一种新冠病毒检测用单抗
阅读说明：本技术 一种新冠病毒检测用单抗 (Monoclonal antibody for detecting new coronavirus ) 是由 刘立成 吴刚 闫广为 张治业 于 2021-09-08 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种新冠病毒检测用单抗,所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水,proteinG纯化的抗体1-3mg；制备腹水,抗原亲和纯化的抗体0.5-1.5mg；制备腹水,硫酸铵沉淀纯化抗体1-3mg；细胞上清扩大培养,proteinG纯化的抗体1-3mg；细胞上清扩大培养,抗原亲和纯化的抗体0.5-1.5mg,新冠病毒检测用单抗的制备方法,包括如下步骤：S1、订购小鼠,S2、小鼠免疫程序,S3、融合,S4、融合检测,S5、单克隆；本发明提供的一种新冠病毒检测用单抗,可以有效对新冠病毒进行检测,解决了核酸检测容易出现漏诊的问题,当核酸检测阴性时,将IgM和IgG抗体检测增加进去,可作为核酸诊断的补充手段,极大提高了新冠病毒检测的准确性。(The invention discloses a monoclonal antibody for detecting new coronavirus, which has the following formula: by weight: preparing 1-3mg of ascites, proteinG purified antibody; preparing ascites, and 0.5-1.5mg of antibody subjected to antigen affinity purification; preparing ascites, precipitating and purifying antibody 1-3mg by ammonium sulfate; amplifying and culturing cell supernatant, and purifying antibody 1-3mg of proteinG; the cell supernatant is enlarged and cultured, the antibody of antigen affinity purification is 0.5-1.5mg, the preparation method of the monoclonal antibody for detecting the new coronavirus comprises the following steps: s1, ordering mice, S2, mouse immunization program, S3, fusion, S4, fusion detection, S5 and monoclonal; the monoclonal antibody for detecting the new coronavirus provided by the invention can effectively detect the new coronavirus, solves the problem that missed diagnosis is easy to occur in nucleic acid detection, and can be used as a supplementary means for nucleic acid diagnosis by adding IgM and IgG antibody detection when the nucleic acid detection is negative, thereby greatly improving the accuracy of new coronavirus detection.)
技术领域
本发明属于生物技术领域，更具体地说，尤其涉及一种新冠病毒检测用单抗。
背景技术
新型冠状病毒的检测方法主要包含核酸检测、抗体检测、抗原 检测几种方法，由于抗原检测检出率较低，目前新冠检测主要集中 在抗体和核酸检测。
核酸检测对检测设备或平台要求较高，高灵敏度的RT-PCR仪价格昂贵，对实验室的洁净度和操作人员要求也较高，此外，核酸检测耗时较长，考虑到样本运输、样本积压的情况，通常最快24小时才可以报告结果，与核酸检测相比，抗体检测的血液标本更易获取且标本质量有保证、操作简单快捷、很大程度上降低了医护人员在标本采集和检测过程中被感染的风险、更易于基层实验室展开筛查工作等，如果说核酸检测病毒的核糖核酸(RNA)，是病毒存在的直接证据，那么抗体检测的就是患者血液中被刺激产生的抗体，是间接证据，对临床有提示作用，当核酸检测阴性时，将IgM和IgG抗体检测增加进去。
抗体检测可以弥补核酸检测容易造成漏诊的缺点，成为一种重要的新冠病毒检测手段，为此，亟需一种新冠病毒检测用单抗对核酸检测的不足进行解决。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种新冠病毒检测用单抗。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种新冠病毒检测用单抗，所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体1-3mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体0.5-1.5mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体1-3mg；细胞上清扩大培养，proteinG纯化的抗体1-3mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体0.5-1.5mg
优选的，所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体3mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体1.5mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体3mg；细胞上清扩大培养， proteinG纯化的抗体3mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体1.5mg.
