一种航天用抗疲劳、抗辐射胶囊及其制备方法
阅读说明：本技术 一种航天用抗疲劳、抗辐射胶囊及其制备方法 (Anti-fatigue and anti-radiation capsule for spaceflight and preparation method thereof ) 是由 简一平 于 2021-11-15 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种航天用抗疲劳、抗辐射胶囊及其制备方法。所述航天用抗疲劳、抗辐射胶囊,其特征在于,包括以下质量份的原料：200-300份西洋参,800-1000份茯砖茶,200-300份玛咖粉,30-50份低聚木糖,30-50份玉米淀粉,1-5份海参肽。本发明提供的胶囊全部采用天然提取物制备得到,能够同时改善宇航员抗疲劳和抗辐射状况,并且没有副作用。(The invention relates to an anti-fatigue and anti-radiation capsule for spaceflight and a preparation method thereof. The anti-fatigue and anti-radiation capsule for spaceflight is characterized by comprising the following raw materials in parts by mass: 200-300 parts of American ginseng, 800-1000 parts of Fuzhuan tea, 200-300 parts of maca powder, 30-50 parts of xylo-oligosaccharide, 30-50 parts of corn starch and 1-5 parts of sea cucumber peptide. The capsule provided by the invention is prepared from natural extracts, can improve the anti-fatigue and anti-radiation conditions of astronauts at the same time, and has no side effect.)
技术领域
本发明属于航天食品技术领域，具体涉及一种航天用抗疲劳、抗辐射胶囊及其制备方法。
背景技术
身处失重、辐射、噪音、狭小密闭空间等特因航天环境下有可能对机体带来诸如太空适应综合征（SMS）、食欲减退、血液头向重新分布、免疫力低下、肌肉萎缩、骨密度减少、脾胃功能下降、认知功能下降等不利影响。在载人飞行任务过程中，航天员承担很多科研任务及设备维护等工作，宇航员可能长期处于高负荷的工作强度状态，导致航天员出现体力疲劳状态，影响工作效率。而现有航天食品涉及到七大营养素，包括蛋白质、脂肪、糖类、维生素、电解质、微量元素和水，它们对保证人体的生长发育，维持体温，补充物质消耗，增强机体抵抗力等有着极为重要的作用，这些食品能保持人体正常工作需求。但是在太空飞行过程中，由于特殊环境及工作效率的需求，需要一款产品方便食用，能在短时间内改变航天员的精神状态，保障飞行任务高效完成。有现有技术中为了改善宇航员精神状态，抵抗疲劳，有加入咖啡因等化学活性成分的食品组合物，但是不适合长期服用。
此外，由于宇航员长期处于太空辐射环境，同时每次宇航任务时间都可能很久，虽然目前宇航飞船和宇航服严格限制了宇宙背景辐射，但还不能够完全隔绝辐射。在短期内的辐射背景下，宇航员的细胞可以自我修复，但是宇航员每次出航任务时间都很长，甚至可能长达数年才能返航，长期处于太空辐射环境中仍可能对宇航员身体造成不利影响，细胞无法即使修复，造成永久性的损伤，比如对皮肤，骨髓的气管的损伤，或者引起细胞变异。
现有技术中还缺乏一种符合航天食品标准的，适合宇航员长期服用的，能够同时改善抗疲劳程度，抗辐射，并且没有副作用的航天食品。
发明内容
为克服现有技术中还缺乏一种有效的，能够同时改善宇航员抗疲劳和抗辐射状况，并且没有副作用的航天用的抗疲劳食品组合物。本发明提供了一种航天用抗疲劳、抗辐射胶囊，包括以下质量份的原料：200-300份西洋参，800-1000份茯砖茶，200-300份玛咖粉，30-50份低聚木糖，30-50份玉米淀粉，1-5份份海参肽。
优选地，所述的航天用抗疲劳、抗辐射胶囊，包括以下质量份的原料：220-280份西洋参，890-950份茯砖茶，220-260份玛咖粉，40-45份低聚木糖，40-45份玉米淀粉，1.5-3份海参肽
