”涉及通过从具有1至12个碳原子的烃化合物的碳原子处移除氢原子获得的一价部分，其可以是脂族或脂环族的，并且可以是饱和或不饱和的(例如部分不饱和的、完全不饱和的)。如本文所用的术语“C_1-4烷基”涉及通过从具有1至4个碳原子的烃化合物的碳原子处移除氢原子获得的一价部分，其可以是脂族或脂环族的，并且可以是饱和或不饱和的(例如部分不饱和的、完全不饱和的)。因此，术语“烷基”包括以下论述的亚类烯基、炔基、环烷基等。

饱和烷基的实例包括但不限于甲基(C₁)、乙基(C₂)、丙基(C₃)、丁基(C₄)、戊基(C₅)、己基(C₆)以及庚基(C₇)。

饱和直链烷基的实例包括但不限于甲基(C₁)、乙基(C₂)、正丙基(C₃)、正丁基(C₄)、正戊基(戊基)(C₅)、正己基(C₆)以及正庚基(C₇)。

饱和支链烷基的实例包括异丙基(C₃)、异丁基(C₄)、仲丁基(C₄)、叔丁基(C₄)、异戊基(C₅)以及新戊基(C₅)。

C_2-12烯基：如本文所用的术语“-C_2-12烯基”涉及具有一个或多个碳-碳双键的烷基。

不饱和烯基的实例包括但不限于乙烯基(乙烯基，-CH＝CH₂)、1-丙烯基(-CH＝CH-CH₃)、2-丙烯基(烯丙基，-CH-CH＝CH₂)、异丙烯基(1-甲基乙烯基，-C(CH₃)＝CH₂)、丁烯基(C₄)、戊烯基(C₅)以及己烯基(C₆)。

C_2-12炔基：如本文所用的术语“C_2-12炔基”涉及具有一个或多个碳-碳三键的烷基。

不饱和炔基的实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)和2-丙炔基(炔丙基，-CH₂-C≡CH)。

C_3-12环烷基：如本文所用的术语“C_3-12环烷基”涉及也是环基的烷基；即，通过从环状烃(碳环)化合物的脂环环原子处移除氢原子获得的一价部分，所述部分具有3至7个碳原子，包括3至7个环原子。

环烷基的实例包括但不限于衍生自以下的那些：

饱和的单环烃化合物：

环丙烷(C₃)、环丁烷(C₄)、环戊烷(C₅)、环己烷(C₆)、环庚烷(C₇)、甲基环丙烷(C₄)、二甲基环丙烷(C₅)、甲基环丁烷(C₅)、二甲基环丁烷(C₆)、甲基环戊烷(C₆)、二甲基环戊烷(C₇)以及甲基环己烷(C₇)；

不饱和的单环烃化合物：

环丙烯(C₃)、环丁烯(C₄)、环戊烯(C₅)、环己烯(C₆)、甲基环丙烯(C₄)、二甲基环丙烯(C₅)、甲基环丁烯(C₅)、二甲基环丁烯(C₆)、甲基环戊烯(C₆)、二甲基环戊烯(C₇)以及甲基环己烯(C₇)；以及

饱和多环烃化合物：

降蒈烷(norcarane)(C₇)、降蒎烷(norpinane)(C₇)、降莰烷(norbornane)(C₇)。

C_3-20杂环基：如本文所用的术语“C_3-20杂环基”涉及通过从杂环化合物的环原子处移除氢原子获得的一价部分，所述部分具有3至20个环原子，其中1至10个为环杂原子。优选地，各环均具有3至7个环原子，其中1至4个环原子为环杂原子。

在上下文中，前缀(例如C_3-20、C_3-7、C_5-6等)表示环原子的数目或环原子的数目的范围，无论为碳原子还是杂原子。例如，如本文所用的术语“C_5-6杂环基”涉及具有5或6个环原子的杂环基。

单环杂环基的实例包括但不限于衍生自以下的杂环基：

N₁：氮丙啶(C₃)、氮杂环丁烷(C₄)、吡咯烷(四氢吡咯)(C₅)、吡咯啉(例如，3-吡咯啉、2,5-二氢吡咯)(C₅)、2H-吡咯或3H-吡咯(异吡咯、异唑)(C₅)、哌啶(C₆)、二氢吡啶(C₆)、四氢吡啶(C₆)、吖庚因(C₇)；

O₁：环氧乙烷(C₃)、氧杂环丁烷(C₄)、氧杂环戊烷(四氢呋喃)(C₅)、氧杂环戊二烯(oxole)(二氢呋喃)(C₅)、噁烷(四氢吡喃)(C₆)、二氢吡喃(C₆)、吡喃(C₆)、氧杂环庚三烯(C₇)；

S₁：硫杂丙环(thiirane)(C₃)、硫杂环丁烷(thietane)(C₄)、硫杂环戊烷(thiolane)(四氢噻吩)(C₅)、噻烷(四氢噻喃)(C₆)、硫杂环庚烷(thiepane)(C₇)；

O₂：二氧戊烷(C₅)、二噁烷(C₆)和二氧杂环庚烷(C₇)；

O₃：三噁烷(C₆)；

N₂：咪唑烷(C₅)、吡唑烷(二氮杂环戊烷(diazolidine))(C₅)、咪唑啉(C₅)、吡唑啉(二氢吡唑)(C₅)、哌嗪(C₆)；

N₁O₁：四氢噁唑(C₅)、二氢噁唑(C₅)、四氢异噁唑(C₅)、二氢异噁唑(C₅)、吗啉(C₆)、四氢噁嗪(C₆)、二氢噁嗪(C₆)、噁嗪(C₆)；

N₁S₁：噻唑啉(C₅)、噻唑烷(C₅)、硫代吗啉(C₆)；

N₂O₁：噁二嗪(C₆)；

O₁S₁：噁噻唑(oxathiole)(C₅)和氧硫杂环己烷(oxathiane)(噻噁烷(thioxane))(C₆)；以及

N₁O₁S₁：噁噻嗪(C₆)。

取代的单环杂环基的实例包括衍生自呈环状形式的糖类的杂环基，所述糖类例如呋喃糖(C₅)，如阿拉伯呋喃糖、来苏呋喃糖、核呋喃糖和木呋喃糖；以及吡喃糖(C₆)，如阿洛吡喃糖(allopyranose)、阿卓吡喃糖(altropyranose)、葡萄吡喃糖、甘露吡喃糖、古洛吡喃糖(gulopyranose)、艾杜吡喃糖(idopyranose)、半乳吡喃糖以及太洛吡喃糖(talopyranose)。

C_5-20芳基：如本文所用的术语“C_5-20芳基”涉及通过从芳族化合物的芳族环原子处移除氢原子获得的一价部分，所述部分具有3至20个环原子。如本文所用的术语“C_5-7芳基”涉及通过从芳族化合物的芳族环原子处移除氢原子获得的一价部分，所述部分具有5至7个环原子并且如本文所用的术语“C_5-10芳基”涉及通过从芳族化合物的芳族环原子处移除氢原子获得的一价部分，所述部分具有5至10个环原子。优选地，每个环具有5至7个环原子。

在上下文中，前缀(例如C_3-20、C_5-7、C_5-6、C_5-10等)表示环原子的数目或环原子的数目的范围，无论为碳原子还是杂原子。例如，如本文所用的术语“C_5-6芳基”涉及具有5或6个环原子的芳基。

环原子可以全部是碳原子，如在“碳芳基”中。

碳芳基的实例包括但不限于衍生自苯(即苯基)(C₆)、萘(C₁₀)、薁(azulene)(C₁₀)、蒽(C₁₄)、菲(C₁₄)、萘并萘(C₁₈)以及嵌二萘(C₁₆)的那些。

包括其中至少一个为芳环的稠环的芳基的实例包括但不限于衍生自茚满(例如2,3-二氢-1H-茚)(C₉)、茚(C₉)、异茚(C₉)、四氢化萘(1,2,3,4-四氢萘(C₁₀)、二氢苊(C₁₂)、芴(C₁₃)、非那烯(phenalene)(C₁₃)、醋菲(acephenanthrene)(C₁₅)以及醋蒽(aceanthrene)(C₁₆)的基团。

另选地，环原子可包括一个或多个杂原子，如在“杂芳基”中。单环杂芳基的实例包括但不限于衍生自以下的那些：

N₁：吡咯(唑)(C₅)、吡啶(吖嗪)(C₆)；

O₁：呋喃(氧杂环戊二烯)(C₅)；

S₁：噻吩(硫杂环戊二烯)(C₅)；

N₁O₁：噁唑(C₅)、异噁唑(C₅)、异噁嗪(C₆)；

N₂O₁：噁二唑(呋咱)(C₅)；

N₃O₁：噁三唑(C₅)；

N₁S₁：噻唑(C₅)、异噻唑(C₅)；

N₂：咪唑(1,3-二唑)(C₅)、吡唑(1,2-二唑)(C₅)、哒嗪(1,2-二嗪)(C₆)、嘧啶(1,3-二嗪)(C₆)(例如，胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶)、吡嗪(1,4-二嗪)(C₆)；

N₃：三唑(C₅)、三嗪(C₆)；以及，

N₄：四唑(C₅)。

包含稠环的杂芳基的实例包括但不限于：

C₉(具有2个稠环)，其衍生自苯并呋喃(O₁)、异苯并呋喃(O₁)、吲哚(N₁)、异吲哚(N₁)、中氮茚(N₁)、吲哚啉(N₁)、异吲哚啉(N₁)、嘌呤(N₄)(例如，腺嘌呤、鸟嘌呤)、苯并咪唑(N₂)、吲唑(N₂)、苯并噁唑(N₁O₁)、苯并异噁唑(N₁O₁)、苯并二噁茂(O₂)、苯并呋咱(N₂O₁)、苯并三唑(N₃)、苯并硫代呋喃(S₁)、苯并噻唑(N₁S₁)、苯并噻二唑(N₂S)；

