一种高纯左亚叶酸钙的制备方法
阅读说明：本技术 一种高纯左亚叶酸钙的制备方法 (Preparation method of high-purity calcium levofolinate ) 是由 俞旭峰 朱华 柴志善 于 2021-09-07 设计创作，主要内容包括：本发明属于化学原料药的合成领域,具体涉及一种高纯左亚叶酸钙的制备方法,包括如下步骤：S-1.亚叶酸钙、拆分剂加入到水中,搅拌使其溶解,过滤,得滤液；S-2.向所述滤液中加入乙酸钙和拆分剂,结晶、过滤,得一次拆分固体；S-3.将所述一次拆分固体经过溶解、结晶、过滤、干燥,得到左亚叶酸钙粗品；S-4.所述左亚叶酸钙粗品经经纯化得左亚叶酸钙成品；所述拆分剂为R-(α)-苯乙胺。本发明以乙酸钙的形式引入钙离子,避免了氯离子的引入,成品中无氯离子杂质。另外采用R-(α)-苯乙胺,作为拆分剂,配合乙酸钙,使得成品的异构体小于0.1%(药典规定小于0.5%)。(The invention belongs to the field of synthesis of chemical raw material medicines, and particularly relates to a preparation method of high-purity calcium levofolinate, which comprises the following steps: s-1, adding calcium folinate and a resolving agent into water, stirring to dissolve the calcium folinate and the resolving agent, and filtering to obtain a filtrate; s-2, adding calcium acetate and a resolving agent into the filtrate, crystallizing and filtering to obtain a primary resolved solid; s-3, dissolving, crystallizing, filtering and drying the primary split solid to obtain a crude calcium levofolinate product; s-4, purifying the crude product of the calcium levofolinate to obtain a finished product of the calcium levofolinate; the resolving agent is R- (alpha) -phenylethylamine. The invention introduces calcium ions in the form of calcium acetate, avoids the introduction of chloride ions, and has no chloride ion impurities in the finished product. In addition, R- (alpha) -phenylethylamine is used as a resolving agent and is matched with calcium acetate, so that the isomer of a finished product is less than 0.1% (less than 0.5% specified in pharmacopoeia).)
技术领域
本发明属于化学原料药的合成领域，具体涉及一种高纯左亚叶酸钙的制备方法。
背景技术
左亚叶酸钙为左亚叶酸的钙盐，左亚叶酸为5-甲酰四氢叶酸（即亚叶酸） 的具有药理学活性的L-光学异构体。左亚叶酸不需要被二氢叶酸还原酶还原 即可参与利用叶酸盐作为一碳单位来源的反应，且左亚叶酸可以主动或被动地通过细胞膜。左亚叶酸的基本作用和叶酸的基本作用相同，但效果优于叶 酸，因为叶酸在肝及骨髓中要先变为亚叶酸才能起作用。而本品，即左亚叶酸钙，为左亚叶酸的活性形式，其也具有刺激白细胞生长成熟的作用，能改善巨幼细胞性贫血。
另外，左亚叶酸钙也已经在实践中和甲氨蝶呤或氟尿嘧啶联合使用来治疗其他类型的恶性肿瘤，常常作为多药联合治疗方案的一员来使用。
