一种大鲵低聚肽及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 一种大鲵低聚肽及其制备方法和应用 (Andrias davidianus oligopeptide and preparation method and application thereof ) 是由 肖慰南 贾绍辉 于 2021-06-24 设计创作，主要内容包括：本发明涉及大鲵肽技术领域,具体涉及一种大鲵低聚肽及其制备方法和应用,所述制备方法包括大鲵蛋白提取；大鲵蛋白酶解：将上述所得脱脂大鲵粉加水搅拌,然后加入复合酶进行酶解,酶解条件为：pH值7.2～7.5,酶解温度50～60℃,酶解时间5～7小时,酶解完成后升温至90～110℃随后使复合水解酶灭活；以及大鲵肽分离纯化：将所得酶解产物经过截留1000道尔顿分子量的可再生纤维素透析膜进行过滤,收集滤液,滤液经过疏水柱进一步分离得分离液,分离液冷冻干燥得大鲵低聚肽；所得的大鲵低聚肽,能够降低体重、调节血脂,显著性减少肥胖模型鼠食欲,减少血清中甘油三脂、总胆固醇及提高低密度脂蛋白蛋白的含量。(The invention relates to the technical field of giant salamander peptides, in particular to giant salamander oligopeptide and a preparation method and application thereof, wherein the preparation method comprises the steps of extracting giant salamander protein; proteolysis of giant salamanders: adding water into the obtained degreased giant salamander powder, stirring, and then adding a complex enzyme for enzymolysis, wherein the enzymolysis conditions are as follows: the pH value is 7.2-7.5, the enzymolysis temperature is 50-60 ℃, the enzymolysis time is 5-7 hours, and after the enzymolysis is finished, the temperature is raised to 90-110 ℃, and then the compound hydrolase is inactivated; and separating and purifying giant salamander peptide: filtering the obtained enzymolysis product by a reproducible cellulose dialysis membrane with the molecular weight of 1000 daltons, collecting filtrate, further separating the filtrate by a hydrophobic column to obtain a separation solution, and freeze-drying the separation solution to obtain the giant salamander oligopeptide; the obtained giant salamander oligopeptide can reduce weight, regulate blood fat, remarkably reduce appetite of obese model mice, reduce triglyceride and total cholesterol in serum and improve the content of low-density lipoprotein.)
