Apoe抑制剂与pd-1单抗联用在制备治疗消化道肿瘤的药物中的应用
阅读说明：本技术 Apoe抑制剂与pd-1单抗联用在制备治疗消化道肿瘤的药物中的应用 (Application of APOE inhibitor and PD-1 monoclonal antibody in preparation of medicine for treating digestive tract tumor ) 是由 王学浩 唐薇薇 刘力 惠冰清 卢琛 荣大伟 于 2021-08-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种APOE抑制剂与PD-1单抗联用在制备治疗消化道肿瘤的药物中的应用,属于医药技术领域。发明人研究发现,与现有技术中采用PD-1单抗用于治疗消化道肿瘤相比,APOE抑制剂与PD-1单抗联用可以进一步抑制消化道肿瘤,提高治疗有效率,尤其是针对PD-1单抗治疗敏感性不高的患者,这对于消化道肿瘤的治疗,具有重要的意义。(The invention discloses an application of APOE inhibitor and PD-1 monoclonal antibody in preparation of a medicament for treating digestive tract tumor, belonging to the technical field of medicines. The inventor researches and finds that compared with the prior art that the PD-1 monoclonal antibody is used for treating the digestive tract tumor, the APOE inhibitor and the PD-1 monoclonal antibody can be used together to further inhibit the digestive tract tumor and improve the treatment efficiency, and especially for patients with low treatment sensitivity of the PD-1 monoclonal antibody, the APOE inhibitor and the PD-1 monoclonal antibody have important significance for treating the digestive tract tumor.)
技术领域
本发明涉及一种APOE抑制剂与PD-1单抗联用在制备治疗消化道肿瘤的药物中的应用，属于医药技术领域。
背景技术
消化道肿瘤是我国最常见的恶性肿瘤之一,其发病率逐年提高，发病年龄也趋于年轻化，严重威胁着人们的健康与生命。由于消化道肿瘤病因、病机的特殊性和复杂性，其临床治愈率较低，靶向治疗和免疫治疗的有效率在20％左右，因此提高有效率极其重要。
目前，PD-1单抗用于治疗消化道肿瘤的有效率为15-20％，有效率比较低。抗 PD-1、抗PD-L1和抗PD-L2抗体发挥作用均取决于其在细胞表面的表达。对于低表达和不表达相应物质的肿瘤，抗体不能起到很好的作用。研究表明，至少有70％的癌症患者对PD-1抗体治疗反应不佳。因此，单药治疗不能满足临床需要，需要考虑联合治疗以提高疗效。
