一种大环多肽化合物及其用途
阅读说明：本技术 一种大环多肽化合物及其用途 (Macrocyclic polypeptide compound and application thereof ) 是由 张哲峰 丁伟 侯雯 李海德 其他发明人请求不公开姓名 于 2021-06-18 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种大环多肽化合物及其用途,所述大环多肽化合物如式(I)所示,其中各基团的定义详见说明书；该化合物可用于制备PD1/PDL1抑制剂。(The invention discloses a macrocyclic polypeptide compound and application thereof, wherein the macrocyclic polypeptide compound is shown as a formula (I), and the definition of each group is detailed in the specification; the compound can be used for preparing PD1/PDL1 inhibitors.)
技术领域
本发明涉及但不限于药物化学技术领域，特别涉及一类大环多肽化合物 或其药学上可以接受的盐、酯、立体异构体或溶剂化合物及药物组合物，还涉 及在PD-1/PD-L1抑制剂药物中的用途。
背景技术
PD-1(程序性死亡受体1)，也称为CD279(分化簇279)，是一种重要的 免疫抑制分子，属于Ⅰ型跨膜蛋白，属免疫球蛋白超家族成员。PD-1含有膜 近端免疫受体酪氨酸抑制单元及膜远程基于酪氨酸的切换基元，通过向下调 节免疫系统对人体细胞的反应，以及通过抑制T细胞炎症活动来调节免疫系 统并促进自身耐受。PD-1主要表达于活化的CD4+T细胞、CD8+T细胞、B 细胞、NK细胞、单核细胞和树突状细胞等免疫细胞上，促进T细胞的成熟。 已鉴别的PD-1的两种配体：PD-L1及PD-L2。其中，PD-L1同是Ⅰ型跨膜蛋 白，主要表达于抗原提呈细胞、B细胞、T细胞、上皮细胞、肌细胞、内皮 细胞等。PD-L1配体在多种人类癌症中充足，PD-1与PD-L1之间的相互作用 导致肿瘤浸润性淋巴球减少、T细胞受体介导的增生减少、在癌症、妊娠、组 织移植以及自身免疫病中抑制免疫系统。
免疫机制可通过抑制PD-1与PD-L1的相互作用而逆转。已有证据表明， 干扰或阻断PD-1与PD-L1相互作用可减弱或消除免疫抑制。目前PD-1/PD- L1抑制剂的开发主要集中在单克隆抗体领域，已有Nivolumab, Lambrolizumab,Atezolizumab,Durvalumab,Avelumab等单抗在国内外上市， 可用于治疗非小细胞肺癌，黑色素瘤等常规治疗方法效果不佳的疾病具有明 显的治疗效果。与单抗研究开发相比，该领域的肽类抑制剂却进展缓慢。所以 研究开发抑制PD-1/PD-L1相互作用的抑制剂具有重要的临床意义。
本领域仍需要新型结构的多肽类抑制剂。
发明内容
以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制本申请的 保护范围。
本申请提供的大环多肽分子在生物化学及基于细胞的实验中证明具有阻 断PD-1与PD-L1相互作用的能力，是一类良好的PD-1/PD-L1抑制剂。
本发明涉及一类大环多肽化合物或其药学上可以接受的盐、酯、立体异构 体或溶剂化合物的PD-1/PD-L1抑制剂用于治疗恶性肿瘤。
本申请提供了通式(I)所示的大环多肽类化合物或其药学上可以接受的 盐、酯、立体异构体或溶剂化合物:
其特征在于：式(I)中，R’为1-甲基丙基或异丁基；
R为甲基或氢；
R0为基团E或被基团E取代的
X1和X2各自独立地选自氧、硫、氮；