左亚叶酸钙是亚叶酸钙的活性旋光体，具有药效和安全性方面的比较优势。未来该产品将逐步替代亚叶酸钙成为国内抗肿瘤药物市场上的一支新军。开发左亚叶酸钙产品市场前景十分广阔。
关于左亚叶酸钙的制备，例如专利号为专利号为CN103113372A的专利公开的一种高收率的左亚叶酸钙的制备方法，通过拆分工艺制备左亚叶酸钙，拆分过程中加入了含有左亚叶酸钙的溶液，左亚叶酸钙溶液中左亚叶酸钙占到亚叶酸钙总量的70%以上，该方法既提高了拆分收率，又回收利用了拆分工艺产生的母液，在工业生产中有较大意义。但是，目前，左旋亚叶酸钙的纯度很难达到要求，而且价格数倍于亚叶酸钙；原料药的纯度直接影响药物的安全性，而药物的价格与其生产成本与收益直接相关，两者也就决定了药物是否能够大范围安全地使用。 而且大部分的制备过程中都引入了氯离子，使得产品中氯离子含量无法满足标准。
发明内容
本发明提供一种高纯左亚叶酸钙的制备方法，无氯离子的引入，其光学纯度可以达到99.95%。
本发明采用如下的技术方案：
一种高纯左亚叶酸钙的制备方法，包括如下步骤：
S-1.亚叶酸钙、拆分剂加入到水中，搅拌使其溶解，过滤，得滤液；
S-2.向所述滤液中加入有机酸钙和拆分剂，结晶、过滤，得一次拆分固体；
S-3.将所述一次拆分固体过滤、干燥，得到左亚叶酸钙粗品；
S-4.所述左亚叶酸钙粗品经精制得左亚叶酸钙成品。
所述拆分剂为R-（α）-苯乙胺。
上述技术方案中，以有机酸钙的形式引入钙离子，避免了氯离子的引入，成品中无氯离子杂质。另外采用R-（α）-苯乙胺，作为拆分剂，配合有机酸钙，使得成品的异构体小于0.1%（药典规定小于0.5%）。有机酸钙盐可以是甲酸钙、乙酸钙、丙酸钙等。
以有机酸钙代替氯化钙，除了避免氯离子的引入造成成品氯污染外，还使得拆分体系更稳定，减少杂质，与R-（α）-苯乙胺拆分剂结合，获得左亚叶酸钙成品的光学纯度可以达到99.95%。
作为优选，在获得一次拆分固体之后，向所述一次拆分固体中滴加酸，再加入有机酸钙和拆分剂，结晶、过滤，得二次拆分固体；对二次拆分固体进行过滤、干燥，得到左亚叶酸钙粗品。
作为优选，步骤S-5中，所述左亚叶酸钙粗品的纯化方法包括如下步骤：
S-11.将左亚叶酸钙粗品加入纯化水中，用乙酸调节pH，得到溶解液；
S-12.溶解液过滤，滤液中加入无水乙醇，过滤沉淀、干燥，得左亚叶酸钙成品。
作为优选，所述亚叶酸钙的制备，以 NaHSO3 还原叶酸至四氢叶酸, 以甲酸乙酯作为甲酰化试剂制备亚叶酸钙 。
用传统的硼氢化钠或催化氢化还原法，还原不完全，产生大量二氢叶酸，或者反应物发生分子断裂，产生副产物，使产率降低，分离纯化困难。以NaHSO3为还原剂，TLC 检测未发现有分子断裂产生的蝶呤、对氨基苯甲酰基谷氨酸及其他杂质点的出现。并且相比其它还原剂，用NaHSO3 还原叶酸具有成本更低、操作更简便、产率高等优点。
作为优选，步骤S-3中所采用的酸为酸可以是甲酸、乙酸、丙酸等低碳链脂肪酸，代替传统使用的盐酸，除了避免氯离子的引入造成成品氯污染。
作为优选，步骤S-2和S-3中，结晶温度为0至20℃，结晶时间为5-10小时，进一步优选为5-6小时。
通过实施上述技术方案，相比现有技术，本发明具有如下改进点和优点：
1.以有机酸钙（甲酸钙、乙酸钙、丙酸钙）的形式引入钙离子，以有机酸（甲酸、乙酸、丙酸等）代替盐酸调节pH，避免了氯离子的引入，成品中无氯离子杂质。
2.采用R-（α）-苯乙胺，作为拆分剂，配合有机酸钙，使得成品的异构体小于0.1%（药典规定小于0.5%）。
3. 以有机酸钙代替氯化钙，除了避免氯离子的引入造成成品氯污染外，还使得拆分体系更稳定，减少杂质，与R-（α）-苯乙胺拆分剂结合，获得左亚叶酸钙成品的光学纯度可以达到99.95%。
4. 采用有机酸钙（尤其是乙酸钙）和R-（α）-苯乙胺，意外发现大大缩短了结晶的时间，相比现有技术中的20个小时左右，本发明在5小时左右就可以完成结晶。
5．以 NaHSO3 还原叶酸至四氢叶酸, 以甲酸乙酯作为甲酰化试剂制备亚叶酸钙 ，无发现有分子断裂产生的蝶呤、对氨基苯甲酰基谷氨酸及其他杂质点的出现。并且相比其它还原剂，用NaHSO3 还原叶酸具有成本更低、操作更简便、产率高等优点。
附图说明
附图1为实施例1中所得的一次拆分固体的异构图谱；
附图2为实施例1中所得的一次拆分固体的杂质图谱；
附图3为实施例1中所得的二次拆分固体的异构图谱；
附图4为实施例1中所得的二次拆分固体的杂质图谱；
附图5为实施例1中所得的左亚叶酸钙粗品的异构图谱；
附图6为实施例1中所得的左亚叶酸钙粗品的杂质图谱；