优选的，所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体2mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体1mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体2mg；细胞上清扩大培养， proteinG纯化的抗体2mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体1mg。
优选的，所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体1mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体0.5mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体1mg；细胞上清扩大培养， proteinG纯化的抗体1mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体0.5mg。
本发明还提供一种新冠病毒检测用单抗的制备方法，包括如下步骤：
S1、订购小鼠；
S2、小鼠免疫程序：注射两次抗原，并采用ELISA方法检测小鼠血清效价；
S3、融合：培养细胞，第8天半量换液HT培养基，第10天后显微镜下画单克隆；
S4、融合检测：对免疫小鼠的血清做阳性对照，并使用酶标仪测定450nm/620nm处OD值；
S5、单克隆：选取20株阳性母细胞培养传代三次，选取OD值较大的细胞株制备抗体。
优选的，所述步骤S2中免疫程序方案包括以下步骤：
S201、抗原配制方法：按照每只小鼠免疫约20ug，将抗原与 QuickAntibody-Mouse5W等体积混合；
S202、免疫前采集空白血清，小鼠通过剪脚指标记，抓住小鼠颈部皮肤将小鼠腹部朝上，剪右前趾为1号，左前趾为2号，右后趾为3号，左后趾为4号，5号为未剪脚趾，将小鼠固定于固定器内，用眼科剪在小鼠尾尖处剪断用EP管收取约20ul血用于分离血清，约3～5ul，手写标记，-20℃保存；
S203、初次免疫第0天：10-20ug蛋白抗原与 QuickAntibody-Mouse5W等体积混合，充分混匀后在小鼠后腿部肌肉注射，在初次免疫前应采集空白血清；
S204、第二次免疫第21天：等同初次免疫；
S205、效价检测第35天：采用ELISA方法检测小鼠血清效价，采用断趾标记法标记小鼠，将小鼠固定于固定器内，用眼科剪在小鼠尾尖处剪断用EP管收取约20ul血并分离血清用于检测ELISA效价。
优选的，所述步骤S205中效价检测的方法包括以下步骤：
S2051、抗原包被：确定抗原包被的浓度1ug/ml，100ul每孔加入96孔板，包被6条共72孔，4℃过夜或37℃温箱1h；
S2052、封闭：弃上清，用PBST清洗三次，每孔加入300ul封闭液，37℃放置1h；
S2053、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S2054、加一抗：从第二孔开始，每孔加入100ulPBS，取免疫后的小鼠血清做1：:65稀释，取200ul左右，加入包被板的第一孔中，从第一孔取100ul加入到第二孔，吹吸7次后吸取100ul加入到第三孔，依次稀释到第11孔，第12孔保留100ulPBS，第6行加入空白血清100ul做阴性对照，37℃温箱作用1h；
S2055、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S2056、加酶标二抗：取HRP羊抗鼠二抗按1:5000稀释，100ul 每孔，37℃温箱作用1h；
S2057、洗涤：用PBST洗涤3到5次，拍干；
S2058、显色：加入可溶型TMB单组分显色液，100ul每孔，37℃温箱作用7～8min，阳性结果显示为蓝色；
S2059、终止：加入30ul的2M的H2SO4终止，溶液变黄色，使用酶标仪读取OD450/620，以OD值大于0.2为阳性，空白血清的OD 值不高于0.1。
优选的，所述步骤S3中融合方法包括以下步骤：
S301、选取小鼠，将小鼠无痛处死，无菌分离脾脏，用滤网研磨后离心获取B细胞和红细胞，用10mlB细胞分离液裂解红细胞5 分钟，离心1000rpm，10分钟获取B细胞，分别将1×108小鼠脾细胞和2×107骨髓瘤细胞重悬于25ml无血清培养基中；