R1和R2各自独立地选自氢、被基团C取代的C1-C6的烃基，当X1或X2为氧或硫时，R1和R2不存在；
R3和R4各自独立地选自：氢、C1-C6的烃氧基、硝基、腈基、羟基、羧 基、氨基、卤素、三氟甲基；
Y1、Y2、Y3和Y4中至多有一个为氮原子，其余均为碳原子；
Y5、Y6、Y7和Y8中至多有一个为氮原子，其余均为碳原子；
R5选自氢、基团D取代的C1-C6的烃基、基团F；
R6选自氢、基团D、被一个或者多个基团D取代的C1-C6的烃基；
R7选自氢、-CONH2、-CH2CONH2、基团F；
且R5与R7不同时为基团F。
R8选自氢、C5-C14的芳杂环、C5-C14的芳杂环取代的C1-C6的烃基；
Y9为C、O、或S；
n1为1或2；
R9为-CH2CONH2，或R9与旁边含氮杂环共同形成如的并环结 构；其中Y10为C或O；n2为1或2；
R10为氢或C1-C6的烃基；
片段A独立地选自下列结构片段：
片段B独立地选自：(式中表示与羰基相连，表示与氨基相连)；其中，R13、R14、R19和R23各自独立的选自：氢、C1-C6的烷基；
R11、R12、R15和R16各自独立地选自C1-C6的烃基，或R11与R12以碳链 相连形成含或不含烯键的8-16元环，或R12与R15以碳链相连形成含或不含烯 键的8-16元环，或R15与R16以碳链相连形成含或不含烯键的8-16元环；
R17、R18和R20各自独立地选自C1-C6的烃基；或R17与R18以碳链相连 形成含或不含烯键的8-16元环；
R21、R22和R24各自独立地选自C1-C6的烃基；或R21与R24以碳链相连 形成含或不含烯键的8-16元环；
所述基团C为下列基团中一种或多种：C1-C6的烃氧羰基、羧基、羟基、 氨基；
所述基团D为下列基团中一种或多种：羧基、羟基、氨基；
所述基团E为下列基团中一种或多种：氨基、羟基、C1-C6的烷氧基；
所述基团F为下列所示基团中一种，虚线处为连接键；
在本申请的实施方案中，本申请提供了如通式(II)的化合物：
式(II)中各个基团的定义如式(I)。
在本申请的实施方案中，本申请提供了如通式(III)的化合物：
式(III)中各个基团的定义如式(I)。
在本申请的实施方案中，所述C1-C6烃基表示1-6个碳原子的饱和或不 饱和的脂烃基，包含直链、支链或环状结构，例如包括但不限于：1-6个碳原 子的烷基，含不饱和键的1-6个碳原子的烃基；
在本申请的实施方案中，所述C1-C6烃氧基表示1-6个碳原子的饱和或 不饱和的脂烃基氧基，包括直链、支链或环状结构；
在本申请的实施方案中，所述C1-C6烃氧羰基表示羰基与C1-C6烃氧基 形成酯键，包括直链、支链或环状结构；
在本申请的实施方案中，所述C1-C6烷基表示1-6个碳原子的饱和的脂 烃基，包括直链、支链或环状结构，例如包括但不限于：甲基、乙基、丙基、 异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、环丙甲基、2-环丙基-乙基、环 丙基、环丁基、环戊基、环己基。
在本申请的实施方案中，所述1-6个碳原子的不饱和脂烃基，包括直链、 支链或环状结构，例如包括但不限于：例如包括但不限于：乙烯基、烯丙基、 1-丁烯-4-氧基、3-己炔-1-基、1-烯戊氧基、2-乙基-1-烯-丁基、(1-环戊烯)甲 基、环己烯-4-基；
在本申请的实施方案中，所述1-6个碳原子的饱和脂烃基氧基，包括直 链、支链或环状结构，例如包括但不限于：甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧 基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、环丙甲氧基、2-环丙基 -乙氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基、2-乙基丁氧基。
