一种快速筛选抗黄萎病棉花品种的方法
阅读说明：本技术 一种快速筛选抗黄萎病棉花品种的方法 (Method for rapidly screening verticillium wilt-resistant cotton varieties ) 是由 赖成霞 阳妮 玛依拉 石必显 师维军 李春平 郑子漂 于 2021-08-11 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种快速筛选抗黄萎病棉花品种的方法,通过提取大丽轮枝菌V991孢内毒素接种叶圆盘,统计分析叶圆盘荧光参数各指标变化与棉花抗黄萎病品种的关系,确定筛选抗(耐)黄萎病棉花品种(系)的关键性因素为光系统II实际光量子产量Y(II)、非调节性能量耗散的量子产量Y(NO)和非光化学淬灭系数(NPQ)三个特征曲线,利用其筛选出抗黄萎病棉花品种,与采用孢内毒素叶盘和分生孢子浸根水培技术对棉花抗性鉴定的结果高度一致,表明本发明提供的快速筛选棉花抗黄萎病品种的方法简单可靠,解决了利用分生孢子悬浮液浸根水培法存在的因孢子生长一致性差,造成鉴定结果参差不齐的问题,同时为棉花抗黄萎病鉴定方法提供新的毒素浸染源。(The invention discloses a method for rapidly screening verticillium wilt resistant cotton varieties, which comprises the steps of extracting verticillium dahliae V991 spore endotoxin to inoculate a leaf disc, statistically analyzing the relation between the index change of the fluorescence parameter of the leaf disc and the verticillium wilt resistant cotton varieties, determining three characteristic curves of the key factors of screening the verticillium wilt resistant cotton varieties (systems) including the actual light quantum yield Y (II), the non-adjustable energy dissipation quantum yield Y (NO) and the non-photochemical quenching coefficient (NPQ), screening the verticillium wilt resistant cotton varieties by using the characteristic curves, and highly consistent with the result of identifying the resistance of cotton by using spore endotoxin leaf disc and conidium root-soaking water culture technology, thereby showing that the method for rapidly screening the verticillium wilt resistant cotton varieties provided by the invention is simple and reliable, solving the problem that the conidium root-soaking water culture method by using conidium suspension liquid has poor consistency due to spore growth, causes the problem of uneven identification results, and provides a new toxin-infecting source for the identification method of the verticillium wilt resistance of cotton.)
