Jnk抑制剂、其药物组合物和用途
阅读说明：本技术 Jnk抑制剂、其药物组合物和用途 (JNK inhibitors, pharmaceutical compositions and uses thereof ) 是由 李金平 娄军 郭晓丹 柳力 彭微 陈晓亚 钱丽娜 王朝东 于 2020-05-22 设计创作，主要内容包括：本文提供下式(I)所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、氮氧化物或它们药学上可接受的盐,其可用作JNK抑制剂。还提供了式(I)所示化合物的制备方法,包含式(I)所示化合物的药物组合物,以及式(I)所示化合物用于制备药物的用途,所述药物用于治疗可通过抑制JNK活性而得以治疗的疾病。(Provided herein are compounds of formula (I), racemates, stereoisomers, tautomers, isotopic labels, solvates, polymorphs, nitroxides thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof, useful as JNK inhibitors. Also provided are a process for the preparation of the compounds of formula (I), pharmaceutical compositions comprising the compounds of formula (I), and the use of the compounds of formula (I) for the preparation of a medicament for the treatment of a disease treatable by inhibition of JNK activitySexually treating diseases.)
技术领域
本发明涉及药物领域，具体涉及可抑制JNK活性的化合物、其药物组合物和用途。
背景技术
促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)是真核生物信号传递网络中的重要途径之一。MAPK链由3类蛋白激酶MAP3K-MAP2K-MAPK组成，通过依次磷酸化将上游信号传递至下游应答分子。在哺乳动物机体中，包括三大MAPK信号转导通路：细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-Jun N-末端激酶(JNK)和p38信号通路，其中ERK1/2信号转导通路调控细胞生长和分化，JNK和p38 MAPK信号转导通路在炎症与细胞凋亡等应激反应中发挥重要作用。JNK是MAPK家族的重要成员，它可由应激信号激活，因此又被称为应激活化蛋白激酶(stress-activated protein kinase，SAPK)。JNK参与广泛的生物学过程，包括胚胎发育，细胞凋亡/存活，癌基因表达细胞的转化血管生成，T细胞激活、B细胞增殖、细胞因子的产生和炎症的发生等。
目前，已鉴定了三种截然不同的基因(JNK1，JNK2和JNK3)，它们编码10种剪接变体。JNK1和JNK2在广泛多样的组织中表达，而JNK3主要在神经元中表达，较小程度地在心脏和睾丸中表达。JNK家族的成员通过促炎细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)以及环境应激而活化。JNK的活化通过它的上游激酶——MKK4和MKK7，经由Thr-183和Tyr-185的双磷酸化而介导。研究显示，MKK4和MKK7可以通过不同的上游激酶激活，所述不同的上游激酶包括MEKK1和MEKK4，这取决于外部刺激和细胞环境。JNK信号传导的特异性是通过使用被称为JNK-相互作用蛋白的支架蛋白而形成JNK-特异性信号传导复合物来实现的，所述复合物含有激酶级联的多个组分。通过磷酸化特异性底物，JNK已经显示在炎症、T细胞功能、细胞凋亡和存活中发挥重要作用，所述底物包括转录因子如c-Jun、激活蛋白-1(AP1)家族成员和ATF2，以及非转录因子如IRS-1和Bcl-2。据认为，JNK的过度活化是自身免疫、炎性、代谢、神经学疾病以及癌症中的重要机制。一些研究表明，JNK信号转导通路在肺纤维化和肝纤维化中被激活，调控细胞炎症、增殖、分化和凋亡等，其可由TGF-β1诱导。
特发性肺间质纤维化(Idiopathic interstitial pulmonary fibrosis，IPF)，是一种原因不明的以普通间质性肺炎为特征性病理改变的慢性、弥漫性肺间质疾病，其组织病理学及影像学多显示为普通间质性肺炎的表现。因其发病机制复杂，病情呈不可逆性进展，早期诊断困难；确诊后患者生存率随时间推移显著下降，其3年生存率为50％，5年生存率仅为20％，比多数癌症(例如：白血病、乳腺癌、结肠癌、子宫瘤、肾癌等)的生存率都低，被称为“不是癌症的癌症”。
肝纤维化是慢性肝病向肝硬化进展的共同环节。既往相关研究局限于避免纤维化发生、延缓乃至阻断纤维化进展。但近年来多项实验均提示，无论是消除致病因素还是应用有效的抗纤维化药物，都可能部分或完全逆转患者及模型动物中的肝纤维化，即肝纤维化在一定程度上是可逆的。然而，肝纤维化的逆转过程十分复杂，众多信号通路如已知的MAPK/EKR信号通路以及SAPK/JNK和MEK5等MAPK信号通路，以及PI3K/Akt、Notch等非MAPK信号通路都在其中发挥重要作用。
目前，尚无通过JNK抑制途径治疗疾病如纤维化疾病的药物上市。因此，开发新的JNK抑制剂化合物对于上述疾病的治疗具有积极意义。
发明内容
为改善现有技术中存在的问题，本发明提供如下技术方案：
一种式(I)所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、氮氧化物或它们药学上可接受的盐：
其中，R1、R2各自独立地选自H、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Ra取代的如下基团：C1-40烷基、C2-40烯基、C2-40炔基、C1-40烷氧基、C3-20环烷基、3-20元杂环基、C6-20芳基、C6-20芳基-C1-40烷基、5-20元杂芳基或5-20元杂芳基-C1-40烷基；X、Y、Z相同或不同，各自独立地选自(C＝O)NH、(C＝O)O、C＝O、S(O)2、S＝O、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rb取代的如下基团：氨基、C1-40亚烷基、C2-40亚烯基、C2-40亚炔基、C1-40亚烷氧基、C3-20亚环烷基、3-20元亚杂环基、C6-20亚芳基、C6-20芳基-C1-40亚烷基、5-20元亚杂芳基或5-20元杂芳基-C1-40亚烷基；
每一个Ra独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、NHC(O)Ra1、C(O)ORa2、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rc取代的如下基团：C1-40烷基、C1-40烷氧基、C3-20环烷基、3-20元杂环基或C6-20芳基；
每一个Rb独立地选自CN、卤素、OH、NH2、COOH、NO2、氧代(＝O)、S(O)2CH3、C(O)NHCH2CH3、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rc取代的如下基团：C1-40烷基、C1-40烷氧基、C3-20环烷基、3-20元杂环基、C6-20芳基或5-20元杂芳基；
每一个Rc独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、S(O)2CH3、C1-40烷基、卤代C1-40烷基、C1-40烷氧基或卤代C1-40烷氧基；
Ra1选自H、羟基、卤素、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rd取代的如下基团：C1-40烷基、C2-40烯基、C2-40炔基、C1-40烷氧基、C3-20环烷基、3-20元杂环基、C6-20芳基或5-20元杂芳基；
Ra2选自H、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rd取代的如下基团：C1-40烷基、C2-40烯基、C2-40炔基、C3-20环烷基、3-20元杂环基、C6-20芳基或5-20元杂芳基；
每一个Rd相同或不同，各自独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、S(O)2CH3、C1-40烷基、卤代C1-40烷基、C1-40烷氧基或卤代C1-40烷氧基。
根据本发明的实施方案，R1、R2各自独立地选自H、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Ra取代的如下基团：C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、C1-10烷氧基、C3-10环烷基、3-10元杂环基、C6-14芳基、C6-14芳基-C1-10烷基、5-14元杂芳基或5-14元杂芳基-C1-10烷基；
X、Y、Z相同或不同，各自独立地选自(C＝O)NH、(C＝O)O、C＝O、S(O)2、S＝O、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rb取代的如下基团：氨基、C1-10亚烷基、C2-10亚烯基、C2-10亚炔基、C1-10亚烷氧基、C3-10亚环烷基、3-10元亚杂环基、C6-14亚芳基、C6-14芳基-C1-10亚烷基、5-14元亚杂芳基或5-14元杂芳基-C1-10亚烷基；