在本申请的实施方案中，所述1-6个碳原子的不饱和脂烃基氧基，包括直 链、支链或环状结构，例如包括但不限于：例如包括但不限于：乙烯氧基、烯 丙氧基、1-甲基-烯氧基、1-丁烯氧基、4-己炔-1-氧基、2-甲基-烯丙氧基、1-烯 戊氧基、2-乙基-1-烯-丁氧基、(1-环戊烯)甲氧基、环己烯-4-氧基；
在本申请的实施方案中，所述含或不含烯键的8-16元环指组成的环含有 8～16个原子，含有烯键的8-16元环指该环中至少有一个碳-碳双键；
在本申请的实施方案中，所述卤素指氟、氯、溴、碘；在一些具体的实施 方案中，优选地为氟、氯、溴；
在本申请的实施方案中，所述C5-C14的芳杂环表示含5-14个原子且至 少有一个杂原子的芳环结构，可以是单环、并环或联苯类芳杂环，包括但不限 于：噻吩、呋喃、咪唑、吡唑、噻唑、异噻唑、噁唑、异噁唑、三唑、噻二唑、 噁二唑、四唑、噻三唑、噁三唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、三嗪、四嗪、嘌 呤、苯并噁唑、苯并呋喃、苯并噻唑、苯并噻二唑、苯并三唑、苯并咪唑、吲 哚、(2-吡啶基)苯、(3-吡啶基)苯、(4-吡啶基)苯、5-苯基-2-吡啶。
在一些实施方案中，基团R’为1-甲基丙基；在一些实施方案中，基团R’ 为1-甲基丙基或异丁基；
在一些实施方案中，基团R为甲基；在一些实施方案中，基团R为氢；
在一些实施方案中，基团R0为羟基；在一些实施方案中，基团R0为氨基； 在一些实施方案中，基团R0为基团E取代的氨基酸残基；优选的，R0为氨基 取代的甘氨酸残基或丙氨酸残基；更优的，R0为氨基取代的甘氨酸残基。
在一些实施方案中，X1和X2均为氮；在一些实施方案中，X1和X2均为 硫；在一些实施方案中，X1为硫，X2为氮；在一些实施方案中，X1为硫，X2为氧；在一些实施方案中，X1为氮，X2为硫；在一些实施方案中，X1为氮， X2为氧；优选的，X1和X2均为氮。
在一些实施方案中，R1和R2均为H；在一些实施方案中，R1为羧基取代 的C1-C6的烷基，R2为H；
在一些实施方案中，R3和R4均为氢；在一些实施方案中，R3和R4可以 为下列基团中和一个或两个：C1-C6的烷氧基、硝基、腈基、羟基、羧基、氨 基、卤素、三氟甲基；
在一些实施方案中，Y1或Y4为氮原子；在一些实施方案中，Y1、Y2、Y3、 Y4均为碳原子；
在一些实施方案中，Y5或Y8为氮原子；在一些实施方案中，Y5、Y6、 Y7和Y8均为碳原子；
在一些实施方案中，R5为氢、、基团D取代的C1-C6的烃基、基团F； 优选地，R5为氢、基团F；
在一些实施方案中，R6选自羟基、氨基、或羧基；在一些实施方案中，R6选自羟基、氨基、或羧基取代下列基团：甲基、乙基、丙基；优选地，R6选自 羟基或羟基取代的C1-C3的烃基；
R7选自氢、-CONH2、-CH2CONH2、基团F；优选地，R7为氢、基团F。
在一些实施方案中，R8为氢；在一些实施方案中，R8为苯并咪唑、吲哚；
在一些实施方案中，Y9为C；在一些实施方案中，Y9为O；在一些实 施方案中，Y9为S；
在一些实施方案中，n1为1；在一些实施方案中，n1为2；
在一些实施方案中，R9为-CH2CONH2；在一些实施方案中，R9与旁边含 氮杂环共同形成如的并环结构；在一些更具体的实施方案中，Y2为 C、或O；n2为1；
在一些实施方案中，基团R10为氢；在一些实施方案中，基团R10为C1- C6的烷基；在一些具体的实施方案中，基团R10为甲基；
在一些实施方案中，片段B为：在一些实施方案中， 片段B为：在一些实施方案中，片段B为： (式中表示与羰基相连，表示与氨基相连)；
在一些实施方案中，R13、R14、R19和R23各自独立的选自：氢、甲基；