近些年来，免疫检查点联合治疗得到广泛应用。虽然这些免疫检查点抑制剂提高了癌症患者治疗的有效率，然而，前期临床试验数据表明，免疫检查点治疗并没有达到预期的阳性响应率，很多前期提出的假设也随之遭到临床质疑。尽管如此，在控制某些晚期癌症的疾病进展方面，大量免疫检查点抗体联合治疗确实取得很好的疗效。随着免疫检查点抑制剂的原发性和获得性耐受机制的深入研究，联合治疗方案将应用于更多的临床试验。除CTLA-4和PD-1抗体的联合治疗，联合治疗还包括：肿瘤微环境的免疫干扰因子例如toll—like受体拮抗剂，肿瘤溶解病毒，阻断T细胞排异的抗体，抑制性免疫细胞如调节性T细胞(Tregs)或者巨噬细胞M。这些免疫因子联合治疗一方面增强了T细胞对肿瘤细胞的清除能力，另一方面也增加了肿瘤组织周围的T细胞数量，从而协同免疫检查点抗体抑制肿瘤进展。此外，其他治疗方式如放疗、化疗、肿瘤靶向治疗、癌症疫苗等联合应用也显示可调控肿瘤微环境免疫因子的活性并与免疫检查点产生协同作用，从而达到增强抗肿瘤疗效的作用。然而关于联合治疗的机制尚缺乏系统性研究。进一步阐述其内在分子机制，对提高肿瘤免疫治疗的有效率至关重要。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术中PD-1单抗用于治疗消化道肿瘤的有效率较低的问题，提供APOE抑制剂与PD-1单抗联用在制备治疗消化道肿瘤的药物中的应用，并通过试验证实，APOE抑制剂与PD-1单抗联用可以进一步抑制消化道肿瘤，提高治疗有效率。
技术方案
APOE抑制剂与PD-1单抗联用在制备治疗消化道肿瘤的药物中的应用。
进一步，所述APOE抑制剂为COG133TFA。COG133TFA是载脂蛋白E(ApolipoproteinE,APOE)肽的片段。COG133TFA与APOE全息蛋白竞争结合LDL 受体，具有有效的抗炎和神经保护作用。发明人研究发现，使用APOE抑制剂可激活癌症患者免疫原性，增强CD8+T细胞中PD-1的表达的表达，再联合使用PD-1 抑增强了药物的敏感性。
进一步，所述治疗消化道肿瘤的药物中，APOE抑制剂和PD-1单抗是主要活性成分。
本发明的有益效果：本发明提供了APOE抑制剂与PD-1单抗联用在制备治疗消化道肿瘤的药物中的应用，与现有技术中采用PD-1单抗用于治疗消化道肿瘤相比，APOE抑制剂与PD-1单抗联用可以进一步抑制消化道肿瘤，提高治疗有效率，尤其是针对PD-1单抗治疗敏感性不高的患者。这对于消化道肿瘤的治疗，具有重要的意义。
附图说明
图1为APOE抑制剂与PD-1单抗单用或者联用治疗肝癌皮下瘤模型小鼠的测试结果；
图2为APOE抑制剂与PD-1单抗单用或者联用治疗肠癌皮下瘤模型小鼠的测试结果；
图3为APOE抑制剂与PD-1单抗单用或者联用治疗胃癌皮下瘤模型小鼠的测试结果。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明。下述实施例中，COG133TFA购买于sigmaaldrich公司；PD-1单抗购买于bioxcell公司。
实施例1
建立野生型小鼠C57BL/6皮下肝癌、肠癌、胃癌移植瘤模型
C57BL/6小鼠(购自维通利华)，4周龄，细胞株(MC38-肠癌，Hepa1-6- 肝癌，MFC-胃癌，均购于中国科学院上海细胞生物学研究所)，采用腹股沟处注射的方式建立皮下肝癌，肠癌，胃癌移植瘤模型。具体方法为：选生长状态好的细胞(MC38-肠癌、Hepa1-6-肝癌或MFC-胃癌细胞)，将瓶内培养液倒掉，加入 2mlD-Hanks液，轻轻震荡后倾去，向瓶内加入0.25％胰酶和O.02％EDTA混合(1：1)消化液3ml，轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有细胞表面，室温25℃下消化3分钟。边消化边在倒置显微镜下观察，发现胞质回缩、细胞间隙增大后，倒掉消化液，在培养瓶中加入3ml培养液，终止消化。用吸管反复吹打瓶壁上的细胞，直至全部细胞被冲下，轻轻吹打混匀，形成细胞悬液，按1：2分配，接种到两个培养瓶内，再向各瓶补加培养液到5ml，继续培养。倒置显微镜下观察，细胞贴壁为80％时终止培养。室温下，0.25％胰酶消化，细胞脱壁，加入2ml RPMI-1640培养液终止消化。收集细胞悬液于50ml离心管中，800转/分离心8min，弃上清，用RPMI-1640培养液重悬，轻轻吹打成单细胞悬液，吸取9微升细胞悬液于EP管，加入1微升台盼兰后混均，取10微升悬液于血细胞计数板上，在倒置显微镜下计数，若细胞活力达95％以上，可调整细胞悬液密度为lxl07个/ml，备用。消毒小鼠右侧腹股沟皮肤，取对数生长期的细胞，调整细胞浓度为lxl07个/ml，用注射器吸取0.2ml(2×106/只)细胞悬液接种于小鼠右侧腹股沟皮下，注射完后用棉签压迫注射部位数秒。接种后将动物送回饲养室继续饲养，每天检查肿瘤生长情况。得到肝癌、肠癌或胃癌移植瘤模型小鼠。
