一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂制备方法
阅读说明：本技术 一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂制备方法 (Preparation method of broussonetia papyrifera oral preparation for clearing heat, enhancing immunity and improving intestinal function ) 是由 蒋平 左瑞华 徐光沛 何燕飞 王敬利 于 2021-09-24 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂制备方法。属于生物医药技术领域。本发明利用构树叶作为原料,通过石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇等溶剂去除极性较小的成分,保留极性较大的成分,最后使用极性较大的水进行提取,获得一种免疫增强有益成分,通过制剂工艺进行深加工,得到一种具有清热增免和改善肠道功能构树口服制剂,通过实验验证具有清热、增强免疫力、促生长和调节肠道菌群稳态的作用。(The invention discloses a preparation method of a broussonetia papyrifera oral preparation for clearing heat, enhancing immunity and improving intestinal function. Belongs to the technical field of biological medicine. According to the invention, broussonetia papyrifera leaves are used as a raw material, components with smaller polarity are removed by solvents such as petroleum ether, dichloromethane, ethyl acetate and n-butanol, components with larger polarity are retained, water with larger polarity is finally used for extraction, an immune enhancing beneficial component is obtained, deep processing is carried out by a preparation process, and the broussonetia papyrifera oral preparation with the functions of clearing heat, enhancing immunity and improving intestinal tract function is obtained.)
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，更具体的说是涉及一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂制备方法。
背景技术
构树叶具有清热，凉血，利湿，杀虫等功效，常用于治疗肠炎，痢疾和鼻衄等，具有重要的药用价值。此外，构树种植面积大，覆盖范围广，具有很强的资源优势和政策优势。
但是，从目前的产业发展角度来看，构树的使用和产业化开发仅停留在饲料领域，其药用价值未得到很好的开发。尤其是应用于生物医药领域的缺乏有效的产品支撑。
免疫系统是人和动物拮抗疾病，保证机体健康的重要保证，具有维持自身免疫功能稳定、抵抗病原微生物感染、免疫应答等诸多方面的功能。当机体发生免疫机能减退等疾病时，会导致多种疾病的发生，导致肠道菌群的紊乱，严重者会发生自身免疫性疾病。
因此，如何开发一种安全、高校、价廉的中草药类免疫增强剂是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂制备方法。
本发明利用构树叶作为原料，通过石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇等溶剂去除极性较小的成分，保留极性较大的成分，最后使用极性较大的水进行提取，获得一种免疫增强有益成分，通过制剂工艺进行深加工，得到一种具有清热增免和改善肠道功能构树口服制剂，通过实验验证具有清热、增强免疫力、促生长和调节肠道菌群稳态的作用。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂制备方法，包括以下步骤：
