一种泰拉霉素注射液及其应用
阅读说明：本技术 一种泰拉霉素注射液及其应用 (Tulathromycin injection and application thereof ) 是由 田瑞叶 刘漫 赵新祥 王玲 李建国 汪娜 杨申永 韩丙星 于 2021-10-21 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种泰拉霉素注射液及其应用,属于兽用注射技术领域。本发明所提供是一种泰拉霉素复合注射液,其特征在于,由泰拉霉素、维生素C、增溶剂、助溶剂及溶剂组成。本发明所制备的复合注射液为水溶性注射液,采用取代的β-环糊精作为增溶剂,提高了泰拉霉素的水溶解性和稳定性。同时该注射液无需再添加pH调节剂和抗氧化剂,因此具有无刺激性、安全性高、起效快、溶解性好等优点。(The invention discloses a tulathromycin injection and application thereof, belonging to the technical field of veterinary injection. The invention provides a tulathromycin compound injection which is characterized by consisting of tulathromycin, vitamin C, a solubilizer, a cosolvent and a solvent. The compound injection prepared by the invention is water-soluble injection, and the water solubility and the stability of the tulathromycin are improved by adopting the substituted beta-cyclodextrin as a solubilizer. Meanwhile, the injection does not need to be added with a pH regulator and an antioxidant, so that the injection has the advantages of no irritation, high safety, quick response, good solubility and the like.)
技术领域
本发明属于兽用注射技术领域，具体涉及一种泰拉霉素注射液制剂及其应用。
背景技术
泰拉霉素(Tulathromycin)是美国研发的动物专用的半合成大环内酯类抗生素，大环内酯抗生素通过与细菌核糖体RNA选择性地结合来抑制必需蛋白质的生物合成。它们通过在易位过程中促进多肽-tRNA从核糖体解离而起作用。与其他许多大环内酯类抗生素不同的是，它的药物作用保持时间较长，部分原因是由于其结构中有3个氨基基团。泰拉霉素是一种广谱抗菌药，对引起的猪、牛呼吸系统疾病的诸多病原菌如溶血性巴氏杆菌、出血败血性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、支原体、副嗜血杆菌、支气管败血性博德特菌等及牛莫拉氏菌引起的牛传染性角膜结膜炎非常敏感。
目前国内在动物生产中使用较广泛且效果良好的大环内酯药物有替米考星、泰乐菌素，但随着使用时间的延长和用药不规范，很多地区出现不同程度的耐药性，而泰拉霉素药效均强于替米考星和泰乐菌素等市场上广泛使用的大环内酯药物，并且大环内酯药物一般对细菌起抑制作用，泰拉霉素则兼有抑菌和杀菌作用。泰拉霉素的药动学特性优良，吸收快，达峰时间短，生物利用度高，在肺中可达到很高的组织浓度，消除半衰期长，药效持久，具有缓释作用，单次肌注或皮下给药即能提供全程的治疗，在兽医临床具有广阔的应用前景。该药于2004年在欧盟和美国上市，我国农业部在2008年第957号公告中首次允许在动物生产中使用。
由于泰拉霉素难溶于水，易溶于酸性溶液，所以目前已上市的泰拉霉素注射液，多数为有机溶剂/水共溶剂和酸性条件下制备的溶液型注射制剂，注射液偏酸性，刺激性大，注射时经常会引起注射疼痛和注射部位肿胀等问题；而泰拉霉素制备成的油质注射剂，相对于溶液型注射液又具有起效缓慢，不利于急性重症感染动物的治疗的缺点；同时泰拉霉素注射液处方中加入抗氧化剂，虽然提高了药物的稳定性，但降低了用药安全性。
因此，提供一种无刺激性、安全性好、起效快、溶解性好的水溶性泰拉霉素复合注射液是本领域亟待解决的问题。
发明内容
本发明公开了一种泰拉霉素注射液及其应用。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种泰拉霉素复合注射液，主要由以下成分组成：泰拉霉素、维生素C、增溶剂和助溶剂，其余为溶剂；
优选的，组分含量如下：
优选的，所述增溶剂为取代的β-环糊精；优选的，所述取代的β-环糊精为羟丙基-β-环糊精或羟乙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精或葡萄糖基-β-环糊精中的任意一种；更优选的，所述取代的β-环糊精为葡萄糖基-β-环糊精；