茯砖茶，又称为茯茶，为我国六大茶类之一是以黑毛茶作为原料，经两步发酵加工工序制成，属于全发酵茶。研究表明，茯砖茶中含有丰富的生物活性物质，如儿茶素、氨基酸、咖啡碱、可溶性糖、可溶性蛋白等，有助于缓解体力疲劳，如咖啡碱、茶叶碱和可可碱等可兴奋中枢神经系统，增强肌肉收缩力，并能消除疲劳感。冠突散囊菌（E.Cristatum）在黑茶中称作“金花菌”，属于散囊菌目、发菌科、散囊菌属小冠曲霉（Aspergiluscristatellus）的有性型，由子囊果和菌丝组成，子囊果直径为150~200μm，通常有黄色球形或近球形闭囊壳，子囊果破裂后可释放出直径为5μm的球形、近球形或双凸镜形子囊孢子。冠突散囊菌是黑茶加工过程中的优势菌。冠突散囊菌体内含有丰富的吲哚类生物碱类代谢产物。吲哚生物碱类化合物具有抗菌、抗过敏、抗辐射、抗紫外和抗肿瘤等重要的生物活性。长期饮用黑茶，能够促进人体新陈代谢、提高免疫力、增强体质、延缓衰老，具有明显的药理保健和病理预防作用。
优选地，本发明航天用抗疲劳、抗辐射胶囊中原料使用的茯砖茶提取物是通过包括以下步骤的制备方法得到：按配方量称取茯砖茶，加5-10倍量水、乙酸乙酯、乙醇混合溶剂，第一次温浸提取，滤出温浸液，茶渣再加5-10倍量水第二次温浸提取，趁热过滤，滤液与第一次浸滤液合并，减压浓缩（-0.06-0.08Mpa，60-70℃）至相对密度1.14-1.20（55℃）稠浸膏，备用。
更优选地，水、乙酸乙酯、乙醇的体积比为10:3-5:1-1.5。
更优选地，所述温浸提是煎煮0.5-1h后再在50-60℃温浸1-2h；第二次温浸提取是用60-70℃水温浸2-4h。
为了避免对多糖、多酚等活性物质成分的破坏，现有技术有采用低共熔溶剂或者超高压萃取的方法，能够在不破坏活性成分的情况下高收率地获得提取物。但是一方面极大增加了生产的成本，得不偿失，此外，低共熔溶剂难以完全除去，如果残留会对产品品质产生影响，该方法并不适用要求更加严格的航天食品，而超高压萃取需要特定的高压装置，价格昂贵。因此，上述两种方法并不适用于航天食品领域。发明人预料不到地发现，以上述水、乙酸乙酯、乙醇的混合溶剂作为提取溶剂，可以在不破坏茯砖茶活性成分的情况下，高收率地获得提取物，其对于有机体的有益效果更加明显，能够显著改善人体免疫力，抗疲劳能力。所用溶剂乙酸乙酯和乙醇无毒，在后续处理过程中也能充分除去。
玛咖是原产南美洲的一种十字花科植物，原产高海拔山区，分布于南美安第斯山脉，人工种植于秘鲁中部和南部，中国的云南和新疆等地区，有较大面积的适种土地。具有抗疲劳、改善性功能、改善睡眠、改善血液循环、加强大脑营养、缓解焦虑等功效。玛咖含较高量的铁，蛋白质、氨基酸、锌等营养元素，能有效增强免疫系统，提升机体抗病力，对抗疲劳，改善贫血症状。玛咖中富含的糖质是大脑和神经系统的唯一营养成分，多食用玛卡有益脑的作用。玛咖能使头脑清醒灵活，提高工作效率，学生学习进步，中老年记忆能力保持，使人头脑清 醒，思路清晰。玛咖能有效改善因压力造成的忧虑症及神经衰弱等。
西洋参在提高免疫力，缓解疲劳，改善孱弱体质，补充体力有非常明显的效果， 不只适用于老人、病后康复期患者，以及对抵抗力低下，亚健康人群都具有很显著的治疗与缓解功效。可调节人体神经系统，适合脑力劳动者缓解大脑疲劳。其功效成分人参皂苷具有促进血氧含量，强化心率同时促进血液流动，使大脑处于血量血氧充足的状态，促进大脑细胞的潜能 最大限度发挥作用，提高思维深度与活跃度等功能。
西洋参提取和浓缩为本领域所熟知，在本发明一个
具体实施方式
中，西洋森提取物是按配方量称取西洋参，加5-10质量倍的40-60wt%食用酒精加热回流提取2-5h，滤出酒精溶液，减压回收至无食用酒精味，得酒精提取液备用；药渣再加5-10倍量水煎煮1-3h，滤出水煎液，与上述酒精提取液合并，减压浓缩（-0.06-0.08Mpa，60-70℃）至相对密度1.14-1.20（55℃）的西洋参稠浸膏，备用。
肠道益生菌群可被视为身体中的 有益“微生物器官”，通过菌群的自身成分、代谢物和衍生物，以及致病共生菌移位等机制，参与调控宿主的代谢、免疫、内分泌、神经等多方面的局部和全身性生理过程。低聚木糖是聚合糖类中增殖双歧杆菌功能最强的品种之一，它的功效性是其他聚合糖类的近20倍，人体胃肠道内没有水解低聚木糖的酶，所以其可直接进入大肠内优先为双歧杆菌所利用，促进双歧杆菌增殖同时产生多种有机酸。降低肠道pH值，抑制有害菌生长，使益生菌在肠道大量增殖，达到增强机体免疫力等功能。
海参肽是由鲜活海参经蛋白酶水解并精制后得到的以小分子肽、以3～10个氨基酸组成的分子量低于1000Da小分子低肽为主，具有抗氧化性、降血糖、促进胶原蛋白分泌、抗肿瘤、抑制炎症、抗疲劳、抗菌、保护血管内皮细胞及促进伤口愈合等多种生物活性。
本发明通过上述有效成分按照一定比例复配组合后，得到的胶囊能够短时间内改善宇航员精神状态，在太空中长期服用能够提高抗辐射能力，并且没有副作用。多种物质在一起明显取得了协同复配的作用，改善了人体抗疲劳能力和抗辐射能力。并且本发明抗疲劳、抗辐射胶囊中使用的都是天然产物，对人体无副作用，可以长期服用。
