具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

本发明的具体实施例如以下说明。

实施例1稀有人参皂甙的提取

取人参花干材料1000g，用3L的蒸馏水浸泡过夜后，煎煮至100℃提取不低于6h，在浸泡和煎煮过程中可以采用密闭环境，比如将人参花干材料于一个密封蒸煮罐中进行浸泡和煎煮进行煎煮。煎煮后将煎煮物用四层纱布过滤，残渣重复以上过程3次，合并3次提取液，即为水提液，所得水提液体积为8.5L。

作为其他的实施例和对比例，其水提过程大致相同。

在上述实施例1中，将上述的水提液减压浓缩至552mL，向浓缩液中加入有机试剂，有机试剂包含甲醇、乙醇和异丙醇，甲醇、乙醇和异丙醇的体积比例为1:8:1，加入的有机试剂的体积为浓缩液的4倍，约为2208mL。充分混合后，静置30min，取上清，减压浓缩去除有机试剂，得到浓缩液为363mL。

由于转化反应需要用到固定化细胞制剂，因此，转化反应需要适应固定化的重组大肠杆菌生长以及对糖基化酶以及蔗糖合酶的可溶性表达。

实施例1的转化反应过程具体为：

1)取UGT91D2固定化细胞制剂5.0mg，SS固定化细胞制剂5.0mg，加入0.2mmol/LIPTG、诱导温度16℃、诱导时间12h，诱导表达完成后，离心收集固定化细胞制剂；

2)用50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.5)洗涤稀释固定化细胞制剂至10g/L，然后加入上方萃取后的浓缩液25mL，加入蔗糖至1.5mg/mL，加入果糖至1.2mg/mL，加入UDP至0.25mg/mL于37℃，220r/min反应14h。

3)反应结束后，用等体积甲醇终止反应，12 000r/min离心10min，取上清液进行HPLC和LC-MS分析，以考察转化情况。

制备的如上式所述的化合物(R1为-Fru，R2为-Lac)的1HNMR(Lib＝SU Solvent＝DMSO 300MHz)图结果为δ：4.51(2H，d，J＝7.0hz)，4.40(2H，s，J＝7.0hz)，4.40(3H，s，J＝7.0hz)，4.05(2H，t，J＝7.0hz)，1.14(2H，t，J＝7.0hz)，1.04(2H，s，J＝7.0hz)，1.04(3H，s，J＝7.0hz)，1.41(2H，s，J＝7.0hz)，1.41(3H，s，J＝7.0hz)，1.77(2H，s，J＝-12.4hz)，1.77(1H，s，J＝7.0hz)，1.77(1H，s，J＝7.1hz)，1.77(1H，s，J＝7.0hz)，1.77(2H，s，J＝7.0hz)，1.53(2H，s，J＝-12.4hz)，1.53(1H，s，J＝7.0hz)，1.47(2H，s，J＝-12.4hz)，1.37(1H，s，J＝7.0hz)，1.57(2H，s，J＝-12.4hz)，1.57(1H，s，J＝7.0hz)，1.57(2H，s，J＝7.1hz)，1.44(2H，s，J＝-12.4hz)，1.44(1H，s，J＝7.0hz)，1.44(2H，s，J＝7.1hz)，3.77(2H，t，J＝-12.4hz)，3.54(1H，d，J＝-12.4hz)，3.54(2H，d，J＝7.0hz)，2.01(2H，s，J＝-12.4hz)，2.01(1H，d，J＝6.2hz)，2.01(1H，d，J＝15.1hz)，2.01(1H，d，J＝-1.0hz)。13CNMR结果为δ：108.7，118.6，110.0，84.8，71.3，77.2，71.6，75.2，46.9，50.8，51.1，26.8，27.9，100.3，1.5，73.8，90.6，71.9，71.5，76.8，67.9，34.1，39.0，61.8，53.6，42.0，31.6，49.8，25.8，39.0，87.8，62.5，62.2，62.8，62.2，62.2，72.4，16.1，16.4，24.0，139.5，123.9，40.8，27.0，29.9，29.9。