技术领域
本发明涉及大鲵肽技术领域，具体涉及一种大鲵低聚肽及其制备方法和应用。
背景技术
肥胖是指一定程度的明显超重与脂肪层过厚，是体内脂肪，尤其是甘油三酯积聚过多而导致的一种状态。由于食物摄入过多或机体代谢的改变而导致体内脂肪积聚过多造成体重过度增长并引起人体病理、生理改变或潜伏，因此如何遏制肥胖的发生显得刻不容缓。营养控制结合运动干预被认为是最有效的减肥手段，目前市面上还缺乏一款真正具有减肥效果而且安全有效的减肥产品。
大鲵又称娃娃鱼，是一种高营养价值两栖类动物，被誉为“水中人参”，大鲵的鸡肉、皮肤、内脏等含有丰富的蛋白质、氨基酸、脂肪酸及微量元素等，对大鲵蛋白质进行深加工，可以获得一系列有益于人类生命活动的大鲵生物活性肽。目前，大鲵生物活性肽多是以大鲵的肌肉、皮肤、内脏、脂肪、血液等为原料，其制备方法主要包括酸水解、碱水解和酶解法，但对于特定功能活性肽少有关注。近几年，已有相关报道公开了大鲵肽的制备方法以及功效，其功效初抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降血压、修复胃粘膜、骨骼和韧带保健、护发防脱等生理活性功能外，大鲵胶原蛋白肽还具有修复上皮细胞、促进伤口愈合、保护肝脏损伤、增强免疫力的特殊功效。目前也有相关研究以获得具有降脂功能的大鲵胶原蛋白肽为目标，尝试了大量大鲵胶原肽的蛋白酶解方法，但依然难以获得调脂减肥功效理想的大鲵胶原肽。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种大鲵低聚肽及其制备方法和应用，通过酶解和分离纯化步骤得到分子量小于1000道尔顿的大鲵低聚肽，具有显著的调脂减肥效果。
本发明提供一种大鲵低聚肽的制备方法，包括如下步骤：
(1)大鲵蛋白提取
将新鲜大鲵肉粉碎、匀浆、冷冻离心后经冷冻干燥处理，然后将其粉碎至60目以下得大鲵肉粉；浸提去除脂肪，挥干溶剂，得到脱脂大鲵粉；
(2)大鲵蛋白酶解
将上述所得脱脂大鲵粉加水搅拌，然后加入复合酶进行酶解，酶解条件为：pH值7.2～7.5，酶解温度50～60℃，酶解时间5～7小时，酶解完成后升温至90～110℃随后使复合水解酶灭活；
(3)大鲵肽分离纯化
将步骤(2)所得酶解产物经过截留1000道尔顿分子量的可再生纤维素透析膜进行过滤，收集滤液，滤液经过疏水柱进一步分离得分离液，分离液冷冻干燥得大鲵低聚肽。
优选的，步骤(1)冷冻离心过程为于温度为3～5℃、转速为1000～1200r/min条件下冷冻离心10～30min。
优选的，步骤(1)中冷冻干燥过程为于温度为-20℃～-45℃，压力为25～30Pa条件下冷冻干燥24～36h。冷冻干燥可避免干燥过程中蛋白的降解以及结构改变，能够最大程度地保持蛋白的活性。
优选的，步骤(1)中浸提过程中所用浸提剂为食品级别正己烷。
优选的，步骤(2)中大鲵粉与水的质量体积比为1:3～15。
优选的，步骤(2)中复合酶为碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶按质量比为1:2～2.5:3～3.5组成；更优选的，碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶的质量比1:2:3.5。按照该比例复合酶进行酶解所得产物中末端为疏水性氨基酸的几率大，由此增加大鲵肽的生物活性。
优选的，步骤(3)还包括采用seplife琼脂糖疏水层析介质，装入内径5.5cm，长度20cm层析柱，待疏水层析柱装柱完毕后，采用2M NaCl缓冲液进行平衡，平衡体积为3倍柱体积，平衡完毕后，将滤液缓慢加入到层析柱中，并在室温下静置1h，然后采用梯度洗脱法用NaCl溶液进行样品洗脱，于盐离子浓度最高时收集洗脱液，经脱盐柱脱盐处理后，分离液冷冻干燥。
本发明还提供一种由上述制备方法得到的大鲵低聚肽。