技术领域
本发明属于棉花抗病性检测技术领域，具体涉及一种快速筛选抗(耐)黄萎病棉花品种(系)的方法。
背景技术
棉花黄萎病是一种土传、维管束真菌病害，被称为棉花的“癌症”，对棉花生产造成了非常严重的经济损失。大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)和黑白轮枝菌(Verticillium albo-atrum)是其主要的致病菌。在我国，棉花黄萎病的主要致病菌为大丽轮枝菌(V.dahliae)。该病原菌具有寄主范围广、类型多、化学农药难以防治、变异快、存活时间久、抗逆性强等特点，大丽轮枝菌在整个棉花生长阶段内都能进行侵染，形成系统性侵染后，造成棉株叶片萎蔫黄化，维管束变褐，植株矮小，严重时叶片焦枯，植株枯萎，最后脱落成光杆，严重制约我国棉花生产。针对棉花黄萎病，至今仍无有效的防治方法。培育抗性品种是防治棉花黄萎病的有效方法，但长期以来，由于缺乏对大丽轮枝菌具有免疫或高抗抗性的种质资源，黄萎病抗性育种一直未取得重大进展。
目前，筛选棉花抗黄萎病品种方法主要包括室内和室外两种方式，其中室外鉴定采用建立病圃，利用自然环境进行鉴定筛选，由于自然气候的地理环境以及气候条件的变化，造成棉花品种发病情况状态不一，往往需要几年才能完成，费事费力；室内鉴定筛选方法主要有分生孢子浸根法以及孢外毒素鉴定法两种，分生孢子浸根法是室内抗黄萎病品种鉴定的主要方式，但其对棉花种植要求高，需要全程浇灌纯净水，并且伤根部位和程度难以控制，造成鉴定结果抗性呈“假阳性”的几率高；毒素鉴定法是近年来发展起来的一种新的鉴定方式，研究者普遍认为致病毒素是胞外分泌型，并且已从T9，VD8，SS-43等菌系液体培养基质中分离出相关毒素，需要培养基质多且量大，才能满足实验所需求的毒素，成本高且耗时，是目前造成该研究迟缓的主要原因之一，但是对于其他菌系的致病毒素则无相关的研究，因此对其他菌系的胞内毒素研究这方面尚存在空白。大丽轮枝菌V991是一种是强致病性、落叶型的菌株，该菌株利用分生孢子浸根法和孢外毒素浸根及叶盘法可以快速让农作物发病，但是未见有文献和专利报道提取该菌孢内毒素作为侵染源对棉花抗黄萎病品种鉴定。
发明内容
针对现有棉花抗黄萎病品种鉴定方法存在的问题，分生孢子浸根法因孢子生长一致性差，造成鉴定结果参差不齐以及未见有文献和专利报道利用提取的大丽轮枝菌V991孢内毒素作为侵染源筛选棉花抗黄萎病品种的技术现状，本发明旨在于提供一种快速筛选抗黄萎病棉花品种的方法，通过提取大丽轮枝菌V991孢内毒素接种叶圆盘，统计分析叶圆盘荧光参数各指标变化与棉花抗黄萎病品种的关系，确定影响筛选抗(耐)黄萎病棉花品种(系)的关键性因素为光系统II实际光量子产量Y(II)、非调节性能量耗散的量子产量Y(NO)和非光化学淬灭系数(NPQ)三个特征曲线，建立筛选抗(耐)黄萎病棉花品种的评价体系，筛选出抗黄萎病棉花品种，进一步验证不同筛选棉花抗黄萎病品种方法，本发明提供的筛选抗黄萎病棉花品种的方法，孢内毒素在侵染棉花后能引起叶绿素荧光参数的变化，由于孢内毒素的均一性，这种变化在抗(耐)黄萎病的棉花品种也具有一致性，因此，黄萎病孢内毒素棉花品种荧光参数天变化可作为抗病棉花品种筛选依据。
为了达到以上技术目的，本发明通过以下技术方案实现：
本发明具体提供了快速筛选抗黄萎病棉花品种的方法，具体包括如下步骤：
(1)制备棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌V991分生孢子悬浮液，提取棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌V991孢内毒素。