附图7为实施例1中所得的左亚叶酸钙成品的异构图谱；
附图8为实施例1中所得的左亚叶酸钙成品的杂质图谱；
附图9为对比例1中所得的一次拆分固体的异构图谱；
附图10为对比例1中所得的一次拆分固体的杂质图谱；
附图11为对比例1中所得的二次拆分固体的异构图谱；
附图12为对比例1中所得的二次拆分固体的杂质图谱；
附图13为对比例1中所得的左亚叶酸钙粗品的异构图谱；
附图14为对比例1中所得的左亚叶酸钙粗品的杂质图谱；
附图15为对比例1中所得的左亚叶酸钙成品的异构图谱；
附图16为对比例1中所得的左亚叶酸钙成品的杂质图谱；
附图17为对比例2中所得的一次拆分固体的异构图谱；
附图18为对比例2中所得的一次拆分固体的杂质图谱；
附图19为对比例2中所得的二次拆分固体的异构图谱；
附图20为对比例2中所得的二次拆分固体的杂质图谱；
附图21为对比例2中所得的左亚叶酸钙粗品的异构图谱；
附图22为对比例2中所得的左亚叶酸钙粗品的杂质图谱；
附图23为对比例2中所得的左亚叶酸钙成品的异构图谱；
附图24为对比例2中所得的左亚叶酸钙成品的杂质图谱；
附图25为对比例3中所得的一次拆分固体的异构图谱；
附图26为对比例3中所得的一次拆分固体的杂质图谱；
附图27为对比例3中所得的二次拆分固体的异构图谱；
附图28为对比例3中所得的二次拆分固体的杂质图谱；
附图29为对比例3中所得的左亚叶酸钙粗品的异构图谱；
附图30为对比例3中所得的左亚叶酸钙粗品的杂质图谱；
附图31为对比例3中所得的左亚叶酸钙成品的异构图谱；
附图32为对比例3中所得的左亚叶酸钙成品的杂质图谱；
附图33为实施例2中所得的左亚叶酸钙成品的异构图谱；
附图34为实施例2中所得的左亚叶酸钙成品的杂质图谱；
附图35为实施例3中所得的左亚叶酸钙成品的异构图谱；
附图36为实施例3中所得的左亚叶酸钙成品的杂质图谱。
具体实施方式
下面通过具体的实施例，对本发明作进一步说明。
需要说明的是，以下实施案例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照下述实施案例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对各实施案例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施案例技术方案的范围。
实施例1
以亚叶酸钙为原料，制备高纯左旋亚叶酸钙，如下：
51.1g(0. 1 m o l)亚叶酸钙和25g溴化钠悬浮于400ml水中，升温至50℃使之溶解，溶解液降温至10℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，合并滤液。
往滤液中加入10g乙酸钙和2g R-（α）-苯乙胺，溶解液降温至10℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，可得一次拆分固体59g，收率=90%，一次拆分异构图谱如附图1，一次拆分杂质图谱如附图2。
将一次拆分固体全量悬浮于400ml水中，升温至50℃，加入乙酸使之溶解，溶解液中加入10g乙酸钙和2g R-（α）-苯乙胺，溶解液降温至10℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，可得二次拆分固体51g，收率=90%，二次拆分异构图谱如附图3所示，二次拆分杂质图谱如附图4所示。
将二次拆分固体全量悬浮于400ml水中，升温至50℃，加入乙酸使之溶解，溶解液中加入10g乙酸钙和2g R-（α）-苯乙胺，溶解液降温至10℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，可得三次拆分固体----左亚叶酸钙粗品44.5g,收率=90%，粗品异构图谱如附图5所示，粗品杂质图谱如附图6所示。
将左亚叶酸钙粗品全量悬浮于400ml水中，升温至50℃，加入乙酸使之溶解，溶解液加入无水乙醇1500ml结晶5h，析出固体，过滤，无水乙醇洗涤，干燥可得左亚叶酸钙成品13.5g，收率=92%，氯化物≤0.05%，成品异构图谱如附图7所示，成品杂质图谱如附图8所示。
对比例1：
以亚叶酸钙粗品为原料，制备高纯左旋亚叶酸钙，如下：
51.1g(0. 1 m o l)亚叶酸钙粗品和25g溴化钠悬浮于400ml水中，升温至50℃使之溶解，溶解液降温至15℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，合并滤液。
