具体实施方式

所需引物如下表1所示。

表1

实施例1：MoRIP1基因的敲除和缺失突变体的回补

稻瘟病菌MoRIP7编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，稻瘟病菌MoRIP1基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2(含有非编码区)所示。

为了揭示MoRIP1在稻瘟病菌生长发育和致病力中的生物学功能，我们利用同源重组的策略构建MoRIP1基因的缺失突变体。

(1)首先构建MoRIP1的敲除载体：以野生型基因组DNA为扩增模板，通过PCR利用引物MoRIP1-upF/upR和MoRIP1-DnF/DnR分别扩增MoRIP1基因约1Kb的上游侧翼序列MoRIP1-up(SEQ ID No.3)和下游侧翼序列MoRIP1-dn(SEQ ID No.4)。利用引物HPH-F/R，以含潮霉素抗性基因的质粒pFGL821(addgene ID：58223)为模板，PCR扩增HPH抗性基因序列(SEQ IDNo.5)。利用商业化的同源重组酶试剂盒将MoRIP1的上下游DNA序列，抗性基因HPH片段和限制性内切酶XbaI和HindIII酶切后的骨架质粒pKOIB连接在一起，最终获得敲除载体pKOIB-MoRIP1。

(2)农杆菌介导的稻瘟病菌转化：将敲除载体转化进入农杆菌菌株AGL1，再将农杆菌和稻瘟病菌的分生孢子液混合，均匀涂布在贴有硝酸纤维素膜的诱导培养基上，2天后将硝酸纤维素膜转移到含有潮霉素的抗性平板上。四天后在硝酸纤维素膜边缘有转化子生长，将转化子挑取到新的抗性平板上。

(3)敲除转化子验证：提取转化子基因组DNA，利用内部验证引物MoRIP1inneryz-F/R和同源重组后验证引物MoRIP1upyzF/HPH-R对转化子验证，最终获得一个敲除突变体，命名为ΔMorip1。

(4)缺失突变体ΔMorip1的回补：为了说明菌株ΔMorip1中观察到的表型变化都是由于MoRIP1基因的缺失导致的，我们构建了回补载体p822-npRIP1C。利用引物npRIP1C-F/R，以野生型基因组DNA为模板，通过PCR扩增MoRIP1的基因组序列npRIP1C(SEQ ID No.6)连接到pFGL822(addgene ID：58225)载体上。测序正确后转入农杆菌AGL1，之后再转入缺失突变体ΔMorip1。筛选获得表型回补的菌株命名为Morip1c。

实施例2：MoRIP1在稻瘟病菌生长和产孢方面的功能分析

将野生型WT、ΔMorip1和Morip1c菌株在完全型培养基(CM)平板上培养7天，在菌落的边缘用打孔器打直径0.5cm的菌柄，将菌柄接种在CM和番茄燕麦培养基(OA)平板上，3个重复，培养7天后测量菌落直径并拍照。拍照后在平板上加入3mL的无菌水用涂布器收集平板上的孢子液，并在显微镜下观察孢子浓度。结果如图1所示，在两种培养基上，ΔMorip1的直径与WT比均减小，回补菌株Morip1c的直径与野生型无差异，表明MoRIP1参与稻瘟病菌菌丝生长。WT和Morip1c的孢子量在两种培养基平板上也无显著差异，但在ΔMorip1中未观察到分生孢子，表明MoRIP1对稻瘟病菌的产孢是必要的。

实施例3：MoRIP1在稻瘟病菌致病力方面的作用

由于ΔMorip1菌株没有分生孢子，我们利用菌柄接种大麦离体叶片的方法判断MoRIP1在致病力方面的功能。将野生型WT、ΔMorip1和Morip1c菌株在完全型培养基(CM)平板上培养7天，在菌落的边缘用打孔器打直径0.5cm的菌柄，将菌柄放到大麦叶片上，保湿放置于光照培养箱里，5天后拍照。结果如图2所示，在接种WT和Morip1c的大麦叶片上可以看到褐色病斑，但接种ΔMorip1并没有产生病斑，说明敲除MoRIP1后，稻瘟病菌致病力完全丧失。

