一种眼用制剂的载体或辅料及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 一种眼用制剂的载体或辅料及其制备方法和应用 (Carrier or auxiliary material of ophthalmic preparation and preparation method and application thereof ) 是由 董庆 张舒 成旋 薛陆兵 唐欣 于 2021-06-17 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种眼用制剂的载体或辅料及其制备方法和应用,属于眼用药递送领域。本发明眼用制剂的载体或辅料的含有如下成分：表面活性剂和离子型高分子等,还含有溶剂；本发明眼用制剂的载体或辅料中含有所述成分在溶剂中形成的纳米小体,纳米小体为球形,粒径为1～100nm,可自组装形成粒径为10～2000nm的球形的纳米小球。本发明给药载体能够包裹药物穿过眼前段,将药物高效输送到眼后段发挥治疗作用,实现了通过滴眼给药治疗眼底疾病的目标,解决了眼科药品给药领域一直努力解决但未解决的技术问题,具有极为优良的临床使用前景和非常积极的社会意义。(The invention provides a carrier or auxiliary material of an ophthalmic preparation, a preparation method and application thereof, and belongs to the field of ophthalmic drug delivery. The carrier or the auxiliary material of the ophthalmic preparation contains the following components: surfactant, ionic polymer, etc., and further contains solvent; the carrier or the auxiliary material of the ophthalmic preparation contains a nano corpuscle formed by the components in a solvent, wherein the nano corpuscle is spherical, has the particle size of 1-100 nm, and can be self-assembled to form spherical nano globules with the particle size of 10-2000 nm. The drug delivery carrier can wrap the drug to pass through the anterior segment of the eye, and efficiently deliver the drug to the posterior segment of the eye to play a therapeutic role, thereby realizing the aim of treating fundus diseases by eye drop drug delivery, solving the technical problems which are always solved but not solved in the field of ophthalmic drug delivery, and having extremely good clinical application prospect and very positive social significance.)
技术领域
本发明属于眼用药递送领域，具体涉及一种眼用制剂的载体或辅料及其制备方法和应用。
背景技术
眼底疾病患者众多，仅中国患者数量已逾数千万，随着社会日益老龄化，电子产品的普及，发病率将会逐年上升；常见的眼底疾病有糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜病变、年龄相关性黄斑病变、视网膜静脉阻塞、病理性近视、地图样萎缩、眼部肿瘤、眼内炎等，可能导致视力下降甚至失明，严重影响人们生活质量。例如，约有6.8％的糖尿病人患有糖尿病性黄斑水肿(DME)，该疾病是导致糖尿病人失明的主要原因(Urias et al.,VisionResearch,V139:221-227,2017；Mandal et al.,Ocular delivery of proteins andpeptides:Challenges and novel formulation approaches,Advanced Drug DeliveryReviews,126:67–95,2018)。
药物治疗是眼底疾病的主要治疗方法和研究趋势。但是，由于眼内存在复杂的生理结构和屏障，导致药物很难进入眼球，特别是眼后段，难以达到有效剂量，因而难以实现有效治疗。寻找一种有效且安全的治疗眼底疾病的药品或方法是本领域研究人员一直孜孜以求的奋斗目标。
临床眼科给药通常有3种途径：⑴结膜囊给药(滴眼)：药物通过角膜进入前房水后可以扩散分布到虹膜、睫状体，但晶状体和玻璃体膜的屏障作用，使药物难以进入晶状体和玻璃体；⑵眼部注射给药：包括结膜下注射、眼前房注射、玻璃体注射、眼球后注射和眼眶注射，注射给药可以使药物直接抵达治疗部位，但注射是创伤性的，存在潜在危险，如前房注射产生疼痛，畏光，流泪，前房浑浊，出血，角膜内皮细胞损害，外伤性白内障等；玻璃体注射会出现晶状体浑浊，玻璃体机化，视网膜/视神经损害等；⑶全身给药包括口服给药，静脉给药：药物在体内一般大多聚集在肝脏，肾脏或肺脏，受到血-视网膜屏障(blood retinalbarrier，BRB)的阻碍，抵达眼球组织的浓度较低，同时全身尤其是主要脏器承受了不必要的毒副作用。
目前，临床上为了使药物穿过眼屏障，通常采用眼球玻璃体注射、或玻璃体植入(眼内插入)等技术手段，把药物输送到患者玻璃体，治疗眼后段疾病(凌沛学主编《眼科药物与制剂学》，中国轻工业出版社，2010，P3；Wang et.al.,Mediators of Inflammation,Vol.2013,Article ID 780634；Luaces-Rodríguez et al.,Pharmaceutics，2018,10,66)。药物玻璃体注射或玻璃体植入操作是创伤性给药，需要经过专门培训的眼科医师在手术室等无菌环境下操作；因为操作有创伤性可能会出现并发症，如高眼压、白内障、医源性感染性眼内炎、玻璃体出血、视网膜损伤等；操作条件及操作环境要求高，必须在有条件的医院进行；生物药眼用注射剂生产成本和使用成本高；同时亦存在治疗时机上因为医疗条件限制而延误治疗的情况发生，调整给药方案灵活性差(M.HATA et al.,RETINA，37:1320–1328,2017)。