(2)在棉花盛花期，每个品系选取20株棉花，取其倒数第三片叶片，然后用打孔器在叶片上打出20-30个直径为1.0cm的叶圆盘，然后将叶圆盘浸入50mL浓度为16μg/mL的步骤(1)所得孢内毒素溶液中，Czapek’s培养液培养24h后取出，用吸水纸吸干表面附着液体，以叶圆盘的变黄面积为分级依据，统计病情指数。
(3)将步骤(2)处理后的叶圆盘经暗适应30min后，置于叶绿素荧光成像系统样品台，每个叶圆盘设定直径为0.5-1.0cm的感兴趣区域AOI，采集接种孢内毒素叶圆盘叶绿素荧光成像图片，检测各叶圆盘叶绿素荧光参数的动力学变化曲线。
(4)统计分析数据，分析荧光参数各指标变化与抗黄萎病棉花品种的关系，确定筛选抗(耐)黄萎病棉花品种(系)的关键性影响因素，建立筛选抗(耐)黄萎病棉花品种的评价体系，筛选棉花抗黄萎病棉花品种。
本发明一种快速筛选抗黄萎病棉花品种的方法中，上述步骤(1)分生孢子悬浮液制备过程如下：将直径为0.5cm的棉花黄萎病菌饼接种到经121℃灭菌15min的Czapek’s培养液中，在25℃转速为130rpm/min的摇床中振荡培养5天，至分生孢子在三角瓶壁上有成团结构出现为止；将培养获得的液体经140目和400目钢筛双层过滤后即可获得孢子悬浮液；将获得的孢子悬浮液于常温条件下，14000rpm/min离心10min，收集沉淀，采用灭菌水洗涤收集到的沉淀，14000rpm/min离心10min，收集沉淀，加入pH值为6.5的0.05M磷酸缓冲液中悬浮沉淀，获得的悬浮液孢子浓度调节至107个/mL；将孢子悬浮液经120Mpa，温度10℃，高压均浆机反复研磨3-4次，于4℃，18000rpm/min离心25min，弃上清，用0.45μm的微孔滤膜过滤除杂菌，最终得到的滤液为孢内毒素。
本发明一种快速筛选抗黄萎病棉花品种的方法中，上述步骤(4)确定筛选抗(耐)黄萎病棉花品种(系)的关键性影响因素为光系统II实际光量子产量Y(II)、非调节性能量耗散的量子产量Y(NO)和非光化学淬灭系数(NPQ)三个特征曲线。
同时，本发明一种快速筛选抗黄萎病棉花品种的方法的应用。
通过实施本发明提供上述具体技术方案，实施本发明内容，可以达到以下有益效果：
(1)本发明提供的一种快速筛选棉花抗黄萎病品种的方法，通过提取大丽轮枝菌V991孢内毒素侵染叶圆盘，对比分生孢子浸根法棉花病情指数，荧光参数各指标与抗黄萎病棉花品种的关系，确定影响筛选抗(耐)黄萎病棉花品种(系)特征曲线的关键性因素为光系统II实际光量子产量Y(II)、非调节性能量耗散的量子产量Y(NO)和非光化学淬灭系数(NPQ)三个特征曲线，建立筛选抗(耐)黄萎病棉花品种的评价体系，筛选出抗黄萎病棉花品种，采用孢内毒素接种叶盘和分生孢子浸根技术对棉花抗性鉴定的结果，与上述荧光参数天变化所得棉花品种抗性鉴定结果高度一致，因此，接种黄萎病孢内毒素后棉花品种荧光参数天变化可作为抗病棉花品种筛选依据。
(2)本发明提供的接种大丽轮枝菌接种棉花引起棉花叶绿素荧光参数的变化筛选棉花抗黄萎病品种的方法，由于大丽轮枝菌V991孢内毒素的均一性，其荧光参数的变化在抗(耐)黄萎病的棉花品种也具有一致性，解决了利用分生孢子悬浮液浸根法筛选抗黄萎病棉花品种方法中存在的因孢子生长一致性差，造成鉴定结果参差不齐的问题。
附图说明
图1所示为不同棉花品种采用水培法与胞内毒素浸泡的圆盘法的病情指数比较图。
图2所示为不同棉花品种接种大丽轮枝菌V991孢内毒素后的叶盘外观特征及叶绿素荧光成像变化图。图中A为不同棉花品种接种大丽轮枝菌V991孢内毒素后的叶盘外观特征；B为不同棉花品种接种大丽轮枝菌V991孢内毒素后FV/FM的荧光变化；C为不同棉花品种接种大丽轮枝菌V991后孢内毒素NO的荧光变化；D为不同棉花品种接种大丽轮枝菌V991孢内毒素后Y(II)的荧光变化；E为不同棉花品种接种大丽轮枝菌V991孢内毒素后NPQ的荧光变化；F为荧光强度值。
图3所示为不同棉花品种接种大丽轮枝菌V991孢内毒素后的叶绿素荧光成像的天变化图。
图4所示为接种大丽轮枝菌V991孢内毒素后棉花品种荧光参数天变化图。
图5所示为不同浸染源处理不同品种棉花病情指数统计图。
具体实施方式
菌株材料：