每一个Ra独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、NHC(O)Ra1、C(O)ORa2、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rc取代的如下基团：C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-10环烷基、3-10元杂环基或C6-14芳基；
每一个Rb独立地选自CN、卤素、OH、NH2、COOH、NO2、氧代(＝O)、S(O)2CH3、C(O)NHCH2CH3、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rc取代的如下基团：C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-10环烷基、3-10元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基；
每一个Rc独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、S(O)2CH3、C1-10烷基、卤代C1-10烷基、C1-10烷氧基或卤代C1-10烷氧基；
Ra1选自H、羟基、卤素、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rd取代的如下基团：C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、C1-10烷氧基、C3-10环烷基、3-10元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基；
Ra2选自H、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rd取代的如下基团：C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、C3-10环烷基、3-10元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基；
每一个Rd相同或不同，各自独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、S(O)2CH3、C1-10烷基、卤代C1-10烷基、C1-10烷氧基或卤代C1-10烷氧基。
根据本发明的实施方案，R1、R2各自独立地选自H、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Ra取代的如下基团：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C3-10环烷基、3-10元杂环基、C6-14芳基、C6-14芳基-C1-6烷基、5-14元杂芳基或5-14元杂芳基-C1-6烷基；
X、Y、Z相同或不同，各自独立地选自(C＝O)NH、(C＝O)O、C＝O、S(O)2、S＝O、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rb取代的如下基团：氨基、C1-6亚烷基、C2-6亚烯基、C2-6亚炔基、C1-6亚烷氧基、C3-10亚环烷基、3-10元亚杂环基、C6-14亚芳基、C6-14芳基-C1-6亚烷基、5-14元亚杂芳基或5-14元杂芳基-C1-6亚烷基；
每一个Ra独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、NHC(O)Ra1、C(O)ORa2、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rc取代的如下基团：C1-6烷基或C1-6烷氧基、C3-10环烷基、3-10元杂环基或C6-14芳基；
每一个Rb独立地选自CN、卤素、OH、NH2、COOH、NO2、氧代(＝O)、S(O)2CH3、C(O)NHCH2CH3、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rc取代的如下基团：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-10环烷基、3-10元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基；
每一个Rc独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、S(O)2CH3、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代C1-6烷氧基；
Ra1选自H、羟基、卤素、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rd取代的如下基团：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C3-10环烷基、3-10元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基；
Ra2选自H、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rd取代的如下基团：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、3-10元杂环基、C6-14芳基或5-14元杂芳基；
每一个Rd相同或不同，各自独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、S(O)2CH3、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代C1-6烷氧基。
根据本发明的实施方案，R1、R2各自独立地选自H、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Ra取代的如下基团：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C3-7环烷基、3-7元杂环基、苯基、苯基-C1-6烷基、5-6元杂芳基或5-6元杂芳基-C1-6烷基；
X、Y、Z相同或不同，各自独立地选自(C＝O)NH、(C＝O)O、C＝O、S(O)2、S＝O、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rb取代的如下基团：氨基、C1-6亚烷基、C2-6亚烯基、C2-6亚炔基、C1-6亚烷氧基、C3-7亚环烷基、3-7元亚杂环基、亚苯基、苯基-C1-6亚烷基、5-6元亚杂芳基或5-6元杂芳基-C1-6亚烷基；
每一个Ra独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、NHC(O)Ra1、C(O)ORa2、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rc取代的如下基团：C1-6烷基或C1-6烷氧基、C3-6环烷基、3-7元杂环基或苯基；
每一个Rb独立地选自CN、卤素、OH、NH2、COOH、NO2、氧代(＝O)、S(O)2CH3、C(O)NHCH2CH3、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rc取代的如下基团：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-7环烷基、3-7元杂环基、苯基或5-6元杂芳基；
每一个Rc独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、S(O)2CH3、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代C1-6烷氧基；
Ra1选自H、羟基、卤素、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rd取代的如下基团：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C3-10环烷基、3-7元杂环基、苯基或5-6元杂芳基；
Ra2选自H、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rd取代的如下基团：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、3-7元杂环基、苯基或5-6元杂芳基；
每一个Rd相同或不同，各自独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、S(O)2CH3、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代C1-6烷氧基。
根据本发明的实施方案，R1、R2各自独立地选自H、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Ra取代的如下基团：C1-6烷基、C3-7环烷基、苯基；
X选自未取代的或任选被一个、两个或更多个Rb取代的如下基团：C1-6亚烷基、C1-6亚烷氧基、亚苯基；
Y选自(C＝O)NH、(C＝O)O、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rb取代的如下基团：C1-6亚烷基、C1-6亚烷氧基、亚苯基；
Z选自未取代的或任选被一个、两个或更多个Rb取代的如下基团：C1-6亚烷基、C1-6亚烷氧基、亚苯基；
每一个Ra独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rc取代的如下基团：C1-6烷基或C1-6烷氧基；
每一个Rb独立地选自CN、卤素、OH、氧代(＝O)、或者未取代的或任选被一个、两个或更多个Rc取代的如下基团：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-7环烷基、3-7元杂环基、苯基或5-6元杂芳基；
每一个Rc独立地选自CN、卤素、OH、NH2、氧代(＝O)、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代C1-6烷氧基。