实施例2

参考现有技术的方法，采用三周龄的雄性昆明小鼠，体重25-30g，卫生级别为SPF级，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，试验动物生产许可证号：SCXK(湘)2016-0002；正常摄食饮水，保持在25℃，相对湿度40％，12h光照黑暗周期循环，适用性饲养1周后用于实验。

实验方法：

普通人参皂甙Rbl(ginsenosides Rbl，Gs-Rb1)(纯度96％)购自中科院昆明植物研究，所氧嗪酸钾购自sigma公司，尿酸(UA)检测试剂盒、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)检测试剂盒、黄嘌呤氧化酶测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)，其他试剂均为分析纯。

实验仪器：

TG1650-WS台式高速离心机(上海卢湘仪离心机仪器有限公司)；BSA124S-CW分析天平(成都一科仪器设备有限公司)等。

构建小鼠高尿酸血症模型

取昆明种小鼠最初5d喂养基础饲料，使小鼠适应实验室环境，实验开始前称量并记录体重，给80只小鼠随机分组，每组10只，分别为：

空白对照组：0.9％生理盐水，灌胃；

模型组：氧嗪酸钾300mg/kg·d腹腔注射+次黄嚓吟250mg/kg·d灌胃；

实验组：氧嗪酸钾300mg/kg·d腹腔注射+次黄嚓吟250mg/kg·d灌胃+实施例1所得的稀有人参皂甙100mg/kg·d灌胃+柠檬酸钾30mg/kg·d灌胃；

对比例组1：氧嗪酸钾300mg/kg·d腹腔注射+次黄嚓吟250mg/kg·d灌胃+实施例1所得的稀有人参皂甙100mg/kg·d灌胃；

对比例组2：氧嗪酸钾300mg/kg·d腹腔注射+次黄嚓吟250mg/kg·d灌胃+柠檬酸钾30mg/kg·d灌胃；

对比例组3：氧嗪酸钾300mg/kg·d腹腔注射+次黄嚓吟250mg/kg·d灌胃+普通人参皂甙100mg/kg·d灌胃；

对比例组4：氧嗪酸钾300mg/kg·d腹腔注射+次黄嚓吟250mg/kg·d灌胃+普通人参皂甙Rbl 100mg/kg·d灌胃+柠檬酸钾30mg/kg·d灌胃；

对比例组5：氧嗪酸钾300mg/kg·d腹腔注射+次黄嚓吟250mg/kg·d灌胃+实施例1所得的稀有人参皂甙100mg/kg·d灌胃+草酸钾30mg/kg·d灌胃；

按照以上剂量及给药方式，实验持续15d，期间每隔5天记录一次小鼠体重变化。

小鼠样本的收集

第16天，眼球取血后，颈椎脱臼处死小鼠，解剖内脏，取肝肾，收集样品并记录备用。将收集的血液置于EP管中，静止30min，以3500rpm/min转速，4℃离心10min，取上清淡黄色澄清液即血清，-20℃冻存，供小鼠血液生化指标检测使用。

活性检测

按试剂盒测定血尿酸UA、血尿素氮BUN、血肌酐Cr含量。按试剂盒测定黄嘌呤氧化酶(XOD)活性。

数据处理

实验数据以均数±标准差表示，组间比较，统计方法采用单因素方差分析(One way ANOVA)；组间比较，统计方法采用t检验。P<0.05认为有显著性差异，P<0.01认为有极显著性差异，结果用SPSS17.0统计软件分析。

表1不同组别小鼠实验检测结果

注：t检验,l：P<0.05(与空白组比较)；2：P<0.05(和模型组比较)；3：P<0.05(和实验组比较)

由表1可知，与空白对照组相比，模型组的小鼠血尿酸UA、血尿素氮BUN、血肌酐Cr含量显著增加，模型组的小鼠血清中黄嚓吟氧化酶活性XOD显著增加(p<0.05)。对比例1为单用稀有人参皂甙，不含有柠檬酸钾，其结果显示，对比例1中血尿酸UA、血尿素氮BUN、血肌酐Cr含量、黄嚓吟氧化酶活性均较模型组有显著性差异(p<0.05)。而使用普通人参皂甙(对比例3)或者普通人参皂甙+柠檬酸钾(对比例4)较模型组稍有下降，但是无统计学意义(p>0.05)，这表明该稀有人参皂甙对小鼠高尿酸血症模型而言，有一定的治疗作用。