实施例4：MoRIP1在稻瘟病菌不同生长发育阶段的定位和对线粒体功能的影响

为了观察MoRIP1在稻瘟病菌不同阶段定位情况，我们构建了MoRIP1的荧光表达菌株MoRIP1-mCherry。以野生型基因组DNA为PCR模板，利用引物MoRip1-mCherryF/R扩增获得DNA片段，将片段连入pFGL823-mCherry载体获得荧光表达载体pFGL823-MoRIP1-mCherry。然后利用农杆菌介导的转化将pFGL823-MoRIP1-mCherry转化进入线粒体标记菌株MitoGFP菌株。筛选获得红色荧光表达的转化子，并用激光共聚焦显微镜观察在菌丝，孢子，附着胞和侵染菌丝中MoRip1的定位。结果如图3所示，在菌丝，分生孢子，附着胞和侵染菌丝中，红色荧光蛋白mCherry标记的MoRip1始终与线粒体标记蛋白Mito-GFP共定位，表明MoRip1在稻瘟病菌的不同生长发育阶段都定位在线粒体中。

由于MoRip1在酵母中的同源基因Rip1是线粒体电子传递链细胞色素bc₁复合体中的一个核心亚基，介导电子从细胞色素b向细胞色素c₁传递，进而影响膜电位和胞内ATP合成。因此我们检测MoRIP1缺失后细胞内ATP的合成是否受影响。用液体CM培养基培养WT、ΔMorip1和Morip1c，收集菌丝并用液氮研磨，用ATP检测试剂盒检测WT、ΔMorip1和Morip1c含量。结果如图4所示，ΔMorip1中的ATP含量显著低于WT和Morip1c中ATP含量，表明MoRIP1对胞内ATP合成非常重要。

实施例5：MoRIP1参与稻瘟病菌对嘧菌酯敏感性

嘧菌酯是防治真菌和卵菌的重要药剂，其药靶是细胞色素b亚基，该亚基由线粒体DNA编码。MoRip1是细胞色素bc1复合体中的核心亚基，由基因组DNA编码。因此，我们检测MoRIP1在稻瘟病菌对嘧菌酯的敏感性中的角色。在CM平板上培养WT、ΔMorip1和Morip1c 7天后，用打孔器打菌柄，将菌柄接种到含有不同浓度嘧菌酯(10、20、40和100μg/mL)的CM平板上继续培养，以添加DMSO的CM平板作为对照，避光培养5天后测量菌落直径并计算生长抑制率。如图5所示，在不同浓度的嘧菌酯平板上ΔMorip1的抑制率显著低于WT和Morip1c，表明MoRIP1的缺失导致稻瘟病菌对嘧菌酯的抗性增强。

实施例6：MoRIP1参与氧化逆境响应

我们检测了WT、ΔMorip1和Morip1c菌株在氧化逆境中的敏感性，用打孔器在培养7天的WT、ΔMorip1和Morip1c菌落边缘打菌柄，将菌柄接种到含有不同浓度过氧化氢(5和10mM)的CM平板上继续培养，以不添加过氧化氢的CM平板作为对照，避光培养5天后测量菌落直径并计算生长抑制率。如图6所示，在两种不同浓度过氧化氢条件下，ΔMorip1的抑制率显著高于WT和Morip1c，表明MoRIP1的缺失导致稻瘟病菌对氧化逆境更加敏感。

序列表

<110> 中国水稻研究所

<120> 一种稻瘟病菌的致病因子或编码所述致病因子的基因的应用

<160> 18

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 236

<212> PRT

<213> 子囊菌稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)