结膜囊给药是最方便、最安全的眼部给药方式。但是眼角膜有多层结构，从外至内大致分为：富含脂质体的上皮层、富含水性成分的基质层和富含脂质体的内皮层，滴眼液在滴眼后首先接触眼表泪水层，继而需要跨过上皮层、基质层和内皮层才可能到达眼后段。在此过程中，由于泪液的稀释、角膜、结膜的眼表屏障和晶状体、玻璃体的解剖位置，滴眼液往往在眼前段的组织中浓度高，很难进入眼后段并达到有效的治疗浓度。因此，结膜囊给药的方式虽然安全，但是药物输送性差，难以达到有效治疗眼底疾病的目的。
综上，现有治疗眼底疾病主要给药方法均难以兼顾安全和有效。
滴眼给药的方式相比于静脉注射、玻璃体注射具有安全、方便的显著优势，发明能将药物输送到眼后段的眼科眼用制剂是临床实践中亟待解决的技术问题，非常具有临床治疗价值和社会意义。然而，由于眼球结构的特殊性，要进入眼后段必须能多次通过水溶层和脂溶层多重屏障，目前研究人员进行了多种尝试，但均未达到理想的效果。
纳米技术使药物分散至纳米级使其有了特殊的理化性质和不同的药物分布吸收特性，增加组织和细胞渗透，有可能使药物产生新的治疗作用(T.L.CHANG et al.,Nanocrystal technology for drug formulation and delivery,Front.Chem.Sci.Eng.2015,9(1):1–14；S.Jiang et al.,Nanotechnology in retinaldrug delivery,Int.J.Ophthalmol.，2018,11(6)1038-1044；M.Kabiri et al.,Astimulus-responsive,in situ-forming,nanoparticle-laden hydrogel for oculardrug delivery,Drug Delivery and Translational Research,2018,8:484–495；贾承政等，纳米材料穿透组织与细胞的研究进展，新型工业化，2019,9(9):99–118)。比如，将纳米技术用于制备眼药以增加生物利用度和控释给药。Kassem等制备氢化可的松纳米混悬剂(粒径：0.539～4.87μm)等滴眼可增加兔眼压(M.A.Kassem et al.,Nanosuspension as anophthalmic delivery system for certain glucocorticoid drugs,InternationalJ.Pharmaceutics,340(2007):126-133)。有研究报道环孢菌素A的纳米囊可进入试验动物角膜表层，但是却未能进入到角膜全层；又如，有研究报道PEG化聚已内酯纳米粒滴入兔眼后，纳米粒能够渗透进入角膜上皮；还有研究发现，将纳米药物经结膜下注射和玻璃体注射，可控制和延缓药物释放(金义光主编，《纳米技术在药物递送中的应用》，P319，化学工业出版社，2015年)。由非离子表面活性剂/非离子型双亲化合物(如司盘类、泊洛沙姆、吐温类等)、配上胆固醇来包裹药物组成直径多为亚微米的囊泡(non-ionic surfactantvesicles，NSVs，又称niosomes)作为新型药物输送载体。生物黏附性材料可增强囊泡在眼部的停留时间，维持药物的缓慢释放，减少药物在眼部的清除等，可以增强对角膜的渗透。分别用环戊醇胺酯(扩瞳药)、马来酸噻吗心安(青光眼药)和乙酰唑胺(青光眼药)制备的囊泡在动物试验中药物的生物利用度的提高(赵晓宇等，新型药物载体非离子表面活性剂囊泡的应用研究进展，中国医院药学杂志，2008，28(1)：833-5；X.Ge et al.,Advances ofNon-Ionic Surfactant Vesicles(Niosomes)and Their Application in DrugDelivery，Pharmaceutics，2019,11,55)。Puras等将制备的阳离子囊泡注射到大鼠视网膜和视网膜下作为基因输送手段(G.Puras et al.,A novel cationic niosomeformulation for gene delivery to the retina，J.Control.Release，2014,174,27–36)。尽管利用纳米技术制备眼科用药具备一定的优势，但以上研究仍然没有实现通过无创伤的滴眼给药的方式使药物进入到眼后段，并保证有效药物浓度的目标。
纳米乳(Nano-Emulsion)又称微乳液，是由油相、水相、表面活性剂和助表面活性剂按适当比例组成的，能够兼具亲水、亲油的特性，具有制备滴眼给药输送药物到眼后段的给药系统的潜在可能。通常的纳米乳难以同时兼具有良好的亲水性和亲脂性，使其能逐次通过眼表泪液层、角膜上皮细胞层、实质层和内皮细胞层而后将有效药物输送进入到眼后段。纳米乳的油相往往需采用植物油脂，而油酯分解，可能导致制剂稳定性变差；而且，使用的表面活性剂用量较大(用量为25～30％)，可能产生毒副作用和过敏反应；助表面活性剂如乙醇，则会增加渗透压，不适合滴眼剂，且不稳定(金义光主编，《纳米技术在药物递送中的应用》，P322，化学工业出版社，2015年；潘卫三主编，《药剂学》，P404，化学工业出版社，2017年)。
因此，研究一种有效输送药物至眼后段的滴眼给药载体仍然是本领域亟待解决而又未解决的技术问题。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种高效输送药物至眼后段的滴眼给药载体及其应用，本发明滴眼给药载体能够将药物高效运送至眼后段，解决了眼科用药递送领域人们一直渴望解决但始终未能获得成功的技术难题。
本发明提供了一种眼用制剂的载体或辅料，它含有如下成分：表面活性剂和离子型高分子，还含有溶剂。
进一步地，上述表面活性剂、离子型高分子的质量比为：(1～100):(0.1～50)；所述表面活性剂与溶剂的比例为：每100mL溶剂含5～3000mg表面活性剂；
优选地，所述表面活性剂、离子型高分子的质量比为(2.5～31):(1～7.5)；所述表面活性剂与溶剂的比例为：每100mL溶剂含50～3000mg表面活性剂。
进一步地，上述表面活性剂为非离子型表面活性剂。
进一步地，上述非离子型表面活性剂为司盘类、聚山梨酯、泊洛沙姆、烷基葡萄糖苷、维生素E聚琥珀酸乙二醇酯、蔗糖硬脂酸酯或氮酮。
进一步地，上述离子型高分子选自羧甲基纤维素及其盐、羟基乙酸淀粉钠、透明质酸及其盐、黄原胶、海藻酸及其盐、二乙酸聚乙二醇PEG-(COOH)2中的至少一种。
本发明还提供了一种眼用制剂的载体或辅料，它含有如下成分：低聚合度聚维酮和中聚合度聚维酮，还含有溶剂。
进一步地，上述低聚合度聚维酮、中聚合度聚维酮的质量比为：(0.1～10):1，所述低聚合度聚维酮与溶剂的比例为：每100mL溶剂含5～3000mg低聚合度聚维酮；
优选地，所述低聚合度聚维酮、中聚合度聚维酮的质量比为：(0.24～1):1，所述低聚合度聚维酮与溶剂的比例为：每100mL溶剂含400～840mg低聚合度聚维酮。
更进一步地，上述低聚合度聚维酮为重均分子量为2000～5000Dalton的聚维酮，优选为重均分子量为3500Dalton的聚维酮PVP K12。
更进一步地，上述中聚合度聚维酮为重均分子量为20000～60000Dalton的聚维酮，优选为重均分子量为35000～50000Dalton的聚维酮PVP K30。
进一步地，上述的眼用制剂的载体或辅料中所述溶剂为极性溶剂。
更进一步地，上述极性溶剂为水。