C₁₀(具有2个稠环)，其衍生自苯并吡喃(O₁)、异苯并吡喃(O₁)、苯并二氢吡喃(O₁)、异苯并二氢吡喃(O₁)、苯并噁烷(O₂)、喹啉(N₁)、异喹啉(N₁)、喹嗪(N₁)、苯并噁嗪(N₁O₁)、苯并二嗪(N₂)、吡啶并吡啶(N₂)、喹喔啉(N₂)、喹唑啉(N₂)、噌啉(N₂)、酞嗪(N₂)、二氮杂萘(N₂)、蝶啶(N₄)；

C₁₁(具有2个稠环)，其衍生自苯并二氮杂(N₂)；

C₁₃(具有3个稠环)，其衍生自咔唑(N₁)、二苯并呋喃(O₁)、二苯并噻吩(S₁)、咔啉(N₂)、萘嵌间二氮杂苯(N₂)、吡啶并吲哚(N₂)；以及，

C₁₄(具有3个稠环)，其衍生自吖啶(N₁)、呫吨(O₁)、噻吨(S₁)、二苯并对二噁英(oxanthrene)(O₂)、氧硫杂蒽(O₁S₁)、吩嗪(N₂)、吩噁嗪(N₁O₁)、吩噻嗪(N₁S₁)、噻蒽(S₂)、菲啶(N₁)、菲咯啉(N₂)、吩嗪(N₂)。

无论单独还是作为另一取代基的一部分的以上基团均可自身任选地被一个或多个选自自身以及以下列出的另外取代基的基团取代。

卤素：-F、-Cl、-Br和-I。

羟基：-OH。

醚：-OR，其中R是醚取代基，例如，C_1-7烷基(也称为C_1-7烷氧基，以下进行讨论)、C_3-20杂环基(也称为C_3-20杂环氧基)或C_5-20芳基(也称为C_5-20芳基氧基)，优选C_1-7烷基。

烷氧基：-OR，其中R为烷基，例如，C_1-7烷基。C_1-7烷氧基的实例包括但不限于-OMe(甲氧基)、-OEt(乙氧基)、-O(nPr)(正丙氧基)、-O(iPr)(异丙氧基)、-O(nBu)(正丁氧基)、-O(sBu)(仲丁氧基)、-O(iBu)(异丁氧基)以及-O(tBu)(叔丁氧基)。

缩醛：-CH(OR¹)(OR²)，其中R¹和R²独立地为缩醛取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基，或在“环状”缩醛基团的情况下，R¹和R²，与它们所连接的两个氧原子，和它们所连接的碳原子一起，形成具有4至8个环原子的杂环。缩醛基团的实例包括但不限于-CH(OMe)₂、-CH(OEt)₂和-CH(OMe)(OEt)。

半缩醛：-CH(OH)(OR¹)，其中R¹为半缩醛取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。半缩醛基团的实例包括但不限于-CH(OH)(OMe)和-CH(OH)(OEt)。

缩酮：-CR(OR¹)(OR²)，其中R¹和R²如对于缩醛所定义，并且R是除氢之外的缩酮取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。缩酮基团的实例包括但不限于-C(Me)(OMe)₂、-C(Me)(OEt)₂、-C(Me)(OMe)(OEt)、-C(Et)(OMe)₂、-C(Et)(OEt)₂以及-C(Et)(OMe)(OEt)。

半缩酮：-CR(OH)(OR¹)，其中R¹如对于半缩醛所定义，并且R是除氢之外的半缩酮取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。半缩醛基团的实例包括但不限于-C(Me)(OH)(OMe)、-C(Et)(OH)(OMe)、-C(Me)(OH)(OEt)以及-C(Et)(OH)(OEt)。

氧代基(酮、-酮)：＝O。

硫酮(thione)(硫酮(thioketone))：＝S。

亚氨基(亚胺)：＝NR，其中R为亚氨基取代基，例如，氢、C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选氢或C_1-7烷基。酯基的实例包括但不限于＝NH、＝NMe、＝NEt及＝NPh。

甲酰基(醛、甲醛)：-C(＝O)H。

酰基(酮基)：-C(＝O)R，其中R是酰基取代基，例如，C_1-7烷基(也称为C_1-7烷基酰基或C_1-7烷酰基)、C_3-20杂环基(也称为C_3-20杂环酰基)或C_5-20芳基(也称为C_5-20芳基酰基)，优选C_1-7烷基。酰基的实例包括但不限于-C(＝O)CH₃(乙酰基)、-C(＝O)CH₂CH₃(丙酰基)、-C(＝O)C(CH₃)₃(叔丁酰基)和-C(＝O)Ph(苯甲酰基、酰苯基(phenone))。

羧基(羧酸)：-C(＝O)OH。

硫代羧基(硫代羧酸)：-C(＝S)SH。

硫醇羧基(硫醇羧酸)：-C(＝O)SH。

硫酮羧基(硫酮羧酸)：-C(＝S)OH。

亚胺酸：-C(＝NH)OH。

异羟肟酸：-C(＝NOH)OH。

酯(羧酸酯、羧酸的酯、氧羰基)：-C(＝O)OR，其中R是酯取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。酯基的实例包括但不限于-C(＝O)OCH₃、-C(＝O)OCH₂CH₃、-C(＝O)OC(CH₃)₃和-C(＝O)OPh。

酰氧基(反酯)：-OC(＝O)R，其中R是酰氧基取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。酰氧基的实例包括但不限于-OC(＝O)CH₃(乙酰氧基)、-OC(＝O)CH₂CH₃、-OC(＝O)C(CH₃)₃、-OC(＝O)Ph和-OC(＝O)CH₂Ph。

氧基羰基氧基：-OC(＝O)OR，其中R是酯取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。酯基的实例包括但不限于-OC(＝O)OCH₃、-OC(＝O)OCH₂CH₃、-OC(＝O)OC(CH₃)₃和-OC(＝O)OPh。

氨基：-NR¹R²，其中R¹和R²独立地为氨基取代基，例如，氢、C_1-7烷基(也称为C_1-7烷基氨基或二-C_1-7烷基氨基)、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选H或C_1-7烷基，或，在“环状”氨基的情况下，R¹和R²与它们所连接的氮原子一起形成具有4至8个环原子的杂环。氨基可以是伯(-NH₂)、仲(-NHR¹)或叔(-NHR¹R²)，并且在阳离子形式中，可以是季(-⁺NR¹R²R³)。氨基的实例包括但不限于-NH₂、-NHCH₃、-NHC(CH₃)₂、-N(CH₃)₂、-N(CH₂CH₃)₂和-NHPh。环状氨基的实例包括但不限于氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉代以及硫吗啉代。

酰氨基(氨基甲酰基、氨甲酰基、氨基羰基、羧基酰胺)：-C(＝O)NR¹R²，其中R¹和R²独立地为氨基取代基，如对于氨基所定义。酰氨基的实例包括但不限于-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NHCH₃、-C(＝O)N(CH₃)₂、-C(＝O)NHCH₂CH₃和-C(＝O)N(CH₂CH₃)₂，以及其中R¹和R²与它们所连接的氮原子一起形成杂环结构的酰氨基，例如哌啶基羰基、吗啉代羰基、硫吗啉代羰基和哌嗪基羰基。

硫代酰氨基(硫代氨甲酰基)：-C(＝S)NR¹R²，其中R¹和R²独立地为氨基取代基，如对于氨基所定义。酰氨基的实例包括但不限于-C(＝S)NH₂、-C(＝S)NHCH₃、-C(＝S)N(CH₃)₂和-C(＝S)NHCH₂CH₃。

酰氨基(Acylamido)(酰基氨基(acylamino))：-NR¹C(＝O)R²，其中R¹是酰胺取代基，例如，氢、C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选氢或C_1-7烷基，并且R²是酰基取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选氢或C_1-7烷基。酰基酰胺基团的实例包括但不限于-NHC(＝O)CH₃、-NHC(＝O)CH₂CH₃和-NHC(＝O)Ph。R¹和R²可一起形成环状结构，如例如在琥珀酰亚胺基、马来酰亚胺基和邻苯二甲酰亚胺基中：

氨基羰基氧基：-OC(＝O)NR¹R²，其中R¹和R²独立地为氨基取代基，如对于氨基所定义。氨基羰基氧基的实例包括但不限于-OC(＝O)NH₂、-OC(＝O)NHMe、-OC(＝O)NMe₂和-OC(＝O)NEt₂。

脲基：-N(R¹)CONR²R³，其中R²和R³独立地为氨基取代基，如对于氨基所定义，并且R¹是脲基取代基，例如，氢、C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选氢或C_1-7烷基。脲基的实例包括但不限于-NHCONH₂、-NHCONHMe、-NHCONHEt、-NHCONMe₂、-NHCONEt₂、-NMeCONH₂、-NMeCONHMe、-NMeCONHEt、-NMeCONMe₂和-NMeCONEt₂。

胍基：-NH-C(＝NH)NH₂。

四唑基：具有四个氮原子和一个碳原子的五元芳环，

亚氨基：＝NR，其中R为亚氨基取代基，例如，氢、C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选H或C_1-7烷基。亚氨基的实例包括但不限于＝NH、＝NMe和＝NEt。

脒(脒基)：-C(＝NR)NR₂，其中每个R为脒取代基，例如，氢、C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选H或C_1-7烷基。脒基团的实例包括但不限于-C(＝NH)NH₂、-C(＝NH)NMe₂和-C(＝NMe)NMe₂。

硝基：-NO₂。

亚硝基：-NO。

叠氮基：-N₃。

氰基(腈、甲腈)：-CN。

异氰基：-NC。

氰酰基：-OCN。

异氰酰基：-NCO。

氰硫基(硫氰酰基)：-SCN。

异氰硫基(异硫氰酰基)：-NCS。

硫氢基(Sulfhydryl)(硫醇(thiol)、巯基(mercapto))：-SH。

硫醚(thioether)(硫醚(sulfide))：-SR，其中R为硫醚取代基，例如，C_1-7烷基(也称为C_1-7烷硫基)、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。C_1-7烷硫基的实例包括但不限于-SCH₃和-SCH₂CH₃。