<400> 1

Met Ala Pro Leu Thr Thr Ala Thr Arg Ala Ile Thr Arg Cys Ala Ala

1 5 10 15

Ser Pro Ser Lys Ala Val Thr Thr Ala Ala Arg Ala Leu Ser Thr Thr

20 25 30

Pro Ala Gln Asn Gly Ser Ser Gly Ala Ser Phe Ser Ser Pro Phe Arg

35 40 45

Gly Glu Gln Lys Ser Thr Gln Ile Pro Asp Phe Lys Lys Tyr Met Ala

50 55 60

Pro Lys Gly Ser Ser Thr Ser Asn Ala Val Phe Ser Tyr Phe Met Val

65 70 75 80

Gly Ala Met Gly Ala Ile Ser Ala Ala Gly Ala Lys Ser Thr Val Gln

85 90 95

Glu Phe Leu Val Asn Met Ser Ala Ser Ala Asp Val Leu Ala Met Ala

100 105 110

Lys Val Glu Val Asp Leu Thr Thr Ile Pro Glu Gly Lys Asn Val Ile

115 120 125

Ile Lys Trp Arg Gly Lys Pro Val Phe Ile Arg His Arg Thr Gly Arg

130 135 140

Glu Ile Asp Glu Ala Asn Lys Ile Asp Val Ala Ser Leu Arg Asp Pro

145 150 155 160

Glu Ala Asp Ser Asp Arg Val Lys Lys Pro Glu Trp Leu Val Met Leu

165 170 175

Gly Val Cys Thr His Leu Gly Cys Val Pro Ile Gly Glu Ala Gly Asp

180 185 190

Phe Gly Gly Trp Phe Cys Pro Cys His Gly Ser His Tyr Asp Ile Ser

195 200 205

Gly Arg Ile Arg Lys Gly Pro Ala Pro Leu Asn Leu Glu Ile Pro Ala

210 215 220

Tyr Asp Phe Pro Glu Asp Asp Lys Leu Val Ile Gly

225 230 235

<210> 2

<211> 1047

<212> DNA

<213> 子囊菌稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)

<400> 2

atggcgccct tgacgaccgc cacccgcgca atcacgcgct gcgcagcgtc gccctccaag 60

gccgtgacta ccgccgcgcg cgccctgagc acgacgccgg cccagaacgg cagctcgggt 120

gccagcttct ccagcccctt ccgcggcgag cagaagtcga cccagatccc cgactttaag 180

aagtacatgg cccccaaggg ctcgtcgacc agcaacgccg tcttctcgta cttcatggtc 240

ggtgccatgg gtgccatctc ggccgccggt gccaagtcga ccgtccaggg tgagttggag 300

gaatctttcc ctcttgtgaa tactcttgaa ggatatgtgg atgtagtgtg ggatgggggg 360

aatacagtct ggagttaagg tttacgccaa ttgggagctt cttgtgactg acgactgtgt 420

gttctttttt cgtgcagagt tcctggtcaa catgtctgct tccgcggacg ttttggccat 480

ggccaaggtc gaggttgatc tgaccaccat ccccgagggc aagaacgtga gtgaccaccc 540

gcgcaatcta ctgtcttcga gtcgtcggaa aacctagtcg acacttgtga ttggtaacat 600

gtggtctgac tttttatctt ttctggattt aggtcatcat caagtggcgt ggaaagcccg 660

tcttcattcg ccaccgtacc ggccgtgaga ttgacgaggc gaacaagatc gacgttgcct 720

cattaagaga tcccgaggcc gacagcgacc gtgtcaagaa gcccgagtgg ctcgttatgt 780

tgggtaagtg gaattcctga tttgctttcc agcttccaag cgtcgatatc gtcgatcgac 840

atgcttactt tgatttctac gacaggtgtc tgcacacatc ttggttgtgt ccccattggc 900

gaggctggcg actttggcgg ttggttctgc ccctgccacg gatctcacta cgacatttcc 960

ggacgtataa ggaaaggacc tgctcccctg aacctcgaga ttcccgcgta cgacttcccc 1020

gaggacgaca agctggtcat tggttaa 1047

<210> 3

<211> 1480

<212> DNA

<213> 子囊菌稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)