优选的，所述取代的β-环糊精与泰拉霉素的重量比例为1:1；
优选的，所述助溶剂组分含量为3-5g/L；
优选的，所述助溶剂为葡甲氨或氨丁三醇或烟酰胺中的一种或两种；
优选的，所述助溶剂为氨丁三醇和葡甲氨，
优选的，氨丁三醇和葡甲氨的重量比为：2:1；
优选的，所述溶剂为注射用水；
优选的，上述的泰拉霉素复合注射液的制备方法包括以下步骤：
步骤一：取配置总量90％的溶剂，向溶剂中通入氮气，加入增溶剂和助溶剂，搅拌溶解；加入维生素C，搅拌溶解完全，溶液呈酸性pH值为1.3～1.8；
步骤二：将步骤一得到的溶解液缓慢加入泰拉霉素，加热至溶解，并搅拌包合一定时间；之后加入余量的溶剂，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。该注射液pH值为5.0～5.5。
优选的，溶剂为注射用水；
优选的，所述除菌过滤的孔径为0.22μm；
优选的，步骤二中，所述的包合时间为30min～120min，优选的，所述包合时间为30min～40min。
优选的，步骤二中，所述加热时的温度为50-60℃；
优选的，加热时间为30min；
优选的，所述加热时的温度为60℃；
优选的，步骤三中，所述pH值范围为5.0～5.5，优选的，所述pH值为5.2。
综上所述，本发明公开了一种泰拉霉素注射液及其应用。本发明所提供是一种泰拉霉素复合注射液，由泰拉霉素、维生素C、增溶剂、助溶剂及溶剂组成。本发明所制备的复合注射液为水溶性注射液，采用取代的β-环糊精作为增溶剂，提高了泰拉霉素的水溶解性和稳定性。同时该注射液无需再添加pH调节剂和抗氧化剂，因此具有无刺激性、安全性高、起效快、溶解性好等优点。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：
步骤一：取配制总量90％的注射用水，向注射用水中通入氮气，加入处方量的葡萄糖基-β-环糊精、氨丁三醇和葡甲氨，搅拌溶解，加入处方量的维生素C，搅拌溶解完全；
步骤二：缓慢加入处方量的泰拉霉素，加热至60℃，至泰拉霉素溶解完全，并搅拌包合30min；之后降至室温，加入余量的注射用水，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。
对比例1
具体制备方法：同实施例1。
对比例2
具体制备方法：同实施例1。
对比例3
具体制备方法：同实施例1。
将实施例1和对比例1-3制备的样品进行稳定性考察比较，考察条件为(1)高温60℃10天(2)强光照5000Lx 10天，检测指标为性状、含量、pH值。结果如下：
0天结果：
高温10天结果：
光照10天结果：
由稳定性试验结果表1-3分析可知，实施例1制备的样品稳定性高于对比例1-3，因此说明了本发明实施例1中采用的葡萄糖基-β-环糊精对泰拉霉素进行包合，提高了泰拉霉素的稳定性。
实施例2：泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：
步骤一：取配制总量90％的注射用水，向注射用水中通入氮气，加入处方量的葡萄糖基-β-环糊精、氨丁三醇和葡甲氨，搅拌溶解，加入处方量的维生素C，搅拌溶解完全；
步骤二：缓慢加入处方量的泰拉霉素，加热至50℃，至泰拉霉素溶解完全，并搅拌包合1h；之后降至室温，加入余量的注射用水，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。
实施例3：泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：
步骤一：取配制总量90％的注射用水，向注射用水中通入氮气，加入处方量的葡萄糖基-β-环糊精、氨丁三醇和葡甲氨，搅拌溶解，加入处方量的维生素C，搅拌溶解完全；
步骤二：缓慢加入处方量的泰拉霉素，加热至60℃，至泰拉霉素溶解完全，并搅拌包合1h；之后降至室温，加入余量的注射用水，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。
实施例4：泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：
步骤一：取配制总量90％的注射用水，向注射用水中通入氮气，加入处方量的葡萄糖基-β-环糊精、氨丁三醇和葡甲氨，搅拌溶解，加入处方量的维生素C，搅拌溶解完全；
步骤二：缓慢加入处方量的泰拉霉素，加热至60℃，至泰拉霉素溶解完全，并搅拌包合30min；之后降至室温，加入余量的注射用水，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。
实施例5：泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：
步骤一：取配制总量90％的注射用水，向注射用水中通入氮气，加入处方量的葡萄糖基-β-环糊精、氨丁三醇和葡甲氨，搅拌溶解，加入处方量的维生素C，搅拌溶解完全；
步骤二：缓慢加入处方量的泰拉霉素，加热至60℃，至泰拉霉素溶解完全，并搅拌包合30min；之后降至室温，加入余量的注射用水，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。