二硫醚：-SS-R，其中R为二硫醚取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基(本文也称为C_1-7烷基二硫醚)。C_1-7烷基二硫醚基团的实例包括但不限于-SSCH₃和-SSCH₂CH₃。

锍化物(亚磺酰基、亚砜)：-S(＝O)R，其中R为锍化物取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。锍化物基团的实例包括但不限于-S(＝O)CH₃和-S(＝O)CH₂CH₃。

砜(磺酰基)：-S(＝O)₂R，其中R为砜取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基，包括例如氟化或全氟化的C_1-7烷基。砜基团的实例包括但不限于-S(＝O)₂CH₃(甲基磺酰基、甲磺酰基)、-S(＝O)₂CF₃(三氟甲磺酰基)、-S(＝O)₂CH₂CH₃(乙磺酰基)、-S(＝O)₂C₄F₉(九氟丁磺酰基)、-S(＝O)₂CH₂CF₃(三氟乙磺酰基)、-S(＝O)₂CH₂CH₂NH₂(牛磺酰基)、-S(＝O)₂Ph(苯基磺酰基、苯磺酰基)、4-甲基苯基磺酰基(甲苯磺酰基)、4-氯苯基磺酰基(氯苯磺酰基)、4-溴苯基磺酰基(溴苯磺酰基)、4-硝基苯基磺酰基(硝苯磺酰基)、2-萘磺酸酯(萘磺酰基)以及5-二甲基氨基-萘-1-基磺酸酯(丹磺酰基)。

亚磺酸(亚磺基)：-S(＝O)OH、-SO₂H。

磺酸(磺基)：-S(＝O)₂OH、-SO₃H。

亚磺酸酯(亚磺酸的酯)：-S(＝O)OR，其中R为亚磺酸酯取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。亚磺酸酯基团的实例包括但不限于-S(＝O)OCH₃(甲氧基亚磺酰基；甲基亚磺酸酯)和-S(＝O)OCH₂CH₃(乙氧基亚磺酰基；乙基亚磺酸酯)。

磺酸酯(磺酸的酯)：-S(＝O)₂OR，其中R为磺酸酯取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。磺酸酯基团的实例包括但不限于-S(＝O)₂OCH₃(甲氧基磺酰基；甲基磺酸酯)和-S(＝O)₂OCH₂CH₃(乙氧基磺酰基；乙基磺酸酯)。

亚磺酰氧基：-OS(＝O)R，其中R为亚磺酰氧基取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。亚磺酰氧基的实例包括但不限于-OS(＝O)CH₃和-OS(＝O)CH₂CH₃。

磺酰氧基：-OS(＝O)₂R，其中R为磺酰氧基取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。磺酰氧基的实例包括但不限于-OS(＝O)₂CH₃(甲磺酸酯)和-OS(＝O)₂CH₂CH₃(乙磺酸酯)。

硫酸酯：-OS(＝O)₂OR；其中R为硫酸酯取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。硫酸酯基团的实例包括但不限于-OS(＝O)₂OCH₃和-SO(＝O)₂OCH₂CH₃。

氨磺酰基(氨磺酰；亚磺酸酰胺；亚磺酰胺)：-S(＝O)NR¹R²，其中R¹和R²独立地为氨基取代基，如对于氨基所定义。氨磺酰基的实例包括但不限于-S(＝O)NH₂、-S(＝O)NH(CH₃)、-S(＝O)N(CH₃)₂、-S(＝O)NH(CH₂CH₃)、-S(＝O)N(CH₂CH₃)₂和-S(＝O)NHPh。

磺酰氨基(sulfonamido)(氨亚磺酰基；磺酸酰胺；磺酰胺)：-S(＝O)₂NR¹R²，其中R¹和R²独立地为氨基取代基，如对于氨基所定义。磺酰氨基的实例包括但不限于-S(＝O)₂NH₂、-S(＝O)₂NH(CH₃)、-S(＝O)₂N(CH₃)₂、-S(＝O)₂NH(CH₂CH₃)、-S(＝O)₂N(CH₂CH₃)₂和-S(＝O)₂NHPh。

磺氨基：-NR¹S(＝O)₂OH，其中R¹为氨基取代基，如对于氨基所定义。磺氨基的实例包括但不限于-NHS(＝O)₂OH和-N(CH₃)S(＝O)₂OH。

磺氨基：-NR¹S(＝O)₂R，其中R¹为氨基取代基，如对于氨基所定义，并且R为磺氨基取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。磺氨基的实例包括但不限于-NHS(＝O)₂CH₃和-N(CH₃)S(＝O)₂C₆H₅。

亚磺氨基：-NR¹S(＝O)R，其中R¹为氨基取代基，如对于氨基所定义，并且R为亚磺氨基取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。亚磺氨基的实例包括但不限于-NHS(＝O)CH₃和-N(CH₃)S(＝O)C₆H₅。

膦基(膦)：-PR₂，其中R为膦基取代基，例如，-H、C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选-H、C_1-7烷基或C_5-20芳基。膦基的实例包括但不限于-PH₂、-P(CH₃)₂、-P(CH₂CH₃)₂、-P(t-Bu)₂和-P(Ph)₂。

磷基：-P(＝O)₂。

氧膦基(氧化膦)：-P(＝O)R₂，其中R为氧膦基取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基或C_5-20芳基。氧膦基的实例包括但不限于-P(＝O)(CH₃)₂、-P(＝O)(CH₂CH₃)₂、-P(＝O)(t-Bu)₂和-P(＝O)(Ph)₂。

膦酸(膦酰基)：-P(＝O)(OH)₂。

膦酸酯(膦酰基酯)：-P(＝O)(OR)₂，其中R为膦酸酯取代基，例如，-H、C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选-H、C_1-7烷基或C_5-20芳基。膦酸酯基团的实例包括但不限于-P(＝O)(OCH₃)₂、-P(＝O)(OCH₂CH₃)₂、-P(＝O)(O-t-Bu)₂和-P(＝O)(OPh)₂。

磷酸(膦酰基氧基)：-OP(＝O)(OH)₂。

磷酸酯(膦酰基氧基酯)：-OP(＝O)(OR)₂，其中R为磷酸酯取代基，例如，-H、C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选-H、C_1-7烷基或C_5-20芳基。磷酸酯基团的实例包括但不限于-OP(＝O)(OCH₃)₂、-OP(＝O)(OCH₂CH₃)₂、-OP(＝O)(O-t-Bu)₂和-OP(＝O)(OPh)₂。

亚磷酸：-OP(OH)₂。

亚磷酸酯：-OP(OR)₂，其中R为亚磷酸酯取代基，例如，-H、C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选-H、C_1-7烷基或C_5-20芳基。亚磷酸酯基团的实例包括但不限于-OP(OCH₃)₂、-OP(OCH₂CH₃)₂、-OP(O-t-Bu)₂和-OP(OPh)₂。

亚磷酰胺：-OP(OR¹)-NR² ₂，其中R¹和R²为亚磷酰胺取代基，例如，-H、(任选取代的)C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选-H、C_1-7烷基或C_5-20芳基。亚磷酰胺基团的实例包括但不限于-OP(OCH₂CH₃)-N(CH₃)₂、-OP(OCH₂CH₃)-N(i-Pr)₂和-OP(OCH₂CH₂CN)-N(i-Pr)₂。

磷酰胺：-OP(＝O)(OR¹)-NR² ₂，其中R¹和R²为磷酰胺取代基，例如，-H、(任选取代的)C_1-7烷基、C_3-20杂环基或C_5-20芳基，优选-H、C_1-7烷基或C_5-20芳基。磷酰胺基团的实例包括但不限于-OP(＝O)(OCH₂CH₃)-N(CH₃)₂、-OP(＝O)(OCH₂CH₃)-N(i-Pr)₂和-OP(＝O)(OCH₂CH₂CN)-N(i-Pr)₂。

亚烷基

C_3-12亚烷基：如本文所用的术语“C_3-12亚烷基”涉及通过从具有3至12个碳原子(除非另外指出)的烃化合物上移除2个氢原子(从同一个碳原子处移除两个氢原子或从两个不同碳原子处各移除一个氢原子)而获得的双齿物部分，其可以是脂族的或脂环族的，并且可以是饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的。因此，术语“亚烷基”包括以下论述的亚类亚烯基、亚炔基、亚环烷基等。

直链饱和C_3-12亚烷基的实例包括但不限于-(CH₂)_n-，其中n为3至12的整数，例如，-CH₂CH₂CH₂-(亚丙基)、-CH₂CH₂CH₂CH₂-(亚丁基)、-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂-(亚戊基)和-CH₂CH₂CH₂CH-₂CH₂CH₂CH₂-(亚庚基)。

支链饱和C_3-12亚烷基的实例包括但不限于-CH(CH₃)CH₂-、-CH(CH₃)CH₂CH₂-、-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₂-、-CH₂CH(CH₃)CH₂-、-CH₂CH(CH₃)CH₂CH₂-、-CH(CH₂CH₃)-、-CH(CH₂CH₃)CH₂-和-CH₂CH(CH₂CH₃)CH₂-。

直链部分不饱和的C_3-12亚烷基(C_3-12亚烯基和亚炔基)的实例包括但不限于-CH＝CH-CH₂-、-CH₂-CH＝CH₂-、-CH＝CH-CH₂-CH₂-、-CH＝CH-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH＝CH-CH＝CH-、-CH＝CH-CH＝CH-CH₂-、-CH＝CH-CH＝CH-CH₂-CH₂-、-CH＝CH-CH₂-CH＝CH-、-CH＝CH-CH₂-CH₂-CH＝CH-和-CH₂-C≡C-CH₂-。

支链部分不饱和的C_3-12亚烷基(C_3-12亚烯基和亚炔基)的实例包括但不限于-C(CH₃)＝CH-、-C(CH₃)＝CH-CH₂-、-CH＝CH-CH(CH₃)-和-C≡C-CH(CH₃)-。