本发明还提供一种所述大鲵低聚肽在制备调脂减肥产品中的应用，所述应用具体为大鲵低聚肽能够降低体重调节血脂，显著性减少肥胖模型鼠食欲，减少血清中甘油三脂、总胆固醇及提高低密度脂蛋白蛋白的含量。
所述的应用还包括调脂减肥产品与有氧运动结合，具体为进食调脂减肥产品的同时进行有氧运动。
本发明的有益效果在于，
(1)本发明提供的大鲵蛋白酶解过程可以得到末端为疏水性氨基酸的酶解产物，增加大鲵肽的生物活性，大鲵肽分离纯化过程最终所得大鲵低聚肽具有分子量小特点，吸收效率优于蛋白质以及大分子肽；另外由于制备所得大鲵低聚肽为疏水性小分子肽，因此具有更强生物活性；
(2)通过本发明提供的制备方法所得的大鲵低聚肽，能够降低体重、调节血脂，显著性减少肥胖模型鼠食欲，减少血清中甘油三脂、总胆固醇及提高低密度脂蛋白的含量。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明提供的对照组与高脂模型组实验大鼠体重变化图；
图2是本发明提供的对照组与高脂模型组造模前后血脂四项检测结果；
图中，A为对照组第1周和第6周时血脂四项检测结果；B为高脂模型组第1周和第6周血脂四项检测结果；
图3是本发明提供的A～E组对肥胖大鼠体重减轻结果对比图；
图4是本发明提供的A～E组对肥胖大鼠血脂四项影响结果对比图；
图中，I：血清中TG含量；II：血清中TC含量；III：血清中HDL含量；IV：血清中LDL含量；
图5是本发明提供的A～E组对肥胖大鼠进食量影响结果对比图；
图6是本发明提供的A～E组对肥胖大鼠能量代谢及食欲调节相关细胞因子影响结果对比图；
图中，I：Irisin浓度，II：FGF15浓度，III：Leptin浓度，IV：NPY浓度；
图7是本发明提供的A～E组对肥胖大鼠能量代谢及食欲调节相关细胞因子影响结果对比图；
图中，I：Western blot检测能量代谢相关蛋白，II：量化PGC～1ɑ表达，III：量化p～AMPK表达，IV：量化Irisin表达；
图8是本发明提供的A～E组对肥胖大鼠能量代谢及食欲调节相关蛋白表达影响结果对比图；
图中，I：Western blot检测食欲调节相关蛋白，II：量化NPY表达，III：量化POMC表达。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
本发明所述的A组为对照组，B组为高脂模型组，C组为高脂模型运动组，D组为高脂模型大鲵肽组，E组为高脂模型大鲵肽联合运动组；
*p<0.05表示与对照组相比具有显著性差异，#p<0.05表示与模型组相比具有显著性差异。
实施例1
一种大鲵低聚肽的制备方法，包括如下步骤：
(1)大鲵蛋白提取
将新鲜大鲵肉经过粉碎机粉碎、匀浆、冷冻离心(转速为1000转，温度为4℃)10min，收集上清液装在预冷钢盘(厚度为0.3cm)中，放于冷冻干燥机中，经过预冷处理，然后冷冻干燥，冷冻干燥参数为：温度为0℃，压力为25Pa，时间为36h；冷冻干燥处理后，将其粉碎至60目以下得大鲵肉粉；采用食品级别正己烷浸提去除脂肪，挥干溶剂，得到脱脂大鲵粉；
(2)大鲵蛋白酶解
将上述所得脱脂大鲵粉按照质量体积比1:15比例加水搅拌，然后加入复合酶(质量比为碱性蛋白酶：中性蛋白酶：胰蛋白酶＝1:2:3.5)，酶解条件为：pH值7.5，酶解温度55℃，酶解时间6小时，酶解完成后升温至100℃，20min使复合酶灭活；按照该比例复合酶进行酶解所得产物中末端为疏水性氨基酸的几率会更大，会增加大鲵肽的生物活性；
(3)大鲵肽分离纯化
上述酶解产物经过截留1000道尔顿分子量的可再生纤维素透析膜进行过滤，收集滤液，采用seplife琼脂糖疏水层析介质，装入内径5.5cm，长度20cm层析柱，待疏水层析柱装柱完毕后，采用2M NaCl缓冲液进行平衡，平衡体积为3倍柱体积，平衡完毕后，将滤液缓慢加入到层析柱中，并在室温下静置1h，然后采用梯度洗脱法用NaCl溶液进行样品洗脱，于盐离子浓度最高时收集洗脱液，经脱盐柱脱盐处理后，分离液冷冻干燥得大鲵低聚肽。