<400> 3

tcctcgtgat agcacttacc aagacggtgg ttctagtgag gtattcagag acatcaacaa 60

cttctgccaa gtttctcaaa gtggcggcgt ttcaaacatc cagttatgcc gttgatgtga 120

cggtacatgg aaagctgatc gctgtggcgg atatcatgaa gtccatcaca ctcctcgagt 180

atattcctgg cgttggcaag tcagccaaga cgggaggcaa agacaaggcc accaggagtg 240

ataaggaagt agaggggtcg aagcaagcaa aacttgtcga ggtctgtcgt gattaccaag 300

caatgtggtc cacggctgta tcacacctcg agggagactc ttggatagta gctgatggtg 360

atggcaacct tgtcgtcctt ctgagaaaca ctgcaggtgt tacgctagag gataagcggc 420

gaatgcagat gacaagtgaa tttggcctgg gcgagtgtgt caacaagatc caaaaggtca 480

tggtcgagac aagtgcaaat gcgccaattg ttgccaaagc attcttgtct acggtaagag 540

ctctctatgc tcatttggcc cggtacctat gccgttttac tgacattttt tttttttgtt 600

ttccgcttag accgagggtt caatctacct attcggtact gttgcaccca agttccagag 660

cctgctcatg gactttcagg cgaacatgga agcacacgtg agctccccgc tcggagagct 720

tcagttcaac cagtggaggt cattccgcaa cccagagcga gagggagcag ggccagaaag 780

gtttctggat ggcgagttcc tcgaaatgtt tcttgacatg gaagagaata ctcaaatcga 840

tatttgccaa gggctgtctt atactgcgga ggatatgagg aatttgattg gggagatgaa 900

aaacatgcat tgattgtttg gagtacaagg gtaggacttg attgaatgat ggttcactct 960

agtcaaagag tcacatgtca tttcttcttt ttcaaactgg gcctgccaac gagttttgtt 1020

ttgaaggttg accttcgtga tggagctggt aatattagct accagcagat ctgataacag 1080

tgtagaagcg atcattacgg aatggacagg gcttggttga tgcaagttaa gactaaggta 1140

ctctcattgt aacagaacca tcacggcgtt cgcttatgta attcgactgt taccggggtt 1200

cgggttgctg gagccggatc ggattctctc gggataattc gcggtgatgt caaagctctc 1260

gccttcaacc aatcaaagcg taccaattag aagaaagcct caggcaattc ttcggcccag 1320

accaacgttt gcattggaaa agacctcaaa agattaccgc atcgtatcgt accgaaaacc 1380

accaccgacc gcccggcgac aggacacgct gaaatccctc cacaccctca atcggaacct 1440

ccccgtccac ctaattaatt cctaaacgaa aggtccgctc 1480

<210> 4

<211> 1238

<212> DNA

<213> 子囊菌稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)