脂环族饱和的C_3-12亚烷基(C_3-12亚环烷基)的实例包括但不限于亚环戊基(例如亚环戊-1,3-基)和亚环己基(例如，亚环己-1,4-基)。

脂环族部分不饱和的C_3-12亚烷基(C_3-12亚环烷基)的实例包括但不限于亚环戊烯基(例如4-亚环戊烯-1,3-基)、亚环己烯基(例如2-亚环己烯-1,4-基；3-亚环己烯-1,2-基；2,5-亚环己二烯-1,4-基)。

其中C_3-12亚烷基被杂原子中断，下标是指包括杂原子的链中的原子数量。例如，链-C₂H₄-O-C₂H₄-将为C₅基团。

其中C_3-12亚烷基被芳环中断，下标是指直接处于包括芳环的链中的原子数量。例如，链

将为C₅基团。

连接标记：在式中，上标标记C(＝O)和NH指示原子所结合的基团。例如，NH基团被示出为与羰基(其不是所示部分的一部分)结合，并且羰基被示出为与NH基团(其不是所示部分的一部分)结合。

配体单元

配体单元可以是任何种类，并且包括特异性结合至靶分子的蛋白质、多肽、肽以及非肽药剂。在一些实施方案中，配体单元可以是蛋白质、多肽或肽。在一些实施方案中，配体单元可以是环状多肽。这些配体单元可包括抗体或含有至少一个靶分子结合位点的抗体片段、淋巴因子、激素、生长因子或可与靶标特异性结合的任何其他细胞结合分子或物质。

术语“特异性结合(specifically binds和specific binding)”是指抗体或其他蛋白质、多肽或肽与预定分子(例如，抗原)的结合。通常，抗体或其他分子以至少约1x10⁷M^-1的亲和力结合，并且以比与除预定分子或密切相关分子之外的非特异性分子(例如，BSA、酪蛋白)的结合亲和力大至少两倍的亲和力与预定分子结合。

配体单元的实例包括所描述的用于并入本文的WO 2007/085930的那些药剂。

在一些实施方案中，配体单元为与细胞上的细胞外靶标相结合的细胞结合剂。所述细胞结合剂可以是蛋白质、多肽、肽或非肽药剂。在一些实施方案中，细胞结合剂可以是蛋白质、多肽或肽。在一些实施方案中，细胞结合剂可以是环状多肽。细胞结合剂还可以是抗体或抗体的抗原结合片段。因此，在一个实施方案中，本发明提供了一种抗体-药物缀合物(ADC)。

细胞结合剂

细胞结合剂可以是任何种类并且包括肽和非肽。这些细胞结合剂可包括抗体或含有至少一个结合位点的抗体片段、淋巴因子、激素、激素模拟物、维生素、生长因子、营养物转运分子或任何其他细胞结合分子或物质。

肽

在一个实施方案中，细胞结合剂是直链或环状肽，其包含4-30个，优选地6-20个连续的氨基酸残基。在此实施方案中，优选的是一种细胞结合剂连接至一种单体或二聚体氮杂环丁烷并苯并二氮杂化合物。

在一个实施方案中，细胞结合剂包含结合整联蛋白α_νβ₆的肽。该肽对α_νβ₆的选择性超过XYS。

在一个实施方案中，细胞结合剂包括A20FMDV-Cys多肽。A20FMDV-Cys具有序列：NAVPNLRGDLQVLAQKVARTC。可替代地，可使用A20FMDV-Cys序列的变体，其中一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸残基被另一氨基酸残基取代。此外，所述多肽可具有序列NAVXXXXXXXXXXXXXXXRTC。

抗体

术语“抗体”在本文中是在最广泛的意义上加以使用并且具体地涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、多聚体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、多价抗体以及抗体片段，只要它们显示所期望的生物活性(Miller等(2003)Jour.of Immunology 170:4854-4861)。抗体可以是鼠、人、人源化的、嵌合的，或来源于其他物种。抗体是由免疫系统生成的蛋白质，其能够识别并结合特定抗原。(Janeway,C.、Travers,P.、Walport,M.、Shlomchik(2001)Immuno Biology,第5版,Garland Publishing,New York)。靶抗原通常具有通过多个抗体上的CDR识别的许多结合位点，也称为表位。特异性结合不同表位的各个抗体具有不同的结构。因此，一种抗原可具有多于一种的对应抗体。抗体包括全长免疫球蛋白分子或全长免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特异性地结合目标靶标的抗原或其部分的抗原结合位点的分子，此类靶标包括但不限于产生与自身免疫疾病相关的自身免疫抗体的一种或多种癌细胞。免疫球蛋白可以属于免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。免疫球蛋白可以源自任何物种，包括人、鼠或兔来源。

“抗体片段”包含全长抗体的一部分，通常为其抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')₂和scFv片段；双体分子；线性抗体；由Fab表达文库产生的片段，抗独特型(抗-Id)抗体，CDR(互补决定区)，和任何上述项的表位结合片段，其免疫特异性地结合于癌细胞抗原、病毒抗原或微生物抗原，单链抗体分子；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。

如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群获得的抗体，即除了可能存在少量可能天然存在的突变之外，构成群的单个抗体是相同的。单克隆抗体针对单一抗原位点具有高度特异性。此外，与包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除了它们的特异性之外，单克隆抗体的优点还在于它们可以在不被其他抗体污染的情况下合成。修饰语“单克隆”表明抗体的特征是从基本上均一的抗体群体获得，并且不应解释为要求通过任何特定方法产生抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可以通过Kohler等(1975)Nature 256:495最初描述的杂交瘤方法制备，或可以通过重组DNA方法制备(参见US4816567)。单克隆抗体还可以分离自噬菌体抗体文库，利用例如在Clackson等(1991)Nature,352:624-628；Marks等(1991)J.Mol.Biol.,222:581-597中描述的技术，或者可以分离自携带完全人免疫球蛋白系统的转基因小鼠(Lonberg(2008)Curr.Opinion 20(4):450-459)。

本文的单克隆抗体具体地包括嵌合抗体、人源化抗体和人抗体。

细胞结合剂的实例包括所描述的用于WO 2007/085930(其并入本文)中的那些细胞结合剂。

用于本发明的实施方案的肿瘤相关抗原和同源抗体在下文列出，并且更详细地描述于被并入本文的WO 2017/186894的第14页至第86页。

(1)BMPR1B(骨形态发生蛋白受体-IB型)

(2)E16(LAT1、SLC7A5)

(3)STEAP1(前列腺的六跨膜上皮抗原)

(4)0772P(CA125、MUC16)

(5)MPF(MPF、MSLN、SMR、巨核细胞增强因子、间皮素)

(6)Napi3b(NAPI-3B，NPTIIb，SLC34A2，溶质载体家族34(磷酸钠)，成员2，II型钠依赖性磷酸转运蛋白3b)

(7)Sema 5b(FLJ10372，KIAA1445，Mm.42015，SEMA5B，SEMAG，Semaphorin 5bHlog，25sema结构域，7血小板反应蛋白重复(1型和1型样)，跨膜结构域(TM)和短胞质结构域(semaphorin 5B)

(8)PSCA hlg(2700050C12Rik,C530008O16Rik,RIKEN cDNA 2700050C12,RIKENcDNA

2700050C12基因)

(9)ETBR(内皮素B型受体)

(10)MSG783(RNF124，假定蛋白FLJ20315)

(11)STEAP2(HGNC_8639，IPCA-1，PCANAP1，STAMP1，STEAP2，STMP，前列腺癌

相关基因1，前列腺癌相关蛋白1，前列腺的六跨膜上皮

抗原2，六跨膜前列腺蛋白)

(12)TrpM4(BR22450，FLJ20041，TRPM4，TRPM4B，瞬时受体电位阳离子5通道，亚家族M，成员4)

(13)CRIPTO(CR，CR1，CRGF，CRIPTO，TDGF1，畸胎癌源性生长因子)

(14)CD21(CR2(补体受体2)或C3DR(C3d/埃-巴二氏病毒受体(Epstein Barrvirus receptor))或Hs.73792)

(15)CD79b(CD79B，CD79β，IGb(免疫球蛋白相关β)，B29)

(16)FcRH2(IFGP4，IRTA4，SPAP1A(SH2域，包含磷酸酶锚定蛋白1a)，SPAP1B，SPAP1C)

(17)HER2(ErbB2)

(18)NCA(CEACAM6)

(19)MDP(DPEP1)

(20)IL20R-α(IL20Ra,ZCYTOR7)

(21)短蛋白聚糖(Brevican)(BCAN，BEHAB)

(22)EphB2R(DRT,ERK,Hek5,EPHT3,Tyro5)

(23)ASLG659(B7h)

(24)PSCA(前列腺干细胞抗原前体)

(25)GEDA

(26)BAFF-R(B细胞活化因子受体，BLyS受体3，BR3)

(27)CD22(B细胞受体CD22-B同种型，BL-CAM，Lyb-8，Lyb8，SIGLEC-2，FLJ22814)

(27a)CD22(CD22分子)

(28)CD79a(CD79A，CD79α)，免疫球蛋白相关的α、B细胞特异性蛋白，其共价相互作用于Igβ(CD79B)并在表面上形成与Ig M分子的复合物，转导涉及B细胞分化的信号，pI:4.84,MW:25028TM:2[P]基因染色体：19q13.2)。

(29)CXCR5(伯基特淋巴瘤受体1，G蛋白偶联受体，其被CXCL13趋化因子活化，在淋巴细胞迁移和体液性防御中起作用，

10在HIV-2感染中以及也许在AIDS、淋巴瘤、骨髓瘤和白血病的发展中起作用)；372aa,pI:8.54MW:41959TM:7[P]基因染色体：11q23.3，

(30)HLA-DOB(MHC II类分子的β亚基(Ia抗原)，其结合肽并

20将它们呈递到CD4+T淋巴细胞)；273aa,pI:6.56,MW:30820.TM:1[P]基因染色体：6p21.3)

(31)P2X5(嘌呤能受体P2X配体门控离子通道5，由细胞外ATP门控的离子通道，可能涉及突触传递和神经发生，缺乏可能有助于特发性逼尿肌不稳定的病理生理学)；422aa),pI:7.63,