进一步地，本发明提供的航天用抗疲劳、抗辐射胶囊通过包括以下步骤的制备方法得到：
（1）玛咖粉、低聚木糖、玉米淀粉过筛；
（2）西洋参、茯砖茶进行提取和浓缩得浸膏；加入玛咖粉、低聚木糖、玉米淀粉和海参肽进行混合、干燥与粉碎得膏细粉；
（3制粒与整粒，胶囊灌装，包装即得；
进一步地，步骤(1)中玛咖粉、低聚木糖、玉米淀粉过60-100目筛
进一步地，步骤(2)中混合、干燥与粉碎是将西洋参和茯砖茶两种稠浸膏混合后，加入低聚木糖和玉米淀粉搅拌15-30min，再加入玛咖粉和海参肽搅拌15-30min，至均匀后真空干燥，干燥后冷却，粉碎过80-100目筛，备用。
进一步地，步骤(3)的制粒与整粒的工艺为本领域所熟知，具体是步骤（2）制得的干膏细粉以95%食用酒精制软材，18目筛制粒；干燥后，20目筛整粒；所述胶囊灌装的工艺为本领域所熟知，符合《中国药典》标准规定即可。在本发明一个具体实施方式中，以0#空心胶囊封装0.2-1g/粒，优选0.5-0.7g/粒，食品包装用塑料瓶包装，经检验合格后进行外包装，成品入库。
具体实施方式
以下对本发明在具体应用中的最佳实施例进行详细说明，需要说明的是，这些实施例并非对本发明的权利要求保护范围进行约束。
本发明所用原料均可来自于商业采购。其中茯砖茶来自于湖南安化航天原生茶基地，海参肽采购自德州蓝李生物技术有限公司，150目，HPLC纯度大于99.5%。
制备例1
按配方量称取茯砖茶890g，加8倍质量的水、乙酸乙酯、乙醇按照体积比10：4：1.2的混合溶剂煎煮0.5h后再温浸（50℃）1.5h，滤出温浸液，茶渣再加6倍质量的70℃温水℃温浸1.5h，趁热过滤，滤液与上述浸液合并，减压浓缩（-0.07Mpa，64℃）至相对密度1.16（55℃）得到茯砖茶稠浸膏，备用。
制备例2
其他条件和操作和制备例1相同，区别在于水、乙酸乙酯、乙醇的体积比为10：3：1.5。
制备例3
其他条件和操作和制备例1相同，区别在于水、乙酸乙酯、乙醇的体积比为10：5：1。
制备例4
其他条件和操作和制备例1相同，区别在于水和乙酸乙酯的体积比为10：4，不加入乙醇。
制备例5
其他条件和操作和制备例1相同，区别在于水和乙醇的体积比为10：1.2，即不加入乙酸乙酯。
实施例1
玛咖粉、低聚木糖、玉米淀粉过100目筛备用；
按配方量称取西洋参220g，加8倍量60%食用酒精加热回流提取2h，滤出酒精溶液，减压回收至无食用酒精味，备用；药渣再加6倍量水煎煮1.5h，滤出水煎液，与上述酒精提取液合并，减压浓缩（-0.07Mpa，64℃）至相对密度1.16（55℃）得西洋参稠浸膏，备用；
将西洋参稠浸膏和制备例1得到的茯砖茶稠浸膏混合，加入45g低聚木糖和45g玉米淀粉搅拌15min，再加入220g玛咖粉和1.5g海参肽搅拌15min，至均匀后真空干燥，干燥后冷却，粉碎过80目筛，备用。制得的干膏细粉以95%食用酒精制软材，18目筛制粒；干燥后，20目筛整粒。用0#空心胶囊，符合《中国药典》标准规定：规格为0.5g/粒；以食品包装用塑料瓶，90粒/瓶包装；经检验合格后进行外包装，成品入库。
实施例2
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于茯砖茶稠浸膏替换为制备例2制得的。
实施例3
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于茯砖茶稠浸膏替换为制备例3制得的。
实施例4
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于茯砖茶稠浸膏替换为制备例4制得的。
实施例5
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于茯砖茶稠浸膏替换为制备例5制得的。
实施例6
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于原料的用量改为玛咖粉260g、低聚木糖40g、玉米淀粉40，西洋参280g，海参肽3g，茯砖茶稠浸膏用量不变。
实施例7
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于原料的用量改为玛咖粉300g、低聚木糖40g、玉米淀粉50g，西洋参230g，海参肽2g，茯砖茶稠浸膏用量不变。
实施例8
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于原料的用量改为玛咖粉200g、低聚木糖50g、玉米淀粉40g，西洋参200g，海参肽2.5g，茯砖茶稠浸膏用量不变。