S302、200-400g离心5-10min，弃去上清，轻拍管底，充分打散沉淀，将离心管置于37℃水浴中保温至融合开始，将1ml经过37℃预热的50％PEG1450匀速加入上述离心管中，用1ml的移液器，用时 1min，期间用移液器枪头不停搅拌，继续用枪头搅拌1-2分钟；
S303、往融合混合物中匀速加入1ml经过37℃预热的培养基，用时1min，期间用移液器枪头不停搅拌，再匀速加入3ml经过37℃预热的培养基，用时3min，期间用移液器枪头不停搅拌，再加入10ml 经过37℃预热的培养基，37℃孵育5min；
S304、200-400g离心5-10min，取细胞，弃上清，用选择性培养基230ml重悬细胞，铺10块96细胞细胞培养板，同常规方法培养细胞，第8天半量换液HT培养基，第10天后显微镜下画单克隆，第12～15天融合检测。
优选的，所述步骤S4中融合检测包括以下步骤：
S401、抗原包被：按照融合板或融合阳性细胞孔数量包板，确定抗原包被的浓度1ug/ml，100ul每孔加入96孔板，4℃过夜；
S402、封闭：弃上清，用PBST清洗三次，每孔加入300ul封闭液，37℃放置1h；
S403、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S404、加一抗：无菌取含有单克隆抗体的细胞上清100ul左右，加入包被板的孔中，用空白培养基做阴性对照，用免疫小鼠的血清做阳性对照，37℃温箱作用1h；
S405、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S406、加酶标二抗：取抗鼠的二抗，羊抗鼠或兔抗鼠IgG等，二抗的Ig类型基本可以确定要制备的单克隆抗体的Ig类型，按 1:5000到1:10000稀释，100ul每孔，37℃温箱作用1h；
S407、洗涤：用PBST洗涤3到5次，拍干；
S408、显色：加入TMB单组分底物溶液，100ul每孔，37℃温箱作用7～8min，阳性结果显示为蓝色；
S409、终止：加入30ul的2M的H2SO4终止，溶液变黄色，测定：用酶标仪测定450nm/620nm处OD值，实验孔大于2.1且数值不小于0.2判定为阳性。
优选的，所述步骤S5中单克隆过程包括以下步骤：
S501、将20株母克隆转移到24孔板培养，传代3次；
S502、第3代细胞培养至孔底40％～70％，检测上清ELISA效价及亚型鉴定；自主选取5株阳性细胞，各株冻存4支，同时收集上清，贴机打标签，106/支自主选取其中1株制备抗体。
本发明的技术效果和优点：
本发明提供的一种新冠病毒检测用单抗，可以有效对新冠病毒进行检测，解决了核酸检测容易出现漏诊的问题，当核酸检测阴性时，将IgM和IgG抗体检测增加进去，可作为核酸诊断的补充手段，极大提高了新冠病毒检测的准确性。
附图说明
图1为本发明移液器本体的结构示意图；
图2为本发明螺纹杆和螺纹孔的结构示意图；
图3为本发明新冠病毒检测用单抗的制备方法流程图；
图4为本发明效价检测方法的流程图；
图5为本发明融合检测的流程图。
图中：001、支撑板；002、固定板；003、放置槽；004、培养板；005、固定孔；006、槽道；007、拉板；008、拉槽；009、移液器本体；010、螺纹杆；011、螺纹孔。
具体实施方式
为使本发明实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施方式中的附图，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种新冠病毒检测用单抗，所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体3mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体1.5mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体3mg；细胞上清扩大培养，proteinG纯化的抗体3mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体1.5mg。
一种新冠病毒检测用单抗的制备方法，包括如下步骤：
S1、订购小鼠；
S2、小鼠免疫程序：注射两次抗原，并采用ELISA方法检测小鼠血清效价，免疫程序方案包括以下步骤：
S201、抗原配制方法：按照每只小鼠免疫约20ug，将抗原与 QuickAntibody-Mouse5W等体积混合；