MW:47206TM:1[P]基因染色体：17p13.3)。

(32)CD72(B细胞分化抗原CD72，Lyb-2)；359aa,pI:8.66,MW:40225,TM:15[P]基因染色体：9p13.3)。

(33)LY64(淋巴细胞抗原64(RP105)，富含亮氨酸重复(LRR)家族的I型膜蛋白，调节B细胞活化和细胞凋亡，在患有系统性红斑狼疮的患者中功能的丧失相关于增加的疾病活性)；661aa,pI:6.20,MW:74147TM:1[P]基因染色体：5q12)。

(34)FcRH1(Fc受体样蛋白1，假定受体，用于免疫球蛋白Fc结构域，其包含C2型Ig样和ITAM结构域，在B淋巴细胞20分化中可以具有作用)；429aa,pI:5.28,MW:46925TM:1[P]基因染色体：1q21-1q22)

(35)IRTA2(免疫球蛋白超家族受体易位相关的2，假定的免疫受体，其在B细胞的发育和淋巴瘤发生中具有可能的作用；在一些B细胞恶性疾病中发生基因的去调节(通过易位))；977aa,pI:6.88,MW:106468,TM:1[P]基因染色体：1q21)

(36)TENB2(TMEFF2，tomoregulin，TPEF，HPP1，TR，推定的跨膜35蛋白多糖，涉及到生长因子和卵泡抑素的EGF/调蛋白(heregulin)家族)；374aa)

(37)PSMA–FOLH1(叶酸水解酶(前列腺特异性膜抗原)1)

(38)SST(生长抑素受体；注意：存在5种亚型)

(38.1)SSTR2(生长抑素受体2)

(38.2)SSTR5(生长抑素受体5)

(38.3)SSTR1

(38.4)SSTR3

(38.5)SSTR4

AvB6–两种亚基(39+40)

(39)ITGAV(整联蛋白，αV)

(40)ITGB6(整联蛋白,β6)

(41)CEACAM5(癌胚抗原相关细胞粘附分子5)

(42)MET(met原癌基因；肝细胞生长因子受体)

(43)MUC1(粘蛋白1(Mucin 1)，细胞表面相关的)

(44)CA9(碳酸酐酶IX)

(45)EGFRvIII(表皮生长因子受体(EGFR)，转录变体3，

(46)CD33(CD33分子)

(47)CD19(CD19分子)

(48)IL2RA(白细胞介素2受体，α)；NCBI参考序列：NM_000417.2)；

(49)AXL(AXL受体酪氨酸激酶)

(50)CD30-TNFRSF8(肿瘤坏死因子受体超家族，成员8)

(51)BCMA(B细胞成熟抗原)-TNFRSF17(肿瘤坏死因子受体超家族，成员17)

(52)CT Ags–CTA(睾丸癌抗原(Cancer Testis Antigen))

(53)CD174(Lewis Y)-FUT3(岩藻糖基转移酶3(半乳糖苷3(4)-L-岩藻糖基转移酶，路易斯血型)

(54)CLEC14A(C型凝集素域家族14，成员A；Genbank登录号NM175060)

(55)GRP78–HSPA5(热休克70kDa蛋白5(葡萄糖调节蛋白，78kDa)

(56)CD70(CD70分子)L08096

(57)干细胞特异性抗原。例如：

·5T4(见以下条目(63))

·CD25(见以上条目(48))

·CD32

·LGR5/GPR49

·Prominin/CD133

(58)ASG-5

(59)ENPP3(外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶3)

(60)PRR4(富含脯氨酸4(泪腺的))

(61)GCC–GUCY2C(鸟苷酸环化酶2C(热稳定肠毒素受体)

(62)Liv-1–SLC39A6(溶质载体家族39(锌转运蛋白)，成员6)

(63)5T4，滋养层糖蛋白，TPBG–TPBG(滋养层糖蛋白)

(64)CD56–NCMA1(神经细胞粘附分子1)

(65)CanAg(肿瘤相关抗原CA242)

(66)FOLR1(叶酸盐受体1)

(67)GPNMB(糖蛋白(跨膜)nmb)

(68)TIM-1–HAVCR1(甲型肝炎病毒细胞受体1)

(69)RG-1/前列腺肿瘤靶Mindin–Mindin/RG-1

(70)B7-H4–VTCN1(包含T细胞活化抑制剂的V-set结构域1

(71)PTK7(PTK7蛋白酪氨酸激酶7)

(72)CD37(CD37分子)

(73)CD138-SDC1(多配体聚糖1(syndecan 1))

(74)CD74(CD74分子，主要组织相容性复合物，II类不变链)

(75)Claudins(整合膜连接蛋白)–CLs(Claudins)

(76)EGFR(表皮生长因子受体)

(77)Her3(ErbB3)–ERBB3(v-erb-b2成红细胞白血病病毒癌基因同系物3(禽))

(78)RON-MST1R(巨噬细胞刺激1受体(c-met相关酪氨酸激酶))

(79)EPHA2(EPH受体A2)

(80)CD20–MS4A1(跨膜4结构域，亚家族A，成员1)

(81)腱生蛋白C(肌腱蛋白C，Tenascin C)–TNC(腱生蛋白C)

(82)FAP(成纤维细胞活化蛋白，α)

(83)DKK-1(Dickkopf 1同系物(光滑爪蟾，Xenopus laevis))

(84)CD52(CD52分子)

(85)CS1-SLAMF7(SLAM家族成员7)

(86)Endoglin-ENG(内皮糖蛋白)

(87)膜联蛋白A1-ANXA1(膜联蛋白A1)

(88)V-CAM(CD106)-VCAM1(血管细胞粘附分子1)

另外的肿瘤相关抗原和感兴趣的同源抗体为：

(89)ASCT2(ASC转运蛋白2，也称为SLC1A5)。

ASCT2抗体描述于WO 2018/089393中，其通过引用并入本文。

可在作为缀合物或作为缀合物的一部分掺入之前，对细胞结合剂进行标记，例如以帮助检测或纯化所述药剂。标记可以是生物素标记。在另一个实施方案中，可用放射性同位素标记细胞结合剂。

治疗方法

本发明的化合物可以用于治疗方法。还提供了一种治疗方法，其包括将治疗有效量的式II的缀合物施用给需要治疗的受试者。术语“治疗有效量”是足以对患者显示益处的量。这样的益处可以是至少改善至少一种症状。施用的实际量以及施用的速率和时程将取决于待治疗对象的性质和严重性。治疗处方，例如对剂量的决定，是在全科医生和其他医生的责任范围内。

可以单独地或与其他治疗组合施用缀合物(同时或相继地，其取决于待治疗的病状)。治疗和疗法的实例包括但不限于化疗(施用活性剂，包括，例如药物；手术；以及放射疗法)。

根据本发明和根据本发明使用的药物组合物，除活性成分(即，式II的缀合物)之外，还可以包含药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或本领域技术人员众所周知的其他材料。此类材料应为无毒的并且应不干扰活性成分的功效。载体或其他材料的确切性质将取决于施用途径，所述施用途径可以是口服或通过注射，例如皮肤、皮下或静脉内注射。

用于口服施用的药物组合物可以是片剂、胶囊剂、粉剂或液体形式。片剂可以包含固体载体或佐剂。液体药物组合物通常包含液体载体，如水、石油、动物油或植物油、矿物油或合成油。可包含生理盐水溶液、葡萄糖或其他糖溶液或二醇类如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。胶囊剂可包含固体载体如明胶。

对于静脉内、皮肤或皮下注射或在痛苦部位处的注射，活性成分将具有肠胃外可接受的水性溶液的形式，所述水性溶液是无热原的并具有适宜的pH、等渗性和稳定性。本领域的相关技术人员使用例如等渗媒介物如氯化钠注射液、林格氏注射液、乳酸林格氏注射液完全能够制备合适的溶液。根据需要，可以包含防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其他添加剂。

缀合物可用于治疗增殖性疾病和自身免疫疾病。术语“增殖性疾病”涉及过度或异常细胞的不需要的或不受控制的细胞增殖，这是不期望的，如赘生物或增生性生长(无论是在体外或体内)。

增殖性病状的实例包括但不限于良性、恶化前、和恶性细胞增殖，包括但不限于赘生物和肿瘤(例如组织细胞瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、骨瘤)、癌症(例如肺癌、小细胞肺癌、胃肠癌、肠癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肝癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌、脑癌、肉瘤、骨肉瘤、卡波西肉瘤、黑素瘤)、白血病、银屑癣、骨疾病、纤维增殖性病症(例如结缔组织的纤维增殖性病症)以及动脉粥样硬化。其他所关注的癌症包括但不限于血液学；恶性肿瘤，如白血病和淋巴瘤，如非霍奇金淋巴瘤，以及亚型如DLBCL、边缘区、外套层和滤泡、霍奇金淋巴瘤、AML以及B或T细胞来源的其他癌症。