实施例6：泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：
步骤一：取配制总量90％的注射用水，向注射用水中通入氮气，加入处方量的葡萄糖基-β-环糊精、氨丁三醇和烟酰胺，搅拌溶解，加入处方量的维生素C，搅拌溶解完全；
步骤二：缓慢加入处方量的泰拉霉素，加热至60℃，至泰拉霉素溶解完全，并搅拌包合30min；之后降至室温，补加余量的注射用水，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。
实施例7：泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：
步骤一：取配制总量90％的注射用水，向注射用水中通入氮气，加入处方量的葡萄糖基-β-环糊精、氨丁三醇，搅拌溶解，加入处方量的维生素C，搅拌溶解完全；
步骤二：缓慢加入处方量的泰拉霉素，加热至60℃，至泰拉霉素溶解完全，并搅拌包合30min；之后降至室温，补加余量的注射用水，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。
实施例8：泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：
步骤一：取配制总量90％的注射用水，向注射用水中通入氮气，加入处方量的葡萄糖基-β-环糊精、葡甲氨，搅拌溶解，加入处方量的维生素C，搅拌溶解完全；
步骤二：缓慢加入处方量的泰拉霉素，加热至60℃，至泰拉霉素溶解完全，并搅拌包合30min；之后降至室温，补加余量的注射用水，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。
实施例9：泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：
步骤一：取配制总量90％的注射用水，向注射用水中通入氮气，加入处方量的葡萄糖基-β-环糊精、烟酰胺，搅拌溶解，加入处方量的维生素C，搅拌溶解完全；
步骤二：缓慢加入处方量的泰拉霉素，加热至60℃，至泰拉霉素溶解完全，并搅拌包合30min；之后降至室温，补加余量的注射用水，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。
实施例10：泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：
步骤一：取配制总量90％的注射用水，向注射用水中通入氮气，加入处方量的葡萄糖基-β-环糊精、氨丁三醇和葡甲氨，搅拌溶解，加入处方量的维生素C，搅拌溶解完全；
步骤二：缓慢加入处方量的泰拉霉素，加热至60℃，至泰拉霉素溶解完全，并搅拌包合30min；之后降至室温，补加余量的注射用水，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。
实施例11：泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：
步骤一：取配制总量90％的注射用水，向注射用水中通入氮气，加入处方量的葡萄糖基-β-环糊精、氨丁三醇和葡甲氨，搅拌溶解，加入处方量的维生素C，搅拌溶解完全；
步骤二：缓慢加入处方量的泰拉霉素，加热至60℃，至泰拉霉素溶解完全，并搅拌包合30min；之后降至室温，补加余量的注射用水，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。
实施例12：泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：
步骤一：取配制总量90％的注射用水，向注射用水中通入氮气，加入处方量的葡萄糖基-β-环糊精、氨丁三醇和葡甲氨，搅拌溶解，加入处方量的维生素C，搅拌溶解完全；
步骤二：缓慢加入处方量的泰拉霉素，加热至60℃，至泰拉霉素溶解完全，并搅拌包合30min；之后降至室温，补加余量的注射用水，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。
实施例13：泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：
步骤一：取配制总量90％的注射用水，向注射用水中通入氮气，加入处方量的葡萄糖基-β-环糊精、氨丁三醇和葡甲氨，搅拌溶解，加入处方量的维生素C，搅拌溶解完全；
步骤二：缓慢加入处方量的泰拉霉素，加热至60℃，至泰拉霉素溶解完全，并搅拌包合30min；之后降至室温，加入处方量的硫代甘油，补加余量的注射用水，搅拌混合均匀；
步骤三：将步骤二中所得溶液过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即制得泰拉霉素和维生素C复合注射液。
对实施例1-13制备的泰拉霉素复合注射液进行含量，泰拉霉素A、B异构体，pH值的检测，结果如下表：
表1