S202、免疫前采集空白血清，小鼠通过剪脚指标记，抓住小鼠颈部皮肤将小鼠腹部朝上，剪右前趾为1号，左前趾为2号，右后趾为3号，左后趾为4号，5号为未剪脚趾，将小鼠固定于固定器内，用眼科剪在小鼠尾尖处剪断用EP管收取约20ul血用于分离血清，约3～5ul，手写标记，-20℃保存；
S203、初次免疫第0天：10-20ug蛋白抗原与 QuickAntibody-Mouse5W等体积混合，充分混匀后在小鼠后腿部肌肉注射，在初次免疫前应采集空白血清；
S204、第二次免疫第21天：等同初次免疫；
S205、效价检测第35天：采用ELISA方法检测小鼠血清效价，采用断趾标记法标记小鼠，将小鼠固定于固定器内，用眼科剪在小鼠尾尖处剪断用EP管收取约20ul血并分离血清用于检测ELISA效价；
效价检测的方法包括以下步骤：
S2051、抗原包被：确定抗原包被的浓度1ug/ml，100ul每孔加入96孔板，包被6条共72孔，4℃过夜或37℃温箱1h；
S2052、封闭：弃上清，用PBST清洗三次，每孔加入300ul封闭液，37℃放置1h；
S2053、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S2054、加一抗：从第二孔开始，每孔加入100ulPBS，取免疫后的小鼠血清做1：:65稀释，取200ul左右，加入包被板的第一孔中，从第一孔取100ul加入到第二孔，吹吸7次后吸取100ul加入到第三孔，依次稀释到第11孔，第12孔保留100ulPBS，第6行加入空白血清100ul做阴性对照，37℃温箱作用1h；
S2055、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S2056、加酶标二抗：取HRP羊抗鼠二抗按1:5000稀释，100ul 每孔，37℃温箱作用1h；
S2057、洗涤：用PBST洗涤3到5次，拍干；
S2058、显色：加入可溶型TMB单组分显色液，100ul每孔，37℃温箱作用7～8min，阳性结果显示为蓝色；
S2059、终止：加入30ul的2M的H2SO4终止，溶液变黄色，使用酶标仪读取OD450/620，以OD值大于0.2为阳性，空白血清的OD 值不高于0.1；
S3、融合：培养细胞，第8天半量换液HT培养基，第10天后显微镜下画单克隆，融合方法包括以下步骤：
S301、选取小鼠，将小鼠无痛处死，无菌分离脾脏，用滤网研磨后离心获取B细胞和红细胞，用10mlB细胞分离液裂解红细胞5 分钟，离心1000rpm，10分钟获取B细胞，分别将1×108小鼠脾细胞和2×107骨髓瘤细胞重悬于25ml无血清培养基中；
S302、200-400g离心5-10min，弃去上清，轻拍管底，充分打散沉淀，将离心管置于37℃水浴中保温至融合开始，将1ml经过37℃预热的50％PEG1450匀速加入上述离心管中，用1ml的移液器，用时1min，期间用移液器枪头不停搅拌，继续用枪头搅拌1-2分钟；
S303、往融合混合物中匀速加入1ml经过37℃预热的培养基，用时1min，期间用移液器枪头不停搅拌，再匀速加入3ml经过37℃预热的培养基，用时3min，期间用移液器枪头不停搅拌，再加入10ml 经过37℃预热的培养基，37℃孵育5min；
S304、200-400g离心5-10min，取细胞，弃上清，用选择性培养基230ml重悬细胞，铺10块96细胞细胞培养板，同常规方法培养细胞，第8天半量换液HT培养基，第10天后显微镜下画单克隆，第12～15天融合检测；
S4、融合检测：对免疫小鼠的血清做阳性对照，并使用酶标仪测定450nm/620nm处OD值，融合检测包括以下步骤：
S401、抗原包被：按照融合板或融合阳性细胞孔数量包板，确定抗原包被的浓度1ug/ml，100ul每孔加入96孔板，4℃过夜；
S402、封闭：弃上清，用PBST清洗三次，每孔加入300ul封闭液，37℃放置1h；
S403、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S404、加一抗：无菌取含有单克隆抗体的细胞上清100ul左右，加入包被板的孔中，用空白培养基做阴性对照，用免疫小鼠的血清做阳性对照，37℃温箱作用1h；
S405、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S406、加酶标二抗：取抗鼠的二抗，羊抗鼠或兔抗鼠IgG等，二抗的Ig类型基本可以确定要制备的单克隆抗体的Ig类型，按 1:5000到1:10000稀释，100ul每孔，37℃温箱作用1h；