进一步地，上述的眼用制剂的载体或辅料还含有如下成分：增粘剂和/或助溶剂。
优选的，所述增粘剂为聚乙二醇、卡波姆、泊洛沙姆、聚维酮、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、聚乙烯醇、黄原胶、聚氧乙烯脂肪醇类、透明质酸及其盐或羟丙基甲基纤维素中的至少一种，所述助溶剂为丙二醇、丙三醇、液态聚乙二醇、氢化蓖麻油或蓖麻油；增粘剂和表面活性剂，或增粘剂和低聚合度聚维酮的质量比为1:(0.1～100)，助溶剂和表面活性剂，或助溶剂和低聚合度聚维酮的质量比为(1～10):1；
更优选地，所述增粘剂和表面活性剂，或增粘剂和低聚合度聚维酮的质量比为1:(0.1～30)。
进一步地，上述的眼用制剂的载体或辅料含有纳米小体，所述纳米小体为球形，其粒径为1～100nm；所述纳米小体由眼用制剂的载体或辅料的成分自组装形成。
进一步地，上述纳米小体粒径为5～30nm。
更进一步地，上述的眼用制剂的载体或辅料还含有纳米小球，所述纳米小球为球形，其粒径为10～2000nm。所述纳米小球是纳米小体自组装形成的。
更进一步地，上述纳米小球粒径为100～2000nm。
本发明还提供了一种上述的眼用制剂的载体或辅料的制备方法，它是将所述成分和溶剂均匀混合成溶液，然后将溶液进行研磨或均质分散。
本发明还提供了上述的眼用制剂的载体或辅料在制备输送药物至眼后段的滴眼给药载体中的用途。
本发明还提供了一种滴眼给药的眼用制剂，它是由上述眼用制剂的载体或辅料和治疗眼病的活性成分组成的制剂。
进一步地，上述眼用制剂的载体或辅料中的表面活性剂和治疗眼病的活性成分的质量比为(1～30):(1～2)；
或，所述眼用制剂的载体或辅料中的低聚合度聚维酮和治疗眼病的活性成分的质量比为(6～40):1。
进一步地，上述眼用制剂的载体或辅料含有纳米小体，所述治疗眼病的活性成分包裹于纳米小体中。
更进一步地，上述纳米小体为球形，其粒径为1～100nm，优选的，其粒径为5～30nm。
进一步地，上述治疗眼病的活性成分包括小分子化合物类药物、或其游离酸、或其游离碱、或其药学上可接受的盐；
优选地，所述小分子化合物类药物包括核苷类抗病毒药物、降眼压药物、抗生素类药物、抗氧化类药物、抗炎症类药物、毒蕈碱型受体阻断剂药物、免疫抑制剂类药物、糖皮质激素类药物；
更优选地，所述核苷类抗病毒药物包括更昔洛韦、阿昔洛韦、喷昔洛韦、西多呋韦、福米韦生、洛布卡韦；
所述降眼压药物包括碳酸酐酶抑制剂，更优选地，为布林佐胺、乙酰唑胺、醋甲唑胺；
所述抗生素类药包括阿米卡星、头孢曲松、头孢唑林、苯唑西林、左氧氟沙星、环丙沙星、莫西沙星、万古霉素；
所述抗炎症类药物包括：土霉素；
所述抗氧化类包括牛磺酸，花青素，木质素；
所述毒蕈碱型受体阻断剂药物包括阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱；
所述免疫抑制剂类药物包括：环孢素(cyclosporin)、他克莫司(tacrolimus)、西罗莫司(sirolimus)、依维莫司(everolimus)、吗替麦考酚酯(mycophenolate mofetil)、氨甲喋呤、硫唑嘌呤及环磷酰胺；
所述糖皮质激素类药物包括可的松、强的松、强的松龙、甲基强的松龙、氟羟强的松龙、曲安奈德。
本发明还提供了一种制备上述的眼用制剂的方法，包括以下步骤：
(1)将表面活性剂、和/或增粘剂加入溶剂中配制成溶液；
(2)将治疗眼病的活性成分和/或助溶剂分散在步骤(1)得到的溶液中，再加入离子型高分子或其溶液，分散混合得到初悬液；
(3)将步骤(2)得到的初悬液搅拌分散或均质分散，即得；
或包括以下步骤：
(a)将低聚合度聚维酮、和/或增粘剂加入溶剂中配制成溶液；
(b)将治疗眼病的活性成分和/或助溶剂分散在步骤(a)得到的溶液中，再加入中聚合度聚维酮或其溶液，分散混合得到初悬液；
(c)将步骤(b)得到的混合液研磨或均质分散，即得。
进一步地，步骤(2)或步骤(b)中所述分散选自机械搅拌分散、磁力搅拌分散、涡旋振摇分散、剪切分散、均质分散、研磨分散、超声分散中的至少一种。
本发明还提供了上述眼用制剂在制备治疗眼部疾病的药物中的用途。
进一步地，上述眼用制剂是治疗眼底疾病，和/或治疗眼后段病毒感染性疾病，和/或治疗眼后段慢性炎症，和/或降眼压，和/或眼部疼痛，和/或抗眼内细菌或真菌感染的眼用制剂，和/或用于青少年近视、假近视的防治的眼用制剂，和/或治疗自身免疫性疾病的眼用制剂，和/或治疗眼前部疾病的眼用制剂，和/或抑制肿瘤生长的眼用制剂。
更进一步地，上述治疗眼底疾病的眼用制剂包括治疗眼底血管性疾病所致的黄斑水肿、炎性水肿、炎性疼痛的眼用制剂；更优选地，为治疗视网膜中央静脉阻塞性黄斑水肿、视网膜分支静脉阻塞性黄斑水肿、糖尿病性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、病理性近视黄斑水肿、湿性年龄相关性黄斑变性所致黄斑水肿、干性黄斑病变、地图样萎缩、非感染性眼内炎、急性视网膜坏死、术后炎性疼痛、葡萄膜炎的眼用制剂；
所述治疗眼后段病毒感染性疾病的眼用制剂包括治疗巨细胞病毒性葡萄膜炎，病毒性视神经炎，病毒性急性视网膜坏死的眼用制剂；
所述降眼压的眼用制剂包括治疗急慢性青光眼及其并发症的眼用制剂；
所述治疗自身免疫性疾病的眼用制剂为治疗眼部免疫性疾病或全身自身免疫性疾病引起的眼部疾病的眼用制剂，优选地，包括治疗Graves眼病，Behoet氏综合征，鸟枪弹丸性视网膜脉络膜病变，干燥综合征，交感性眼炎或肉芽肿性眼病的眼用制剂；
所述治疗眼前部疾病的眼用制剂包括治疗高危角膜移植术后后遗症或并发症、春季卡他性角结膜炎，蚕蚀性角膜溃疡或顽固性角膜溃疡，单纯疱疹病毒性角膜炎，角膜新生血管形成及角膜翼状胬肉的眼用制剂。
更进一步地，上述抗眼内细菌或真菌感染的眼用制剂的活性成分是抗生素；
所述用于青少年近视、假近视防治的眼用制剂的活性成分是毒蕈碱型受体阻断剂；
所述治疗自身免疫性疾病的眼用制剂的活性成分是免疫抑制剂。
本发明所指的纳米小体是：眼用制剂载体或辅料的成分在溶剂中自组装形成的纳米级的球形聚集体。
本发明所指的纳米小球是：纳米小体在溶剂中自组装形成的球形自组装结构。
本发明所指的溶剂是：能溶解眼用制剂载体或辅料的成分的液体。
本发明所指表面活性剂是：能够显著降低液体表面张力的物质；本发明所指非离子型表面活性剂是指在水中不解离的表面活性剂。
本发明所指离子型高分子是：带有阳离子或阴离子的高分子聚合物。
本发明所指低聚合度聚维酮是：分子量在10000Dalton以下的聚维酮，中聚合度聚维酮是指分子量在10000Dalton以上，100000Dalton以下的聚维酮。
本发明所指的“治疗眼病的活性成分”是：可以用于治疗眼病的活性物质，即目前已经作为眼科用药使用的活性物质，以及作用机理、作用靶点表明其能够治疗眼病，但目前暂没有作为眼科用药使用的活性物质。
本发明所述滴眼给药是：将药液滴入眼内的一种给药方法，属于角膜给药途径。
由于眼球结构的特殊性，现有技术中的给药方式均无法兼顾安全给药和有效给药，能够有效给药的方式存在安全问题，能够安全给药的方式无法有效给药。比如，玻璃体注射能够有效给药，但是存在眼内出血、疼痛等严重的并发症，目前最为安全的滴眼给药非常安全，但是由于无法透过眼前段，导致药物难以到达眼后段，有效浓度不够，无法达到有效治疗的目的。