实施例9
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于原料的用量改为玛咖粉300g、低聚木糖40g、玉米淀粉40g，西洋参200g，海参肽1.8g，茯砖茶稠浸膏用量不变。
实施例10
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于原料的用量改为玛咖粉225g、低聚木糖50g、玉米淀粉45g，西洋参300g，海参肽2.2g，茯砖茶稠浸膏用量不变。
对比例1
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于原料中不加入玛咖粉，在制备西洋参稠浸膏时西洋参的用量改为440g。
对比例2
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于原料中不加入西洋参稠浸膏，玛咖粉的加入量改为350g。
对比例3
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于原料中不加入茯砖茶稠浸膏，玛咖粉的用量改为550g，制备西洋参稠浸膏时西洋参的用量改为665g。
对比例4
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于原料中不加入海参肽。
应用例1
一、安全性毒理学评价试验
1. 实验动物及饲料：试验分别选用北京维通利华实验动物技术有限公司[许可证号：SCXK（京）2012-0001]繁殖的SPF级昆明种小鼠和SD大鼠。急性毒性试验和遗传毒性试验各实验组均给予维持饲料，维持饲料由北京科澳协力饲料有限公司[许可证号：SCXK（京）2014-0010]生产。30天喂养试验各剂量组及维持饲料对照组饲料均由北京华阜康生物科技股份有限公司[许可证号：SCXK（京）2012-0008]生产。
2. 试验样品：以实施例1制得的胶囊，人体推荐剂量：每日4.5g/60kgBW，取内容物，供试验用。
3. 小鼠急性毒性试验（最大耐受剂量法）：选用18-22g昆明种小鼠20只，雌雄各半，进行试验。试验期间，动物自由摄食和饮水，采取灌胃法给予受试物。样品的最大使用浓度为0.4g/mL，称取样品16.00g，加无菌水至40.0mL。灌胃容量为20mL/kgBW，即以8.0g/kgBW的剂量，灌胃2次，间隔6h，灌胃剂量相当于16.00g/kgBW，连续观察14d，观察并记录动物的状态、体重变化、中毒体征以及死亡情况等，确定最大耐受剂量（MTD）。
4. 小鼠遗传毒性试验(Ames试验)：选用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株，进行加与不加大鼠肝S9的标准平皿掺入法试验。设8、40、200、1000、5000μg/皿5个剂量组。受试物配制及灭菌方法：称取1.00g样品加无菌水配制成20.0mL溶液，0.103MPa，灭菌20min，灭菌后对受试物进行无菌检查，37℃培养24h，无菌生长。此为最高工作浓度50mg/mL（即5000μg/皿），其他浓度以此为基础，依次用无菌水，5倍等比稀释，同时设阳性对照、无菌水对照、无菌DMSO对照、未处理对照。不加S9的阳性对照为敌克松（50.0μg/皿，适用菌种TA97、TA98、TA102）、叠氮钠（1.5μg/皿，适用于菌株TA100），加S9的阳性对照为2-氨基芴（10.0μg/皿，适用菌种TA97、TA98、TA102），1,8-二羟蒽醌（50.0μg/皿，适用菌株TA102）。在顶层琼脂中加入0.1mL试验菌株增菌液，0.1mL受试物溶液和0.5mL S9混合液，混匀后倒入底层培养基平皿上，每个剂量3个平皿。在37±1℃培养48h，计数每皿回变菌落数。受试物组回变菌落数超过自发回变的2倍以上，并具有剂量反应关系时即判定为阳性。试验在相同条件下重复做两次。
5. 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：选用体重25-30g小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以环磷酰胺（40mg/kgBW）为阳性对照，无菌水为溶剂对照，低、中、高三个剂量组分别为2.00 g/kgBW、4.00 g/kgBW、8.00 g/kgBW，相当于人体推荐剂量的27、53、107倍。8.00 g/kgBW组：取样品16.00g加无菌水至40.0mL；4.00 g/kgBW组：取样品8.00g加无菌水至40.0mL；2.00 g/kgBW组：取样品4.00g加无菌水至40.0mL。受试物、阳性对照、溶剂对照均采用经口灌胃给予，灌胃容量均为20.0 g/kgBW。