通过对实施例1-3的样品检测结果分析可知，加热温度60℃及加热包和时间在30min-1h时，泰拉霉素异构体A、B两种异构体维持在一定范围内(泰拉霉素异构体A 87.0-92.0％；泰拉霉素异构体B 8.0-13.0％)，且泰拉霉素和维生素C都比较稳定；通过对实施例1、4、5的样品检测结果分析可知，选择葡萄糖基-β-环糊精与泰拉霉素的重量比例为1:1时，葡萄糖基-β-环糊精对泰拉霉素的增溶效果较好；对比实施例1、6-11样品检测结果可知，助溶剂优选氨丁三醇和葡甲氨，两者加入量为3g/L，比例为2:1较好；对比实施例1、13样品检测结果可知，加入抗氧剂(硫代甘油)与不加抗氧剂，对于泰拉霉素和维生素C的稳定性无显著差别。综上分析，加热温度及加热时间优选60℃30min，选择葡萄糖基-β-环糊精与泰拉霉素的重量比例优选为1:1。
实施例14：泰拉霉素复方注射液
具体制备方法：同实施例1。
将实施例14制备的泰拉霉素复合注射液作为样品，进行加速试验和长期试验，考察泰拉霉素复合注射液的稳定性。实验结果见下表(表2和表3)：
表2加速试验(40±2℃)数据
表3长期试验(25±2℃)数据
通过加速试验(40±2℃)和长期试验(25±2℃)数据(表2和表3)可知，本发明的泰拉霉素复合注射液在加速试验放置6个月和长期实验放置12个月后样品性状、pH值等均无明显变化，样品泰拉霉素和维生素C含量等各项质量指标均合格，有效说明了泰拉霉素与葡萄糖基-β-环糊精形成包合物，与维生素C制备成的复合注射液，质量稳定性良好。
实施例15刺激性试验
将实施例14制备的泰拉霉素复合注射液作为药品，并与已上市10％泰拉霉素注射液制剂(以有机溶剂/水作为溶剂)进行对比，分别对12头牛6头猪进行颈部肌肉注射，给药剂量分别为2.5mg/kg、7.5mg/kg，具体情况见下表4和表5：
表4
表5
对比本发明制备的泰拉霉素复合注射液和已上市10％泰拉霉素注射液对牛注射部位的刺激性实验结果可见，注射实施14制剂的6头牛和3头猪中，只有一头牛在注射剂量稍大时出现了轻微疼痛反应，其余5头牛和3头猪均未出现注射刺激反应；对于注射已上市10％泰拉霉素注射液的6头牛和3头猪中，有5头牛出现了疼痛反应，并在注射部位出现了局部肿胀，给药剂量加大时，注射部位均会出现肿胀，同时3头猪中有2头猪出现了疼痛反应，其中1头猪在注射部位出现了局部肿胀，且在8到33天肿胀才消失。刺激性试验结果表明，本发明制备的泰拉霉素复合注射液组织相容性好，无明显刺激性。
实施例16泰拉霉素复合注射液血药浓度测定
将实施例14制备的泰拉霉素复合注射液作为药品，与制剂1—已上市10％泰拉霉素注射液制剂(以有机溶剂/水作为注射溶剂)，制剂2—10％泰拉霉素注射液制剂(以油性溶剂作为注射溶剂)进行对比。选30头健康猪，体重为40-50kg，分为3组，每组10头，分别对其进行颈部肌肉注射，给药剂量分别为2.5mg/kg，按时采血，检测血浆中泰拉霉素含量(ng/ml)，具体情况见下表6：
表6
从表6中三种制剂注射后血药浓度的检测结果对比可知，实施例14制剂比制剂1泰拉霉素注射液制剂(以有机溶剂/水作为注射溶剂)血药浓度达峰快；而对于制剂2泰拉霉素注射液制剂(以油性溶剂作为注射溶剂)前期刚注射时，血药浓度达峰时间无明显差异，但是实施例14制剂在后期48小时内仍有较高的血药浓度，且在48小时内药物在体内释药速度平稳且浓度接近。综上结果分析说明，实施例14相比于制剂1泰拉霉素注射液(以有机溶剂/水作为注射溶剂)和制剂2泰拉霉素注射液(以油性溶剂作为注射溶剂)有明显的速释兼缓控释的优点，同时表现了实施例14制剂具有给药吸收完全、半衰期长、生物利用度高的特点。
实施例17将实施例14制剂与实施例16中制剂1、制剂2进行疗效对比选取某一大型养殖猪场的有呼吸道疾病临床症状的猪(体重约50kg)36头进行试验，根据临床症状(见表7)，将36头猪分为3—病情严重(6头)、2—病情中等(21头)、1—病情轻微(9头)3个等级，再将3个等级分别平分为3个组，第1组注射实施例14制剂，第2组注射制剂1，第3组注射制剂2，颈部肌肉注射，给药量均为2.5mg/kg。在治疗后1、2、5及7天观察临床症状及2个月后的病情复发和增重情况，结果见表8。
表7临床症状评分标准
表8临床症状按等级评分结果
经表8数据分析可知，给药实施例14制剂后的重症猪在第3天就已全部转为中轻症，而在第5天已无中重症猪，有8头猪基本无临床症状，第7天所有病猪的临床症状基本消失；而给药制剂1后，第7天仍有1头重症临床症状的猪和6头中轻症状的猪；给药制剂2后，第7天仍有5头轻症状的猪。数据显示，实施例14制剂对于患有呼吸系统疾病的猪，起效快、病症消失快，生物利用度高，特别有利于对于重症猪的治疗。
表9病情复发和增重情况
通过表9数据分析得出，经过治疗痊愈后，2个月内，实施例14制剂组所有猪未复发呼吸系统疾病，制剂2组有1头猪复发呼吸系统疾病，制剂1组有3头猪复发呼吸系统疾病，且实施例14制剂组中猪的体重增重比制剂1组和制剂2组大，因此说明泰拉霉素复合注射液相比制剂1—10％泰拉霉素注射液制剂(以有机溶剂/水作为注射溶剂)和制剂2—10％泰拉霉素注射液制剂(以油性溶剂作为注射溶剂)，不仅可以使痊愈猪的身体恢复快，效果好，而且可以加强猪的免疫力。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对上述实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
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