自身免疫疾病的实例包括以下：类风湿性关节炎、自身免疫性脱髓鞘疾病(例如，多发性硬化症、变态反应性脑脊髓炎)、银屑病性关节炎、内分泌眼病、葡萄膜视网膜炎、全身性红斑狼疮、重症肌无力、格雷夫斯病、肾小球肾炎、自身免疫性肝病、炎症性肠病(例如，克罗恩病)、过敏性反应、变态反应、舍格伦综合症、I型糖尿病、原发性胆汁性肝硬化、韦氏肉芽肿病(Wegener’s granulomatosis)、纤维肌痛症、多肌炎、皮肌炎、多发性内分泌衰竭、施密特氏综合征(Schmidt’ssyndrome)、自身免疫性葡萄膜炎、爱迪生氏病(Addison’sdisease)、肾上腺炎、甲状腺炎、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis)、自身免疫性甲状腺疾病、恶性贫血、胃萎缩、慢性肝炎、狼疮样肝炎、动脉粥样硬化、亚急性皮肤型红斑狼疮、甲状旁腺功能减退症、德雷斯勒综合征(Dressler’s syndrome)、自身免疫性血小板减少症、特发性血小板减少性紫癜、溶血性贫血、寻常型天疱疮、天疱疮、疱疹样皮炎、斑秃、类天疱疮、硬皮病、进行性全身性硬化症、CREST综合征(钙质沉着、雷诺氏现象、食道运动功能障碍、指端硬化以及毛细管扩张)、男性和女性自身免疫性不孕、强直性脊柱炎、溃疡性结肠炎、混合性结蒂组织病、结节性多动脉炎、系统性坏死性血管炎、过敏性皮肤炎、特应性鼻炎、肺出血-肾炎综合征(Goodpasture’s syndrome)、查加斯病(Chagas’disease)、结节病、风湿热、哮喘、复发性流产、抗磷脂综合征、农民肺、多形性红斑、心脏切开后综合征、库欣综合征(Cushing’ssyndrome)、自身免疫性慢性活动性肝炎、养鸟人肺(bird-fancier’slung)、中毒性表皮坏死松解症、Alport综合征、肺泡炎、过敏性肺泡炎、纤维性肺泡炎、间质性肺病、结节性红斑、坏疽性脓皮病、输血反应、大动脉炎、风湿性多肌痛、颞动脉炎、血吸虫病、巨细胞动脉炎、蛔虫病、曲霉病、阿司匹林三联症(Sampter’s syndrome)、湿疹、淋巴瘤样肉芽肿病、贝切特氏病(Behcet’s disease)、卡普兰综合征(Caplan’s syndrome)、川崎氏病(Kawasaki’s disease)、登革热、脑脊髓炎、心内膜炎、心内膜心肌纤维化、眼内炎、持久性隆起性红斑(erythema elevatum et diutinum)、银屑病、胎儿成红细胞增多症、嗜酸细胞性筋膜炎、舒尔曼综合征(Shulman’s syndrome)、费尔蒂氏综合征(Felty’ssyndrome)、丝虫病、睫状体炎、慢性睫状体炎、异时睫状体炎、富克斯氏睫状体炎、IgA肾病、亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、移植物抗宿主病、移植排斥反应、心肌症、伊顿-兰伯特综合征(Eaton-Lambert syndrome)、复发性多软骨炎、冷沉球蛋白血症、华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulemia)、埃文氏综合征(Evan’s syndrome)以及自身免疫性腺衰竭。

在一些实施方案中，自身免疫性疾病是B淋巴细胞的失调(例如，系统性红斑狼疮、肺出血-肾炎综合征、类风湿性关节炎以及I型糖尿病)、Th1淋巴细胞的失调(例如，类风湿性关节炎、多发性硬化症、银屑病、干燥综合征、桥本氏甲状腺炎、格雷夫斯病、原发性胆汁性肝硬化、韦氏肉芽肿病、肺结核或移植物抗宿主病)或Th2淋巴细胞的失调(例如，特应性皮炎、系统性红斑狼疮、特应性哮喘、结膜炎、过敏性鼻炎、欧门氏综合征(Omenn’ssyndrome)、系统性硬化症或慢性移植物抗宿主病)。一般而言，涉及树突状细胞的病症涉及Th1淋巴细胞或Th2淋巴细胞的失调。在一些实施方案中，自身免疫性病症是T细胞介导的免疫学病症。

在一些实施方案中，所施用的缀合物的量在约0.01mg/kg/剂量至约10mg/kg/剂量的范围内。在一些实施方案中，所施用的缀合物的量在约0.01mg/kg/剂量至约5mg/kg/剂量的范围内。在一些实施方案中，所施用的缀合物的量在约0.05mg/kg/剂量至约5mg/kg/剂量的范围内。在一些实施方案中，所施用的缀合物的量在约0.1mg/kg/剂量至约5mg/kg/剂量的范围内。在一些实施方案中，所施用的缀合物的量在约0.1mg/kg/剂量至约4mg/kg/剂量的范围内。在一些实施方案中，所施用的缀合物的量在约0.05mg/kg/剂量至约3mg/kg/剂量的范围内。在一些实施方案中，所施用的缀合物的量在约0.1mg/kg/剂量至约3mg/kg/剂量的范围内。在一些实施方案中，所施用的缀合物的量在约0.1mg/kg/剂量至约2mg/kg/剂量的范围内。

药物负载量

药物负载量(p)是每个细胞结合剂(例如抗体)的ABD药物的平均数量。在本发明的化合物与半胱氨酸结合的情况下，药物负载量可在每个细胞结合剂1至8个药物(D)的范围内，其中1、2、3、4、5、6、7和8个药物部分与所述细胞结合剂共价连接。缀合物的组合物包括与一定范围的药物(1至8)缀合的细胞结合剂(例如，抗体)的集合。在本发明的化合物与赖氨酸结合的情况下，药物负载量可在每个细胞结合剂1至80个药物(D)的范围内，但是40、20、10或8的上限可为优选的。缀合物的组合物包括与一定范围的药物(1至80、1至40、1至20、1至10或1至8)缀合的细胞结合剂(例如，抗体)的集合。

可以通过常规方法如UV、反相HPLC、HIC、质谱法、ELISA测定和电泳来表征来自缀合反应的ADC的制剂中每个抗体的药物的平均数量。还可以确定就p而言ADC的数量分布。通过ELISA，可确定ADC的特定制剂中p的平均值(Hamblett等(2004)Clin.Cancer Res.10:7063-7070；Sanderson等(2005)Clin.Cancer Res.11:843-852)。然而，通过ELISA的抗体-抗原结合和检测限，无法辨别p(药物)值的分布。此外，用于检测抗体-药物缀合物的ELISA测定不确定在何处药物部分连接至抗体，如重链或轻链片段，或特定氨基酸残基。在一些情况下，可以通过如反相HPLC或电泳的手段来实现其中p是一定值的均质ADC与具有其他药物负载量的ADC的分离、纯化和表征。这样的技术也适用于其他类型的缀合物。

对于一些抗体-药物缀合物，p可受到抗体上的连接位点的数量的限制。举例来说，抗体可仅具有一个或若干个半胱氨酸硫醇基团，或可仅具有可供连接接头的一个或若干个具有足够反应性的硫醇基团。较高的药物负载量，例如p>5，可导致某些抗体-药物缀合物的聚集、不溶性、毒性或细胞渗透性损失。

通常，在缀合反应期间，将小于理论最大值的药物部分缀合于抗体。抗体可以包含，例如，不与药物接头反应的许多赖氨酸残基。只有最具反应性的赖氨酸基团可与胺反应性接头试剂反应。另外，只有最具反应性的半胱氨酸硫醇基团可与硫醇反应性接头试剂反应。通常，抗体不含有许多(如果含有的话)游离且具反应性的半胱氨酸硫醇基团，其可与药物部分连接。化合物的抗体中的大多数半胱氨酸硫醇残基作为二硫桥存在，并且必须用还原剂如二硫苏糖醇(DTT)或TCEP，在部分或完全还原条件下进行还原。可以以几种不同的方式控制ADC的负载量(药物/抗体比率)，包括：(i)限制药物接头相对于抗体的摩尔过量，(ii)限制缀合反应时间或温度，以及(iii)用于半胱氨酸硫醇修饰的部分或限制性还原性条件。

某些抗体具有可还原的链间二硫化物，即半胱氨酸桥。可通过用还原剂如DTT(二硫苏糖醇)处理抗体而使其对于与接头试剂的缀合具有反应性。各半胱氨酸桥因此在理论上将形成两个反应性硫醇亲核体。可通过赖氨酸与2-亚氨基硫杂环戊烷(Traut’s试剂)的反应向抗体中引入另外的亲核基团，其导致胺转化为硫醇。可通过对一个、两个、三个、四个或更多个半胱氨酸残基进行工程改造来向抗体(或其片段)中引入反应性硫醇基团(例如，制备包含一个或多个非天然半胱氨酸氨基酸残基的突变抗体)。US 7521541教导了通过引入反应性半胱氨酸氨基酸对抗体进行工程改造。

可在抗体中的反应性位点处对半胱氨酸氨基酸进行工程改造并且这不形成链内或分子间二硫键(Junutula等,2008b Nature Biotech.,26(8):925-932；Dornan等(2009)Blood 114(13):2721-2729；US 7521541；US 7723485；WO2009/052249)。工程改造的半胱氨酸硫醇可与接头试剂或本发明的具有硫醇反应性的亲电子基团(如马来酰亚胺或α-卤代酰胺)的药物-接头试剂反应，以形成具有半胱氨酸工程改造的抗体和ABD药物部分的ADC。药物部分的位置因此可以设计、控制并已知。可以控制药物负载量，因为工程改造的半胱氨酸硫醇基团通常以高收率与硫醇反应性接头试剂或药物接头试剂反应。通过在重链或轻链的单个位点上取代引入半胱氨酸氨基酸来工程改造IgG在对称抗体上得到两个新的半胱氨酸。近似2的药物负载量可以通过缀合产物ADC的近似同质性实现。

在抗体的多于一个亲核或亲电子基团与药物-接头中间体或接头试剂、接着是药物部分试剂反应的情况下，那么得到的产物是ADC化合物与连接于抗体的药物部分的分布的混合物，例如1、2、3等。液相色谱法如聚合物反相(PLRP)和疏水性相互作用(HIC)可按照药物负载值来分离混合物中的化合物。可以分离具有单药物负载值(p)的ADC的制剂，然而，这些单负载值ADC可仍然是非均匀混合物，因为可通过接头在抗体上的不同位点处连接药物部分。

因此，本发明的抗体-药物缀合物组合物包括抗体-药物缀合化合物的混合物，其中抗体具有一个或多个ABD药物部分以及其中药物部分可以在不同的氨基酸残基处连接于抗体。

在一个实施方案中，每个细胞结合剂的二聚体氮杂环丁烷并苯并二氮杂基团的平均数量在1至20的范围内。在一些实施方案中，所述范围选自1至8、2至8、2至6、2至4以及4至8。

在一些实施方案中，每个细胞结合剂存在一个二聚体氮杂环丁烷并苯并二氮杂基团。

一般合成路线

大量合适的N-Prot^N、O-Prot^O和Y-Prot^Y保护基描述于Greene,T.W.和Wuts,G.M.,Protective Groups in Organic Synthesis,第3版,John Wiley&Sons,Inc.,1999中，其以引用方式并入本文。