采用30h给药法，即两次经口灌胃给予受试物，两次给药间隔24h。末次灌胃6h后，颈椎脱臼处死动物。取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。双盲法阅片，在光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染色红细胞（PCE），计算微核细胞率。同时，每只动物计数200个嗜多染红细胞和成熟红细胞（NCE）数，计算PCE/NCE比值。试验组与对照组相比，试验结果微核率有明显的剂量反应关系并有统计学意义时，即可确认为阳性结果。若统计学上差异有显著性，但无剂量反应关系时，则须进行重复试验。结果能重复者可确定为阳性。
6. 小鼠精子畸形试验：用体重25-35g的性成熟雄性小鼠25只，随机分为5组，以环磷酰胺（40mg/kgBW）为阳性对照，无菌水为溶剂对照。低、中、高三个剂量组分别为2.00 g/kgBW、4.00 g/kgBW、8.00 g/kgBW，相当于人体推荐剂量的27、53、107倍，受试物、阳性对照、溶剂对照均采用经口灌胃给予，灌胃容量为20.0 g/kgBW。每日灌胃一次，连续5天，末次灌胃后30天处死动物，取睾丸制片，伊红染色，高倍显微镜下检查小鼠的精子形态，每组计数5只动物，每只动物计数1000个的精子，计算精子畸变发生率，并进行统计分析。
7. 大鼠30天喂养试验：离乳大鼠80只，雌雄各半。随机分为4组，维持饲料对照组和低、中、高三个剂量组。维持饲料对照组给予维持饲料（蛋白质含量为21.0%）。低、中、高三个剂量组分别为1.88 g/kgBW、3.75 g/kgBW、7.50 g/kgBW，相当于推荐人体日摄入量25、50、100倍。分别给予掺入1.88% 、3.75%、7.50%样品（蛋白质含量为17.2%）和不同比例酪蛋白（蛋白质含量为83%）的饲料。各剂量组蛋白质含量均为21.0%。高剂量：样品1.42kg+维持饲料粉17.49kg+酪蛋白0.09kg；中剂量组：样品0.71kg+维持饲料粉18.25kg+酪蛋白0.04kg；低剂量：样品0.36kg+维持饲料粉18.62kg+酪蛋白0.02kg。单笼饲养，每天观察并记录动物的一般表现行为、中毒表现和死亡情况。每周称两次体重、撒食量和剩余量，计算每周摄食量和食物利用率。在第30天禁食16h后称空腹体重，测定血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及分类等血液指标。血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、葡萄糖、白蛋白、总蛋白、总胆固醇、甘油三酯等生化指标。进行大体解剖，称量肝、肾、脾、睾丸的脏器绝对重量和计算脏/体比值。结果进行统计学分析。当各剂量组动物大体检查未发现明显病变以及生化指标未发生显著性改变时，取高剂量组和维持饲料对照组的肝、肾、胃、肠、脾、睾丸、卵巢进行病理组织学检查。若发现病变后对较低剂量组进行相应检查。由每例动物中切取肝组织、肾组织、脾组织、胃组织、十二指肠组织、卵巢或睾丸组织各一块，经甲醛固定，酒精、二甲苯脱水透明，石蜡包埋，制成5μm厚度切片，苏木精伊红染色，光学显微镜观察。
8. 数据处理：采用SPSS11.0软件进行数据处理。对计量资料采用单因素方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。对方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足方差齐性要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐性，改用秩和检验进行统计。对计数资料采用x 2检验。
二、实验结果
1. 小鼠急性毒性（最大耐受量法）试验
表1 小鼠急性毒性试验结果
由表1结果可见，给两种性别的小鼠灌胃2两次受试物，灌胃剂量为16.00 g/kgBW，在观察的14d期间，动物状态正常，无中毒体征和死亡等异常情况。第15d将受试动物处死进行大体解剖检查，主要器官未见明显异常。受试物对雌、雄小鼠的经口最大耐受剂量（MTD）均大于15g/kgBW。根据急性毒性分级标准，按本发明实施例1制得胶囊内容物属无毒级。
2. 遗传毒性试验
2.1 Ames试验
表2 第一次Ames试验结果 单位：个/皿
注：以上结果为三个平皿的均值±标准差。
表3 第二次Ames试验结果 单位：个/皿
注：以上结果为三个平皿的均值±标准差。
由表2、表3结果可见，受试物各剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照组、未处理对照组回变菌落数2倍以上，亦无剂量-反应关系。