在一些实施方案中，R11、R12、R15和R16各自独立地选自:C1-C6的烷基、C1-C6的烯基、C1-C6的炔基；在一些实施方案中，R11与R12以碳链相连形 成含或不含烯键的8-16元环；在一些实施方案中，R12与R15以碳链相连形成 含或不含烯键的8-16元环；在一些实施方案中，R15与R16以碳链相连形成含 或不含烯键的8-16元环；
在一些实施方案中，R17、R18和R20各自独立地选自:C1-C6的烷基、C1- C6的烯基、C1-C6的炔基；在一些实施方案中，R17与R18以碳链相连形成 含或不含烯键的8-16元环；
在一些实施方案中，R21、R22和R24各自独立地选自：C1-C6的烷基、C1- C6的烯基、C1-C6的炔基；在一些实施方案中，R21与R24以碳链相连形成 含或不含烯键的8-16元环；
在一些实施方案中，基团C为C1-C6的烷氧羰基；在一些实施方案中， 基团C为羧基；
在一些实施方案中，基团D为羧基；在一些实施方案中，基团D为羟基； 在一些实施方案中，基团D为氨基；
在一些实施方案中，基团E为羧基；在一些实施方案中，基团E为羟基； 在一些实施方案中，基团E为氨基；
在一些实施方案中，基团F为
在一些实施方案中，基F为
在一些实施方案中，基团F为
在一些实施方案中，本发明提供的上述取代的大环多肽类化合物，选自下 列化合物中的一种：
另一方面，式(I)或式(II)中的化合物或其药学上可以接受的盐、酯、立 体异构体或溶剂化合物用于开发以PD-1/PD-L1为靶点的肽类抑制剂。
式(I)中的化合物或其药学上可以接受的盐、酯、立体异构体或溶剂化合物 用于预防和治疗肿瘤中的用途。
所述肿瘤包括血液癌症、神经系统癌症、胃肠癌、食道癌、泌尿系统癌症、 肺癌、肝癌和皮肤癌。
式(I)中的化合物或其药学上可以接受的盐、酯、立体异构体或溶剂化合物 用于在预防或治疗败血症及乙肝病毒的应用。
一种药物组合物，含有式(I)或式(II)的化合物或其药学上可接受的盐或 酯或溶剂化物，和药学上可接受的载体。
所述药物组合物为片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、糖浆剂、口服液或注射剂。
本申请的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明 书中变得显而易见，或者通过实施本申请而了解。本申请的其他优点可通过在 说明书中所描述的方案来实现和获得。
附图说明
图1为小鼠皮下荷瘤(结肠癌)试验趋势图。
图2为小鼠皮下荷瘤(乳腺癌)试验趋势图。
具体实施方式
为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下文中将对本发明的 实施例进行详细说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例 及实施例中的特征可以相互任意组合。
以下实施例可以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方 式限制本发明。
实施例1：
化合物1c的合成：
室温下，反应瓶中加入3.23g化合物1a、2.88g的EDCI、2.45g DMAP， 和1.97g化合物1b,体系加入35ml无水二氯甲烷，反应体系在55℃搅拌12小 时。体系降温，加入50mL水淬灭反应，用二氯甲烷萃取。有机相依次用1N 盐酸，饱和碳酸钠溶液、饱和食盐水洗涤。体系浓缩至干得到3.82g化合物1c 的粗品，无需要进一步纯化。
化合物1d的合成：
在0℃下，取25ml的3mol.L-1HCl/EtOAc加入到上一步反应的反应瓶 中，体系搅拌至反应完全。体系浓缩至干，用乙醚打浆过滤得到3.16g黄色固 体。
反应瓶中加入1g上述固体、0.83g碳酸钾，30ml的乙腈，体系降温至0℃， 加入0.35ml的2-氟苄溴。加毕，体系升温至65℃反应8小时。反应体系过滤。 滤液浓缩至干,过硅胶柱纯化得到0.92g化合物1d,收率90％，ESI-MS(+): m/z403.18[M+H]。