式IV的化合物的合成

合成本发明的第一方面的化合物(具体地，式IV的化合物)的一个可能步骤在方案1中示出。这从N10保护的ABD二聚体(d1A)开始。

通过标准方法在N10位置处对二聚体d1A去保护，以得到式IV的化合物。在Prot^N为Alloc的情况下，使用钯进行去保护。取决于所用的溶剂，所产生的化合物可处于其甲醇胺或甲醇胺醚形式，与亚胺平衡。

在ABD的情况下，四元氮杂环丁烷环的环应变是指甲醇胺形式在平衡中是主要的。

合成式IV的化合物的替代步骤在方案2中示出。这从N10氮保护的ABD单体(m2A)开始。

在C11位醇处对N10和Y8位置受保护的ABD单体m2A进行保护，以得到m2B。优选地，Prot^O为TBS并且通过添加过量TBS-Cl实现保护。Prot^Y-Y保护基的后续去保护提供可二聚化的物类(m2C)。当Prot^Y为TIPS时，可使用在DMF和水中的LiOAc实现去保护。

使m2C与二聚体接头R”(X)₂反应以得到二聚体d2D。通常，Y为O并且X为卤素(优选Br)。在此情况下，使用TBAI添加剂，双Williamson醚合成形成二聚体。

从二聚体产物中移除N10保护基以得到d2E。例如，如果Prot^N为Alloc并且Prot^O为用于合成的氧保护基，那么使用钯进行去保护以移除N10保护基，然后消除用于合成的氧保护基。如果Prot^N为Troc并且Prot^O为用于合成的氧保护基，那么使用Cd/Pb对进行去保护。如果Prot^N为SEM或类似基团，并且Prot^O为氧代基，那么可以通过还原移除氧代基，这产生受保护的甲醇胺中间体，然后可以对其进行处理以移除SEM保护基，接着消除水。C11位醇保护基的移除提供式IV的化合物。如果Prot^O为TBS，使用钯和在DCM中的吡咯烷，醇去保护可与前述Alloc N去保护同时发生。

方案1和2分别所需的二聚体d1A和单体m2A可通过若干路线合成。经由氧化闭环的一种可能路线在方案3中示出。

化合物3A、3B、3C、3D和3E可以是二聚体(其中基团R^Y代表与类似的ABD前体连接的R”)或单体(其中基团R^Y代表合适的保护基)。

单体3A是硝基苯甲酸衍生物。许多此类衍生物是可商购获得的并且其他衍生物可以通过常规方法合成(例如Althuis,T.H.和Hess,H.J.,J Medicinal Chem.,20(1),146-266(1977))。通常，硝基苯甲酸衍生自酯，通过在温和条件(如使用LiOH)下酯水解获得。二聚体3A可通过现有技术中公开的各种策略制备(例如，WO 00/12508的方案3)。例如，适当的苯甲酸酯可关于合适的二醇通过Mitsunobo醚化，接着硝化和水解而二聚化。另选地，苯甲酸酯可关于合适的二卤化物通过Williamson醚合成而二聚化。获得单体和二聚体3A所需的另外的转化可在文献中获得。

可通过现有技术中公开的相当的脯氨酸合成的修改来合成氮杂环丁烷起始材料(例如，WO 00/12508的方案4)。与氮杂环丁烷特别相关的策略也是文献中已知的(例如Bose,D.S.等,Tetrahedron Letters,38(33),5839-5842,1997；doi:10.1016/S0040-4039(97)01297-5)。例如，可在氮杂环丁烷的氮处通过合适的保护基如Cbz对可商购获得的氮杂环丁烷-2-羧酸进行保护，然后进行酸性酯化以得到甲基酯。可用在THF中的LiBH₄还原酯以得到Cbz保护的2-(羟甲基)氮杂环丁烷。在一些方法中，可通过与TBS-Cl的反应将适当的保护基(Prot^O)，如TBS，添加到醇中。在其他方法中，醇不受保护。在方案3中，Prot^O可代表合适的保护基或H-合适的Prot^O基团应能够承受NO₂还原条件。接下来，通常通过在H₂气体下还原来移除氮保护基，以产生方案3中所需的氮杂环丁烷起始材料。

化合物3A与氮杂环丁烷起始材料缩合得到3B。通常通过DCC偶联或通过酰氯(由羧酸与草酰氯或SOCl₂形成)或在低温下利用在DCM中的HOBt实现缩合。

使用标准程序，如在MeOH中的SnCl₂，或在MeOH/H₂O/甲酸(90:5:5)中的锌，或连二亚硫酸钠，或雷尼镍和肼，或在钯/炭上催化加氢将3B的硝基还原为胺(3C)。所选择的方法取决于羟基保护基的需要。

所得的胺被合适的保护基单重保护以得到3D。N-Prot^N基团优选地为氨基甲酸酯，如N-Alloc。胺的亲核性在用Alloc保护后降低，因此单重保护是有利的。通常，这通过与吡啶和一当量的氯甲酸烯丙基酯反应来实现。当Prot^O为H时，则3D等同于3E。当Prot^O为保护基时，在标准条件下将其移除以得到醇3E。如果Prot^O为乙酸酯保护基，则可在弱碱性条件下(例如K₂CO₃)将其移除，或者如果Prot^O为甲硅烷基醚保护基，如TBS，则可通过使用TBAF或弱酸将其移除。

通过醛或功能等效物实现的氧化闭环由二聚体3E得到d1A(用于根据方案1的进一步反应)并且由单体3E得到m2A(用于根据方案2的进一步反应)。选择性醇-醛氧化可通过在分子筛上暴露于在N-甲基吗啉N-氧化物(NMO)中的四丙基过钌酸铵(TPAP)或通过Swern氧化(使用DMSO和草酰氯)或通过Dess-Martin氧化(使用DMP)或优选地通过Cu(I)/TEMPO自由基氧化(使用三氟甲磺酸四乙腈铜(I)、1-羟基-2,2,6,6-四甲基-哌啶(TEMPO)、1-甲基咪唑和2-(2-吡啶基)吡啶)来实现。后者是有利的，因为不需要严格的无水条件，并且没有证据表明ABD双内酰胺物类的过度氧化。醛物类经历自发的B环闭合，包括受到单重保护的N10位置的攻击。

获得二聚体d1A和单体m2A的替代路线在方案4中示出。此路线使用醛解掩蔽(unmasking)来介导闭环。

化合物3A、4B、4C和4D可以是二聚体(其中基团R^Y代表与类似的ABD前体连接的R”)或单体(其中基团R^Y代表合适的保护基)。

3A单体和二聚体变体可通过上文关于方案3所讨论的策略生成。氮杂环丁烷起始材料在2位具有硫缩醛(但是可使用其他掩蔽醛等效物)。二乙基硫缩醛氮杂环丁烷可通过类似的脯氨酸合成策略的修改制备(例如Langley,D.R.&Thurston,D.E.,J OrganicChemistry,52,91-97(1987))。与氮杂环丁烷特别相关的路线在文献中也是已知的(例如Bose,D.S.等,Tetrahedron Letters,38(33),5839-5842,1997；doi:10.1016/S0040-4039(97)01297-5)。例如，Cbz保护的2-(羟甲基)氮杂环丁烷可如上文所述(针对方案3)进行制备。然后通常通过Dess-Martin氧化(使用DMP)或在DMSO中的IBX将醇再氧化为醛。优选地利用弱酸催化剂如在质子溶剂中的TMSCl使所得的醛与硫醇如EtSH缩合，以得到硫缩醛。硫缩醛与H₂气体还原不相容，因此通常利用在DCM中的TMS-I移除N保护基(例如Cbz)。这产生二乙基硫缩醛氮杂环丁烷起始材料。

3A与硫缩醛氮杂环丁烷起始材料的直接缩合得到4B。4B的硝基可通过上文关于方案3所讨论的方法，优选地通过氯化锡(II)方法(在MeOH中的SnCl₂)或在MeOH/H₂O/甲酸(90:5:5)中的锌还原为胺(4C)。由于硫缩醛基团的不相容性，优选地不通过直接氢化进行还原。通过与相应的氯甲酸酯或酰氯反应，胺被合适的胺保护基如Alloc单重保护。4D的N-Prot^N基团优选地为氨基甲酸酯，如N-Alloc，因为这些物类有利于单重保护。

硫缩醛对醛的选择性解掩蔽导致B环因受到单重保护的N10位置的攻击而自发环化。通常，解掩蔽是由汞(II)介导的，例如在乙腈:水中的HgCl₂和CaCO₃。对于二聚体4D，这提供了d1A(用于根据方案1的进一步反应)，并且对于单体4D，这提供了m2A(用于根据方案2的进一步反应)。

二聚体或单体硫缩醛4B(根据方案4)可通过替代路线合成，在方案5中示出。此路线原位生成硫缩醛。

实现单体和二聚体3A的合成策略在上文关于方案3进行了讨论。3A与可商购获得的氮杂环丁烷-2-羧酸缩合得到5B。从5B到4B的路线遵循与由氮杂环丁烷-2-羧酸合成硫缩醛氮杂环丁烷起始材料(如关于方案4所讨论的)类似的方法。

通过氢化物还原剂，通常通过LiBH₄将5C还原为仲醇5D。然后将5D再氧化为醛(5E)，通常通过高价碘物类(例如IBX或DMP)。原位生成硫缩醛，优选地在酸性条件下使用EtSH，以提供化合物4B。这可以根据方案4进一步反应，以得到期望的ABD物类。

式I的化合物的合成

合成本发明的第二方面的化合物(具体地，式I的化合物)的一个可能步骤在方案6中示出。这从两个环化的ABD单体开始：具有Prot^N保护的N10位置的m2A和具有R^L附加的N10氮的m6A。