结论：按本发明实施例1制得胶囊内容物在加与不加肝微粒体酶活化系统情况下，Ames试验结果均为阴性。
2.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
表4 雌性小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果
注#：阳性对照组与溶剂对照组比较，有极显著性差异（P＜0.01）。
表5 雄性小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果
注#：阳性对照组与溶剂对照组比较，有极显著性差异（P＜0.01）。
由表4、表5结果可见，各剂量受试物对两种性别小鼠的骨髓细胞增殖无明显抑制作用，低、中、高三个剂量组PCE/NCE比值说明受试物无细胞毒性。两种性别小鼠各剂量组骨髓嗜多染红细胞微核率与溶剂对照组比较均无显著性差异（P＞0.05）。阳性对照组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率显著高于溶剂对照组（P＜0.01），说明受试动物敏感，试验可靠。
结论：在受试剂量范围内，按本发明实施例1制得胶囊小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验阴性。
2.3 小鼠精子畸形试验
表6 小鼠精子畸形试验结果
注#：阳性对照组与溶剂对照组比较，有极显著性差异（P＜0.01）。
由表6可见，受试物各剂量组小鼠精子畸形发生率与溶剂对照组比较无显著性差异（P＞0.05）.阳性对照组小鼠精子畸形发生率显著高于溶剂对照组（P＜0.01），说明受试动物敏感，试验可靠。
结论：在受试剂量范围内，按本发明实施例1制得胶囊小鼠精子畸形试验阴性。
2.4 大鼠30天喂养试验
2.4.1 一般检查、脏器称重、血液生化学检查、血液学检查结果
表7 雌性大鼠体重、体重增重、摄食量、食物利用率检查结果
表8 雄性大鼠体重、体重增重、摄食量、食物利用率检查结果
由表7、表8可见，给予大鼠不同剂量的受试物30天后，大鼠体重、体重增重、摄食量、食物利用率在实验动物各剂量组与维持饲料对照组间比较，均无显著性差异（P＞0.05），即按本发明实施例1制得胶囊对大鼠的体重增重、摄食量、食物利用率等无明显影响。
表9 大鼠禁食体重
表10 大鼠脏器系数检查结果-1
表11 大鼠脏器系数检查结果-2
由表9、表10、表11可见，给予大鼠不同剂量的受试物30天后，大鼠脏器系数在实验动物各剂量组与维持饲料对照组间比较，均无显著性差异（P＞0.05），即按本发明实施例1制得胶囊对大鼠脏器无明显影响。
表12 大鼠生化学检查结果-1
表13 大鼠生化学检查结果-2
表14 大鼠生化学检查结果-3
表15 大鼠血液学检查结果-1
表16 大鼠血液学检查结果-2
由表12至表16可见，给予大鼠不同剂量的受试物30天后，大鼠各项生化及血液指标在实验动物各剂量组与维持饲料对照组间比较，均无显著性差异（P＞0.05），即按本发明实施例1制得胶囊对大鼠的血液指标，肝肾功能，脂、糖、蛋白质代谢无明显影响。
3. 病理组织学检查结果
3.1 大体检查描述
实验动物80例（维持饲料对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组雄、雌性各10例），大体检查肝脏、脾脏、胃、十二指肠、两侧肾脏、睾丸或卵巢等，未见其外形、体积、色泽及结构有明显病理变化。
3.2 组织病理检查描述
实验动物40例（维持饲料对照组和高剂量组，每组雄、雌性各10例）。
肝脏：维持饲料对照组雌性大鼠肝细胞见1例点状坏死，雄性大鼠肝细胞见1例点状坏死。高剂量组雌雄大鼠肝细胞见1例点状坏死、1例灶状坏死，雄性大鼠肝细胞见1例点状坏死。
肾脏：维持饲料对照组和高剂量组雌、雄性大鼠肾脏均为正常。
胃肠：维持饲料对照组和高剂量组雌、雄性大鼠胃肠均为正常。
脾脏：维持饲料对照组和高剂量组雌、雄性大鼠脾脏均为正常。
睾丸/卵巢：维持饲料对照组和高剂量组睾丸/卵巢均为正常。
三、小结
1. 经口毒性试验
小鼠最大耐受量试验结果表明，按本发明实施例1制得胶囊对两种性别的小鼠经口最大耐受剂量均大于15g/kgBW，按急性毒性分级属无毒级。
2. 遗传毒性试验
经Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验，结果均为阴性，表明按本发明实施例1制得胶囊在受试剂量范围无致突变活性。
3. 大鼠30天喂养试验
大鼠体重、增重、摄食量、食物利用率、脏器检查、脏器重量、脏/体比值、血液学和血液生化学检查结果表明，各剂量组与维持饲料对照组比较，各检验项目均无显著性差异（P＞0.05）。病理组织学检查结果表明，维持饲料对照组和高剂量组雌、雄性大鼠肝、肾、胃、肠、脾、卵巢及睾丸均未发现明显损伤性病理变化。30天喂养试验未发现实施例1制得胶囊有明显的毒性作用。