本发明中所采用的棉花黃萎病原菌：大丽轮枝菌V991(Verticillium daliaeKleb)，为常见菌株，公众可从中国农业科学院植物保护研究所获得。
棉花品种：供试所用的所有冀棉棉花品种(系)湘棉13号，2890，中棉12号，辽棉15号，渝棉1号由新疆农业科学院经济作物研究所提供，分生孢子浸根法及毒素叶盘侵染法所用的棉花品种为辽棉15号。
本申请中采用的查氏(Czapek)培养基(1L)配制方法：称取葡萄糖30g，NaNO32 g，K2HPO4·3H2O 1g，KCl 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g依次倒入1L去离子水中，充分溶解后，高温高压灭菌15min。
本申请中采用的5mmol磷酸缓冲液母液(1L)配制方法：称取0.78g NaH2PO4·2H2O,用去离子水定容到1L，称取1.79g Na2HPO4·2H2O，用去离子水定容到1L。
本申请中采用的5mmol磷酸缓冲液pH 7.0(1L)配制方法：分别量取610mLNaH2PO4·2H2O，390mLNa2HPO4·2H2O，用去离子水定容到1L。
本发明中所述试剂、材料均可通过公共渠道购买，工艺中所采用的设备和仪器均为本领域常见的设备。
本试验处理采用Microsoft Excel进行数据分析处理，采用Sigmaplot 14.0软件进行数据分析作图，Photoshop 2017进行图片处理。
本发明中选用的所有材料、试剂和仪器以及数据处理方法都为本领域熟知的，但不限制本发明的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例1：快速筛选抗黄萎病棉花品种的方法
一种快速筛选抗黄萎病棉花品种的方法，具体方法包括如下步骤：
(1)制备棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌V991分生孢子悬浮液，提取棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌V991孢内毒素。
(2)在棉花盛花期，每个品系选取20株棉花，取其倒数第三片叶片，然后用打孔器在叶片上打出20-30个直径为1.0cm的叶圆盘，然后将叶圆盘浸入50mL浓度为16μg/mL的步骤(1)所得孢内毒素溶液中，Czapek’s培养液培养24h后取出，用吸水纸吸干表面附着液体，以叶圆盘的变黄面积为分级依据，统计病情指数。
(3)将步骤(2)处理后的叶圆盘经暗适应30min后，置于叶绿素荧光成像系统样品台，每个叶圆盘设定直径为0.5-1.0cm的感兴趣区域AOI，采集接种孢内毒素叶圆盘叶绿素荧光成像图片，检测各叶圆盘叶绿素荧光参数的动力学变化曲线。
(4)统计分析数据，分析荧光参数各指标变化与抗黄萎病棉花品种的关系，确定筛选抗(耐)黄萎病棉花品种(系)的关键性影响因素，建立筛选抗(耐)黄萎病棉花品种的评价体系，筛选棉花抗黄萎病棉花品种。
其中，上述步骤(1)分生孢子悬浮液制备过程如下：将直径为0.5cm的棉花黄萎病菌饼接种到经121℃灭菌15min的Czapek’s培养液中，在25℃转速为130rpm/min的摇床中振荡培养5天，至分生孢子在三角瓶壁上有成团结构出现为止；将培养获得的液体经140目和400目钢筛双层过滤后即可获得孢子悬浮液；将获得的孢子悬浮液于常温条件下，14000rpm/min离心10min，收集沉淀，采用灭菌水洗涤收集到的沉淀，14000rpm/min离心10min，收集沉淀，加入pH值为6.5的0.05M磷酸缓冲液中悬浮沉淀，获得的悬浮液孢子浓度调节至107个/mL；将孢子悬浮液经120Mpa，温度10℃，高压均浆机反复研磨3-4次，于4℃，18000rpm/min离心25min，弃上清，用0.45μm的微孔滤膜过滤除杂菌，最终得到的滤液为孢内毒素。
实施例2：确定筛选抗黄萎病棉花品种的关键性影响因素试验
本实施例在实施例1的基础上，考察筛选抗(耐)黄萎病棉花品种(系)的关键性影响因素。
1.试验方法
采用分生孢子浸根法和孢内毒素浸泡叶圆盘法对棉花的抗病指数进行统计，并采集孢内毒素浸泡叶圆盘叶绿素荧光成像图片，检测各叶圆盘叶绿素荧光参数的动力学变化曲线。
