阅读说明：本技术 低成本提取鱼蛋白的方法 (Low-cost method for extracting fish protein ) 是由 王振文 李健雄 于 2021-07-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种低成本提取鱼蛋白的方法,属于蛋白质的制备技术领域。该方法包括：(1)粉碎：将低值小杂鱼粉碎；(2)酶解：将酶液和步骤(1)的产物进行酶解,酶解条件为：温度为45-60℃,pH值6.5,时间为2.0-2.5小时,酶液的用量以鱼内脏计为低值小杂鱼重量的0.5-1.0倍：(3)蛋白提取：将步骤(2)的产物经灭酶、离心、脱色脱腥、微滤、纳滤和闪蒸得到鱼蛋白；酶液的制备过程包括：将粉碎后的鱼内脏在-10—10℃下采用正丁醇进行脱脂,正丁醇的用量为鱼内脏重量的0.2-0.5倍,脱脂完成后,固液分离,固体加水水提两次,水提时水的用量为鱼内脏重量的0.5-2.0倍,合并水提液并冷冻离心得到酶液。(The invention discloses a method for extracting fish protein at low cost, and belongs to the technical field of protein preparation. The method comprises the following steps: (1) crushing: crushing the low-value small trash fish; (2) enzymolysis: carrying out enzymolysis on the enzyme solution and the product obtained in the step (1), wherein the enzymolysis conditions are as follows: the temperature is 45-60 ℃, the pH value is 6.5, the time is 2.0-2.5 hours, the dosage of the enzyme solution is 0.5-1.0 time of the weight of the low-value small trash fish counted by fish viscera: (3) protein extraction: carrying out enzyme deactivation, centrifugation, decoloration and deodorization, microfiltration, nanofiltration and flash evaporation on the product obtained in the step (2) to obtain fish protein; the preparation process of the enzyme solution comprises the following steps: defatting the crushed fish viscera at-10 deg.C with n-butanol in an amount of 0.2-0.5 times of the weight of the fish viscera, performing solid-liquid separation after defatting, extracting the solid with water in an amount of 0.5-2.0 times of the weight of the fish viscera twice, combining the water extractive solutions, and freeze-centrifuging to obtain the enzyme solution.)

低成本提取鱼蛋白的方法

技术领域

本发明属于蛋白质的制备技术领域，特别涉及一种低成本提取鱼蛋白的方法。

背景技术

我国是一个渔业大国，仅广东省为例，近年来海洋渔业每年递增海产品总量不断增长，捕捞量每年300万吨，但其中30-40%为低值小杂鱼，由于价格低，加工手段落后，其中很大一部分直接切碎作为养殖用饲料，造成产品使用价值低，资源浪费现象严重。现有技术中可以以低值小杂鱼为原料，经粉碎、酶解和蛋白提取等过程得到蛋白质。

如申请号为CN201710067498.7的专利公开了一种提取鱼蛋白的方法，包括以下步骤：

（1）准备：将小杂鱼、低价值海鱼去除内脏后洗净，经匀浆器搅碎制成鱼糜；

（2）脱腥：将鱼糜置于10-20℃的脱腥溶液中漂洗4-6次，然后经0-4℃冷水漂洗2-3次后过滤，保留鱼糜；

（3）制备原混料：向重量份的100份鱼糜中加入800-1200份的水，并调节pH值至5.5-7.5，制得原混料；

（4）提取：保持原混料温度45-60℃，添加复合分解酶进行超声分解处理3-5h，搅拌速度100-120r/min，超声功率35-45W，作用时间30-60s，间隔15-20min，得到酶解料；

（5）脱脂脱苦：继续加入甘油酯水解酶、复合风味酶和质量百分比为10-15%的脱腥溶液对酶解料进行脱腥、脱苦味、脱脂处理，处理时间2-4小时；

（6）灭活：将步骤（5）所得酶解料温度升高至80-90℃并保持45-60min以杀灭酶活性，然后过滤酶解料，保留滤液；

（7）脱色：将滤液通过离子交换树脂进行脱色处理；

（8）浓缩：脱色后的溶液通过筛网过滤，然后真空浓缩至原体积的30-40%；

（9）制粉：将浓缩后的溶液送至喷雾干燥设备喷雾干燥得鱼蛋白粉。

如申请号为CN201710317816.0的专利公开了一种增强免疫的低值鱼蛋白粉的加工技术，所述制备方法包括以下步骤：

1）前处理：将鲜活低值小杂鱼，经宰杀、去鳞、去内脏、去头、去尾、剥皮，清洗干净；

2）斩拌成糜：放斩拌机切成肉糜，斩拌时间控制在8-10 min，确保斩拌均匀，无大块组织；

3）低值小杂鱼肉糜内源蛋白酶自溶：称取500g鱼糜置于酶解罐中在5℃，pH6.0-8.0条件下自溶0-12h；

4）酶解：加入一定量的外源蛋白酶，在pH7.0-9.0，55-60℃温度下，搅拌酶解6-24h；

5）灭酶：升温到85℃，保温30 min后，灭酶；

离心：将酶解液泵入碟式分离机中，调整离心机转速为6000-10000r/min，离心后分离出上层低值小杂鱼初鱼油；

6）纯化：压滤得澄清酶解液，加入鱼骨粉、糊精、甜奶粉、甘露醇、营养强化剂，搅拌；

7）喷雾干燥：控制酶解液的温度，保持在60℃，进风温度为185℃，出风温度为80℃，控制进液泵流量。

但是前述方法存在酶价格高,处理大量小杂鱼经济成本高。

发明内容

为了解决前述问题，本发明提供了一种低成本提取鱼蛋白的方法，该方法具有成本低、酶解效果好和废物再利用等优点。所述技术方案如下：

本发明实施例提供了一种低成本提取鱼蛋白的方法，该方法包括：以低值小杂鱼为原料，经粉碎、酶解和蛋白提取等过程得到。其中，粉碎与蛋白提取过程与现有技术类似。酶解的酶液的制备过程包括：以鱼内脏为原料，经粉碎、脱脂、水提取和冷冻离心等得到。酶解条件为：温度为35-60℃，pH值为5-7，时间为1-24小时，酶液的用量以鱼内脏计为低值小杂鱼重量的0.1-10倍，如低值小杂鱼重量为1Kg，则以0.1-10Kg的鱼内脏为原料制备酶液以进行酶解。