应用例2 缓解体力疲劳功能评价试验
一、实验方法和条件
1. 实验动物及饲料：选用北京华阜康生物科技股份有限公司[许可证号：SCXK（京）2014-0004]繁殖的16g-19g昆明种清洁级雄性小鼠，共分为四批进行实验，每批随机分为4组，实验每组12只。实验一批进行负重游泳试验，实验二批进行血清尿素的测定，实验三批进行肝糖原的测定，实验四批进行血乳酸的测定。实验动物饲养于北京联合大学应用文理学院保健食品功能检测中心SPF级动物室[许可证号：SYXK（京）2012-0031]。维持饲料由北京科澳协力饲料有限公司[许可证号：SCXK（京）2014-0010]生产。
2. 剂量：以实施例1制得的胶囊，试验分为低、中、高剂量组，即每日0.38g/kgBW、0.75g/kgBW、2.25g/kgBW，其中，中剂量组0.75g/kgBW即为成人（按60kg体重计）推荐剂量：每日4.5g，相当于0.075g/kgBW。高剂量受试物：称取样品13.50g，加无菌水至60.0mL；中剂量受试物：称取样品4.5g，加无菌水至60.0mL；低剂量受试物：称取样品2.28g，加无菌水至60.0mL。每日一次经口给予，连续灌胃31天测各项指标。小鼠灌胃体积为10mL/kgBW。同时设一空白对照组（0g/kgBW）。每日灌胃体积与各受试物组相同。各剂量组均给予维持饲料。
3. 实验方法
3.1 负重游泳实验
末次给小鼠受试物30min后，将尾根部负荷5%体重铅丝的小鼠置于游泳箱中游泳。水深30cm，水温25℃±1.0℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小鼠负重游泳时间。
游泳时间为计量资料，若受试物组游泳时间明显长于空白对照组游泳时间，且差异有显著性（P＜0.05），可判定该受试物有延长小鼠负重游泳时间的作用。
3.2血清尿素测定
末次给小鼠受试物30min后，在温度为30℃的水中游泳90min，休息60min后立即拔眼球采血0.5mL。置4℃冰箱约3h，血凝固后3000r/min离心15min，取血清，测定血清尿素含量。
所得数据为计量资料，若受试物组血清尿素含量明显低于空白对照组，且差异有显著性（P＜0.05），可判定该受试物有减少疲劳小鼠尿素含量的作用。
3.3 肝糖原测定：蒽酮法
末次给小鼠受试物30min后，立即处死，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏100mg，加入4.0mL TCA，匀浆1min，将匀浆液倒入离心管，以3000r/min离心15min，取上清液0.5mL，加95%乙醇2mL，充分混匀至两种液体间不留有界面，用干净塞子塞上，室温下竖立放置过夜。次日以3000r/min离心15min。小心倒掉上清液并使试管倒立放置10min。用2.00mL蒸馏水溶解糖原待测。取0.25mL待测液和0.25mL蒸馏水放入试管中，混匀。试剂空白管：吸0.5mL蒸馏水到干净试管。标准管：吸0.125mL葡萄糖标准液（50mg/dL）和0.375mL蒸馏水放入试管中，混匀。
将2.5mL蒽酮试剂用力加入各管，煮沸15min，然后移到冰水浴，冷却后在620nm波长下，用试剂空白管调零后测定吸光度。按下式计算肝糖原含量：
DU：样品管吸光度，DS：标准管吸光度，G：肝组织重量（g），V：提取液体积（mL），16：为稀释倍数，0.0625：为0.125mL葡萄糖标准液中的葡萄糖含量，0.9：将葡萄糖换算成糖原的系数。
所得数据为计量资料，若受试物组肝糖原含量明显高于空白对照组，且差异有显著性（P＜0.05），可判定该受试物有促进小鼠肝糖原储备的作用。
3.4血乳酸测定
高血乳酸模型的制作及血标本制备：末次给予受试物30min后，在游泳前，由小鼠眼内眦静脉丛取血20μL加入0.48mL1%NaF溶液中，再加入1.5mL蛋白沉淀剂，振荡混匀；然后不负重在30℃的水中游泳10min后停止，立即采血20μL加入0.48mL1%NaF溶液中，再加入1.5mL蛋白沉淀剂，振荡混匀；休息20min后立即采血20μL加入0.48mL1%NaF溶液中，再加入1.5mL蛋白沉淀剂，振荡混匀。均于3000r/min离心10min，取上清液，按表17操作。
表17 血乳酸测定样品前处理
上述步骤完成后，摇匀，置30℃水浴30min（每隔10min振摇一次）。取出后放入沸水浴中加热90s，取出冷却至室温，在波长560nm处比色，空白管调零。
按下列计算公式计算血乳酸含量及血液乳酸曲线下面积：
所得数据为计量资料，若受试物组血乳酸曲线下面积明显低于空白对照组，且差异有显著性（P＜0.05），可判定该受试物有减少小鼠游泳后血乳酸曲线下面积的作用。