S407、洗涤：用PBST洗涤3到5次，拍干；
S408、显色：加入TMB单组分底物溶液，100ul每孔，37℃温箱作用7～8min，阳性结果显示为蓝色；
S409、终止：加入30ul的2M的H2SO4终止，溶液变黄色，测定：用酶标仪测定450nm/620nm处OD值，实验孔大于2.1且数值不小于0.2判定为阳性；
S5、单克隆：选取20株阳性母细胞培养传代三次，选取OD值较大的细胞株制备抗体，单克隆过程包括以下步骤：
S501、将20株母克隆转移到24孔板培养，传代3次；
S502、第3代细胞培养至孔底40％～70％，检测上清ELISA效价及亚型鉴定；自主选取5株阳性细胞，各株冻存4支，同时收集上清，贴机打标签，106/支自主选取其中1株制备抗体。
本实施例中移液器具备可对使用位置进行固定的优点，解决了传统手持移液器在使用过程中不能够对搅拌的位置进行固定的缺点，具体包括支撑板001，支撑板001顶部的前后两侧均固定安装有固定板002，支撑板001的顶部且位于两个固定板002的内侧开设有放置槽003，放置槽003的内腔放置有培养板004，培养板004的顶部开设有固定孔005，固定板002内侧的顶部开设有与固定孔005 相对应的槽道006，槽道006的内腔卡接有拉板007，拉板007的表面开设有拉槽008，拉板007的下方设有移液器本体009，移液器本体009的顶部固定安装有螺纹杆010，拉板007的底部开设有与螺纹杆010相适配的螺纹孔011，螺纹杆010的顶部与螺纹孔011的内壁螺纹连接；
使用者在使用移液器本体009时，可以根据下方培养板004的规格安装相应数量的移液器本体009，通过螺纹孔011和螺纹杆010 的配合使用，可以方便对移液器本体009进行拆装，通过放置槽003 的设置，可以对培养板004的位置进行固定，通过拉板007的设置，可以对移液器本体009的位置进行调整，通过槽道006的设置，可以对拉板007的位置进行固定，通过固定孔005的设置，可以将离心管插入固定孔005的内腔，对其位置进行固定，通过拉槽008的设置，可以方便使用者拉动拉板007对移液器本体009的位置进行移动。
实施例2
一种新冠病毒检测用单抗，所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体2mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体1mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体2mg；细胞上清扩大培养，proteinG纯化的抗体2mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体1mg。
一种新冠病毒检测用单抗的制备方法，包括如下步骤：
S1、订购小鼠；
S2、小鼠免疫程序：注射两次抗原，并采用ELISA方法检测小鼠血清效价，免疫程序方案包括以下步骤：
S201、抗原配制方法：按照每只小鼠免疫约20ug，将抗原与 QuickAntibody-Mouse5W等体积混合；
S202、免疫前采集空白血清，小鼠通过剪脚指标记，抓住小鼠颈部皮肤将小鼠腹部朝上，剪右前趾为1号，左前趾为2号，右后趾为3号，左后趾为4号，5号为未剪脚趾，将小鼠固定于固定器内，用眼科剪在小鼠尾尖处剪断用EP管收取约20ul血用于分离血清，约3～5ul，手写标记，-20℃保存；
S203、初次免疫第0天：10-20ug蛋白抗原与 QuickAntibody-Mouse5W等体积混合，充分混匀后在小鼠后腿部肌肉注射，在初次免疫前应采集空白血清；
S204、第二次免疫第21天：等同初次免疫；
S205、效价检测第35天：采用ELISA方法检测小鼠血清效价，采用断趾标记法标记小鼠，将小鼠固定于固定器内，用眼科剪在小鼠尾尖处剪断用EP管收取约20ul血并分离血清用于检测ELISA效价；
效价检测的方法包括以下步骤：
S2051、抗原包被：确定抗原包被的浓度1ug/ml，100ul每孔加入96孔板，包被6条共72孔，4℃过夜或37℃温箱1h；
S2052、封闭：弃上清，用PBST清洗三次，每孔加入300ul封闭液，37℃放置1h；