本申请发明人经过多年的积累，发明了本发明滴眼给药载体，经过试验验证，该滴眼给药载体能够携载药物，将药物运送至玻璃体发挥作用，并且稳定，解决了眼科药品给药领域一直期限亟待解决但未解决的技术问题。
通过实验可知，采用本发明滴眼给药载体可运送多种药物，可以在眼底达到有效(预期)浓度，且不会影响其携载(包裹)的治疗眼病的活性成分的性质与效果。可以预见，本发明滴眼给药载体可用于运送现有采用玻璃体注射给药、玻璃液植入给药、口服给药和全身注射给药的小分子药物，进而能够克服现有玻璃体注射、玻璃体注射植入剂，口服给药和全身注射给药存在的问题，解决眼内出血、疼痛等严重的并发症问题，极大降低眼底疾病患者的痛苦，增加医从性、改善患者及其家庭的生活质量，或避免全身给药带来的全身毒副作用。
本发明可以避免眼局部注射或植入带来的并发症。
本发明开发的制剂给药量小，毒副作用小，不仅可以作为治疗药物，还可以作为眼科疾病防控。
本发明的制剂可以满足临床上长期给药的需求。
本发明的滴眼给药治疗系统，有效成分(Active Pharmaceutical Ingredient,API)可以采用已在临床使用且作用机理明确的小分子药物，质量可控，产品使用方便，病人顺应性好，医师可根据患者病情灵活调整给药方案。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的
具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为实施例1制得的样品的(A)透射电镜图(标尺为200nm)；(B)加染色剂染色后的透射电镜图(标尺为1μm)。
图2为实施例3制得的样品的透射电镜图(标尺为0.5μm)。
图3为实施例6制得的样品染色后的透射电镜图(标尺为500nm)。
图4为实施例13制得的样品染色后的透射电镜图(标尺为200nm)。
图5为实施例36制得的样品的(A)透射电镜图(标尺为0.5μm)；(B)加染色剂后的透射电镜图(标尺为0.5μm)。
具体实施方式
本发明所用试剂或仪器可以通过市售购买获得，未注明具体条件的，按照常规条件或制造商建议的条件使用。
部分仪器设备如下：
ES225SM-DR(E)电子分析天平，Precisa公司(瑞士)；
DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器，巩义市英峪高科仪器厂(河南，中国)；
WH-2微型涡旋混合仪，上海沪西分析仪器厂有限公司(上海，中国)；
分散机：T25 easy clean digital，IKA公司(德国)；
KQ-500型超声清洗仪，昆山市超声波仪器有限公司(昆山，中国)；
JP-010T型超声清洗仪，深圳市洁盟清洗设备有限公司；
AH-NANO Plus高压均质机，安拓思纳米技术(苏州)有限公司(中国)；
PM-DK2行星式球磨机，卓的仪器设备(上海)有限公司(上海，中国)；
Mettler Toledo FE20 pH meter，梅特勒-托利多公司(瑞士)；
NS-90纳米粒度分析仪，珠海欧美克仪器有限公司(珠海，中国)；
安捷伦1100HPLC高效液相色谱仪，安捷伦科技有限公司(美国)；
API 4000三重四极杆质谱仪(美国Applied Biosystems公司)；
STY-1A渗透压测定仪，天津市天大天发科技有限公司(天津，中国)。
本发明制剂的性质检测方法如下
粒径检测方法：
将1mL实施例或对比例制备得到的样品转移至样品池中，检测温度设置为40℃，将样品池放入NS-90纳米粒度分析仪，开始检测。每个样品重复检测3次，取3次检测结果的平均值为该样品检测结果为粒度(以光强分布，及占比％)和多分散指数(PdI，Polydispersity Index)表示。
渗透压检测方法：
测量溶液的冰点下降来测定其渗透压摩尔浓度。操作：清洗STY-1A渗透压测定仪探头：取三份100μL蒸馏水至3只样品管中，待仪器预热后，将装有100μL蒸馏水的样品管旋上仪器探头，选择清洗3次，点击“清洗”，重复三次。检测：在仪器信息表中填入样品信息后，点击“测试”；用移液枪移取100μL样品至样品管中，轻轻旋上仪器，点击“启动”检测。重复检测三次，取3次检测结果的平均值为检测结果。
pH值检测方法：
FE20型酸度计分别用pH缓冲溶液(pH分别为4.00、6.86和9.18)校准，电极用纯净水冲洗后，用无纤维纸吸去多余水份，浸入待检测液体样品中按读数键开始测量，在读数稳定后所得数据，即为样品pH值。
检测得到的溶液若pH<5，或>9，则需要用酸或碱调节至pH6～8，常用的pH调节剂为NaOH和HCl，磷酸和磷酸盐(如磷酸二氢钠、磷酸氢二钠)，柠檬酸和柠檬酸盐(如柠檬酸钠)，硼酸和硼砂；检测所得液体的渗透压如未达到等渗，则添加适量氯化钠，使其达到或接近等渗。
除另有说明外，递送药物到达眼后段的效果验证方法如下：
试验仪器设备：高效液相色谱仪，型号：LC-20AD(日本岛津)；质谱仪：型号：API4000三重四极杆质谱仪(美国Applied Biosystems公司)；色谱柱：Fortis Pace C18 5μM,2.1X30mm(英国Fortis公司)。
大鼠：选用健康成年Sprague Dawley(SD)大鼠，分为受试剂组和对照组，每组6只眼，受试剂组滴加本发明实施例制备的眼用制剂，对照组滴加2mg药物/5mL生理盐水的混悬液(使用前涡旋振摇均匀)，每只眼睛20μL。给药后于0.5小时或1小时后安乐死处理动物，迅速采集玻璃体，玻璃体样品匀浆处理后，于-80℃保存。取10μL玻璃体匀浆，加入90μL 95％乙醇，超声2分钟，涡旋混合1分钟，得玻璃体匀浆液；取50μL匀浆液，加入175μL甲醇，涡旋混合3min，4℃12000rpm离心10min，取上清液用0.45μm的针头式过滤器过滤，滤液用于LC/MS/MS(正离子模式，MRM SCAN)分析。
新西兰兔：选用健康3～4月龄雄性新西兰兔，体重2.0～2.5k g，分为两组，每组4只眼睛。抓取新西兰兔至操作台上，待动物安静后，1组动物眼(空白对照)滴生理盐水各30μl；另一组动物眼各滴受试物30μl，于1小时后安乐处死动物，迅速采集双眼房水及玻璃体，保存于-80℃。
取新西兰兔房水样品50μl，加入50μl 75％乙腈-水，内标(咪达唑仑20ng/ml乙腈溶液)150μL，涡旋混合10min，4℃10000rpm离心5min，取上清液用于LC-MS/MS分析。取新西兰兔玻璃体样品匀浆后，取100μl，加入100μl 75％乙腈-水，内标(50ng/ml乙腈溶液)50μL，涡旋混合10min，4℃10000rpm离心5min，取上清液用于LC-MS/MS(正离子模式，MRM SCAN)分析。
实施例1：本发明眼用制剂的制备
按照表1称取0.24g CMC-Na(羧甲基纤维素钠，离子型高分子)加到含有40mL纯净水的玻璃三角瓶中，开启磁力搅拌2小时，得溶液1；分别称取1.0g聚山梨酯80(表面活性剂)和0.24g HPMC(羟丙基甲基纤维素，增黏剂)加到含有60mL纯净水的玻璃三角瓶中，开启磁力搅拌、水浴加热40℃左右1.5小时，得溶液2；称取40mg地塞米松和4.0mL PEG400(即表面活性剂用量的4.3倍(w/w))投入到溶液2，继续加热搅拌30分钟，加入溶液1，搅拌30分钟，得混合液；将混合液用分散机在转速9500转分散5分钟，停机待泡沫消失后，用布氏漏斗减压过滤，得分散液；将分散液转移至高压均质机，控制温度15±5℃，在压力400Bar左右均质3分钟，然后提高压力至>800Bar均质25分钟，减压至300Bar均质2分钟后排出，得到无色澄明溶液，进一步减压过滤除菌并除去机械杂质得到除杂后的无色澄明溶液。