(1)按重量份取构树超微粉5～15份，添加石油醚10～30份萃取，过滤，得滤渣a；将滤渣a烘干后，添加二氯甲烷5～20份萃取，过滤，得滤渣b；将滤渣b烘干后，添加乙酸乙酯5～15份萃取，过滤，得滤渣c；将滤渣c烘干后，加入正丁醇5～15份萃取，过滤，得滤渣d；将滤渣d烘干后，加入30～50 份水冷凝回流提取，得提取液A；
(2)将提取液A经离心后，真空负压过滤，收集滤液，在30～60℃条件下进行电热负压干燥至恒重，得到构树固体粉末B；
(3)按重量份取1～5份固体粉末B，加1～5份水，0.1～1份果葡糖浆，抗坏血酸1～5份，均质处理，得到混合液C；密封后超高压杀菌，得混合液D；
(4)将混合液D无菌灌装即为一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂。
进一步的，超微粉粒度要求过300目筛。步骤(3)均质处理所用设备为均质混匀搅拌机。
有益效果在于：步骤(1)可去除极性较小的成分。
优选的：步骤(1)萃取的次数均为三次；萃取的温度均为20～30℃；烘干的温度的均为40～60℃；过滤采用布氏漏斗。
进一步的：预先在布氏漏斗中放置中速滤纸。
优选的：步骤(2)离心：2000～6000r/min，时间为5～20min；真空负压过滤的设备为布氏漏斗、真空泵；真空负压的压力为0.09M Pa；电热负压的压力为0.095M Pa。
优选的：步骤(3)密封后超高压杀菌：将混合液C装入双层聚乙烯塑料袋中密封，置于800MPa、25℃环境下，2min。
优选的：步骤(3)混合液D中，构树固体粉末B的浓度为0.1g/mL。
本发明还提供了一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂在制备药品、保健品或食品中的应用。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂制备方法，相较于现有技术：
1.提取过程中去除非水溶性成分，增加产品的水溶性效率，即使在较高的浓度下，也能够完全溶于水，得率高，约在25％左右。
2.利用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇等溶剂去除极性较小的成分，保留极性较大的成分，最后使用极性较大的水进行提取，保证本发明在水中的溶解效率。
3.能够显著的增高免疫力和改善肠道功能。
4.具有显著的清热作用，能够降低发烧大鼠的体温。
5.方便易携带、口感好、价廉、制作成本低。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明提供的构树固体粉末LC-MS色谱图。
图2附图为本发明提供的构树口服制剂对环磷酰胺致免疫抑制小鼠体重的影响图，*P<0.05，表示与免疫抑制模型组相比差异显著，下同。
图3附图为本发明对环磷酰胺致免疫抑制小鼠血清IgM抗体水平的影响图。
图4附图为本发明对环磷酰胺致免疫抑制小鼠血清IgG抗体水平的影响图。
图5附图为本发明提供的对环磷酰胺免疫抑制小鼠肠道菌群丰富度的影响图。
图6附图为本发明提供的对发热大鼠体温差值(ΔT)的影响图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例公开了一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂制备方法。
实施例1
一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂制备方法，包括以下步骤：
(1)按重量份取构树超微粉5份，添加石油醚10份萃取，过滤，得滤渣a；将滤渣a烘干后，添加二氯甲烷5份萃取，过滤，得滤渣b；将滤渣b 烘干后，添加乙酸乙酯5份萃取，过滤，得滤渣c；将滤渣c烘干后，加入正丁醇5份萃取，过滤，得滤渣d；将滤渣d烘干后，加入30份水冷凝回流提取，得提取液A；
(2)将提取液A经离心后，真空负压过滤，收集滤液，在30℃条件下进行电热负压干燥至恒重，得到构树固体粉末B；
(3)按重量份取1份固体粉末B，加1份水，0.1份果葡糖浆，抗坏血酸1份，均质处理，得到混合液C；密封后超高压杀菌，得混合液D；
(4)将混合液D无菌灌装即为一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂。
为进一步优化技术方案：步骤(1)萃取的次数均为三次；萃取的温度均为20℃；烘干的温度的均为40℃；过滤采用布氏漏斗。
为进一步优化技术方案：步骤(2)离心：2000r/min，时间为5min；真空负压过滤的设备为布氏漏斗、真空泵；真空负压的压力为0.09M Pa；电热负压的压力为0.095M Pa。
为进一步优化技术方案：步骤(3)密封后超高压杀菌：将混合液C装入双层聚乙烯塑料袋中密封，置于800MPa、25℃环境下，2min。
为进一步优化技术方案：步骤(3)混合液D中，构树固体粉末B的浓度为0.1g/mL。
实施例2
一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂制备方法，包括以下步骤：