S2053、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S2054、加一抗：从第二孔开始，每孔加入100ulPBS，取免疫后的小鼠血清做1：:65稀释，取200ul左右，加入包被板的第一孔中，从第一孔取100ul加入到第二孔，吹吸7次后吸取100ul加入到第三孔，依次稀释到第11孔，第12孔保留100ulPBS，第6行加入空白血清100ul做阴性对照，37℃温箱作用1h；
S2055、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S2056、加酶标二抗：取HRP羊抗鼠二抗按1:5000稀释，100ul 每孔，37℃温箱作用1h；
S2057、洗涤：用PBST洗涤3到5次，拍干；
S2058、显色：加入可溶型TMB单组分显色液，100ul每孔，37℃温箱作用7～8min，阳性结果显示为蓝色；
S2059、终止：加入30ul的2M的H2SO4终止，溶液变黄色，使用酶标仪读取OD450/620，以OD值大于0.2为阳性，空白血清的OD 值不高于0.1；
S3、融合：培养细胞，第8天半量换液HT培养基，第10天后显微镜下画单克隆，融合方法包括以下步骤：
S301、选取小鼠，将小鼠无痛处死，无菌分离脾脏，用滤网研磨后离心获取B细胞和红细胞，用10mlB细胞分离液裂解红细胞5 分钟，离心1000rpm，10分钟获取B细胞，分别将1×108小鼠脾细胞和2×107骨髓瘤细胞重悬于25ml无血清培养基中；
S302、200-400g离心5-10min，弃去上清，轻拍管底，充分打散沉淀，将离心管置于37℃水浴中保温至融合开始，将1ml经过37℃预热的50％PEG1450匀速加入上述离心管中，用1ml的移液器，用时1min，期间用移液器枪头不停搅拌，继续用枪头搅拌1-2分钟；
S303、往融合混合物中匀速加入1ml经过37℃预热的培养基，用时1min，期间用移液器枪头不停搅拌，再匀速加入3ml经过37℃预热的培养基，用时3min，期间用移液器枪头不停搅拌，再加入10ml 经过37℃预热的培养基，37℃孵育5min；
S304、200-400g离心5-10min，取细胞，弃上清，用选择性培养基230ml重悬细胞，铺10块96细胞细胞培养板，同常规方法培养细胞，第8天半量换液HT培养基，第10天后显微镜下画单克隆，第12～15天融合检测；
S4、融合检测：对免疫小鼠的血清做阳性对照，并使用酶标仪测定450nm/620nm处OD值，融合检测包括以下步骤：
S401、抗原包被：按照融合板或融合阳性细胞孔数量包板，确定抗原包被的浓度1ug/ml，100ul每孔加入96孔板，4℃过夜；
S402、封闭：弃上清，用PBST清洗三次，每孔加入300ul封闭液，37℃放置1h；
S403、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S404、加一抗：无菌取含有单克隆抗体的细胞上清100ul左右，加入包被板的孔中，用空白培养基做阴性对照，用免疫小鼠的血清做阳性对照，37℃温箱作用1h；
S405、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S406、加酶标二抗：取抗鼠的二抗，羊抗鼠或兔抗鼠IgG等，二抗的Ig类型基本可以确定要制备的单克隆抗体的Ig类型，按 1:5000到1:10000稀释，100ul每孔，37℃温箱作用1h；
S407、洗涤：用PBST洗涤3到5次，拍干；
S408、显色：加入TMB单组分底物溶液，100ul每孔，37℃温箱作用7～8min，阳性结果显示为蓝色；
S409、终止：加入30ul的2M的H2SO4终止，溶液变黄色，测定：用酶标仪测定450nm/620nm处OD值，实验孔大于2.1且数值不小于0.2判定为阳性；
S5、单克隆：选取20株阳性母细胞培养传代三次，选取OD值较大的细胞株制备抗体，单克隆过程包括以下步骤：
S501、将20株母克隆转移到24孔板培养，传代3次；
S502、第3代细胞培养至孔底40％～70％，检测上清ELISA效价及亚型鉴定；自主选取5株阳性细胞，各株冻存4支，同时收集上清，贴机打标签，106/支自主选取其中1株制备抗体。
本实施例中移液器具备可对使用位置进行固定的优点，解决了传统手持移液器在使用过程中不能够对搅拌的位置进行固定的缺点，具体包括支撑板001，支撑板001顶部的前后两侧均固定安装有固定板002，支撑板001的顶部且位于两个固定板002的内侧开设有放置槽003，放置槽003的内腔放置有培养板004，培养板004的顶部开设有固定孔005，固定板002内侧的顶部开设有与固定孔005 相对应的槽道006，槽道006的内腔卡接有拉板007，拉板007的表面开设有拉槽008，拉板007的下方设有移液器本体009，移液器本体009的顶部固定安装有螺纹杆010，拉板007的底部开设有与螺纹杆010相适配的螺纹孔011，螺纹杆010的顶部与螺纹孔011的内壁螺纹连接；