取决于所使用的溶剂，式I的化合物可在亚胺与甲醇胺或甲醇胺醚形式之间平衡存在(类似于针对式IV在方案1中所示的平衡)。

在一些实施方案中，Prot^N可等同于式I的R³⁰取代基(由本发明第二方面的选项(d)i、ii和iii描述)。

m2A起始材料可根据方案3、4和5制备。对于其中Prot^N等同于R³⁰氨基甲酸酯连接基团的化合物，则通过异氰酸酯制备m2A(即与m6A相同的路线-下文讨论)。

使用与关于方案2所描述的类似的策略，可使用二聚体接头R”使m2A和m6A关于Y8位置二聚化。C11位醇由Prot^O保护，其中Prot^O优选为TBS并通过与TBS-Cl的反应引入。Prot^Y基团的后续移除，其中Prot^Y为TIPS，可使用在DMF和水中的LiOAc发生，以分别得到m2C和m6B。

使m2C和m6B与R”(X)₂进一步反应，以得到二聚体d6C。通常，Y为O并且X为卤素(优选地Br)。在此情况下，TBAI添加剂可驱动双Williamson醚合成以形成二聚体。二聚化的替代策略也是本领域已知的，例如通过Mitsonobu醚化。

在一些实施方案中，从非接头ABD中移除N10保护基以得到不对称二聚体d6D。讨论了与方案1和2有关的各种去保护策略。在Prot^N为Alloc的情况下，则可使用钯进行去保护。

在其他实施方案中，不移除N10保护基。通过移除Prot^O将d6C直接转化为式I的化合物。

移除C11位醇保护基提供式I的不对称化合物。如果Prot^O为TBS，则醇去保护可与利用钯和在DCM中的吡咯烷的Alloc N10位去保护同时发生。

单体m6A(方案6所需)的可能合成和式I的化合物的替代路线在方案7中示出。

化合物7A、7B、7C和7D可以是二聚体(其中基团R^YY代表与在N10位单重保护的ABD前体连接的R”)或单体(其中基团R^YY代表合适的保护基)。单体7A等同于单体3C，并且可以通过类似的路线合成(如方案3所示)。

7A的胺转化为异氰酸酯7B。在现有技术(例如，WO 2005/023814)中详细描述了异氰酸酯形成的策略。通常，使用光气，优选地在碱性条件下使用三光气；固体三光气晶体比有毒的光气气体更安全且更容易处理。该反应应在无水和非羟基有机溶剂中进行，所述溶剂优选是非极性的。合适的溶剂包括无水DCM和无水甲苯。该反应可在室温下进行，并且通过红外光谱在约2265cm^-1下方便地监测。

氨基甲酸酯7C是通过R^L-OH的攻击由异氰酸酯形成的。氨基甲酸酯的形成通常通过一锅法实现，其中异氰酸酯通过三光气与在DCM中的TEA形成，并将R^L-OH直接添加到反应混合物中。这种方法减少了异氰酸酯在氨基甲酸酯形成之前的停留时间，从而减少副反应的机会。

通过合适的方法移除Prot^O保护基以提供仲醇7D，通常在酸性条件下(例如，在THF:水溶剂中的乙酸)。

通过醛或功能等效物实现的7D的氧化闭环可通过在分子筛上暴露于在N-甲基吗啉N-氧化物(NMO)中的四丙基过钌酸铵(TPAP)或通过Swern氧化(DMSO和草酰氯)或优选地通过Cu(I)/TEMPO自由基氧化(三氟甲磺酸四乙腈铜(I)、1-羟基-2,2,6,6-四甲基-哌啶(TEMPO)、1-甲基咪唑和2-(2-吡啶基)吡啶)来实现。这对于单体7D变体(即其中R^YY＝Prot^Y)得到m6A(用于在方案6中进一步反应)，或对于二聚体7D变体(即其中R^YY＝与N10保护的ABD连接的R”)得到d7E。

氮保护基(Prot^N)(通常用钯移除的Alloc)的移除提供式I的不对称化合物。

单体m6A(方案6)和二聚体d7E(方案7)的替代路线在方案8中示出。

化合物8A、8B和8C可以是二聚体(其中基团R^YY代表与在N10位置单重保护的ABD前体连接的R”)或单体(其中基团R^YY代表合适的保护基Prot^Y)。8A转化为异氰酸酯8B，其继而与R^L-OH反应以通过氨基甲酸酯附加R^L。优选策略类似于关于方案7所讨论的策略。

硫缩醛8C对醛的选择性解掩蔽导致B环因受到单重保护的N10位置的攻击而自发环化。通常，解掩蔽是由汞(II)介导的，例如在乙腈:水中的HgCl₂和CaCO₃。环化提供单体m6A(由单体8C)和二聚体d7E(由二聚体8C)。m6A可根据方案6反应，并且d7E可根据方案7反应，以产生式I的化合物。

对于单体7A(即其中R^YY为Prot^Y)，方案7的起始材料可通过与方案3(单体3A至3C)类似的路线实现。类似地，对于单体8A(即其中R^YY为Prot^Y)，方案8的起始材料可通过与方案4(单体3A至4C)类似的路线实现。

获得二聚体7A和8A的路线(即其中R^YY为连接至在N10位置处单重保护的ABD前体的R”)在方案9中示出。

3C和4C的二聚体变体是通过方案3、4和5中讨论的策略生成的。3C和4C仅在一个N10位置处被保护以分别产生不对称ABD二聚体7A和8A。这是通过添加一当量的保护试剂(当Prot^N为Alloc时，其通常为氯甲酸烯丙基酯)，并且随后进行纯化以移除未保护或双重保护的产物来实现的。

式II的缀合物的合成

合成本发明第三方面的缀合物(具体地，式II的成分药物接头单元(D^L))的一个可能步骤涉及将接头与配体单元连接，从而将基团R^L(根据式I的化合物)转化为基团R^LL(根据式I’的化合物)。

可如先前所述制备缀合物。可如Doronina等,Nature Biotechnology,2003,21,778-784)中所述将抗体缀合至药物接头化合物。简单地说，在37℃下用三(羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)还原在pH 7.4的含有50mM硼酸钠的PBS中的抗体(4-5mg/mL)。还原链间二硫化物的反应的进展通过与5,5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)的反应进行监测并且使其进行直到实现期望水平的巯基/mAb。然后将还原的抗体冷却至0℃并且每抗体巯基用1.5当量的马来酰亚胺药物-接头进行烷基化。1小时后，通过添加5当量N-乙酰半胱氨酸将反应淬灭。通过在PD-10柱上进行凝胶过滤来移除淬灭的药物-接头。然后通过0.22μm注射过滤器将ADC无菌过滤。可分别在280nm和329nm处进行光谱分析来确定蛋白质浓度，其中针对在280nm处的药物吸光度的贡献进行校正。可使用尺寸排阻色谱确定抗体聚集的程度，并且可使用RP-HPLC确定剩余的NAC淬灭的药物-接头的水平。

大环实施方案的合成

在本发明的第一、第二和第三方面的一些实施方案中，R⁷和R⁷'取代基可一起形成一个基团，所述基团为：(i)-O-(CH₂)_n-O-，其中n为7至16，或(ii)-O-(CH₂CH₂O)_m-，其中m为2至5，以得到大环ABD二聚体。

可采用各种策略引入R⁷-R⁷'接头，如以下方案10中所示。从d2D开始，其中R⁷和R⁷'均代表-OR，可通过添加在DCM中的BBr₃移除R基团以显露醇。二溴烷烃在碱中的取代反应(如1,7-二溴庚烷与K₂CO₃)通过两个C7位醇的攻击而得到大环产物。

从d2D开始的替代路线包括用n-溴烷-1-烯取代C7位醇。这提供了两个末端不饱和的烯基链，其可以容易地进行闭环复分解(RCM)。例如，可使用Grubs-II催化剂利用5-溴戊-1-烯和RCM实现取代。通过RCM实现的大环化通常是高收率的。

获得大环的优选路线从二聚体3A或酯前体开始，其中R⁷和R^7'均代表-OR。移除R基团并用二溴烷烃取代(使用与上文类似的条件)提供大环化合物。然后可根据方案3或4得到ABD。

所得产物可通过方案2或方案6反应以分别获得式IV和I的化合物。

获得此类大环产物所需的另外的转化细节可在文献中获得(Donnell,A.F.、Zhang,Y.、Stang,E.M.、Wei,D.D.、Tebben,A.J.、Perez,H.L.、Schroeder,G.M.、Pan,C.、Rao,C.、Borzilleri,R.M.、Vite,G.D.、Gangwar,S.,Macrocyclic pyrrolobenzodiazepinedimers as antibody-drug conjugate payloads,Bioorganic&Medicinal ChemistryLetters(2017),doi:https://doi.org/10.1016/j.bmcl.2017.10.028和WO 2016/209951)。

仲胺实施方案的合成

其中N10-C11基团为-NH-CH₂-的化合物(即仲胺)可通过以上程序的修改来合成。具体地，化合物3B*的还原胺化可以产生m2A或d1A的修饰型式，以用于另外的步骤：

化合物3B*可以由前体醇通过氧化合成，前体醇可通过与用于合成3B的那些类似的步骤获得。

药物缀合物的合成

可如先前所述制备缀合物。可如Doronina等,Nature Biotechnology,2003,21,778-784)中所述将抗体缀合至药物接头化合物。简单地说，在37℃下用三(羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)还原在pH 7.4的含有50mM硼酸钠的PBS中的抗体(4-5mg/mL)。还原链间二硫化物的反应的进展通过与5,5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)的反应进行监测并且使其进行直到实现期望水平的巯基/mAb。然后将还原的抗体冷却至0℃并且每抗体巯基用1.5当量的马来酰亚胺药物-接头进行烷基化。1小时后，通过添加5当量N-乙酰半胱氨酸将反应淬灭。通过在PD-10柱上进行凝胶过滤来移除淬灭的药物-接头。然后通过0.22μm注射过滤器将ADC无菌过滤。可分别在280nm和329nm处进行光谱分析来确定蛋白质浓度，其中针对在280nm处的药物吸光度的贡献进行校正。可使用尺寸排阻色谱确定抗体聚集的程度，并且可使用RP-HPLC确定剩余的NAC淬灭的药物-接头的水平。