其中，酶液的原料选自青鱼内脏、草鱼内脏、鲢鱼内脏、鳙鱼内脏和罗非鱼内脏等中的一种或多种，具体来自鱼加工厂下脚料。

优选地，酶液的原料选自白鲢内脏和罗非鱼内脏中的一种或两种，不但便宜且效果好。更优选地，酶液的原料为白鲢内脏和罗非鱼内脏；经发明人大量实验，以白鲢内脏和罗非鱼内脏作为酶液原料，蛋白水解度达到30%以上，产品多肽含量高。

进一步地，鱼内脏去除鱼胆后作为制备酶液的原料。

优选地，酶解条件为：温度为45-60℃，pH值6.5，时间为2.0-2.5小时，酶液的用量以鱼内脏计为低值小杂鱼重量的0.5-1.0倍。

在本专利的一种方式中，酶液的制备过程包括：将粉碎后的鱼内脏溶于有机溶剂中，调整pH为5-7，在-10—10℃（优选为5℃）下进行脱脂，有机溶剂的用量为鱼内脏重量的0.2-0.5倍（优选为0.3倍），脱脂完成后，固液分离，固体加水水提至少一次（优选为2次），水提时水的用量为鱼内脏重量的0.5-2.0倍（优选为1倍），合并水提液并冷冻离心得到酶液。其中，有机溶剂选自正丁醇、石油醚、乙醚、丙酮或正己烷等。

具体地，有机溶剂为正丁醇。

在本专利的另一种方式中，酶液的制备过程包括：将粉碎后的鱼内脏溶于0.5-2.0倍（优选为1倍）重量的水中，调整pH为5-7，在-10—10℃（优选为5℃）下冷藏5-25小时，去除表面的油层，固液分离得到固体和冷冻液，固体加水水提至少一次（优选为2次），水提时水的用量为鱼内脏重量的0.5-2.0倍（优选为1倍），合并冷冻液和水提液并冷冻离心得到酶液。

其中，蛋白提取过程包括：酶解过程的产物经灭酶、离心、脱色脱腥、微滤、纳滤和闪蒸（最好至固含量在30%以上）等得到鱼蛋白。

优选地，本发明提供的低成本提取鱼蛋白的方法包括：

(1)粉碎：将低值小杂鱼粉碎。

(2)酶解：将酶液和步骤(1)的产物进行酶解（根据需要加水或不加水，水的用量最好小于低值小杂鱼重量的2倍），酶解条件为：温度为45-60℃，pH值6.5，时间为2.0-2.5小时，酶液的用量以鱼内脏计为低值小杂鱼重量的0.5-1.0倍。

(3)蛋白提取：将步骤(2)的产物经离心、脱色脱腥、微滤、纳滤和闪蒸得到鱼蛋白。

其中，酶液的制备过程包括：将粉碎后的鱼内脏溶于正丁醇中，调整pH为5-7，在-10—10℃下进行脱脂，正丁醇的用量为鱼内脏重量的0.2-0.5倍，脱脂完成后，固液分离，固体加水水提两次，水提时水的用量为鱼内脏重量的0.5-2.0倍，合并水提液并冷冻离心得到酶液。其中，鱼内脏选自白鲢内脏和罗非鱼内脏中的一种或两种。

具体地，纳滤得到清亮浓缩液，固含量一般在20-25%；闪蒸后固含量可达到35-40%；闪蒸后的浓缩液可以进行喷雾干燥得到固体粉末，也可以先调味后做成固体或液体产品。

本发明提供了一种低成本提取鱼蛋白的方法，该方法具有成本低、酶解效果好和废物再利用等优点。得到的产品的蛋白含量可达80%左右或更高（常规酶法的蛋白含量为70-80%），收率可达10%以上，产品中的氨基酸和多肽与常规酶法基本一致且多肽含量高；另外，本方法在低温下脱脂，酶液杂质少，保留活性高。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明作进一步地详细描述。

实施例1：

罗非鱼内脏1kg在5℃下用0.3kg正丁醇脱脂，柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液调控pH值到6，纯净水提取二次，每次水提的用水量为1kg，冷冻离心30分钟的上清液得到酶液。

将小杂鱼搅碎后称取1kg与前述酶液在pH值6，温度55℃ 反应4小时，水解液经灭酶、离心弃渣、脱色脱腥、微滤、纳滤、闪蒸后得到的水解液在喷雾干燥得到蛋白多肽粉，蛋白质含量80%，与市售蛋白酶法水解所得产品相当。

实施例2：

白鲢鱼内脏1kg, 在5℃下清洗加1kg水捣碎后至于低温库冷冻过夜，将冷冻上面一层油脂去除，然后加水在pH值7提取二次，每次水提的用水量为1kg，冷冻离心机离心得上清液得到酶液。

将小杂鱼2kg搅碎碎后加前述酶液和适量水pH值7，温度55℃下反应4小时再经灭酶、离心、脱色脱腥、组合膜微滤、纳滤得到清液在闪蒸得到固形物30%以上液体喷雾干燥得到浅黄色粉末197.3g，蛋白含量80.2%，与市售蛋白酶法水解所得产品相当。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。