往滤液中加入10g氯化钙和2g R-（α）-苯乙胺，溶解液降温至15℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，可得一次拆分固体57g，收率=88%，一次拆分异构图谱如附图9所示，一次拆分杂质图谱如附图10所示。
将一次拆分固体全量悬浮于400ml水中，升温至50℃，加入乙酸使之溶解，溶解液中加入10g氯化钙和2g R-（α）-苯乙胺，溶解液降温至15℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，可得二次拆分固体49g，收率=87%，二次拆分异构图谱如附图11所示，二次拆分杂质图谱如附图12所示。
将二次拆分固体全量悬浮于400ml水中，升温至50℃，加入乙酸使之溶解，溶解液中加入10g氯化钙和2g R-（α）-苯乙胺，溶解液降温至15℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，可得三次拆分固体----左亚叶酸钙粗品41g，收率=90%，粗品异构图谱如附图13所示，粗品杂质图谱如附图14所示。
将左亚叶酸钙粗品全量悬浮于400ml水中，升温至50℃，加入乙酸使之溶解，溶解液加入无水乙醇1500ml结晶5h，析出固体，过滤，无水乙醇洗涤，干燥可得左亚叶酸钙成品12.5g，收率=92%,氯化物≥0.5%，成品异构图谱如附图15所示，成品杂质图谱如附图16所示。
与实施例1的不同在于，将乙酸钙替换成氯化钙。
对比例2：
以亚叶酸钙粗品为原料，制备高纯左旋亚叶酸钙，如下：
51.1g(0. 1 m o l)亚叶酸钙粗品和25g溴化钠悬浮于400ml水中，升温至50℃使之溶解，溶解液降温至15℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，合并滤液。
往滤液中加入10g乙酸钙和2g S-甲基苄胺，溶解液降温至15℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，可得一次拆分固体52.5g，收率=80%，一次拆分异构图谱如附图17所示，一次拆分杂质图谱如附图18所示。
将一次拆分固体全量悬浮于400ml水中，升温至50℃，加入乙酸使之溶解，溶解液中加入10g乙酸钙和2g S-甲基苄胺，溶解液降温至15℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，可得二次拆分固体47g，收率=86%，二次拆分异构图谱如附图19所示，二次拆分杂质图谱如附图20所示。
将二次拆分固体全量悬浮于400ml水中，升温至50℃，加入乙酸使之溶解，溶解液中加入10g乙酸钙和2g S-甲基苄胺，溶解液降温至15℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，可得三次拆分固体----左亚叶酸钙粗品，38g，收率=84%，粗品异构图谱如附图21所示，粗品杂质图谱如附图22所示。
将左亚叶酸钙粗品全量悬浮于400ml水中，升温至50℃，加入乙酸使之溶解，溶解液加入无水乙醇1500ml结晶5h，析出固体，过滤，无水乙醇洗涤，干燥可得左亚叶酸钙成品11.2g，收率=90%，成品异构图谱如附图23所示，成品杂质图谱如附图24所示。
与实施例1的不同在于，将拆分剂R-（α）-苯乙胺替换成S-甲基苄胺。
对比例3：
以亚叶酸钙粗品为原料，制备高纯左旋亚叶酸钙，如下：
51.1g(0. 1 m o l)亚叶酸钙粗品和25g溴化钠悬浮于400ml水中，升温至50℃使之溶解，溶解液降温至15℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，合并滤液。
往滤液中加入10g乙酸钙和2g S-（α）-苯乙胺，溶解液降温至15℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，可得一次拆分固体57.5g，收率=89%，一次拆分异构图谱如附图25所示，一次拆分杂质图谱如附图26所示。
将一次拆分固体全量悬浮于400ml水中，升温至50℃，加入乙酸使之溶解，溶解液中加入10g乙酸钙和2g S-（α）-苯乙胺，溶解液降温至15℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，可得二次拆分固体47.8g，收率=88%，二次拆分异构图谱如附图27所示，二次拆分杂质图谱如附图28所示。