作为实例，式(I)化合物可选自下面表1中例示的化合物及其药学上可接受的盐、消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物：
表1
本发明化合物药学上可接受的盐可以是酸加成盐，也可以是碱加成盐，例如，可以是与以下的无机酸或有机酸形成的酸加成盐：盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲酸、乙酸、酒石酸、富马酸、柠檬酸、苹果酸、草酸、抗坏血酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸等，或者可以是与钠离子、钾离子、钙离子、铵离子等形成的盐。
本发明还提供式(I)所示化合物的制备方法，包括以下步骤1)-3)：
其中，X、Y、Z、R1和R2独立地具有上文所述的定义；
步骤1)：化合物1与化合物2在碱作用下反应得到化合物3；
步骤2)：化合物3脱保护得到化合物4；
上述脱保护的条件是本领域技术人员已知的，例如在酸作用下脱保护，所述酸可以为有机酸或无机酸，例如选自盐酸、三氟乙酸、甲酸、乙酸、丙酸、硫酸中的至少一种；和
步骤3)：化合物4在碱作用下关环得到式(I)所示化合物。
根据本发明的实施方案，步骤1)的反应条件可为常规选择，例如，所述碱可以选自三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、碳酸钾、碳酸钠、叔丁醇钾、叔丁醇钠、氢氧化钾、氢氧化钠中的至少一种，或者可以以过量的化合物1提供碱性条件。
根据本发明的实施方案，步骤1)的反应可以在存在溶剂或不存在溶剂的情况下进行。当存在溶剂时，所述溶剂可以为有机溶剂，所述有机溶剂优选选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、丙酮、二氯甲烷中的至少一种；
根据本发明的实施方案，在步骤1)中，化合物1与化合物2的摩尔比可以为1:(0.5～20)；所述化合物1与所述碱的摩尔比可以为1:(0.5～20)；所述化合物1与有机溶剂的重量体积比可以为1:(0～100)g/ml，优选为1:(3～100)g/ml；反应可以于10℃～150℃下进行，优选于25℃～120℃下进行；反应时间可以为1～24h。
根据本发明的实施方案，步骤2)的反应可以在存在溶剂或不存在溶剂的情况下进行。当存在溶剂时，所述溶剂可以为有机溶剂或水-有机溶剂组成的混合溶剂，所述有机溶剂优选选自乙酸乙酯、甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、丙酮、二氯甲烷中的至少一种，水与有机溶剂的体积比为0:100～100:0。
根据本发明的实施方案，在步骤2)中，化合物3与所述酸的摩尔比可以为1:(0.8～100)；所述化合物3与溶剂的重量体积比可以为1:(0～100)g/ml，优选为1:(3～100)g/ml；反应可以于-20℃～150℃下进行，优选于25℃～120℃下进行；反应时间可以为1～24h。
根据本发明的实施方案，步骤3)的反应条件可为常规选择，例如，所述碱可以选自三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、碳酸钾、碳酸钠、叔丁醇钾、叔丁醇钠、氢氧化钾、氢氧化钠中的至少一种。
根据本发明的实施方案，步骤3)的反应可以在存在溶剂或不存在溶剂的情况下进行。当存在溶剂时，所述溶剂可以为有机溶剂，所述有机溶剂优选选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、丙酮、二氯甲烷中的至少一种。
根据本发明的实施方案，在步骤3)中，化合物4与碱的摩尔比可以为1:(0.5～20)；所述化合物4与有机溶剂的重量体积比可以为1:(0～100)g/ml，优选为1:(3～100)g/ml；反应可以于0℃～150℃下进行，优选于25℃～120℃下进行；反应时间可以为1～24h。
本领域技术人员应当理解，式(I)所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、氮氧化物可以作为原料或中间体，以制备式(I)所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、氮氧化物的药学上可接受的盐。为此，本发明还提供式(I)所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、氮氧化物在制备式(I)所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、氮氧化物的药学上可接受的盐中的用途。
本发明还提供式I所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、氮氧化物、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、药学上可接受的盐或前药中的至少一种在制备药物中用途，所述药物为蛋白质激酶的抑制剂。所述药物用来治疗、预防或改善动物或人的病症，所述病症包括肺部纤维化或肝脏纤维化等。此外，所述化合物针对蛋白激酶、特别是JNK1和/或JNK2有活性。本文提供的方法包括将有效量的本发明化合物(包括式(I)所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、氮氧化物或它们药学上可接受的盐，下同)给予有其需要的对象。
本发明还提供药物组合物，其包含治疗有效量的式(I)所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、氮氧化物、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、药学上可接受的盐或前药。所述药物组合物还可任选包含药学上可接受的辅料，例如载体、赋形剂。作为实例，所述辅料可以为选自下列中的一种或多种：崩解剂、助流剂、润滑剂、稀释剂或填充剂、粘合剂、着色剂。
本发明还提供一种调节JNK激酶功能的方法，包括向有此需要的个体给予有效量的一种或更多种本发明的化合物，或者包含所述化合物的药物组合物。
再一个方面，本发明提供抑制表达激酶的细胞中的所述激酶的方法，包括使所述细胞接触有效量的本发明化合物。在一个实施方案中，所述激酶是JNK1、JNK2或其突变体或同等型，或它们的组合，所述化合物是一种或更多种式(I)的化合物，例如来自表1的化合物。
在另一个方面，本文提供的是用于治疗或预防肝脏纤维化疾病例如非酒精性脂肪性肝炎、脂肪变性(即脂肪肝)、肝硬化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化、肝炎、肝细胞癌和肝纤维化同时伴有长期或反复酒精摄入(酒精性肝炎)、伴有感染(例如病毒性感染例如HCV)、伴有肝脏移植或伴有药物诱发的肝损伤(例如对乙酰氨基酚毒性)的方法，包括给予有其需要的对象有效量的本发明化合物。在有些方面，本文提供的是用于治疗或预防导致肝脏或肺部纤维化疾病例如非酒精性脂肪性肝炎、脂肪变性(即脂肪肝)、肝硬化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化和肝炎的糖尿病或代谢综合症的方法，包括给予有其需要的对象有效量的本发明化合物。
在另一个方面，本文提供的是用于治疗或预防一种或多种选自特发性肺纤维化(IPF)、系统性硬化病、硬皮病、慢性同种异体移植物肾病变、抗体介导的排斥或狼疮的紊乱的方法，包括给予有其需要的对象有效量的本发明化合物。在有些这样的实施方案中，所述狼疮是红斑狼疮(例如，盘状红斑狼疮或皮肤红斑狼疮)或系统性狼疮。
在另一个方面，本文提供的是用于治疗或预防通过抑制JNK1和/或JNK2可治疗或可预防的病症的方法，所述方法包括给予有其需要的对象有效量的本发明化合物。此类病症的实例包括类风湿性关节炎；类风湿性脊椎炎；骨关节炎；哮喘、支气管炎；变应性鼻炎；慢性阻塞性肺疾病；囊性纤维化；炎症性肠疾病；过敏性肠综合症(irritable bowelsyndrome)；粘液性结肠炎；溃疡性结肠炎；克罗恩病(Crohn's disease)；亨廷顿病(Huntington's disease)；肝炎；胰腺炎；肾炎；多发性硬化；红斑狼疮；II型糖尿病；肥胖症；动脉粥样硬化；血管成形术后再狭窄；左心室肥大；心肌梗塞；脑卒中；心、肺、肠、肾、肝、胰、脾和脑的缺血性损伤；急性或慢性器官移植排斥；用于移植的器官的保存；器官衰竭或肢缺损(例如，包括但不限于由缺血-再灌注损伤、创伤、全身受伤、车祸、挤压伤或移植失败所致的)；移植物抗宿主病；内毒素性休克；多器官衰竭；银屑病；暴露于火、化学品或辐射所致的烧伤；湿疹；皮炎；皮肤移植；局部缺血；与外科手术或创伤性损伤(例如车辆事故、枪弹伤或肢轧碎(limb crush))相关的缺血病症；癫痫；阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)；帕金森病(Parkinson's disease)；对细菌或病毒感染的免疫应答；恶病质；血管生成性和增殖性疾病；实体肿瘤；和各种组织例如结肠、直肠、前列腺、肝脏、肺、支气管、胰腺、脑、头、颈、胃、皮肤、肾脏、宫颈、血液、喉、食管、口、咽、膀胱、卵巢或子宫的癌症。
在另一个方面，本文提供式(I)的化合物，其用于调节JNK激酶功能，包括向有此需要的个体给予有效量的一种或更多种本发明的化合物，或者包含所述化合物的药物组合物。
在又一个方面，本发明提供式(I)的化合物，其用于抑制表达激酶的细胞中的所述激酶的方法，包括使所述细胞接触有效量的本发明化合物。在一个实施方案中，所述激酶是JNK1、JNK2或其突变体或同等型，或它们的组合，所述化合物是一种或更多种式(I)的化合物，例如来自表1的化合物。