实施例2
一种大鲵低聚肽的制备方法，包括如下步骤：
(1)大鲵蛋白提取
将新鲜大鲵肉经过粉碎机粉碎、匀浆、冷冻离心(转速为1000转，温度为4℃)10min，收集上清液装在预冷钢盘(厚度为0.3cm)中，放于冷冻干燥机中，经过预冷处理，然后冷冻干燥，冷冻干燥参数为：温度为-45℃，压力为30Pa，时间为24h；冷冻干燥处理后，将其粉碎至60目以下得大鲵肉粉；采用食品级别正己烷浸提去除脂肪，挥干溶剂，得到脱脂大鲵粉；
(2)大鲵蛋白酶解
将上述所得脱脂大鲵粉按照质量体积比1:3比例加水搅拌，然后加入复合酶(质量比为碱性蛋白酶：中性蛋白酶：胰蛋白酶＝1:2.5:3)，酶解条件为：pH值7.2，酶解温度60℃，酶解时间6小时，酶解完成后升温至90℃，20min使复合酶灭活；按照该比例复合酶进行酶解所得产物中末端为疏水性氨基酸的几率会更大，会增加大鲵肽的生物活性；
(3)大鲵肽分离纯化
上述酶解产物经过截留1000道尔顿分子量的可再生纤维素透析膜进行过滤，收集滤液，采用seplife琼脂糖疏水层析介质，装入内径5.5cm，长度20cm层析柱，待疏水层析柱装柱完毕后，采用2M NaCl缓冲液进行平衡，平衡体积为3倍柱体积，平衡完毕后，将滤液缓慢加入到层析柱中，并在室温下静置1h，然后采用梯度洗脱法用NaCl溶液进行样品洗脱，于盐离子浓度最高时收集洗脱液，经脱盐柱脱盐处理后，分离液冷冻干燥得大鲵低聚肽。
实施例3
一种大鲵低聚肽的制备方法，包括如下步骤：
(1)大鲵蛋白提取
将新鲜大鲵肉经过粉碎机粉碎、匀浆、冷冻离心(转速为1000转，温度为4℃)10min，收集上清液装在预冷钢盘(厚度为0.3cm)中，放于冷冻干燥机中，经过预冷处理，然后冷冻干燥，冷冻干燥参数为：温度为-20℃，压力为30Pa，时间为30h；冷冻干燥处理后，将其粉碎至60目以下得大鲵肉粉；采用食品级别正己烷浸提去除脂肪，挥干溶剂，得到脱脂大鲵粉；
(2)大鲵蛋白酶解
将上述所得脱脂大鲵粉按照质量体积比1:8比例加水搅拌，然后加入复合酶(质量比为碱性蛋白酶：中性蛋白酶：胰蛋白酶＝1:2:3.5)，酶解条件为：pH值7.2，酶解温度60℃，酶解时间6小时，酶解完成后升温至110℃，20min使复合酶灭活；按照该比例复合酶进行酶解所得产物中末端为疏水性氨基酸的几率会更大，会增加大鲵肽的生物活性；
(3)大鲵肽分离纯化
上述酶解产物经过截留1000道尔顿分子量的可再生纤维素透析膜进行过滤，收集滤液，采用seplife琼脂糖疏水层析介质，装入内径5.5cm，长度20cm层析柱，待疏水层析柱装柱完毕后，采用2M NaCl缓冲液进行平衡，平衡体积为3倍柱体积，平衡完毕后，将滤液缓慢加入到层析柱中，并在室温下静置1h，然后采用梯度洗脱法用NaCl溶液进行样品洗脱，于盐离子浓度最高时收集洗脱液，经脱盐柱脱盐处理后，分离液冷冻干燥得大鲵低聚肽。
实施例4大鲵肽在调脂减肥中的应用评价
1、肥胖模型大鼠构建
(1)高脂饲料中三大营养物质按能量供给占比为，脂肪供能58.3％，蛋白质供能21％，碳水化合物供能20.7％。具体高脂饲料配方：以质量百分比计，包括5％蔗糖、18％猪油、15％蛋黄粉、0.5％胆酸盐、1％胆固醇和基础饲料60.5％。
(2)肥胖模型大鼠构建：实验大鼠采用上述配方饲料在SPF级动物房喂养6周并检测其血脂四项直至达到肥胖模型，饲养条件为室温维持18～24℃，压强维持在10～20Kpa，相对湿度保持在40～70％，饮水正常。
2、动物分组与实验
SPF级SD大鼠为购自湖北省三峡大学动物实验中心，大鼠体重为200～250g，适应性喂养1周后，首先将动物分为两组，一组为正常对照组(A组)，10只SD大鼠；另外一组为实验组，先进行高脂喂养，构建肥胖模型，待肥胖模型构建成功以后，随机分为4组，每组20只，分别为高脂模型组(B组)、高脂模型运动组(C组)、高脂模型大鲵肽组(D组)与高脂模型大鲵肽联合运动组(E组)；实验中A组与B组实验大鼠均为安静组，C组进行为期6周跑台训练，D组实验大鼠每天灌胃给予0.4g/kg体重大鲵低聚肽(实施例1制备所得)，E组实验大鼠每天灌胃给予0.4g/kg体重大鲵低聚肽(实施例1制备所得)同时进行跑台运动训练，训练方案与C组实验大鼠一致。