2.检测指标
(1)病情指数统计
调查分生孢子蘸根法水培法棉花黄萎病发病情况，在15天进行调查，按照温室棉花苗期发病的5级制进行统计，计算病情指数，划分黄萎病的致病类型，分级标准：0级-健株，无症状；1级-1～2片子叶发病；2级-1片真叶发病；3级-2片真叶以上发病或脱落，仅剩心叶；4级-植株生长点或全株枯死。
调查叶圆盘棉花黄萎病发病情况，以个为单位，采用全面调查法，对所有经处理的棉花叶圆盘进行调查病情指数，病情指数分级标准：0级：叶片无病班；1级：整个叶面积中病斑面积占1-25％，叶片出现褐色斑点；2级：整个叶面积中病斑面积占26-50％，叶片变黄或有部分褐色病斑；3级：整个叶面积中病斑面积占51-74％，叶片变黄或有大部分褐色病斑；4级：整个叶面积中病斑面积占75％，叶片基本偏黄或褐色。根据病指对品种抗性进行分类：，病指＝0，免疫；病指≤10，高抗；病指10.1～20.0，抗病；病指20.1～35.0耐病，病指>35.1感病。
(2)叶绿素荧光成像参数统计
棉花叶圆盘经暗适应30min后，置于叶绿素荧光成像系统样品台，每个叶圆盘设定直径为0.5-1.0cm的感兴趣区域AOI，在软件的Kinetics窗口检测出各叶圆盘叶绿素荧光参数的动力学变化曲线，可从Report窗口导出。采用叶绿素荧光成像系统测定光系统II最大光量子产量(Fv/Fm)，光系统II实际光量子产量(Y(Ⅱ))，非光化学淬灭系数(NPQ)，非调节性能量耗散的量子产量(Y(NO))等叶绿素荧光参数，并进行荧光参数和图片进行分析。
3.数据分析
(1)孢内毒素浸泡叶圆盘法对抗黄萎病棉花品种的可靠性鉴定
分别采用分生孢子浸根法与孢内毒素浸泡叶圆盘法对棉花抗黄萎病品种进行鉴定，参见如附图1所示，2890在水培法与圆盘法鉴定中，水培法病情指数为13.3，圆盘法病情指数为16.6均在20以内，根据棉花品种抗性鉴定标准可定性为抗性品种，湘棉13号在水培与圆盘法鉴定中，水培法病情指数为28.3，圆盘法病情指数为33.3均在21-35以内，根据棉花品种抗性鉴定标准可定性为耐病品种，渝棉1号水培法病情指数为53.3，圆盘法病情指数为56.25，辽棉15号水培法病情指数为76.6，圆盘法病情指数为72.91，中棉12号水培法病情指数为73.3，圆盘法病情指数为54.16，病情指数均大于35，根据棉花品种抗性鉴定标准可定性为感病品种，说明大丽轮枝菌V991提取的胞内毒素与分生孢子浸根法对棉花黄萎病抗性一致，该方法适用于抗黄萎病棉花品种的鉴定。
(2)不同棉花品种接种大丽轮枝菌V991胞内毒素后的叶盘外观特征及叶绿素荧光成像变化
对不同棉花品种接种大丽轮枝菌V991胞内毒素后的叶盘外观特征及叶绿素荧光成像变化进行观察，参见如附图2所示，可以看出不同品种被大丽轮枝菌毒素侵染3d后，与侵染1d进行对比，可看到圆盘发病面积有明显差异，抗病品系2890不管是从扫描仪下观察，或者分析荧光图都没有明显的变化，维持较为健康的组织形态，耐病品种湘棉1号，毒素侵染3d，叶盘外观和Fv/Fm，Y(II)，NPQ荧光参数图像变化不明显，而荧光图Y(NO)在3d颜色发生明显变化，感病品种渝棉1号，中棉12号，辽棉15号的Fv/Fm、Y(II)、NPQ、NO四种荧光图在3d就发生明显变化，其中中棉12号，辽棉15号，随着毒素侵染时间的加长，Fv/Fm，Y(II)，NPQ，Y(NO)荧光图像响应变弱，在毒素侵染5d后，Fv/Fm，Y(II)，NPQ甚至荧光响应逐渐为0。因此Fv/Fm，Y(II)，NPQ，Y(NO)四种荧光图像可作为大丽轮枝菌胞内毒素法对棉花抗(耐)黄萎病品种鉴定的一种方式。
(3)不同棉花品种接种大丽轮枝菌V991孢内毒素后的叶绿素荧光参数的变化
棉花叶圆盘被棉花黄萎病V991毒素侵染后，参见如附图3所示，各棉花品种光系统II最大光量子产量(Fv/Fm)的变化范围为0.50-0.76，其中抗病品种与耐病品种在0.72范围上下呈微波浪型波动，而感病品种感病品种辽棉15号，渝棉1号，中棉12号幅度较大，在0.5-0.76范围呈大波浪波动，其中中棉12号甚至呈梯度下降。各棉花品种实际最大光量子量Y(Ⅱ)的变化范围为0.10-0.27，其中辽棉15号上下波动最为明显，像斜体“Z”型，在侵染3d首先呈现一个上升趋势，5-7d又快速下降，9-11d呈波浪波动，抗病品种2890，湘棉13号侵染7天的下降斜度小于感病品种，并且侵染11d天后，可呈现明显的勺状，1-7d形成勺柄平缓，而感病品种则无上述特征。