(1)按重量份取构树超微粉10份，添加石油醚20份萃取，过滤，得滤渣a；将滤渣a烘干后，添加二氯甲烷15份萃取，过滤，得滤渣b；将滤渣b 烘干后，添加乙酸乙酯10份萃取，过滤，得滤渣c；将滤渣c烘干后，加入正丁醇10份萃取，过滤，得滤渣d；将滤渣d烘干后，加入40份水冷凝回流提取，得提取液A；
(2)将提取液A经离心后，真空负压过滤，收集滤液，在50℃条件下进行电热负压干燥至恒重，得到构树固体粉末B；
(3)按重量份取3份固体粉末B，加4份水，0.5份果葡糖浆，抗坏血酸2份，均质处理，得到混合液C；密封后超高压杀菌，得混合液D；
(4)将混合液D无菌灌装即为一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂。
为进一步优化技术方案：步骤(1)萃取的次数均为三次；萃取的温度均为25℃；烘干的温度的均为50℃；过滤采用布氏漏斗。
为进一步优化技术方案：步骤(2)离心：5000r/min，时间为15min；真空负压过滤的设备为布氏漏斗、真空泵；真空负压的压力为0.09M Pa；电热负压的压力为0.095M Pa。
为进一步优化技术方案：步骤(3)密封后超高压杀菌：将混合液C装入双层聚乙烯塑料袋中密封，置于800MPa、25℃环境下，2min。
为进一步优化技术方案：步骤(3)混合液D中，构树固体粉末B的浓度为0.1g/mL。
实施例3
一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂制备方法，包括以下步骤：
(1)按重量份取构树超微粉15份，添加石油醚30份萃取，过滤，得滤渣a；将滤渣a烘干后，添加二氯甲烷20份萃取，过滤，得滤渣b；将滤渣b 烘干后，添加乙酸乙酯15份萃取，过滤，得滤渣c；将滤渣c烘干后，加入正丁醇15份萃取，过滤，得滤渣d；将滤渣d烘干后，加入50份水冷凝回流提取，得提取液A；
(2)将提取液A经离心后，真空负压过滤，收集滤液，在60℃条件下进行电热负压干燥至恒重，得到构树固体粉末B；
(3)按重量份取5份固体粉末B，加5份水，1份果葡糖浆，抗坏血酸 5份，均质处理，得到混合液C；密封后超高压杀菌，得混合液D；
(4)将混合液D无菌灌装即为一种清热增免和改善肠道功能的构树口服剂。
为进一步优化技术方案：步骤(1)萃取的次数均为三次；萃取的温度均为30℃；烘干的温度的均为60℃；过滤采用布氏漏斗。
为进一步优化技术方案：步骤(2)离心：6000r/min，时间为20min；真空负压过滤的设备为布氏漏斗、真空泵；真空负压的压力为0.09M Pa；电热负压的压力为0.095M Pa。
为进一步优化技术方案：步骤(3)密封后超高压杀菌：将混合液C装入双层聚乙烯塑料袋中密封，置于800MPa、25℃环境下，2min。
为进一步优化技术方案：步骤(3)混合液D中，构树固体粉末B的浓度为0.1g/mL。
其中，实施例2中制备的构树固体粉末B进行LC-MS色谱分析参见图1。
取ICR小鼠50只，均分为空白对照组、免疫抑制模型组、实例1组(应用实施例1制备的口服制剂)，实例2组(应用实施例2制备的口服制剂) 和实例3组(应用实施例3制备的口服制剂)；实例1组，实例2组和实例3 组每只小鼠按照1mL/kg体重剂量灌胃构树口服制剂，空白对照组和免疫抑制模型组给予等量的生理盐水灌胃，连续灌胃14天；在用药的第12天，免疫抑制模型组、实例1组，实例2组和实例3组小鼠按50g/kg的剂量腹腔注射环磷酰胺生理盐水溶液，空白对照组给予等量的生理盐水，连续用药3天；第15天将小鼠断颈处死，取血清检测其免疫功能；无菌条件下取小鼠盲肠粪便，通过16s rDNA分析肠道菌群结构。
结果表明：环磷酰胺可以显著降低小鼠的体重，降低小鼠的IgM和IgG 的水平，而实例1组，实例2组和实例3组的构树口服制剂可以有效的提高小鼠的体重(图2)和IgM(图3)和IgG的水平(图4)，改善小鼠的免疫功能。与空白对照组相比，环磷酰胺可使小鼠肠道菌群结构发生明显变化，可使Bacteroidales(拟杆菌目)、Lachnospiraceae(毛螺旋菌科)、Rikenella (理研菌属)等的相对丰富度显著降低，而构树口服制剂可有效逆转环磷酰胺导致的小鼠肠道菌群变化，可使Bacteroidales、Lachnospiraceae、Rikenella 等的相对丰富度显著升高(图5)。
取Sd大鼠50只，均分为空白对照组、发热模型组、实例1组，实例2 组和实例3组；试验前6h禁食不禁水。发热模型组、实例1组，实例2组和实例3组大鼠以20μg/kg剂量腹腔注射LPS生理盐水溶液；空白对照组注射同体积生理盐水。造模2h后，实例1组，实例2组和实例3组给药组分别灌胃给予相应构树口服制剂，剂量为0.7mL/kg体重；空白对照组与发热模型组给予同体积生理盐水。30min测量大鼠的体温。结果表明，与空白对照组大鼠相比，发热模型组大鼠体温升高3倍左右，用药30min后，实例1组，实例2组和实例3组大鼠体温迅速下降，约降低1/3左右(图6)，表明本发明一种具有清热增免和改善肠道功能构树口服制剂具有显著的清热作用。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。