实施例2
APOE抑制剂与PD-1单抗联用治疗消化道肿瘤
1.取肝癌移植瘤模型小鼠，分成四组，设为对照组、PD1单抗单用组(αPD-1)、COG133TFA单用组(αAPOE)、PD1单抗和COG133TFA联用组(αAPOE+αPD-1)，每组4只小鼠，四组小鼠分别按对应组别进行治疗，其中，PD1单抗单用组：第八天腹腔注射6.6mg/kg，以后每隔三天注射一次；COG133TFA单用组：第二天腹腔注射1mg/kg，以后每隔五天注射一次；PD1单抗和COG133TFA联用组：第二天腹腔注射COG133TFA1mg/kg，以后每隔五天注射一次，第八天腹腔注射PD1单抗 6.6mg/kg，以后每隔三天注射一次；对照组：第二天腹腔注射PBS100ul/只，以后每隔五天注射一次；实验前后每天观察小鼠的活动、精神、饮食等情况。每隔4 天用游标卡尺测量肿瘤长径a(mm)及短径b(mm)，并计算小鼠肿瘤体积(V)按下列公式计算：V＝ab2/2，描绘出肿瘤生长曲线。用药后20天脱颈处死小鼠。测试结果见图1。
图1为APOE抑制剂与PD-1单抗单用或者联用治疗肝癌皮下瘤模型小鼠的测试结果，由图1可以看出，单用COG133TFA或者PD1单抗均可以减缓肝癌生长， PD1单抗的效果比COG133TFA的抑癌效果好，但是二者联用可以显著减缓肝癌生长甚至消失。
2.取肠癌移植瘤模型小鼠，分成四组，设为对照组、PD1单抗单用组、COG133TFA 单用组、PD1单抗和COG133TFA联用组，每组4只小鼠，四组小鼠分别按对应组别进行治疗，其中，PD1单抗单用组：第八天腹腔注射6.6mg/kg，以后每隔三天注射一次；COG133TFA单用组：第二天腹腔注射1mg/kg，以后每隔五天注射一次； PD1单抗和COG133TFA联用组：第二天腹腔注射COG133TFA1mg/kg，以后每隔五天注射一次，第八天腹腔注射PD1单抗6.6mg/kg，以后每隔三天注射一次；对照组：第二天腹腔注射PBS100ul/只，以后每隔五天注射一次；实验前后每天观察小鼠的活动、精神、饮食等情况。每隔4天用游标卡尺测量肿瘤长径a(mm)及短径b(mm)，并计算小鼠肿瘤体积(V)按下列公式计算：V＝ab2/2，描绘出肿瘤生长曲线。用药后20天脱颈处死小鼠。测试结果见图2。
图2为APOE抑制剂与PD-1单抗单用或者联用治疗肠癌皮下瘤模型小鼠的测试结果，由图2可以看出，单用APOE抑制剂COG133TFA或者PD1单抗均可以减缓肠癌生长，PD1单抗的效果比APOE抑制剂COG133TFA的抑癌效果好，但是二者联用可以显著减缓肠癌生长甚至消失。
3.取胃癌移植瘤模型小鼠，分成四组，设为对照组、PD1单抗单用组、COG133TFA 单用组、PD1单抗和COG133TFA联用组，每组4只小鼠，四组小鼠分别按对应组别进行治疗，其中，PD1单抗单用组：第八天腹腔注射6.6mg/kg，以后每隔三天注射一次；COG133TFA单用组：第二天腹腔注射1mg/kg，以后每隔五天注射一次； PD1单抗和COG133TFA联用组：第二天腹腔注射COG133TFA1mg/kg，以后每隔五天注射一次，第八天腹腔注射PD1单抗6.6mg/kg，以后每隔三天注射一次；对照组：第二天腹腔注射PBS100ul/只，以后每隔五天注射一次；实验前后每天观察小鼠的活动、精神、饮食等情况。每隔4天用游标卡尺测量肿瘤长径a(mm)及短径b(mm)，并计算小鼠肿瘤体积(V)按下列公式计算：V＝ab2/2，描绘出肿瘤生长曲线。用药后20天脱颈处死小鼠。测试结果见图3。
图3为APOE抑制剂与PD-1单抗单用或者联用治疗胃癌皮下瘤模型小鼠的测试结果，由图3可以看出，单用APOE抑制剂COG133TFA或者PD1单抗均可以减缓胃癌生长，PD1单抗的效果比APOE抑制剂COG133TFA的抑癌效果好，但是二者联用可以显著减缓胃癌生长。
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