4. 试验数据统计
用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值＞F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正太或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。
5. 结果判定
若负重游泳实验结果阳性，且血乳酸、血清尿素、肝糖原三项生化指标中任二项指标阳性，即可判定该受试物具有缓解体力疲劳的功能。
二、实验结果
1. 对小鼠体重的影响
由表18和表19可见，小鼠的初始体重在四批实验动物各剂量组与0g/kgBW组间比较，差异均无显著性（P＞0.05）。即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。
小鼠经口给予不同剂量的样品31天后，小鼠体重在四批实验动物各剂量组与0g/kgBW组间比较，差异无显著性（P＞0.05）。即各剂量样品对小鼠体重无不良影响。
2. 对小鼠负重游泳时间的影响
由表20可见，经口给予小鼠不同剂量的样品31天后，与0g/kgBW组比较，0.75g/kgBW组、2.25g/kgBW组小鼠负重游泳时间延长，有显著性差异（P＜0.01）。即其中5组样品均能延长小鼠的负重游泳时间，其中相对与对比例1-3，实施例1的实验组受试物在各剂量组条件下对运动耐力均具有显著增效作用，且显著优于对比例1-3受试物（P＜0.05），对比例4和实施例1没有明显差距。
3. 对小鼠游泳后血清尿素水平的影响
由表21可见，经口给予小鼠不同剂量的样品31天后，与0g/kgBW组比较，受试物在各剂量组条件下，游泳后小鼠血清尿素含量降低，有显著性差异（P＜0.05），即各受试物在不同剂量组条件下能减少疲劳小鼠的血清尿素含量，其中对比例4和实施例1的效果最佳。
4. 对小鼠肝糖原含量的影响
由表22可见，经口给予小鼠不同剂量的样品31天后，与0g/kgBW组比较，各剂量组小鼠肝糖原含量均无显著性差异（P＞0.05），即受试物各剂量组对小鼠的肝糖原含量均无影响。
5. 对小鼠游泳后血乳酸值的影响
由表23可见，经口给予小鼠不同剂量的样品31天后，与0g/kgBW组比较，5组受试物游泳后小鼠血乳酸曲线下面积减少，在中剂量组和高剂量组条件，均有显著性差异（P＜0.05），其中实施例1在不同剂量组下较对比例1-3能显著减少游泳后小鼠血乳酸曲线下面积。
三、小结
经口给予小鼠不同剂量受试物31天后，与0g/kgBW组比较，该受试物能延长小鼠的负重游泳时间（P＜0.05），能降低疲劳小鼠血清尿素含量（P＜0.05），能减少游泳后小鼠血乳酸曲线下面积（P＜0.05），且呈一定的量-效关系，受试物对小鼠体重增长无不良影响。西洋参-茯砖茶-玛咖这一组合物对抗疲劳效果具有显著增效作用，且明显优于西洋参-茯砖茶、茯砖茶-玛咖和西洋参-玛咖等组合物。根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）对缓解体力疲劳保食品的判定标准可知，实施例1制得的胶囊具有缓解体力疲劳的功能。
应用例3 抗辐射功能评价试验
取实施例和对比例所得胶囊，进行小抗辐射损伤测试，选取SPF级雄性昆明种小鼠，随机分为6组，每组12只，分别为空白对照组，模型对照组，实验组(实施例1-10，对比例1-4，一共14组)，除空白对照组不进行辐照，模型对照组和实验组的小鼠每天都经过2Gy剂量γ射线全身辐照。辐照前1小时，空白对照组和模型对照组灌胃0.75g/kgBW的生理盐水，实验组分别灌胃实施例1-10以及对比例1-4的胶囊，剂量0.75g/kgBW。辐照连续持续7天，7天后颈椎脱臼处死小鼠，采尾末梢血，测试白细胞数量；剥离股骨，用Hank’s液冲出全部骨髓细胞，细胞悬液通过4号针头注射器，细胞在悬液中充分分散后，在260nm处用紫外风光光度计测试OD值表示DNA含量，结果如下表24所示：
表24
从表24数据可以看出，模型对照组和空白组相比，小鼠白细胞数量明显减少，说明辐照对小鼠产生损伤。灌服本发明制备得到的胶囊剂后，白细胞数量和骨髓细胞DNA含量有所恢复。其中实施例4和实施例5的效果稍差，可能的原因是不同的溶剂体系对茯砖茶有效成分提取时，提取率以及活性成分的化学结构破坏程度不同。本发明以水、乙酸乙酯、乙醇按照体积比例的混合溶剂对茯砖茶进行提取，所得茯砖茶浸膏制得的胶囊剂抗辐射效果最优。对比例3和对比例4的效果较差，当胶囊剂组分中缺少茯砖茶活性成分或海参肽时，胶囊剂的抗辐射效果大幅度下降，说明茯砖茶活性成分和海参肽之间存在一定的协同复配的作用。
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