<400> 4

aatggagggt ggtgtctggc agtggcgagg ggggcatcac ccgacacata gacgtctttt 60

acttgggcag agggaggttt tgctgccaag tttgggcgcg ctattacttt ttaaagcata 120

caacatttcc tttatagacg tcgtttgcgt ttgcgcggag aaagtgaaga gggtgttggt 180

ttccccagct cacgcatctg ctgtttgtac aaagaaaggt ccttatagag gcgtgaacgt 240

ttggagacta ggatcataaa gaacagtggc gtttgttgtt ttgtagtttg ctgcccctga 300

ctggatgctt ttgctttttg gtttgttgat ttggtgatat gccaagtgca ccaactgtgg 360

aggctgactc tgggatctcg gtgagtatat ggggtgacgg gcgcacattg tctgtcggct 420

ttgcaggtca tgtcgcggtt gtgatgagtg tataagatct tcttctcacg tggaaattat 480

aatgtctcgt ggcatatgaa ttttttggaa acagttgcgc gaagatcttg gtttcgagga 540

agccccaggc gtatatctag aagttgtatg tacagtcatt atcgtgctga ctggtggtgt 600

gtaacaaggg agacggtaaa aaaagttggg tcaccaaggt ctctgtcatc tgcacccaat 660

aatgttcgat tcattttctc ctccccaaga ctgaattcat ttgtggacaa ccgttggact 720

aattgtacgg acttgttgag gatagtctcg caaataacca tcaccctcaa gcagcccaga 780

tattttgaga tctaccaagt gacggagaat gcctagacct ggagacatca aagattacga 840

tttcacacaa gtaaacctcg gaacaagcat ccttaggcac ccaagaatcc taaaatttgg 900

tgccggagag cttgatgtat ggatctgaaa aagattcctt ggaataacaa aatttatatg 960

tgaacaaaag ccaaaccggt cattctctgt atctttgcgt tggaagggct ccttttgtaa 1020

gaagaatttg aaaacgtgag aaacatgggt cgacgtgctt ttatatcttt atattttcct 1080

tgcctacctt cctagatcca gaagtacttc gtagaagtat gcaaatattt ggctcgggta 1140

aactgtacgc cggcctcctg atacaatgta agaaccgttg gcttttctct ccagagtttg 1200

tcaacccatg accagacgtc acacggacca gaaccaga 1238

<210> 5

<211> 1410

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gtcgagtata ttgaaggagc actttttggg cttggctgga gctagtggag gtcaacaatg 60

aatgcctatt ttggtttagt cgtccaggcg gtgagcacaa aatttgtgtc gtttgacaag 120

atggttcatt taggcaactg gtcagatcag ccccacttgt agcagtagcg gcggcgctcg 180

aagtgtgact cttattagca gacaggaacg aggacattat tatcatctgc tgcttggtgc 240

acgataactt ggtgcgtttg tcaagcaagg taagtggacg acccggtcat accttcttaa 300

gttcgccctt cctcccttta tttcagattc aatctgactt acctattcta cccaagcatc 360

caaatgaaaa agcctgaact caccgcgacg tctgtcgaga agtttctgat cgaaaagttc 420

gacagcgtct ccgacctgat gcagctctcg gagggcgaag aatctcgtgc tttcagcttc 480

gatgtaggag ggcgtggata tgtcctgcgg gtaaatagct gcgccgatgg tttctacaaa 540

gatcgttatg tttatcggca ctttgcatcg gccgcgctcc cgattccgga agtgcttgac 600

attggggagt ttagcgagag cctgacctat tgcatctccc gccgttcaca gggtgtcacg 660

ttgcaagacc tgcctgaaac cgaactgccc gctgttctac aaccggtcgc ggaggctatg 720

gatgcgatcg ctgcggccga tcttagccag acgagcgggt tcggcccatt cggaccgcaa 780

ggaatcggtc aatacactac atggcgtgat ttcatatgcg cgattgctga tccccatgtg 840

tatcactggc aaactgtgat ggacgacacc gtcagtgcgt ccgtcgcgca ggctctcgat 900

gagctgatgc tttgggccga ggactgcccc gaagtccggc acctcgtgca cgcggatttc 960

ggctccaaca atgtcctgac ggacaatggc cgcataacag cggtcattga ctggagcgag 1020

gcgatgttcg gggattccca atacgaggtc gccaacatct tcttctggag gccgtggttg 1080

gcttgtatgg agcagcagac gcgctacttc gagcggaggc atccggagct tgcaggatcg 1140

ccacgactcc gggcgtatat gctccgcatt ggtcttgacc aactctatca gagcttggtt 1200

gacggcaatt tcgatgatgc agcttgggcg cagggtcgat gcgacgcaat cgtccgatcc 1260

ggagccggga ctgtcgggcg tacacaaatc gcccgcagaa gcgcggccgt ctggaccgat 1320

ggctgtgtag aagtactcgc cgatagtgga aaccgacgcc ccagcactcg tccgagggca 1380

aagaaataga gtagatgccg accggaacca 1410

<210> 6

<211> 3629

<212> DNA

<213> 子囊菌稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)