在又一个方面，本文提供式(I)的化合物，其用于治疗或预防肝脏纤维化疾病例如非酒精性脂肪性肝炎、脂肪变性(即脂肪肝)、肝硬化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化、肝炎、肝细胞癌和肝纤维化同时伴有长期或反复酒精摄入(酒精性肝炎)、伴有感染(例如病毒性感染例如HCV)、伴有肝脏移植或伴有药物诱发的肝损伤(例如对乙酰氨基酚毒性)的方法，包括给予有其需要的对象有效量的本发明化合物。在有些方面，本文提供的是用于治疗或预防导致肝脏或肺部纤维化疾病例如非酒精性脂肪性肝炎、脂肪变性(即脂肪肝)、肝硬化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化和肝炎的糖尿病或代谢综合症的方法，包括给予有其需要的对象有效量的本发明化合物。
在又一个方面，本文提供式(I)的化合物，其用于治疗或预防一种或多种选自特发性肺纤维化(IPF)、系统性硬化病、硬皮病、慢性同种异体移植物肾病变、抗体介导的排斥或狼疮的紊乱的方法，包括给予有其需要的对象有效量的本发明化合物。在有些这样的实施方案中，所述狼疮是红斑狼疮(例如，盘状红斑狼疮或皮肤红斑狼疮)或系统性狼疮。
在又一个方面，本文提供式(I)的化合物，其用于治疗或预防通过抑制JNK1和/或JNK2可治疗或可预防的病症的方法，所述方法包括给予有其需要的对象有效量的本发明化合物。此类病症的实例包括类风湿性关节炎；类风湿性脊椎炎；骨关节炎；哮喘、支气管炎；变应性鼻炎；慢性阻塞性肺疾病；囊性纤维化；炎症性肠疾病；过敏性肠综合症；粘液性结肠炎；溃疡性结肠炎；克罗恩病；亨廷顿病；肝炎；胰腺炎；肾炎；多发性硬化；红斑狼疮；II型糖尿病；肥胖症；动脉粥样硬化；血管成形术后再狭窄；左心室肥大；心肌梗塞；脑卒中；心、肺、肠、肾、肝、胰、脾和脑的缺血性损伤；急性或慢性器官移植排斥；用于移植的器官的保存；器官衰竭或肢缺损(例如，包括但不限于由缺血-再灌注损伤、创伤、全身受伤、车祸、挤压伤或移植失败所致的)；移植物抗宿主病；内毒素性休克；多器官衰竭；银屑病；暴露于火、化学品或辐射所致的烧伤；湿疹；皮炎；皮肤移植；局部缺血；与外科手术或创伤性损伤(例如车辆事故、枪弹伤或肢轧碎)相关的缺血病症；癫痫；阿尔茨海默病；帕金森病；对细菌或病毒感染的免疫应答；恶病质；血管生成性和增殖性疾病；实体肿瘤；和各种组织例如结肠、直肠、前列腺、肝脏、肺、支气管、胰腺、脑、头、颈、胃、皮肤、肾脏、宫颈、血液、喉、食管、口、咽、膀胱、卵巢或子宫的癌症。
有益效果
本发明提供的式(I)的化合物具有优异的JNK抑制活性，并且具有较好的安全性和代谢稳定性。此外，本发明的式(I)的化合物制备方法简单、易于提纯，因此具有良好的应用前景。
术语定义与说明
除非另有说明，本申请说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当属于本申请说明书记载的范围内。
本申请说明书和权利要求书记载的数值范围，当该数值范围被定义为“整数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点以及该范围内的每一个整数。例如，“0～10的整数”应当理解为记载了0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的每一个整数。当该数值范围被定义为“数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点、该范围内的每一个整数以及该范围内的每一个小数。例如，“0～10的数”应当理解为不仅记载了0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的每一个整数，还至少记载了其中每一个整数分别与0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9的和。
除非另有说明，当本文中使用“本发明化合物”或“本发明的化合物”时，旨在涵盖式(I)所示的三氮唑衍生物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、氮氧化物或它们药学上可接受的盐。
术语“卤素”指F、Cl、Br和I。换言之，F、Cl、Br和I在本说明书中可描述为“卤素”。
术语“C1-40烷基”应理解为优选表示具有1～40个碳原子的直连或支链饱和一价烃基，优选为C1-10烷基和C1-6烷基。“C1-10烷基”应理解为优选表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的直连或支链饱和一价烃基。“C1-6烷基”应理解为优选表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直连或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。特别地，所述基团具有1、2、3、4、5或6个碳原子(即，C1-6烷基)，例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基，更特别地，所述基团具有1、2或3个碳原子(即，C1-3烷基)，例如甲基、乙基、正丙基或异丙基。
术语“C1-40烷氧基”指基团-OR，其中R为取代或未取代的C1-40烷基，其中“C1-40烷基”具有上文给出的定义。类似地，术语“C1-10烷氧基”指基团-OC1-10烷基，“C1-6烷氧基”指基团-OC1-6烷基，“C1-3烷氧基”指基团-OC1-3烷基，其中“C1-10烷基”、“C1-6烷基”和“C1-3烷基”具有上文给出的定义。具体的所述烷氧基包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基和1,2-二甲基丁氧基。
术语“C2-40烯基”应理解为优选表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2～40个碳原子，优选“C2-10烯基”。“C2-10烯基”应理解为优选表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，例如，具有2、3、4、5或6个碳原子(即，C2-6烯基)，具有2或3个碳原子(即，C2-3烯基)。应理解，在所述烯基包含多于一个双键的情况下，所述双键可相互分离或者共轭。所述烯基是例如乙烯基、烯丙基、(E)-2-甲基乙烯基、(Z)-2-甲基乙烯基、(E)-丁-2-烯基、(Z)-丁-2-烯基、(E)-丁-1-烯基、(Z)-丁-1-烯基、戊-4-烯基、(E)-戊-3-烯基、(Z)-戊-3-烯基、(E)-戊-2-烯基、(Z)-戊-2-烯基、(E)-戊-1-烯基、(Z)-戊-1-烯基、己-5-烯基、(E)-己-4-烯基、(Z)-己-4-烯基、(E)-己-3-烯基、(Z)-己-3-烯基、(E)-己-2-烯基、(Z)-己-2-烯基、(E)-己-1-烯基、(Z)-己-1-烯基、异丙烯基、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、(E)-1-甲基丙-1-烯基、(Z)-1-甲基丙-1-烯基、3-甲基丁-3-烯基、2-甲基丁-3-烯基、1-甲基丁-3-烯基、3-甲基丁-2-烯基、(E)-2-甲基丁-2-烯基、(Z)-2-甲基丁-2-烯基、(E)-1-甲基丁-2-烯基、(Z)-1-甲基丁-2-烯基、(E)-3-甲基丁-1-烯基、(Z)-3-甲基丁-1-烯基、(E)-2-甲基丁-1-烯基、(Z)-2-甲基丁-1-烯基、(E)-1-甲基丁-1-烯基、(Z)-1-甲基丁-1-烯基、1,1-二甲基丙-2-烯基、1-乙基丙-1-烯基、1-丙基乙烯基、1-异丙基乙烯基。
术语“C2-40炔基”应理解为表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个三键并且具有2～40个碳原子，优选“C2-10炔基”。术语“C2-10炔基”应理解为优选表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个三键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，，例如，具有2、3、4、5或6个碳原子(即，“C2-6炔基”)，具有2或3个碳原子(“C2-3-炔基”)。所述炔基是例如乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、戊-1-炔基、戊-2-炔基、戊-3-炔基、戊-4-炔基、己-1-炔基、己-2-炔基、己-3-炔基、己-4-炔基、己-5-炔基、1-甲基丙-2-炔基、2-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-2-炔基、3-甲基丁-1-炔基、1-乙基丙-2-炔基、3-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-4-炔基、1-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-3-炔基、1-甲基戊-3-炔基、4-甲基戊-2-炔基、1-甲基戊-2-炔基、4-甲基戊-1-炔基、3-甲基戊-1-炔基、2-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-2-炔基、1-丙基丙-2-炔基、1-异丙基丙-2-炔基、2,2-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-2-炔基或3,3-二甲基丁-1-炔基。特别地，所述炔基是乙炔基、丙-1-炔基或丙-2-炔基。
术语“C3-20环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，可以是螺环或桥环，其具有3～20个碳原子，优选“C3-10环烷基”。例如，术语“C3-10环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，可以是螺环或桥环，其具有3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子。所述C3-10环烷基可以是单环烃基，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃基如十氢化萘环。例如，术语“C3-6环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，可以是螺环或桥环，其具有3、4、5或6个碳原子。所述C3-6环烷基可以是，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[1.1.0]丁基、螺戊基、螺[2.3]己基、双环[1.1.1]戊基、双环[2.1.0]戊基、双环[2.1.1]己基或双环[3.1.0]己基。