pH和渗透压调节：加700mg NaH2PO4和400mg Na2HPO4调节pH至pH＝6.3；加氯化钠调节渗透压至282mOsmol/kg。
HPLC检测：检测仪器：安捷伦1100高效液相色谱仪；操纵软件：OpenLab CDSc.01.10(201)Chemstation Edition；
色谱条件：色谱柱为Waters XBridge C18 5μm,4.6x250mm；柱温35℃，流速1.0mL/min，检测波长240nm，流动相：0.1％磷酸水溶液(72.0％)-乙腈(28.0％)等度洗脱。样品用流动相5倍稀释后取10μL注入液相色谱仪。检测结果：96.2％。
粒度为20.6nm(85.6％)，PdI：0.266。室温避光保存1月，该样品外观和含量无变化。
滴眼后0.5小时动物玻璃体地塞米松浓度为：53.4(ng/g)，RSD：36.6％。对照组滴加2mg地塞米松/5mL生理盐水的混悬液(使用前涡旋振摇均匀)，每只眼睛20μL，对照组滴眼后0.5小时动物玻璃体中未检测到地塞米松(低于检测限，<1ng/g)。
实施例2：
制备方法参照实施例1，原料及用量如表1所示。得到除杂后的无色澄明溶液。
pH调节：用0.2N NaOH或/和0.1N HCl调节至pH6.5。
HPLC检测方法同实施例1，HPLC含量检测结果：95.1％,粒径12.9nm(92.1％)，PdI：0.509；稳定性较好，室温避光放置1个月外观和含量无明显变化；2个月后出现少量沉淀。
滴眼后1小时大鼠玻璃体API浓度为：13.9ng/g，RSD：17.2％。
实施例3：
制备方法参照实施例1，原料及用量如表1所示得到除杂后的微黄色澄明溶液后，加氯化钠调节渗透压至：273mOsmol/kg。
HPLC检测：Column:ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6x100mm 3.5μm；流动相A:0.1％甲酸水溶液,流动相B:ACN。Temp.：35℃,检测波长：296nm，Flowrate:0.8ml/min；梯度洗脱程序：0-2’:95％A-5％B,15’:55％A-45％B,18-21’:35％A-65％B,23’:95％A-5％B。检测结果：98.2％。
粒径13.2nm(81.2％)和57.7nm(13.1％)，PdI：0.431；稳定性好，在40℃避光放置20天，外观及含量无明显变化；
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：315ng/g，RSD：29.4％。
滴眼后0.5小时新西兰兔玻璃体API浓度为：142ng/g，RSD：34.3％。
实施例4：
制备方法参照实施例3，得到除杂后的微黄色澄明溶液，原料及用量如表1所示。
检测结果：16.6nm(96.2％)，PdI：0.229。
HPLC检测方法同实施例3，检测结果：97.5％；稳定性好，在40℃避光放置20天，外观及含量无明显变化。
实施例5：
制备方法参照实施例1，原料及用量如表1所示，得到除杂后的无色澄明溶液后，用0.1N NaOH调节pH6.5。
HPLC检测：Column:ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6x100mm 3.5μm；流动相A:40mM醋酸铵水溶液(pH5.0)，流动相B：MeOH，Temp.：35℃,检测波长：233nm，Flowrate:0.8ml/min；梯度洗脱程序：0-2’:100％A,20-22’:60％A-40％B,23’:100％A。检测结果：97.4％；
粒径11.8nm(71.6％)，PdI：0.519。室温避光放置1个月，外观及含量无明显变化。
实施例6：
制备方法参照实施例5，原料及用量如表1所示，得到除杂后的无色澄明溶液后，用1N柠檬酸钠溶液调节至pH6.5，加氯化钠调节渗透压至：297mOsmol/kg。
HPLC检测：Column:ZORBAX 300SB-CN,2.1x150mm，5μm；流动相:40mM KH2PO4(pH4.5)：甲醇(75:25)等度洗脱，Temp.：35℃,检测波长：233nm，Flowrate:0.8ml/min；检测结果：99.1％。
粒径21.6nm(94.4％)，PdI：0.206；室温避光放置2个月，外观及含量无明显变化。
滴眼后0.5小时动物玻璃体API浓度为：39.8±16.6ng/g。
实施例7：
制备方法参照实施例5，原料及用量如表1所示，得到除杂后的无色澄明溶液，pH检测结果：6.9，无需调节。
HPLC检测方法参照实施例5，检测结果：98.6％；粒径16.6nm(98％)，PdI：0.227，室温避光放置2个月，外观及含量无明显变化。
实施例8：
制备方法参照实施例5，原料及用量如表1所示，得到除杂后的无色澄明溶液，pH检测结果：6.5，无需调节。
HPLC检测方法参照实施例5，检测结果：97.8％。粒径17.1nm(55.5％)，513(36.3％)，PdI：0.795；室温避光放置1个月，外观及含量无明显变化。
实施例9：
制备方法：称取60mg CMC-Na加到含有15mL纯水的玻璃三角瓶中，开启磁力搅拌2小时，得溶液1；分别称取0.24g聚山梨酯80和0.12g HPMC(增黏剂)加入到含有15mL纯水的另一个玻璃三角瓶中，开启磁力搅拌、水浴加热40℃左右3小时，得溶液2；称取15mg硫辛酸和1mL丙三醇(相当于表面活性剂用量的5.25倍(w/w))投入到溶液2，继续加热搅拌30分钟后，加入溶液1，搅拌30分钟，得混合液；将混合液用分散机在转速11,000转分散3分钟，停机后待溶液泡沫消失后转入高压均质机均质处理(条件参照实施例1)得到无色澄明溶液，然后减压过滤除菌并除去机械杂质，得到除杂后的无色澄明溶液；
pH和渗透压调节方法：用0.1N柠檬酸钠溶液调节至pH6.3，加氯化钠调节渗透压至：294mOsmol/kg；
HPLC检测：Column:ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6x100mm 3.5μm；流动相A:0.1％磷酸(pH3.0),B:甲醇-乙腈(1:1)。Temp.：35℃,检测波长：215nm，Flowrate:0.8ml/min；梯度洗脱程序：0-5’:60％A-40％B,28-30’:40％A-60％B；检测结果：97.4％。粒度检测结果：17.8nm(98.6％)，PdI：0.222；3～8℃避光放置1个月外观和含量无变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：52.6±17.9ng/g。
对照组滴加2mg硫辛酸/5mL生理盐水的混悬液(使用前涡旋振摇均匀)，每只眼睛20μL，对照组滴眼后0.5小时动物玻璃体中未检测到硫辛酸(低于检测限，<1ng/g)。
实施例10：
制备方法及pH、渗透压调节方法参照实施例5，原料及用量如表1所示，得到除杂后的无色澄明溶液。