<400> 6

cctaccacag cctaacggct tgtgcagcat atttgtgaca tgcgaacact cgagtctaat 60

tcacggtgcc gaacgacgaa ttgtttattc ggcggtcacg gcacactcgg ctgcatatgt 120

ctgtccgttt gatacggcgg cattccgtga ttgtctcgct gttgcaaccg aatcagcaat 180

cgaccggaga atggaactga agatctcgcg catcgacagg cagcgccagt gccagatgat 240

gacacgtccc atgggcgaga atgtacgcag catagcatat tcgagcgctg ataaggtgtt 300

tggtctggga tgcatcagac gagtgctgtc cagaggtatc gaaaaagtat acggcacgtt 360

caaacttttt gacgaggtca tattcgagcc caagggcaat gtctttgcac tcgaagatgg 420

tgaggtgcca gaatgcgtca ctcgtgcacc gctactcgat agttatggcg agcaagcgga 480

gaggttcata gttggcacac ggtacctctc gggaactggg agtggtcatg gcggccgagt 540

ccttgttttc ggtgttgacg aaagccgttc gccgtacctc attcatgcac actctaccaa 600

aagcggctgc cggcgaatag ctaccatgga tgacgatctc ctcgtgatag cacttaccaa 660

gacggtggtt ctagtgaggt attcagagac atcaacaact tctgccaagt ttctcaaagt 720

ggcggcgttt caaacatcca gttatgccgt tgatgtgacg gtacatggaa agctgatcgc 780

tgtggcggat atcatgaagt ccatcacact cctcgagtat attcctggcg ttggcaagtc 840

agccaagacg ggaggcaaag acaaggccac caggagtgat aaggaagtag aggggtcgaa 900

gcaagcaaaa cttgtcgagg tctgtcgtga ttaccaagca atgtggtcca cggctgtatc 960

acacctcgag ggagactctt ggatagtagc tgatggtgat ggcaaccttg tcgtccttct 1020

gagaaacact gcaggtgtta cgctagagga taagcggcga atgcagatga caagtgaatt 1080

tggcctgggc gagtgtgtca acaagatcca aaaggtcatg gtcgagacaa gtgcaaatgc 1140

gccaattgtt gccaaagcat tcttgtctac ggtaagagct ctctatgctc atttggcccg 1200

gtacctatgc cgttttactg acattttttt tttttgtttt ccgcttagac cgagggttca 1260

atctacctat tcggtactgt tgcacccaag ttccagagcc tgctcatgga ctttcaggcg 1320

aacatggaag cacacgtgag ctccccgctc ggagagcttc agttcaacca gtggaggtca 1380

ttccgcaacc cagagcgaga gggagcaggg ccagaaaggt ttctggatgg cgagttcctc 1440

gaaatgtttc ttgacatgga agagaatact caaatcgata tttgccaagg gctgtcttat 1500

actgcggagg atatgaggaa tttgattggg gagatgaaaa acatgcattg attgtttgga 1560

gtacaagggt aggacttgat tgaatgatgg ttcactctag tcaaagagtc acatgtcatt 1620

tcttcttttt caaactgggc ctgccaacga gttttgtttt gaaggttgac cttcgtgatg 1680

gagctggtaa tattagctac cagcagatct gataacagtg tagaagcgat cattacggaa 1740

tggacagggc ttggttgatg caagttaaga ctaaggtact ctcattgtaa cagaaccatc 1800

acggcgttcg cttatgtaat tcgactgtta ccggggttcg ggttgctgga gccggatcgg 1860

attctctcgg gataattcgc ggtgatgtca aagctctcgc cttcaaccaa tcaaagcgta 1920

ccaattagaa gaaagcctca ggcaattctt cggcccagac caacgtttgc attggaaaag 1980

acctcaaaag attaccgcat cgtatcgtac cgaaaaccac caccgaccgc ccggcgacag 2040

gacacgctga aatccctcca caccctcaat cggaacctcc ccgtccacct aattaattcc 2100

taaacgaaag gtccgctccg aaaaaaaacc tttacgatgg cgcccttgac gaccgccacc 2160

cgcgcaatca cgcgctgcgc agcgtcgccc tccaaggccg tgactaccgc cgcgcgcgcc 2220

ctgagcacga cgccggccca gaacggcagc tcgggtgcca gcttctccag ccccttccgc 2280