术语“3-20元杂环基”意指具有环碳原子和1至5个环杂原子的3至20元非芳香环系的一价基团，该非芳香环系可以是饱和的或者含有一个或更多个双键，其可以为单环、双环、螺环或桥环，其中每个环杂原子独立地选自N、O、S、B、P和Si。所述“3-20元杂环基”可以是例如，“3-10元杂环基”、“3-7元杂环基”或“5-6元杂环基”。术语“3-10元杂环基”意指具有环碳原子和1至5个环杂原子的3至10元非芳香环系的一价基团，该非芳香环系可以为单环、双环、螺环或桥环，其中每个环杂原子独立地选自N、O、S、B、P和Si，优选包含1-3个选自N、O和S的杂原子。术语“3-7元杂环基”意指具有环碳原子和1至3个环杂原子的3至7非芳香环系的一价基团，该非芳香环系可以为单环、双环、螺环或桥环，其中每个环杂原子独立地选自N、O、S、B、P和Si，优选包含1-3个选自N、O和S的杂原子。术语“5-6元杂环基”意指具有环碳原子和1至3个环杂原子的5至6非芳香环系的一价基团，该非芳香环系通常为单环，其中每个环杂原子独立地选自N、O、S、B、P和Si，优选包含1-3个选自N、O和S的杂原子。所述杂环基可以通过所述碳原子中的任一个或氮原子(如果存在的话)与分子的其余部分连接。不论杂环基前是否修饰有“取代的”，杂环基的每个原子独立地任选被取代，例如，被1至5个取代基、1至3个取代基或1个取代基取代，适当的取代基包括但不限于羟基、氨基、氧代、卤素、氰基、硝基、C1-40烷基、C2-40烯基、C2-40炔基等。特别地，所述杂环基可以包括但不限于：3元环，如氮杂环丙烷基、氧杂环丙烷基和硫杂环丙烷基；4元环，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基和硫杂环丁烷基；5元环，如二氢呋喃基、四氢呋喃基、二氢噻吩基、四氢噻吩基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、二氢吡咯基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基、二氧杂环戊烷基、氧硫杂环戊烷基(oxasulfuranyl)、二硫杂环戊烷基(disulfuranyl)、噁唑烷-2-酮、三唑啉基、噁二唑啉基和噻二唑啉基；或6元环，如二氢吡喃基、四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二氢吡啶基、硫杂环己烷基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基、二硫杂环己烷基、二噁烷基和三噻烷基；或7元环，如二氮杂环庚烷基、氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基和硫杂环庚烷基。双环杂环基，例如但不限于5,5元环，如六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基环，或者5,6元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基环。含氮原子的环可以是部分不饱和的，即它可以包含一个或多个双键，例如但不限于2,5-二氢-1H-吡咯基、4H-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氢噁唑基或4H-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基。
术语“C6-20芳基”应理解为优选表示具有6～20个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环，优选“C6-14芳基”。术语“C6-14芳基”应理解为优选表示具有6、7、8、9、10、11、12、13或14个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环(“C6-14芳基”)，特别是具有6个碳原子的环(“C6芳基”)，例如苯基；或联苯基，或者是具有9个碳原子的环(“C9芳基”)，例如茚满基或茚基，或者是具有10个碳原子的环(“C10芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基，或者是具有13个碳原子的环(“C13芳基”)，例如芴基，或者是具有14个碳原子的环(“C14芳基”)，例如蒽基。
术语“5-20元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5～20个环原子且包含1-5个独立选自N、O和S的杂原子，例如“5-14元杂芳基”。术语“5-14元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个环原子，特别是5或6或9或10个碳原子，且其包含1-5个，优选1-3各独立选自N、O和S的杂原子并且，另外在每一种情况下可为苯并稠合的。术语“5-6元杂芳基”应理解为具有5或6个环原子的一价单环芳族环系，其包含1-3各独立选自N、O和S的杂原子，并且其在每一种情况下可为苯并稠合的。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻-4H-吡唑基等以及它们的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。
除非另有说明，杂环基、杂芳基或亚杂芳基包括其所有可能的异构形式，例如其位置异构体。因此，对于一些说明性的非限制性实例，吡啶基或亚吡啶基包括吡啶-2-基、亚吡啶-2-基、吡啶-3-基、亚吡啶-3-基、吡啶-4-基和亚吡啶-4-基；噻吩基或亚噻吩基包括噻吩-2-基、亚噻吩-2-基、噻吩-3-基和亚噻吩-3-基。
上述对术语“烷基”，如“C1-40烷基”的定义同样适用于含有“C1-40烷基”的其他术语，例如术语“C1-40亚烷基”“C1-40烷氧基”、“C1-40烷基硅基”和“C1-40烷基硅基氧基”等。同样地，上述对术语“C2-40烯基”、“C2-40炔基”、“C3-20环烷基”、“C5-20环烯基”、“3-20元杂环基”、“C6-20芳基”和“5-20元杂芳基”的定义相应地同样适用于含有其的其他术语，如术语“C2-40烯基氧基”、C2-40炔基氧基”、“C3-20环烷基氧基”、“3-20元杂环基”、“3-20元杂环基氧基”、“C6-20芳基氧基”、“C6-20芳基烷基”和“5-20元杂芳基烷基”等。
术语“亚*基”应理解为表示二价的相应基团，该取代基中有两个位置的氢被取代，如“C1-40亚烷基”应理解为表示二价的烃基。同样地，上述定义相应地同样适用于其它“亚*基”，如术语“C2-40亚烯基”、“C2-40亚炔基”、“C1-40亚烷氧基”、“C3-20亚环烷基”、“3-20元亚杂环基”、“C6-20亚芳基”，以及含有其的其它术语，如“5-20元亚杂芳基”、“5-20元杂芳基-C1-40亚烷基”等。
在任何用于制备本发明化合物的方法中，可能必需和/或期望保护任何有关分子上的敏感或反应性基团。这可通过常规的保护基来实现，如本领域教科书或工具书描述的保护基。可使用本领域已知的方法在方便的后续阶段移除保护基团。本领域技术人员将认识到，取决于具体的保护基团，可将其他试剂用于该去保护步骤，包括但不限于Pd/C、Pd(OH)2、PdCl2、Pd(OAc)2/Et3SiH、兰尼镍、适当选择的酸、适当选择的碱、氟化物等等。
可以根据已知的方法，例如通过萃取、过滤或柱色谱来分离目标化合物。
根据其分子结构，本发明的化合物可以是手性的，因此可能存在各种对映异构体形式。因而这些化合物可以以消旋体形式或光学活性形式存在。本发明的化合物或其中间体可以通过本领域技术人员公知的化学或物理方法分离为对映异构体化合物，或者以此形式用于合成。在外消旋的胺的情况中，通过与光学活性的拆分试剂反应，从混合物制得非对映异构体。适当的拆分试剂的示例是光学活性的酸，例如R和S形式的酒石酸、二乙酰酒石酸、二苯甲酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸、适当的N-保护的氨基酸(例如N-苯甲酰脯氨酸或N-苯磺酰基脯氨酸)或各种光学活性的樟脑磺酸。借助光学活性的拆分试剂(例如固定在硅胶上的二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸、三乙酸纤维素或其它碳水化合物的衍生物或手性衍生化的异丁烯酸酯聚合物)，也可有利地进行色谱对映体拆分。用于此目的的适当的洗脱剂是含水或含醇的溶剂混合物，例如，己烷/异丙醇/乙腈。
本领域技术人员将理解，由于氮需要具有可用的孤对电子用于被氧化为氧化物，因此并非所有的含氮杂环都可以形成N-氧化物；本领域技术人员将识别能够形成N-氧化物的含氮杂环。本领域技术人员还将认识到叔胺能够形成N-氧化物。制备杂环和叔胺的N-氧化物的合成方法对于本领域技术人员而言是熟知的，所述合成方法包括用过氧酸如过氧乙酸和间氯过氧苯甲酸(MCPBA)、过氧化氢、烷基氢过氧化物如叔丁基氢过氧化物、过硼酸钠和双环氧乙烷(dioxirane)如二甲基双环氧乙烷氧化杂环和叔胺。这些制备N-氧化物的方法已在文献中广泛地描述和综述。