使用者在使用移液器本体009时，可以根据下方培养板004的规格安装相应数量的移液器本体009，通过螺纹孔011和螺纹杆010 的配合使用，可以方便对移液器本体009进行拆装，通过放置槽003 的设置，可以对培养板004的位置进行固定，通过拉板007的设置，可以对移液器本体009的位置进行调整，通过槽道006的设置，可以对拉板007的位置进行固定，通过固定孔005的设置，可以将离心管插入固定孔005的内腔，对其位置进行固定，通过拉槽008的设置，可以方便使用者拉动拉板007对移液器本体009的位置进行移动。
实施例3
一种新冠病毒检测用单抗，所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体1mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体0.5mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体1mg；细胞上清扩大培养，proteinG纯化的抗体1mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体0.5mg。
一种新冠病毒检测用单抗的制备方法，包括如下步骤：
S1、订购小鼠；
S2、小鼠免疫程序：注射两次抗原，并采用ELISA方法检测小鼠血清效价，免疫程序方案包括以下步骤：
S201、抗原配制方法：按照每只小鼠免疫约20ug，将抗原与 QuickAntibody-Mouse5W等体积混合；
S202、免疫前采集空白血清，小鼠通过剪脚指标记，抓住小鼠颈部皮肤将小鼠腹部朝上，剪右前趾为1号，左前趾为2号，右后趾为3号，左后趾为4号，5号为未剪脚趾，将小鼠固定于固定器内，用眼科剪在小鼠尾尖处剪断用EP管收取约20ul血用于分离血清，约3～5ul，手写标记，-20℃保存；
S203、初次免疫第0天：10-20ug蛋白抗原与 QuickAntibody-Mouse5W等体积混合，充分混匀后在小鼠后腿部肌肉注射，在初次免疫前应采集空白血清；
S204、第二次免疫第21天：等同初次免疫；
S205、效价检测第35天：采用ELISA方法检测小鼠血清效价，采用断趾标记法标记小鼠，将小鼠固定于固定器内，用眼科剪在小鼠尾尖处剪断用EP管收取约20ul血并分离血清用于检测ELISA效价；
效价检测的方法包括以下步骤：
S2051、抗原包被：确定抗原包被的浓度1ug/ml，100ul每孔加入96孔板，包被6条共72孔，4℃过夜或37℃温箱1h；
S2052、封闭：弃上清，用PBST清洗三次，每孔加入300ul封闭液，37℃放置1h；
S2053、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S2054、加一抗：从第二孔开始，每孔加入100ulPBS，取免疫后的小鼠血清做1：:65稀释，取200ul左右，加入包被板的第一孔中，从第一孔取100ul加入到第二孔，吹吸7次后吸取100ul加入到第三孔，依次稀释到第11孔，第12孔保留100ulPBS，第6行加入空白血清100ul做阴性对照，37℃温箱作用1h；
S2055、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S2056、加酶标二抗：取HRP羊抗鼠二抗按1:5000稀释，100ul 每孔，37℃温箱作用1h；
S2057、洗涤：用PBST洗涤3到5次，拍干；
S2058、显色：加入可溶型TMB单组分显色液，100ul每孔，37℃温箱作用7～8min，阳性结果显示为蓝色；
S2059、终止：加入30ul的2M的H2SO4终止，溶液变黄色，使用酶标仪读取OD450/620，以OD值大于0.2为阳性，空白血清的OD 值不高于0.1；
S3、融合：培养细胞，第8天半量换液HT培养基，第10天后显微镜下画单克隆，融合方法包括以下步骤：
S301、选取小鼠，将小鼠无痛处死，无菌分离脾脏，用滤网研磨后离心获取B细胞和红细胞，用10mlB细胞分离液裂解红细胞5 分钟，离心1000rpm，10分钟获取B细胞，分别将1×108小鼠脾细胞和2×107骨髓瘤细胞重悬于25ml无血清培养基中；