ggcgagcaga agtcgaccca gatccccgac tttaagaagt acatggcccc caagggctcg 2340

tcgaccagca acgccgtctt ctcgtacttc atggtcggtg ccatgggtgc catctcggcc 2400

gccggtgcca agtcgaccgt ccagggtgag ttggaggaat ctttccctct tgtgaatact 2460

cttgaaggat atgtggatgt agtgtgggat ggggggaata cagtctggag ttaaggttta 2520

cgccaattgg gagcttcttg tgactgacga ctgtgtgttc ttttttcgtg cagagttcct 2580

ggtcaacatg tctgcttccg cggacgtttt ggccatggcc aaggtcgagg ttgatctgac 2640

caccatcccc gagggcaaga acgtgagtga ccacccgcgc aatctactgt cttcgagtcg 2700

tcggaaaacc tagtcgacac ttgtgattgg taacatgtgg tctgactttt tatcttttct 2760

ggatttaggt catcatcaag tggcgtggaa agcccgtctt cattcgccac cgtaccggcc 2820

gtgagattga cgaggcgaac aagatcgacg ttgcctcatt aagagatccc gaggccgaca 2880

gcgaccgtgt caagaagccc gagtggctcg ttatgttggg taagtggaat tcctgatttg 2940

ctttccagct tccaagcgtc gatatcgtcg atcgacatgc ttactttgat ttctacgaca 3000

ggtgtctgca cacatcttgg ttgtgtcccc attggcgagg ctggcgactt tggcggttgg 3060

ttctgcccct gccacggatc tcactacgac atttccggac gtataaggaa aggacctgct 3120

cccctgaacc tcgagattcc cgcgtacgac ttccccgagg acgacaagct ggtcattggt 3180

taaactggta gcaaacaaca catgtatcgc cacacttgaa actgtacgag tatggaacaa 3240

ggggagagag agagagagga aagaagaaaa aatggagggt ggtgtctggc agtggcgagg 3300

ggggcatcac ccgacacata gacgtctttt acttgggcag agggaggttt tgctgccaag 3360

tttgggcgcg ctattacttt ttaaagcata caacatttcc tttatagacg tcgtttgcgt 3420

ttgcgcggag aaagtgaaga gggtgttggt ttccccagct cacgcatctg ctgtttgtac 3480

aaagaaaggt ccttatagag gcgtgaacgt ttggagacta ggatcataaa gaacagtggc 3540

gtttgttgtt ttgtagtttg ctgcccctga ctggatgctt ttgctttttg gtttgttgat 3600

ttggtgatat gccaagtgca ccaactgtg 3629

<210> 7

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

ccggggatcc tctagatcct cgtgatagca cttacc 36

<210> 8

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

cttcaatata ctcgacgagc ggacctttcg ttta 34

<210> 9

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

atgccgaccg gaaccaaatg gagggtggtg tctg 34

<210> 10

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

ggccagtgcc aagctttctg gttctggtcc gtgt 34

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

gtcgagtata ttgaaggagc 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

tggttccggt cggcatctac 20

<210> 13

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

cagggtgagt tggaggaa 18

<210> 14

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

cgtagtgaga tccgtggc 18

<210> 15

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

cgtgattgtc tcgctgttg 19

<210> 16

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

acctccacta gctccagcca ag 22

<210> 17

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

agaaactcga gaattcccta ccacagccta acgg 34

<210> 18

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

taccgagctc gaattcccac agttggtgca cttggc 36