药学上可接受的盐可以是例如在链或环中具有氮原子的具有足够碱性的本发明的化合物的酸加成盐，例如与如下无机酸形成的酸加成盐：例如盐酸、氢氟酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、焦硫酸、磷酸或硝酸，或硫酸氢盐、或者与如下有机酸形成的酸加成盐：例如甲酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、苯甲酸、水杨酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡糖酸、3-羟基-2-萘甲酸、烟酸、扑酸、果胶酯酸、过硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、特戊酸、2-羟基乙磺酸、衣康酸、氨基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、己二酸、藻酸、马来酸、富马酸、D-葡糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡庚酸、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水杨酸、半硫酸或硫氰酸。
另外，具有足够酸性的本发明的化合物的另一种适合的药学上可接受的盐是碱金属盐(例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐或镁盐)、铵盐，或与提供生理学可接受的阳离子的有机碱形成的盐，例如与如下物质形成的盐：钠离子、钾离子、N-甲基葡糖胺、二甲基葡糖胺、乙基葡糖胺、赖氨酸、二环己基胺、1,6-己二胺、乙醇胺、葡糖胺、葡甲胺、肌氨酸、丝氨醇、三羟基甲基氨基甲烷、氨基丙二醇、1-氨基-2,3,4-丁三醇。作为实例，所述药学上可接受的盐包括基团-COOH与如下物质形成的盐：钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、N-甲基葡糖胺、二甲基葡糖胺、乙基葡糖胺、赖氨酸、二环己基胺、1,6-己二胺、乙醇胺、葡糖胺、葡甲胺、肌氨酸、丝氨醇、三羟基甲基氨基甲烷、氨基丙二醇、1-氨基-2,3,4-丁三醇；当本发明M1、M2、M3中的1、2或3个为H时，本发明药学上可接受的盐包括例如-OP(O)(OM1)(OM2)、-P(O)(OM1)(OM2)、-OS(O)2OM3、-S(O)2OM3与与如下物质形成的盐：钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、N-甲基葡糖胺、二甲基葡糖胺、乙基葡糖胺、赖氨酸、二环己基胺、1,6-己二胺、乙醇胺、葡糖胺、葡甲胺、肌氨酸、丝氨醇、三羟基甲基氨基甲烷、氨基丙二醇、1-氨基-2,3,4-丁三醇。
另外，碱性含氮基团可用如下试剂季铵化：低级烷基卤化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯；长链卤化物，例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤化物如苄基和苯乙基溴化物等。作为实例，药学上可接受的盐包括盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、硫酸氢盐、氢溴酸盐、醋酸盐、草酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、甲酸盐或葡甲胺盐等。
由于本发明的化合物可存在多个成盐位点，所述“药学上可接受的盐”不仅包括本发明化合物其中1个成盐位点上形成的盐，而且还包括其中2、3或全部成盐位点上形成的盐。为此，所述“药学上可接受的盐”中式(I)化合物与成盐所需的酸的根离子(阴离子)或碱的阳离子摩尔比可以在较大的范围内变化，例如可以是4:1～1:4，如3:1、2:1、1:1、1:2、1:3等。
根据本发明，药学上可接受的阴离子包括选自由无机酸或有机酸电离生成的阴离子。所述“无机酸”包括但不限于盐酸、氢氟酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、焦硫酸、磷酸或硝酸。所述“有机酸”包括但不限于甲酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、苯甲酸、水杨酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡糖酸、3-羟基-2-萘甲酸、烟酸、扑酸、果胶酯酸、过硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、特戊酸、2-羟基乙磺酸、衣康酸、氨基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、己二酸、藻酸、马来酸、富马酸、D-葡糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡庚酸、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水杨酸、半硫酸或硫氰酸。
术语“电离生成的阴离子”包括所述无机酸和有机酸所有可能由电离生成的阴离子形式，例如可经过一级电离、二级电离或三级电离而生成不同的阴离子。作为实例，磷酸可经一级电离生成磷酸二氢根，可经二级电离生成磷酸氢根，也可经三级电离生成磷酸根；硫酸可经一级电离生成硫酸氢根，也可经二级电离生成硫酸根。本发明式(I)化合物可以多个分子共用一个经过多级电离所生成的多价态阴离子。这些所有可能生成的阴离子都涵盖在本发明阴离子的范围内。
术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本发明化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。质子移变互变异构体来自两个原子之间共价键合的氢原子的迁移。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本发明包含化合物的所有互变异构形式。
术语“有效量”或者“治疗有效量”是指足以实现预期应用(包括但不限于如下定义的疾病治疗)的本发明所述化合物的量。治疗有效量可以取决于以下因素而改变：预期应用(体外或者体内)，或者所治疗的受试者和疾病病症如受试者的重量和年龄、疾病病症的严重性和给药方式等，其可以由本领域普通技术人员容易地确定。具体剂量将取决于以下因素而改变：所选择的特定化合物、所依据的给药方案、是否与其它化合物组合给药、给药的时间安排、所给药的组织和所承载的物理递送系统。
术语“辅料”是指可药用惰性成分。赋形剂种类的实例非限制性地包括粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂和稀释剂等。赋形剂能增强药物制剂的操作特性，即通过增加流动性和/或粘着性使制剂更适于直接压缩。适用于上述制剂的典型的药学上可接受的载体的实例为：糖类，例如乳糖、蔗糖、甘露醇和山梨醇；淀粉类，例如玉米淀粉、木薯淀粉和土豆淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠，乙基纤维素和甲基纤维素；磷酸钙类，例如磷酸二钙和磷酸三钙；硫酸钠；硫酸钙；聚乙烯吡咯烷酮；聚乙烯醇；硬脂酸；硬脂酸碱土金属盐，例如硬脂酸镁和硬脂酸钙；硬脂酸；植物油类，例如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油和玉米油；非离子、阳离子和负离子表面活性剂；乙二醇聚合物；脂肪醇类；和谷物水解固形物以及其它无毒的可相容的填充剂、粘合剂、崩解剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧剂、润滑剂、着色剂等在药物制剂中常用到的辅料。
具体实施方式
下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。
除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
名词及代表试剂
在以下具体实验描述中使用的所述名词分别代表(除非另有说明)以下试剂：
TEA：三乙胺；DIEA：二异丙基乙胺；DCM：二氯甲烷；THF：四氢呋喃；EA：乙酸乙酯；MeOH：甲醇；MeCN：乙腈。
<制备实施例>
实施例1：2,11-二氮杂-1(2,4)-嘧啶环十一烷-15-甲酰胺(L001)的制备
1.1化合物(8-氨基辛基)氨基甲酸叔丁酯(L001-2)的制备
1,8-辛二胺(2g，13.86mmol)和DIEA(537mg，4.16mmol)溶于DCM(50mL)，向溶液中缓慢滴加(Boc)2O(106mg,4.85mmol)的DCM溶液(20mL)，滴毕，室温下搅拌反应12小时。反应完成后将反应液调节pH＝3～4，用水萃取(50mL*3)，合并水相，然后调节水相pH＝9～10，再用DCM萃取(50mL*3)，收集有机相，无水硫酸钠干燥后，旋干得白色固体产物600mg，其为标题化合物L001-2，收率：12％，LC-MS[M+H]+:245.0。
1.2化合物(8-((5-氨基甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基)辛基)氨基甲酸叔丁酯(L001-3)的制备
L001-2(600mg，2.45mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，加入DIEA(635mg，4.91mmol)和2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(471mg，2.45mmol)。室温搅拌反应4小时，反应完成后，将反应液旋干得粗品产物，硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝0-50％)得白色固体400mg，其为标题化合物L001-3，收率：37％，LC-MS[M+H]+:399.8。
1.3化合物4-((8-氨基辛基)氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酰胺(L001-4)的制备
L001-3(400mg，1mmol)溶于乙酸乙酯(10mL)，加入HCl/EA(4N，5mL)，室温搅拌2小时。反应完成后，将反应液旋干得粗品产物400mg，其中标题化合物L001-4的纯度为60％，收率：86％。LC-MS[M+H]+:299.8。
1.4化合物2,11-二氮杂-1(2,4)-嘧啶环十一烷-15-甲酰胺(L001)的制备