将二次拆分固体全量悬浮于400ml水中，升温至50℃，加入乙酸使之溶解，溶解液中加入10g乙酸钙和2g S-（α）-苯乙胺，溶解液降温至15℃结晶6h，析出固体，过滤，水洗固体，可得三次拆分固体----左亚叶酸钙粗品40.1g，收率=86%，粗品异构图谱如附图29所示，粗品杂质图谱如附图30所示。
将左亚叶酸钙粗品全量悬浮于400ml水中，升温至50℃，加入乙酸使之溶解，溶解液加入无水乙醇1500ml结晶5h，析出固体，过滤，无水乙醇洗涤，干燥可得左亚叶酸钙成品12.2g，收率=91%，成品异构图谱如附图31所示，成品杂质图谱如附图32所示。
与实施例1的不同在于，将拆分剂R-（α）-苯乙胺替换成S-（α）-苯乙胺。
实施例2
以亚叶酸钙为原料，制备高纯左旋亚叶酸钙，如下：
51.1g(0. 1 m o l)亚叶酸钙和25g溴化钠悬浮于400ml水中，升温至（40-60）℃使之溶解，溶解液降温至（0-20）℃结晶（5-20）h，析出固体，过滤，水洗固体，合并滤液。
往滤液中加入8g甲酸钙和2g R-（α）-苯乙胺，溶解液降温至（0-20）℃结晶（5-20）h，析出固体，过滤，水洗固体，可得一次拆分固体59.5g，收率=91%。
将一次拆分固体全量悬浮于400ml水中，升温至（40-60）℃，加入甲酸使之溶解，溶解液中加入8g甲酸钙和2g R-（α）-苯乙胺，溶解液降温至（0-20）℃结晶（5-20）h，析出固体，过滤，水洗固体，可得二次拆分固体50g，收率=89%。
将二次拆分固体全量悬浮于40 0ml水中，升温至（40-60）℃，加入甲酸使之溶解，溶解液中加入8g甲酸钙和2g R-（α）-苯乙胺，溶解液降温至（0-20）℃结晶（5-20）h，析出固体，过滤，水洗固体，可得三次拆分固体----左亚叶酸钙粗品43.8g,收率=89.2%。
将左亚叶酸钙粗品全量悬浮于400ml水中，升温至（40-60）℃，加入甲酸使之溶解，溶解液加入无水乙醇1500ml结晶（2-6）h，析出固体，过滤，无水乙醇洗涤，干燥可得左亚叶酸钙成品13.2g，收率=91.5%，氯化物≤0.05%，成品异构图谱如附图33所示，成品杂质图谱如附图34所示。
实施例3
以亚叶酸钙为原料，制备高纯左旋亚叶酸钙，如下：
51.1g(0. 1 m o l)亚叶酸钙和25g溴化钠悬浮于400ml水中，升温至（40-60）℃使之溶解，溶解液降温至（0-20）℃结晶（5-20）h，析出固体，过滤，水洗固体，合并滤液。
往滤液中加入12g丙酸钙和2g R-（α）-苯乙胺，溶解液降温至（0-20）℃结晶（5-20）h，析出固体，过滤，水洗固体，可得一次拆分固体60g，收率=90.5%。
将一次拆分固体全量悬浮于400ml水中，升温至（40-60）℃，加入丙酸使之溶解，溶解液中加入12g丙酸钙和2g R-（α）-苯乙胺，溶解液降温至（0-20）℃结晶（5-20）h，析出固体，过滤，水洗固体，可得二次拆分固体51.5g，收率=90.3%。
将二次拆分固体全量悬浮于400ml水中，升温至（40-60）℃，加入丙酸使之溶解，溶解液中加入12g丙酸钙和2g R-（α）-苯乙胺，溶解液降温至（0-20）℃结晶（5-20）h，析出固体，过滤，水洗固体，可得三次拆分固体----左亚叶酸钙粗品44.8g,收率=90.2%。
将左亚叶酸钙粗品全量悬浮于400ml水中，升温至（40-60）℃，加入丙酸使之溶解，溶解液加入无水乙醇1500ml结晶（2-6）h，析出固体，过滤，无水乙醇洗涤，干燥可得左亚叶酸钙成品得13.7g,收率=92.1%，氯化物≤0.05%，成品异构图谱如附图35所示，成品杂质图谱如附图36所示。
实施例4
从四氢叶酸的制备开始至制备高纯左旋亚叶酸钙，以 NaHSO3 还原叶酸至四氢叶酸, 以甲酸乙酯作为甲酰化试剂制备亚叶酸钙。再以所获得的亚叶酸钙为原料，制备高纯左旋亚叶酸钙。
10g叶酸悬浮于60ml水中，加入氢氧化钠溶液，搅拌溶解，加入15g亚硫酸氢钠，70℃ 下1.5小时，脱色、过滤，滤液中加入维生素C，调节pH至4.0，过滤，得固体A。将固体A溶解，加入甲酸甲酯60ml，反应20小时，结晶、过滤、干燥，得固体B。固体B溶解与氯化钙反应，过滤，滤液加入无水乙醇，结晶，过滤，干燥，得亚叶酸钙粗品。
以所获得的亚叶酸钙为原料，制备高纯左旋亚叶酸钙同实施例3。
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