3、实验结果
(1)高脂饲料喂养大鼠体重变化
通过对实验大鼠每周体重的检测(见图1)，我们发现，在造模第一周，对照组与高脂模型组实验大鼠体重并没有显著性差异，而且在高脂饲料喂养三周以后，高脂模型组实验大鼠体重较对照组虽然有较大的增加但是还未达到显著性增加。在第4周，第5周第6周时，高脂模型组实验大鼠体重分别为373.46±12.92g、418.43±11.79g以及441.75±15.32，显著性高于同时期对照组大鼠体重(312.31±11.87g、336.57±12.64g、359.66±14.75g)。上述结果说明肥胖大鼠模型构建成功。
(2)高脂饲料喂养大鼠血脂四项检测结果
ELISA结果显示(图2)，在经过6周高脂饲料喂养以后，模型大鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)以及低密度脂蛋白(LDL)分别由0.52±0.13mmol/l、1.35±0.23mmol/l、0.30±0.08mmol/l显著性上升到1.61±0.22mmol/l、5.11±0.42mmol/l、1.85±0.23mmol/l；而高密度脂蛋白(HDL)则由0.39±0.12mmol/l降低至0.29±0.07mmol/l，但并无显著性差异。与此相对应的对照组在采用普通饲料喂养6周后，血清中TG、TC、HDL以及LDL均为出现明显改变。综合以上结果，我们认为肥胖模型大鼠构建成功。
(3)大鲵肽促进肥胖大鼠体重减轻
在造模成功后，我们按照实验动物训练方案对实验大鼠进行6周干预，发现对照组(A组)和高脂模型组(B组)大鼠体重维持缓慢升高的趋势，而且第6周的体重与第一周体重相比有显著性增加；单纯的高脂模型运动组(C组)大鼠体重在前两周保持轻微增长，到第三周开始逐渐下降，第6周体重与第二周相比有显著性下降；而单纯喂养0.4g/kg体重大鲵低聚肽的高脂模型大鲵肽组(D组)大鼠体重在前三周轻微升高，第四周开始体重略微下降，下降趋势较C组实验大鼠要缓慢，下降曲线更平稳；E组实验大鼠在给予0.4g/kg体重大鲵低聚肽同时进行跑台训练，结果显示与其他组实验大鼠不同的是，该组实验大鼠体重一直保持下降趋势，而且下降幅度较C组合D组明显增大，下降曲线更加陡峭(见图3)。
(4)大鲵肽对肥胖大鼠血脂四项影响
血脂四项包括甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)以及高密度脂蛋白(HDL)是评估肥胖的经典指标。在本实验中我们分别考察了大鲵肽以及大鲵肽联合有氧运动对肥胖大鼠血脂四项的影响。结果显示，高脂模型组与对照组大鼠的TG、TC、HDL以及LDL浓度在实验前和试验后均无显著性差异，而运动组大鼠在运动干预6周后，其血清中TG、TC以及LDL浓度均显著性低于运动干预前，相反HDL浓度明显高于运动干预前。单纯口服给予大鲵肽的实验大鼠，其血清中TG、TC、HDL以及LDL浓度在实验前后的变化与运动干预组相似，只是变化幅度略小于运动组。大鲵肽联合运动干预显示出比单纯运动以及单纯口服给予大鲵肽更加显著改变TG、TC、HDL以及LDL浓度的能力(见图4)。另外，实验前各组实验大鼠血清中TG、TC、HDL以及LDL浓度并无显著性差异，但是试验后运动组以及联合干预组实验大鼠血清中TG、TC、HDL以及LDL浓度与模型组相比发生显著性改变(#p<0.05)。
(5)大鲵肽减少肥胖模型大鼠食欲
能量摄入也是评价减重效果的关键因素，因此接下来我们进一步考察了各实验组大鼠进食量的改变，如图5结果所示，对照组(A组)、高脂模型组(B组)以及高脂模型运动组(C组)实验大鼠，在干预6周时间内，进食量并无显著性改变，而单纯给予大鲵肽的实验大鼠在干预3周后，其进食量发生显著性降低，大约在第5、第6周进食量开始趋于稳定。与之相似，高脂模型大鲵肽联合运动组实验大鼠进食量也在干预后第3周开始出现显著性降低，但是其进食量高于同时期单纯口服给予大鲵肽的实验大鼠。