L001-4(300mg，1mmol)溶解于四氢呋喃(200mL)，加入DIEA(853mg，6.6mmol)，升温至70℃，搅拌过夜，反应完成后，将反应液旋干，经制备色谱纯化得白色固体17mg，其为标题化合物L001，收率：4％，LC-MS[M+H]+:264.0。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.04(s,1H),8.31(s,1H),7.55(brs,1H),7.18(s,1H),6.93(brs,1H),3.49–3.39(m,2H),3.35–3.25(m,2H),1.66–1.56(m,4H),1.49(s,4H),1.24(s,4H)。
实施例2：化合物2,10-二氮杂-1(2,4)-嘧啶基环癸烷-15-甲酰胺(L002)的制备
2.1化合物(7-氨基庚基)氨基甲酸叔丁酯(L002-2)的制备
将L002-1(2.0g,15.36mmol)和(Boc)2O(0.67g,3.07mmol)溶解于DCM(100mL)中，反应液在室温下反应4h。TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示反应完毕。反应液滴加到DCM(100mL)和水(50mL)中，水相用DCM(100mL*3)萃取，合并有机相，饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩过柱子(DCM:MeOH＝20:1，加入1％氨水)得到0.6g无色液体，其为标题化合物L002-2。
2.2化合物(7-((5-氨基甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基)庚基)氨基甲酸叔丁酯(L002-3)的制备
将L002-2(0.60g,2.60mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.53g,2.73mmol)和TEA(0.39g,3.91mmol)溶解于THF(20mL)中，反应液在室温下反应4h。TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示反应完毕。反应液滴加到EA(150mL)和水(50mL)中，水相用EA(150mL*3)萃取，合并有机相，饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到0.80g白色固体，其为标题化合物L002-3。LC-MS[M+H]+:＝387.4。
2.3化合物4-((7-氨基庚基)氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酰胺(L002-4)的制备
将L002-3(0.80g,2.07mmol)溶解于EA(10mL)中，再加入HCl/EA(4N，20mL)，反应液室温搅拌反应3h。TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示反应完毕。反应液浓缩得0.70g白色固体，其为标题化合物L002-4。LC-MS[M+H]+:286.1。
2.4化合物2,10-二氮杂-1(2,4)-嘧啶基环癸烷-15-甲酰胺(L002)的制备
将L002-4(0.7g,2.45mmol)和TEA(0.74g,7.35mmol)溶解于THF(350mL)中，反应液在室温反应48h。TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示大概只有20％原料反应。反应液直接旋干直接用H2O/MeCN体系经prep-HPLC制备分离，冻干后得到白色固体23mg，其为标题化合物L002，纯度99.10％。LC-MS[M+H]+:250.2。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.04(t,J＝6.2Hz,1H),8.33(s,1H),7.55(s,1H),7.23(t,J＝6.2Hz,1H),6.95(s,1H),3.31(s,4H),1.51(d,J＝4.0Hz,2H),1.45–1.36(m,4H),1.21(m,4H)。
实施例3：化合物6-氧杂2,10-二氮杂-1(2,4)-嘧啶基环癸烷-15-甲酰胺(L003)的制备
3.1化合物(3-(3-氨基丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(L003-2)的制备
2,2'-氧双(乙胺)(750mg，5.7mmol)和DIEA(220mg，1.7mmol)溶于DCM(50mL)，向溶液中缓慢滴加(Boc)2O(433mg,2mmol)的DCM溶液(20mL)，滴毕，室温下搅拌反应12小时。反应完成后，稀盐酸调节pH＝3～4，水萃取(50mL*3)，合并水相，然后调节水相pH＝9～10，再用DCM萃取(50mL*3)，收集有机相，无水硫酸钠干燥后，旋干得白色固体产物250mg，其为标题化合物L003-2，收率：19％。
3.2化合物(3-(3-((5-氨基甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基)丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(L003-3)的制备
化合物L003-2(250mg，1.15mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，加入DIEA(446mg，3.45mmol)和2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(220mg，1.15mmol)。室温搅拌反应4小时，反应完成后，将反应液旋干得粗品产物，硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝0-50％)得白色固体300mg，其为标题化合物L003-3，收率：60％。LC-MS[M+H]+:388.0。
3.3化合物4-((3-(3-氨基丙氧基)丙基)氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酰胺(L003-4)的制备
化合物L003-3(250mg，0.64mmol)溶于乙酸乙酯(10mL)，加入HCl/EA(4N,5mL)，室温搅拌2小时。反应完成后，将反应液旋干得粗品产物250mg，其中标题化合物L003-4的纯度为60％，收率：81％。LC-MS[M+H]+:287.9。
3.4化合物6-氧杂2,10-二氮杂-1(2,4)-嘧啶基环癸烷-15-甲酰胺(L003)的制备
化合物L003-4(250mg，0.86mmol)溶解于乙腈(200mL)，加入DIEA(853mg，6.6mmol)，升温至70℃，搅拌过夜，反应完成后，将反应液旋干，经制备色谱纯化得白色固体20.9mg，其为标题化合物L003，收率：11％，LC-MS[M+H]+:252.0。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.70(t,J＝6.5Hz,1H),8.33(s,1H),7.52(brs,1H),7.08(t,J＝6.3Hz,1H),6.92(brs,1H),4.25-3.40(m,4H),3.25-2.90(m,4H),1.62–1.48(m,4H)。
实施例4化合物2,9-二氮杂-1(2,4)-嘧啶基环壬烷-15-甲酰胺(L004)的制备
4.1化合物(6-((5-氨基甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基)己基)氨基甲酸叔丁酯(L004-2)的制备
将L004-1(0.5g,2.31mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.46g,2.43mmol)和TEA(0.35g,3.47mmol)溶解于THF(20mL)中，反应液在室温下反应4h。TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示反应完毕。反应液滴加到EA(100mL)和水(50mL)中，水相用EA(100mL*3)萃取，合并有机相，饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到0.75g白色固体，其为标题化合物L004-2。LC-MS[M+H]+:372.2。
4.2化合物4-((6-氨基己基)氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酰胺(L004-3)的制备
将L004-2(0.75g,2.02mmol)溶解于EA(10mL)中,再加入HCl/EA(4N，20mL)，反应液室温搅拌反应3h。TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示反应完毕。反应液浓缩得到含标题化合物L004-3的粗品0.53g白色固体。LC-MS[M+H]+:272.1。
4.3化合物2,9-二氮杂-1(2,4)-嘧啶基环壬烷-15-甲酰胺(L004)的制备
将L004-3(0.4g,1.47mmol)和TEA(0.45g,4.42mmol)溶解于THF(200mL)中，反应液在室温反应48h。TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示大概只有30％原料反应。反应液直接旋干得到0.3g粗品，粗品直接用H2O/MeCN体系经prep-HPLC制备分离，冻干后得到白色固体100mg，产物纯度不够，纯化之后得产物进一步通过prep-TLC制备分离，冻干后得到45mg白色固体，其为标题化合物L004(纯度100.00％)。LC-MS[M+H]+:236.2。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ(t,J＝5.2Hz,1H),8.45(t,J＝5.2Hz,1H),8.33(s,1H),8.02(s,1H),7.56(s,1H),3.50(d,J＝4.0Hz,2H),1.63–1.44(m,8H),1.32(s,2H)。