HPLC检测方法同实施例5，HPLC检测结果：98.4％
检测结果：粒径348nm(85％)，PdI：0.422。
室温避光放置1个月外观和含量无变化，1个月无明显变化，2个月后出现少量沉淀。
实施例11：
制备方法和pH、渗透压调节方法参照实施例9，原料及用量如表1所示，其中助溶剂丙二醇的用量为表面活性剂的6.2倍(w/w)。
HPLC检测波长233nm，其余检测方法同实施例9，检测结果：98.1％；粒径25.8nm(87.4％)，PdI：0.317，3～8℃避光放置1个月，外观和含量无变化。
实施例12：
制备方法和pH、渗透压调节方法参照实施例9，原料及用量如表1所示，其中助溶剂丙二醇的用量为表面活性剂的8.9倍(w/w)。
HPLC检测方法同实施例9，检测结果：95.2％；粒径31.5nm(82.9％)，PdI：0.347。3～8℃避光放置1个月，外观和含量无变化。
实施例13：
制备方法参照实施例1，原料及用量如表1所示，得到除杂后的微黄色澄明溶液。
pH、渗透压调节：用0.1N NaOH调节至pH6.3，加氯化钠调节渗透压至：297mOsmol/kg；
HPLC检测波长280nm，其余检测方法同实施例1，检测结果：97.3％；粒径16.7nm(98.1％)，PdI：0.225；室温避光放置1个月，外观和含量无变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：66.5±18.1ng/g。
对照组滴加2mg多西环素/5mL生理盐水的混悬液(使用前涡旋振摇均匀)，每只眼睛20μL，对照组滴眼后0.5小时动物玻璃体中未检测到多西环素(低于检测限，<1ng/g)。
实施例14：
制备方法和pH、渗透压调节方法参照实施例13，原料及用量如表1所示，得到除杂后的微黄色澄明溶液。
HPLC检测方法同实施例13，HPLC含检测结果：98.2％；粒径17.2nm(97.9％)，PdI：0.208；室温避光放置1个月，外观和含量无变化。
实施例15：
制备方法和pH、渗透压调节方法参照实施例13，助溶剂的加入是：称取1.5mL丙二醇(相当于表面活性剂的10倍(w/w))与表面活性剂一起加入介质水中，磁力搅拌，水浴加热溶解得到溶液2，得到除杂后的微黄色澄明溶液，原料及用量如表1所示。
HPLC检测方法同实施例13，检测结果：95.2％；粒径29.7nm(89.3％)，PdI：0.382；3～8℃避光放置1个月，有絮状物出现。
实施例16：
制备方法和pH、渗透压调节方法参照实施例9，原料及用量如表1所示。
HPLC检测方法参照实施例9，检测结果：0.486mg/mL(二甲双胍)、0.481mg/mL(硫辛酸)；粒径18.9nm+302.1nm，PdI：0.529；3～8℃避光放置1个月，外观和含量无变化。
滴眼后0.5小时动物玻璃体API浓度为：86.5ng/g硫辛酸，69.5ng/g二甲双胍。
实施例17：
制备方法和pH、渗透压调节方法参照实施例9，原料及用量如表1所示。
HPLC检测方法参照实施例9，检测结果：0.487mg/mL(多西环素)、0.478mg/mL(硫辛酸)；粒径20.2nm+251.6nm，PdI：0.701，3～8℃避光放置1个月，外观和含量无变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：57.3ng/g硫辛酸，68.4ng/g二甲双胍。
实施例18：
制备方法参照实施例1，原料及用量如表1所示，得除杂后的无色澄明溶液后，加氯化钠调节渗透压至：301mOsmol/kg；pH检测结果：6.6无需调节。
HPLC检测：Column:ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6x100mm 3.5μm；流动相A:0.1％磷酸,流动相B:乙腈，Temp.：35℃,检测波长：260nm，Flowrate:0.8ml/min；梯度洗脱程序：0-2’:95％A-5％B,20-25’:65％A-35％B,28’:95％A-5％B；检测结果：98.2％。粒径20.3nm(83.6％)，PdI：0.249；室温放置1个月，外观和含量无变化。
滴眼后1小时新西兰兔玻璃体API浓度为：138ng/g，房水中浓度为681ng/g。
实施例19：
制备方法和pH、渗透压调节方法参照实施例1，原料及用量如表1所示，得到除杂后的微黄色澄明溶液。
HPLC检测：Column:ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6x100mm 3.5μm；流动相A:0.1％磷酸,流动相B:甲醇(80：20)等度洗脱，Temp.：35℃,检测波长：280nm，Flowrate:0.8ml/min；检测结果：98.4％。粒径39.7nm(95.5％)，PdI：0.318；室温避光放置1个月，外观和含量无变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：78.3ng/g。
实施例20：
制备方法和pH、渗透压调节参照实施例19，原料及用量如表1所示。得到除杂后的微黄色澄明溶液。
HPLC检测方法同实施例19，检测结果：97.8％；粒径：46.2nm(95.5％)，PdI：0.343；在室温避光放置1个月外观和含量明显无变化。
实施例21：
制备方法参照实施例1，原料及用量如表1所示，得到除杂后的无色澄明溶液，加氯化钠调节渗透压至271mOsmol/kg；pH检测结果：6.6，无需调节。
HPLC检测：Column:ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6x100mm 3.5μm；流动相:0.1％H3PO4-乙睛(85:15)等度洗脱，Temp.：35℃,检测波长：217nm，Flowrate:0.7ml/min；检测结果：99.6％。粒径15.2nm(93.4％)，PdI：0.227；在室温避光放置1个月，外观和含量明显无变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：79.4(ng/g)。
实施例22：
制备方法参照实施例21，原料及用量如表1所示，得到除杂后的无色澄明溶液，加氯化钠调节渗透压至265mOsmol/kg；pH检测结果：6.5，无需调节。
HPLC检测方法同实施例21，检测结果：98.3％；粒径11.9(91.9％)nm，PdI：0.206；在室温避光放置1一个月外观和含量无明显变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：46.2(ng/g)。
实施例23：
制备方法参照实施例9；原料及用量如表1所示，其中助溶剂丙二醇的用量为表面活性剂的4.5倍(w/w)，pH为6.5，接近等渗，无需调节。
HPLC检测方法：Column:ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6x100mm 3.5μm；流动相A:0.1％磷酸,B:乙腈(80:20)，等度洗脱；Temp.：35℃,检测波长：306nm，Flowrate:0.8ml/min；检测结果：95.7％；