各棉花品种(系)非光化学淬灭系数(NPQ)的变化范围为0.07-0.26，其中抗病品种2890及耐病品种湘棉13号在0.13上下波动，并在侵染11天呈现W型，侵染5天则形成了W型状中的中心点，而感病品种波动范围大，变动范围无法形成紧凑的W型。
光系统Ⅱ非调节性能力耗散的量子产量Y(NO)为0.43-0.81，抗病品种2890及耐病品种湘棉13号在0.43-0.66上下波动，侵染9天形成明显的M型，侵染5天形成M的中心点，而感病品种中棉12在侵染9天也能形成明显的M型，但侵染7天才能形成M的中心点，并且在0.57-0.72范围波动，而其他感病品种则0.49-0.81范围呈震荡波动。
(4)接种黄萎病孢内毒素后棉花品种荧光参数天变化作为抗病棉花品种筛选的依据
在前述的研究中，抗(耐)病品种被毒素侵染11天的过程中，光系统II实际最大光量子Y(II)在被毒素侵染11天的过程中，前7天下降斜度比较平缓，并且在后期能形成勺状。光系统Ⅱ非调节性能力耗散的量子产量Y(NO)则可形成紧凑的W型，非光化学淬灭系数(NPQ)则可形成M型，这三个特征可作为筛选抗(耐)黄萎病棉花品种(系)的特征曲线，以2890、湘棉13号作为抗/耐黄萎病棉花品种的参照，以中棉12号作为感病品种的参照，比较18个品种(系)的棉花叶圆盘被棉花黄萎病V991毒素侵染后，各叶圆盘天变化的Y(II)、Y(NO)、NPQ荧光参数参见如附图4所示，冀棉8号符合上述的三个基本特征，而其他的棉花品种(系)则无此特征，由此可以判定冀棉8号为抗(耐)黄萎病品种。
通过上述试验可知：筛选抗(耐)黄萎病棉花品种(系)的关键性影响因素为光系统II实际光量子产量Y(II)、非调节性能量耗散的量子产量Y(NO)和非光化学淬灭系数(NPQ)三个特征曲线。
实施例3：不同筛选棉花抗黄萎病品种方法对抗黄萎病棉花品种鉴定的验证
为进一步验证接种黄萎病孢内毒素后棉花品种荧光参数天变化作为抗病棉花品种筛选的依据，分别采用分生孢子浸根法与胞内毒素浸泡叶圆盘法采用常规的病情指数规程对上述18个棉花品种进行抗黄萎病鉴定采用，参见如附图5所示，冀棉8号在水培法与圆盘法鉴定中，病情指数分别为水培法为21.6667，圆盘法为25，病指均在35以内，根据棉花品种抗性鉴定标准可定性为耐病品种，其他棉花品种(系)的病情指数均在35以上，均为感病品种。根据病情指数鉴定法，采用孢内毒素叶盘和分生孢子浸根技术对棉花抗性鉴定的结果，与上述荧光参数天变化所得棉花品种抗性鉴定结果高度一致。因此，接种黄萎病孢内毒素后棉花品种荧光参数天变化可作为抗病棉花品种筛选依据。
综上所示，本发明提供的快速筛选棉花抗黄萎病品种方法，采用大丽轮枝菌V991孢内毒素接种叶圆盘，通过统计其抗病指数确定其适用于抗黄萎病棉花品种的鉴定，统计分析其荧光成像图片和荧光参数变化与棉花抗黄萎病品种的关系，最终确定光系统II实际光量子产量Y(II)、非调节性能量耗散的量子产量Y(NO)和非光化学淬灭系数(NPQ)三个特征曲线可作为抗棉花品种筛选的依据，进一步验证发现，采用孢内毒素叶盘和分生孢子浸根技术对棉花抗性鉴定的结果，与上述荧光参数天变化所得棉花品种抗性鉴定结果高度一致，表明本发明提供的快速筛选棉花抗黄萎病品种的方法简单，可靠，解决了利用分生孢子悬浮液浸根法筛选抗黄萎病棉花品种方法中存在的因孢子生长一致性差，造成鉴定结果参差不齐的问题，同时为棉花抗黄萎病鉴定方法提供新的毒素浸染源。
上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所延伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。
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