实验组为稀有人参皂甙和柠檬酸钾联合治疗，其结果显示，实验组和对比例1相比较，其UA、BUN、CCr、XOD均下降，实现结果最好，和对比例1-4组比较均有统计学意义。该结果出乎意料的显示稀有人参皂甙和柠檬酸钾竟然有联合治疗作用。本研究发现稀有人参皂甙和柠檬酸钾竟然有联合治疗痛风的作用，考虑和柠檬酸钾碱化液体，促进稀有人参皂甙结构式稳定，促进吸收有一定关系。也可能和柠檬酸钾联合稀有人参皂甙抑制炎性细胞，维持血液稳态，促进尿酸代谢有一定关系。

实施例3

建模方法基本同实施例2，不同之处是配置MSU晶体：称取尿酸钠,加至1mol/L的氢氧化钠中,再加入无菌生理盐水煮沸溶解,冷却至室温后,调节pH到7.2,离心吸取上清,室温静置2d使MSU晶体析出。离心弃上清得MSU晶体,临用前经超声并且配置出所需浓度。

模型组、实验组、对比例组在10天、12天和14天，分别将MSU晶体(0.5mg/10μl)注射至小鼠踝关节胫附踝关节腔,而空白组注射等量的磷酸缓冲盐溶液(PBS)。

喂养至第16天时候，采用缚线法测量小鼠踝关节造模后周径与造模前周径。同时在眼眶后静脉丛取血，使用试剂盒检测血清炎症因子白细胞介素IL-1β，肿瘤坏死因子TNF—α、前列腺素PGE2。相关试剂盒均购自上海康朗生物科技有限公司。

数据处理如表2

表2不同组别小鼠实验检测结果

注：t检验,l：P<0.05(与空白组比较)；2：P<0.05(和模型组比较)；3：P<0.05(和实验组比较)

由表2可知，与空白对照组相比，模型组的小鼠踝关节周径差最大、白细胞介素IL-1β，肿瘤坏死因子TNF—α、前列腺素PGE2显著增加(p<0.05)。对比例1为单用稀有人参皂甙，不含有柠檬酸钾，其结果显示，对比例1中小鼠踝关节周径差、白细胞介素IL-1β，肿瘤坏死因子TNF—α、前列腺素PGE2显著增加均较模型组有显著性差异(p<0.05)。而使用普通人参皂甙(对比例3)或者普通人参皂甙+柠檬酸钾(对比例4)较模型组仅仅稍有下降，这表明该稀有人参皂甙对小鼠高尿酸血症诱导关节炎症痛风模型而言，有一定的治疗作用。

实验组为稀有人参皂甙和柠檬酸钾联合治疗，其结果显示，实验组和对比例1相比较，其小鼠踝关节周径差更小、白细胞介素IL-1β，肿瘤坏死因子TNF—α、前列腺素PGE2上升程度更小，小鼠关节肿胀程度更低，炎症程度更小，实验组和对比例1-4组比较均有统计学意义。该结果出乎意料的显示稀有人参皂甙和柠檬酸钾竟然有联合治疗作用。本研究发现稀有人参皂甙和柠檬酸钾竟然有联合减少痛风疾病中尿酸盐沉积的作用，考虑和柠檬酸钾促进稀有人参皂甙活化，还原尿酸盐，从而溶晶有一定关系。稀有人参皂甙和柠檬酸钾联合稀有人参皂甙抑制炎性细胞，能够维持血液稳态，促进尿酸代谢也有一定关系。

综上所述，该组合物通过动物实验验证了稀有人参皂甙具有降低小鼠血清中尿酸含量的作用，并且对于小鼠的肝脏和肾脏的毒副作用小。当联合使用稀有人参皂甙和柠檬酸钾时候，降低小鼠血清中尿酸，保护肝肾功的作用最强。

术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。