粒径27.5nm(77.9％)，PdI：0.328；3～8℃避光放置1个月，外观和含量无明显变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：20.3±9.3ng/g。
实施例24：
制备方法参照实施例23，原料及用量如表1所示，其中助溶剂丙二醇的用量为表面活性剂的4.5倍(w/w)，得到除杂后的无色澄明溶液。
pH为6.6，无需调节pH；渗透压调节：加氯化钠调节渗透压至：293mOsmol/kg；
HPLC检测方法参照实施例14，检测结果：96.1％；
粒径24.5nm(85.5％)，PdI：0.253；3～8℃避光放置1个月，外观和含量无明显变化。
实施例25：
制备方法参照实施例23，原料及用量如表1所示，其中助溶剂丙三醇的用量为表面活性剂的4.5倍(w/w)，得到除杂后的无色澄明溶液。
pH为6.4，无需调节pH；渗透压调节：加氯化钠调节渗透压至305mOsmol/kg；
HPLC检测方法参照实施例14，检测结果：94.7％；
粒径26.2nm(75.2％)，PdI：0.325；3～8℃避光放置1个月，外观和含量无明显变化。
实施例26：
制备方法参照实施例23，原料及用量如表1所示，其中助溶剂丙二醇的用量为表面活性剂的4.5倍(w/w)，得到除杂后的无色澄明溶液。
pH、渗透压调节：用0.2N NaOH调节至pH6.2，加氯化钠调节渗透压至：305mOsmol/kg；
HPLC检测方法参照实施例14，检测结果：95.3％；
粒径22.7nm(83.4％)，PdI：0.372；3～8℃避光放置1个月，外观和含量无明显变化。
实施例27：
制备方法参照实施例1，原料及用量如表1所示，得到除杂后的无色澄明溶液，用1M柠檬酸钠水溶液调节至pH6.2，加氯化钠调节渗透压至：307mOsmol/kg；
HPLC检测：Column:ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6x100mm 3.5μm；流动相A:水：流动相B:甲醇，Flowrate:0.8ml/min；梯度洗脱程序：0-10’:100％A-0％B,15’:55％A-45％B,18-21’:35％A-65％B；Temp.：30℃,检测波长：255nm；纯度检测结果：99.2％；粒径19.6nm(75.9％)，PdI：0.424；室温避光放置1个月，外观和含量无明显变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：580ng/g。
实施例28：
制备方法参照实施例9，原料及用量如表1所示，其中助溶剂丙二醇的用量为表面活性剂的5倍(w/w)，得到除杂后的无色澄明溶液。
pH、渗透压调节：用0.1N NaOH调节至pH6.3，加氯化钠调节渗透压至：290mOsmol/kg；
HPLC检测方法参照实施例9，检测结果：96.1％；
粒径23.7nm(84.2％)，PdI：0.323；室温避光放置1个月，外观和含量无明显变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：62.5ng/g。
实施例29：
制备方法参照实施例1，原料及用量如表1所示，其中助溶剂PEG400的用量为表面活性剂的5倍(w/w)，得到除杂后的无色澄明溶液。
pH和渗透压调节：用1M Na2HPO4溶液调节至pH6.2，加氯化钠调节渗透压至：295mOsmol/kg；
HPLC检测方法同实施例1，检测结果：97.3％；粒径22.4nm(91.4％)，PdI：0.293；室温避光放置1个月，外观和含量无明显变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：42.7ng/g。
实施例30：
制备方法参照实施例9，原料及用量如表1所示,其中助溶剂丙二醇的用量为表面活性剂的4.2倍(w/w)，得到除杂后的无色澄明溶液。
pH、渗透压调节：用0.1N NaOH调节至pH6.3，加氯化钠调节渗透压至：288mOsmol/kg；
HPLC检测方法参照实施例9，检测结果：95.6％；粒径24.1nm(81.5％)，PdI：0.357；室温避光放置1个月，外观和含量无明显变化。
实施例31：
制备方法参照实施例5，原料及用量如表1所示，其中助溶剂丙二醇的用量为表面活性剂的5.2倍(w/w)，得到除杂后的无色澄明溶液。
pH、渗透压调节：用0.2N NaOH调节至pH6.3，加氯化钠调节渗透压至：310mOsmol/kg；
HPLC检测方法参照实施例5，检测结果：97.2％；粒径27.5nm(79.6％)，PdI：0.364；室温避光放置1个月，有可见微粒。
实施例32：
制备方法参照实施例1，原料及用量如表1所示。得到除杂后的无色澄明溶液，用1M柠檬酸钠溶液调节至pH6.2，加氯化钠调节渗透压至308mOsmol/kg；
HPLC检测：Column:ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6x100mm 3.5μm；流动相A:0.1％磷酸水溶液,流动相B:甲醇。Temp.：35℃,检测波长：280nm，Flowrate:0.8ml/min；梯度洗脱程序：0-2’:85％A-15％B,15-20’:35％A-65％B,22-25’:15％A-85％B；检测结果：95.3％；粒径17.6nm(93.9％)，PdI：0.229；室温避光放置1个月，外观和含量无明显变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：185.3ng/g。
实施例33：
制备方法参照实施例9，原料及用量如表1所示，其中助溶剂蓖麻油的用量为表面活性剂的3倍。
HPLC检测波长280nm，其余条件同实施例9，检测结果：94.7％，粒径19.7nm(86.4％)，PdI：0.331；pH 6.8；室温避光放置1个月，外观和含量无明显变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：37.6(ng/g)。
实施例34
制备方法参照实施例1，原料及用量如表1所示，得到除杂后的无色澄明溶液。pH6.5无需调节；
HPLC检测波长245nm，其余检测条件同实施例1，检测结果：98.1％；粒径18.6nm(96.9％)，PdI：0.257；室温避光放置1个月，外观和含量无明显变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：43.8ng/g。
实施例35：
原料及用量如表1所示，制备方法参考实施例1。得到除杂后的无色澄明溶液。
检测结果：粒径18.6nm(96.5％)，PdI：0.218；
HPLC含量检测结果：97.2％；
室温避光放置1个月后，外观和含量无明显变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：5.1ng/g。
实施例36：
原料及用量如表1所示，制备方法参考实施例1。助溶剂PEG400加入的质量与表面活性剂相等(1:1(w/w))，得到除杂后的无色澄明溶液。
检测结果：粒径19.6nm(97.0％)，PdI：0.289；pH6.33，渗透压：275mOsmol/kg；HPLC含量检测结果：N/A.