(6)大鲵肽联合有氧运动对能量代谢及食欲调节相关细胞因子的影响
在考察各实验组血清中能量代谢以及食欲调节相关细胞因子的浓度后，我们发现高脂模型组大鼠血清中鸢尾素Irisin的浓度(118.74±16.65ng/ml)显著性低于对照组(257.43±21.78ng/ml)，而经过6周跑台运动干预后，其血清中Irisin浓度出现显著性的升高(187.58±18.52ng/ml)，虽然单纯口服给予大鲵肽的实验大鼠血清中Irisin浓度较高脂模型组有一定的增加，但是增加幅度明显小于运动干预组。高脂模型大鲵肽联合运动干预组实验大鼠血清中Irisin的浓度较模型组大幅度增加，而且其浓度也高于单纯运动干预组实验大鼠。同时，我们也观察到模型组中血清中FGF15浓度为21.52±2.83pg/ml，与对照组(7.35±1.36pg/ml)相比有显著性地升高，运动组以及口服大鲵肽组实验大鼠血清中FGF浓度(18.47±1.66pg/ml)与对照组相比出现下降，但并无显著性差异(见图6)，但是高脂模型大鲵肽联合运动组实验大鼠血清中FGF15浓度(14.23±1.45)与模型组相比出现显著性下降。同样的，我们也发现模型组实验大鼠血清中瘦素(Leptin)以及神经肽(NPY)的的含量(分别为1.33±0.41ng/ml和2.82±0.43ng/ml)要明显高于对照组，而单纯运动组与口服大鲵肽组实验大鼠血清中Leptin以及NPY浓度虽然较高脂模型组有一定程度的降低，但均未见显著性差异。而大鲵肽联合高脂模型运动组实验大鼠血清中这两种细胞因子浓度较模型组出现显著性的减少(分别为0.97±0.28ng/ml和1.89±0.27ng/ml)。
(7)大鲵肽联合有氧运动对能量代谢相关信号通路影响
如图7所示，肥胖模型大鼠骨骼肌中PGC-1ɑ表达量较对照组出现明显下降，与高脂模型组相比，单纯运动组实验大鼠骨骼肌中PGC-1ɑ表达水平呈现大幅度增加，单纯口服大鲵肽的实验大鼠，其骨骼肌中PGC-1ɑ表达量与高脂模型组相比并未见明显改变，然而高脂模型大鲵肽联合运动组大鼠骨骼肌中PGC-1ɑ表达量同样表现为大幅度上升，并且增加比例大于高脂模型运动组实验大鼠。我们也发现高脂模型组实验大鼠骨骼肌中p-AMPK表达水平较对照组并未发生显著性改变，而高脂模型运动组以及高脂模型大鲵肽联合运动组实验大鼠骼肌中p-AMPK表达水平较模型组均出现明显的上升，高脂模型大鲵肽联合运动组实验大鼠骨骼肌中p-AMPK表达水平更高。另外我们也检测了各组实验大鼠骨骼肌中Irisin表达量的变化情况，发现高脂模型组中Irisin的表达水平较对照组呈下降趋势，而运动干预，特别是口服大鲵肽联合运动干预能够增加实验大鼠骨骼肌中Irisin表达量，但是单纯口服大鲵肽似乎并不引起Irisin表达水平的改变(见图7)。
(8)大鲵肽联合有氧运动对实验大鼠食欲调节相关蛋白表达的影响
基于上述实验发现，口服大鲵肽具有降低实验大鼠食欲的作用，在本研究中，我们也初步考察了各种干预手段对肥胖大鼠调节食欲相关蛋白的表达。如图8II所示，与对照组相比，高脂模型组实验大鼠下丘脑中神经肽(NPY)的表达水平急剧升高，单纯的高脂模型运动组以及口服大鲵肽组实验大鼠小丘脑中NPY的表达相对于模型组出现明显的下降，而高脂模型大鲵肽联合运动则能更大幅度降低肥胖大鼠下丘脑中NPY表达水平。与之相反，我们发现，高脂模型组实验大鼠下丘脑中前黑素细胞质素原(POMC)的表达水平与对照组相比，出现显著性下降，而运动干预、口服大鲵肽以及大鲵肽联合跑台运动均能显著提高肥胖大鼠下丘脑中POMC的表达量，而且单纯口服大鲵肽对下丘脑中POMC的表达水平影响更明显(见图8III)。
尽管通过参考附图并结合优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以权利要求所述的保护范围为准。
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