S302、200-400g离心5-10min，弃去上清，轻拍管底，充分打散沉淀，将离心管置于37℃水浴中保温至融合开始，将1ml经过37℃预热的50％PEG1450匀速加入上述离心管中，用1ml的移液器，用时1min，期间用移液器枪头不停搅拌，继续用枪头搅拌1-2分钟；
S303、往融合混合物中匀速加入1ml经过37℃预热的培养基，用时1min，期间用移液器枪头不停搅拌，再匀速加入3ml经过37℃预热的培养基，用时3min，期间用移液器枪头不停搅拌，再加入10ml 经过37℃预热的培养基，37℃孵育5min；
S304、200-400g离心5-10min，取细胞，弃上清，用选择性培养基230ml重悬细胞，铺10块96细胞细胞培养板，同常规方法培养细胞，第8天半量换液HT培养基，第10天后显微镜下画单克隆，第12～15天融合检测；
S4、融合检测：对免疫小鼠的血清做阳性对照，并使用酶标仪测定450nm/620nm处OD值，融合检测包括以下步骤：
S401、抗原包被：按照融合板或融合阳性细胞孔数量包板，确定抗原包被的浓度1ug/ml，100ul每孔加入96孔板，4℃过夜；
S402、封闭：弃上清，用PBST清洗三次，每孔加入300ul封闭液，37℃放置1h；
S403、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S404、加一抗：无菌取含有单克隆抗体的细胞上清100ul左右，加入包被板的孔中，用空白培养基做阴性对照，用免疫小鼠的血清做阳性对照，37℃温箱作用1h；
S405、洗涤：用PBST洗涤三次，拍干；
S406、加酶标二抗：取抗鼠的二抗，羊抗鼠或兔抗鼠IgG等，二抗的Ig类型基本可以确定要制备的单克隆抗体的Ig类型，按 1:5000到1:10000稀释，100ul每孔，37℃温箱作用1h；
S407、洗涤：用PBST洗涤3到5次，拍干；
S408、显色：加入TMB单组分底物溶液，100ul每孔，37℃温箱作用7～8min，阳性结果显示为蓝色；
S409、终止：加入30ul的2M的H2SO4终止，溶液变黄色，测定：用酶标仪测定450nm/620nm处OD值，实验孔大于2.1且数值不小于0.2判定为阳性；
S5、单克隆：选取20株阳性母细胞培养传代三次，选取OD值较大的细胞株制备抗体，单克隆过程包括以下步骤：
S501、将20株母克隆转移到24孔板培养，传代3次；
S502、第3代细胞培养至孔底40％～70％，检测上清ELISA效价及亚型鉴定；自主选取5株阳性细胞，各株冻存4支，同时收集上清，贴机打标签，106/支自主选取其中1株制备抗体。
本实施例中移液器具备可对使用位置进行固定的优点，解决了传统手持移液器在使用过程中不能够对搅拌的位置进行固定的缺点，具体包括支撑板001，支撑板001顶部的前后两侧均固定安装有固定板002，支撑板001的顶部且位于两个固定板002的内侧开设有放置槽003，放置槽003的内腔放置有培养板004，培养板004的顶部开设有固定孔005，固定板002内侧的顶部开设有与固定孔005 相对应的槽道006，槽道006的内腔卡接有拉板007，拉板007的表面开设有拉槽008，拉板007的下方设有移液器本体009，移液器本体009的顶部固定安装有螺纹杆010，拉板007的底部开设有与螺纹杆010相适配的螺纹孔011，螺纹杆010的顶部与螺纹孔011的内壁螺纹连接；
使用者在使用移液器本体009时，可以根据下方培养板004的规格安装相应数量的移液器本体009，通过螺纹孔011和螺纹杆010 的配合使用，可以方便对移液器本体009进行拆装，通过放置槽003 的设置，可以对培养板004的位置进行固定，通过拉板007的设置，可以对移液器本体009的位置进行调整，通过槽道006的设置，可以对拉板007的位置进行固定，通过固定孔005的设置，可以将离心管插入固定孔005的内腔，对其位置进行固定，通过拉槽008的设置，可以方便使用者拉动拉板007对移液器本体009的位置进行移动。
表1，根据实施例1-3实施时，其配方组成得出以下表格：
综上所述：本发明提供的一种新冠病毒检测用单抗，可以有效对新冠病毒进行检测，解决了核酸检测容易出现漏诊的问题，当核酸检测阴性时，将IgM和IgG抗体检测增加进去，可作为核酸诊断的补充手段，极大提高了新冠病毒检测的准确性。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
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