室温避光放置1个月后，外观和含量无明显变化。
对比例1
制备方法和检测方法参照实施例1，原料及用量如表1所示。
检测结果：粒径10.0nm(98.8％)，PdI：0.363，稳定性：阴凉处放置1个月后有沉淀。
对比例2
制备方法和检测方法参照实施例1，原料及用量如表1所示。
检测结果：粒径196nm(61.6％)，PdI：0.828，稳定性：阴凉处放置1个月，有絮状沉淀产生。取其上清液检测粒径结果：530nm(53.9％)和225nm(46.1％)，PDI：1.00，
实施例37：
按照表2称取0.25g聚维酮(PVP)K30加到含有15mL纯净水的玻璃三角瓶中，磁力搅拌2小时，得溶液1；分别称取60mg HPMC和60mg聚维酮(PVP)K12加入到含有15mL纯净水的另一玻璃三角瓶中，开启磁力搅拌、水浴40℃加热2小时，得溶液2；称取36mg盐酸莫西沙星投到溶液2，继续加热搅拌30分钟，加入溶液1，搅拌30分钟，得混合液；用实施例3相同的分散、高压均质和膜过滤操作除去细菌和机械杂质，得到除杂后的微黄色澄明溶液，加氯化钠调节渗透压至：285mOsmol/kg；
检测结果：粒径14.0nm(54.2％)，222nm(31.9％)和10.1nm(13.1％)，PdI：0.564；HPLC含量检测结果：96.4％
稳定性：在40℃放置20天，外观和含量无明显变化。粒径增大，检测结果：242nm(77.9％)和18.1nm(12.4％)。
实施例38：
制备方法参照实施例1，原料及用量如表2所示，其中助溶剂PEG400的用量为低聚合度聚维酮的5倍(w/w)。得到除杂后的无色澄明溶液，pH6.5无需调节；
HPLC检测方法同实施例1，检测结果：98.1％；
粒径15.1nm(87.1％)和3.1nm(11.0％)，PdI：0.288；室温避光放置1个月，外观和含量无明显变化。
滴眼后0.5小时大鼠玻璃体API浓度为：5.1ng/g。
实施例39：
原料及用量如表2所示，制备方法和HPLC检测方法参考实施例21。pH检测结果：6.68，无需调节。
HPLC检测结果：99.3％；粒径11.5nm(62.9％)和77.8nm(23.6％)，PdI：0.362；室温避光放置1个月后外观、含量无变化。
实施例40：
原料及用量如表2所示，制备方法参考实施例1。得到除杂后的无色澄明溶液。
HPLC检测方法参照实施例1，检测结果：98.5％；粒径125.6nm(63.5％)、13.6nm(33.1％)，PdI：0.255；室温避光处放置1个月后，形成淡乳液，有白色沉淀。
对比例3
原料及用量如表2所示，制备方法参照实施例1，将中聚合度聚维酮替换为离子型高分子CMC-Na，得到淡白色乳液。
检测结果：粒径1299nm，PdI：0.175，放置过夜，有白色沉淀产生。
通过滴眼给药后大鼠玻璃体内API浓度的测定结果，说明本发明眼用药品可以携载治疗眼病的活性成分穿过眼球结构的屏障，通过结膜囊给药(滴眼给药)的方式即可把有效剂量的药物递送到玻璃体，避免玻璃体注射等侵入性给药方式，还大幅度减少总的药物量，减少药物在全身的吸收，避免产生毒副作用。
表1
表2
以下通过实验例证明本发明眼用制剂载体或辅料的有益效果。
实验例1、本发明载体的透射电镜观察结果
透射电子显微镜(JEM-2100Plus，日本JEOL公司)
吸取1滴实施例3-1制备的液体样品于铜质样品网，静置5分钟后吸去多余的液体样品后，自然放干，放置于电镜样品室作检测；样品染色：吸取1滴液体样品于铜质样品网，在除去样品网上多余的样品后，加1滴2％磷钼酸，静置5分钟后吸去多余的液体，自然放干，样品网放置于电镜作检测。结果见图1可以看出，本发明制备的载药载体在溶剂中形成了粒径为1～100nm的球形结构(纳米小体，图1A)，纳米小体又能进一步自组装成粒径为10～2000nm的球体(纳米小球，图1B)。
实验例2、粒径、含量及稳定性检测
1、实验方法
将1mL实施例和对比例制备得到的样品转移至样品池中，检测温度设置为40℃，将样品池放入NS-90钠米粒度分析仪，开始检测。每个样品重复检测3次，取3次检测结果的平均值为该样品检测结果为粒度(以光强分布，及占比％)和多分散指数(PdI，Polydispersity Index)表示。检测后避光保存，观察外观变化并再次检测粒径。
采用安捷伦1100高效液相色谱仪检测本发明制得的眼用制剂样品的HPLC含量。
2、实验结果
见表4、表5：
表4：
表5：
上述结果可以看出，本发明制备的载体或辅料可以成功包载多种类型的眼用药物制备成眼用制剂，并且制剂粒径小，HPLC检测药物含量高，长时间放置形态和含量均稳定；说明本发明制备的载体或辅料对眼用药物包封率高，稳定性好。而使用与本发明的辅料原料不同的对比例制得的制剂，稳定性很差，短时间就会出现沉淀或变质现象。
实验例3、本发明载体或辅料制备的眼用制剂的抗病毒实验
1、实验对象：实施例3-27制备的更昔洛韦滴眼给药系统
2、实验方法：
对实施例制备的更昔洛韦滴眼给药系统进行体外抗人巨细胞病毒测试。
选用人巨细胞病毒株HCMV-AD169感染人胚肺成纤维细胞(MRC-5)，以半数有效量(EC50)考察更昔洛韦受试品的抗病毒活性。试验分为4组，本实施例制备的滴眼给药系统受试组，更昔洛韦原药受试组，阴性对照组(MRC-5细胞)，阳性对照组(MRC-5细胞感染HCMV-AD169)。二个受试组样品用培养液稀释成6个稀释浓度：500、250、125、62.5、31.25、15.63μg/mL，每个稀释度设4个复孔，以细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)为指标：0为无细胞病变，1为≤25％细胞病变，2为25-50％细胞病变，3为50-75％细胞病变，4为75-100％细胞病变。用Reed-Muench方法计算半数有效量(EC50)：EC50＝10n；n＝[(有效率大于50％稀释度的对数)+(有效率大于50％的百分数-50％)/(有效率大于50％的百分数-有效率小于50％的百分数)×稀释系数的对数]。
试验过程如下，将MRC-5细胞调整大约为1.5×105/mL，加入96孔板，每孔加100μL培养液，置37℃、5％CO2细胞培养箱培养，待细胞贴壁成单层后弃上清液，除对照组外，各受试组按预试获得的半数病毒感染细胞量(TC50)的100倍浓度，每孔加入100μL培养2小时，弃上清液，加入100μL一系列受试样品继续培养，观察各孔的CPE，待阳性对照组病变的CPE达到90％以上时，记录各孔CPE，按Reed-Muench方法计算半数有效量(EC50)。
3、实验结果：如表6所示
表6试样品对HCMV-AD169病毒的抑制试验结果
结论：实施例27制备的更昔洛韦滴眼给药系统与更昔洛韦原药的体外抑制病毒作用没有差别。
以上结果说明将更表明本发明的眼用制剂的载体或辅料作为滴眼给药的药物载体，不会影响其携载(包裹)的治疗眼病的活性成分的药效。
实验例4、本发明载体或辅料制备的眼用制剂的体外抑菌实验
1、实验对象：实施例3-3制备的莫西沙星滴眼给药系统。
1.1实验方法：
对实施例制备的莫西沙星滴眼液给药系统进行体外抑菌试验(MIC)，取莫西沙星原料药作为对照品，实施例6制得的莫西沙星滴眼给药系统作为受试品，制作成药敏板，使药敏板上含7～8个倍比稀释浓度的莫西沙星原料药(对照品)和受试剂。接种环挑取经18h～24h孵育后的菌株(25株)，于无菌生理盐水中，调制成相当于0.5麦氏浊度的菌悬液；加入到液体药敏试验培养基，菌液和液体培养基的比例为1:200，充分混匀，每孔加入100μL稀释后的菌液；在35℃±2℃环境孵育16h～20h；通过浊度判断各孔内细菌的生长情况，由低浓度向高浓度观察，能抑制细菌生长的最低药物浓度即为该药的MIC。
1.2实验结果：如表7所示
表7莫西沙星滴眼液给药系统药敏试剂(微量肉汤稀释法)试验结果
结论：实施例3制备的制得的莫西沙星滴眼给药系统与对照相比其抑菌作用无显著性差异。
以上结果说明，本发明的眼用制剂的载体或辅料作为滴眼给药载体，不会影响其携载(包裹)的治疗眼病的活性成分的性质与效果。
综上，本发明提供了一种眼用制剂的载体或辅料及其应用。本发明眼用制剂的载体或辅料作为滴眼给药载体不会影响其携载(包裹)的治疗眼病的活性成分的性质与效果，能够包裹药物穿过眼前段，将药物高效输送到眼后段发挥治疗作用，实现了通过滴眼给药治疗眼底疾病的目标，解决了眼用制剂给药领域一直期限亟待解决但未解决的技术问题，具有极为优良的临床使用价值和非常积极的社会意义。
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