实施例5：5,8-二氧基-2,11-二氮杂-1(2,4)-嘧啶基环十一烷-15-甲酰胺(L005)的制备
5.1化合物(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)氨基甲酸叔丁酯(L005-2)的制备
2,2'-(乙烷-1,2-二酰双(氧))双(乙烷-1-胺)(L005-1)(2.0g，13.49mmol和DIEA(523mg，4.05mmol)溶于DCM(50mL)，向溶液中缓慢滴加(Boc)2O(1.03g,4.72mmol)的DCM溶液(20mL)，滴毕，室温下搅拌反应12小时。反应完成后将反应液调节pH＝3～4，用水萃取(50mL*3)，合并水相，然后调节水相pH＝9～10，再用DCM萃取(50mL*3)，收集有机相，无水硫酸钠干燥后，旋干得白色固体产物500mg，其为标题化合物L005-2，收率：12％，LC-MS[M+H]+:249.0。
5.2化合物(2-(2-(2-((5-氨基甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(L005-3)的制备
L005-2(400mg，1.61mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，加入DIEA(416mg，3.22mmol)和2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(231mg，1.2mmol)。室温搅拌反应4小时，反应完成后，将反应液旋干得粗品产物，硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝0-50％)得白色固体300mg，其为标题化合物L005-3，收率：42％，LC-MS[M+H]+:403.8。
5.3化合物4-((2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酰胺(L005-4)的制备
L005-3(300mg，0.72mmol)溶于乙酸乙酯(10mL)，加入HCl/EA(4N，5mL)，室温搅拌2小时。反应完成后，将反应液旋干得粗品产物300mg，其中标题化合物L005-4的纯度为60％，收率：86％。LC-MS[M+H]+:303.9。
5.4化合物5,8-二氧基-2,11-二氮杂-1(2,4)-嘧啶基环十一烷-15-甲酰胺(L005)的制备
L005-4(200mg，0.63mmol)溶解于四氢呋喃(200mL)，加入DIEA(853mg，6.6mmol)，升温至70℃，搅拌过夜，反应完成后，将反应液旋干，经制备色谱纯化得到白色固体25.1mg，其为标题化合物L005，收率：14％，LC-MS[M+H]+:268.0。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.27(s,1H),3.83–3.77(m,6H),3.73–3.67(m,6H)。
实施例6化合物2,12-二氮杂-1(2,4)-嘧啶基环十二烷-15-甲酰胺(L006)的制备
6.1化合物(9-氨基壬基)氨基甲酸叔丁酯(L006-2)的制备
将称量好的L006-1(2.0g,12.635mmol)溶于50mL DCM中,加入TEA(2.56g,25.270mmol)室温搅拌10min，滴加Boc酸酐(552mg,2.527mmol)滴完室温反应过夜，反应液点板监控显示原料没反应完，有一个新点产生，反应液浓缩拌样，通过过柱纯化(DCM:MeOH＝10:1)得到产物500mg，为白色固体，其为标题化合物L006-2。
6.2化合物(9-((5-氨基甲酰基-4-氯嘧啶-2-基)氨基)壬基)氨基甲酸叔丁酯(L006-3)的制备
将称量好的L006-2(500mg，1.935mmol)，2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(372mg，1.935mmol)，TEA(588mg，5.805mmol)依次加入到20mL的THF中,室温反应过夜，点板监控原料L006有少许没反应完，有新点产生，反应液加水，用EA萃取，有机相用0.1M HCl洗涤，旋干得到产物800mg，为白色固体，其为标题化合物L006-3。
6.3化合物2-((9-氨基壬基)氨基)-4-氯嘧啶-5-甲酰胺(L006-4)的制备
将称量好的L006-3(800mg,1.933mmol)溶于20mL的EA中，加入HCl/EA(4N，20mL)，室温搅拌1h，固体析出，点板监控原料有少许没反应完，反应液直接过滤,滤饼用EA洗涤2次，旋干得到产物530mg，为淡黄色固体，其为标题化合物L006-4。
6.4化合物2,12-二氮杂-1(2,4)-嘧啶基环十二烷-15-甲酰胺(L006)的制备
将称量好的L006-4(300mg,0.956mmol)溶于300mL THF中，加入TEA(484mg,4.780mmol)，70℃反应过夜，LC-MS显示有产物生成，反应液旋干通过Prep-HPLC制备纯化得到白色固体51.7mg，其为标题化合物L006。LC-MS:[M+H]+：278.2。
1H NMR(400MHz,dmso)δ9.19(t,J＝6.2Hz,1H),8.31(s,1H),7.53(s,1H),7.33(t,J＝6.2Hz,1H),6.98(s,1H),3.39–3.35(m,2H),3.21(dd,J＝10.7,5.5Hz,2H),1.52(s,4H),1.36(s,10H)。
实施例7～17的制备参照实施例1-6的方法进行。
<生物学活性测试试验>
激酶活性筛选
JNK1活性筛选。用96孔(Cisbio，66PL96025)时间分辨荧光测定法来检测JNK1活性。JNK1测定是在以下测定缓冲液中运行：10mM MgCl2(Sigma，M1028)、1mM MnCl2(Sigma，M1787)、1mM DTT(Sigma，D0632)和1X Enzymatic buffer/kinase(Cisbio，62EZBFDC)。采用测定缓冲液，先转3μl的0.1ng/μl JNK1激酶(Carna Biosciences，04-163)于96微孔板，再转适当稀释的4μl的化合物，DMSO含量2.5％，室温下孵育0.5h。为了启动反应，也使用测定缓冲液，将0.003μM ATP(阿拉丁，A7699)和30μM底物ATF2-GST fusion(Cisbio，64CUS000AFPEB)一起混合后，加入3μl混合液于微孔板，继续室温孵育2.5h。然后使用HTRFdetection buffer(Gibco，62SDBRDD)配制5μg/ml MAb Anti GST-XL665(Cisbio，61GSTXLA)和0.045μg/ml PAb Anti-phospho ATF2-K(Cisbio，61P12KAZ)的混合物，转10μl混合物来终止反应。孵育约12h后，在Perkin-Elmer Envision阅读器上读板。
细胞评价法
1.RAW264.7磷酸化c-jun全细胞测定。RAW264.7(ATCC TIB-71)细胞购自苏州北纳创联生物技术有限公司(BeNa Culture Collection)，并在含10％胎牛血清(Gibco)、1％青霉素-链霉素(Gibco)高糖DMEM培养基(Gibco)中维持。所有的细胞在37℃下在95％空气在5％CO2中培养。将细胞按照每孔2×105个细胞的密度接种到96孔板中的120μl细胞培养基中，将化合物贮液(15mM)在DMSO(Sigma)中连续稀释，在生长培养基中进一步稀释，然后以10×浓溶液15μl加至孔中，混匀与细胞一起孵育30min。所有孔中化合物溶媒(DMSO)浓度为0.2％。30min后细胞用25ng/ml的脂多糖(Sigma)激活。脂多糖作为10×浓溶液加入生长培养基中并按每孔加入15μl的体积添加。把细胞板培养1小时，然后弃去全部培养基。采用全细胞裂解试剂盒-磷酸化c-jun测定法(PathPhospho-c-Jun(Ser63)Sandwich ELISAKit)(CST，7145C)，按照生产商的说明书测量在63位丝氨酸磷酸化的c-jun的蛋白水平。
2.Jurkat T细胞IL-2产生测定。Jurkat T细胞(克隆(clone)E6-1)购自中国典型培养物保藏中心(China Center for Type Culture Collection)，并在含10％胎牛血清(Gibco)、1％青霉素-链霉素(Gibco)的RPMI1640(Gibco)中维持。所有的细胞在37℃下在95％空气在5％CO2中培养。将细胞按照每孔1×105个细胞的密度接种到96孔板中的120μl细胞培养基中，将化合物贮液(15mM)在DMSO(Sigma)中连续稀释，在生长培养基中进一步稀释，然后以10×浓溶液15μl加至孔中，混匀与细胞一起孵育30min。所有孔中化合物溶媒(DMSO)浓度为0.2％。30min后细胞用PMA(乙酸肉豆蔻酸佛波醇酯；终浓度50ng/ml)(Sigma)和PHA(植物血凝素；终浓度1μg/ml)(Sigma)激活。PMA和PHA作为制得的作为10×浓溶液加入生长培养基中并按每孔加入15μl的体积添加。把细胞板培养6小时。用微孔板离心机(湘仪)将细胞沉淀下来，收集细胞上清置于-20℃保存。采用人类Il-2检测试剂盒(Human IL-2ValukineTM ELISA Kit)(R&D Systems，VAL110)，按照生产商的说明书测量上清中IL-2的量。
下面表2中的各化合物都在JNK1生物化学试验中通过酶法与细胞法进行了测试，发现本发明的化合物具有良好的活性。在酶法试验中，化合物的IC50低于100nM记为活性水平A，IC50介于100nM和500nM之间记为活性水平B，IC50介于500nM和1μM之间记为活性水平C。在细胞法试验中，化合物的IC50低于100nM记为活性水平A，IC50介于100nM和500nM之间记为活性水平B，IC50介于500nM和1μM之间记为活性水平C。
表2
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。