化合物1e的合成：
反应瓶中加入5g化合物1d,7.23g的Ni(NO3)2·6H2O、2.8g甘氨酸和40ml 甲醇，体系中加入氢氧化钾(3.48g)的甲醇(20ml)溶液，体系升温至65℃反 应1小时。体系降温至0℃，加入4.48g乙酸，体系在室温下搅拌1小时。加 水稀释，析出产品。粗品用acetone/Et2O＝1:6结晶，过滤得到5.9g化合物1e, 收率92％，ESI-MS(+):m/z516.12[M+H]。
化合物1f的合成：
氮气保护下，反应瓶中加入1g化合物1e，和30ml无水乙腈，体系降温 至0℃，加入0.31g氢氧化钠，搅拌10min，加入1.14g的5-碘戊烯。体系室 温下搅拌至反应完全；体系过滤、滤液浓缩，用正庚烷打浆、过滤得到2.15g 化合物1f，无需进一步纯化。收率88％，ESI-MS(+):m/z584.18[M+H]。
化合物1的合成:
反应瓶中加入2g化合物1f,和20ml的甲醇，体系升温至70℃，缓慢滴入 10ml 3M的盐酸，体系回流反应至完全；体系降温后，浓缩除去甲醇，加入二 氯甲烷多次萃取，有机相回收手性助剂。水相浓缩至干，加入6％的碳酸钠溶 液调节pH至9-10，加入1.15g的EDTA-2Na，搅拌约10分钟。体系降温至- 10℃，滴入芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺(1.27g)的乙腈(15ml)溶液，体系室温下搅 拌15小时。体系浓缩除去乙腈，水相调节pH至1～2，用乙酸乙酯萃取，有机 相洗涤后浓缩至干，过硅胶柱纯化得到0.813g化合物1，收率65％，ESI-MS(+): m/z366.17[M+H]。
化合物2的合成：
反应瓶中加入450mg的化合物1和10mL四氢呋喃，加入100mg的10％ Pd/C。体系45℃氢化反应8h。反应结束后，硅藻土助滤，滤饼用乙酸乙酯洗 涤2次。合并有机相，浓缩至干，经硅胶柱层析分离可得429mg化合物2,收 率95％，ESI-MS(+):m/z368.18[M+H]。
实施例2：
化合物2d的合成：
反应瓶中加入10g的化合物2a、8.22g三乙胺、和100ml四氢呋喃，体系 中加入12.2g氯甲酸异丁酯，体系室温反应1小时。14.42g化合物2b加入， 体系加热至80℃回流过夜；反应完全后，体系浓缩至干，加入甲醇200ml。体 系中依次加入30.49g甘氨酸、37.17g的6水合硝酸镍、DSC19.49g氢化钠、 13.67g氢氧化钾，体系回流2小时，降温至室温，用乙酸调节pH，析晶12小 时。体系过滤，用甲醇和水打浆，体系过滤后，即得产品2d，无需纯化，直 接投入下一步反应；
化合物2e的合成:
氮气保护下，反应瓶中加入3g化合物2d，和50ml无水乙腈，体系降温 至0℃，加入1.15g氢氧化钠，搅拌10min，加入3.53g的5-碘戊烯。体系室 温下搅拌至反应完全；体系过滤、滤液浓缩，用正庚烷打浆、过滤得到3.5g化 合物2e，无需进一步纯化。收率88％，ESI-MS(+):m/z353.17[M+H]。
化合物3的合成:
反应瓶中加入3g化合物2e,和30ml的甲醇，体系升温至70℃，缓慢滴入 15ml 3M的盐酸，体系回流反应至完全；体系降温后，浓缩除去甲醇，加入二 氯甲烷多次萃取，有机相回收手性助剂。水相浓缩至干，加入6％的碳酸钠溶 液调节pH至9-10，加入1.83g的EDTA-2Na，搅拌约10分钟。体系降温至- 10℃，滴入芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺(2.02g)的乙腈(20ml)溶液，体系室温下搅 拌15小时。体系浓缩除去乙腈，水相调节pH至1～2，用乙酸乙酯萃取，有机 相洗涤后浓缩至干，过硅胶柱纯化得到1.37g化合物3，收率58％，ESI-MS(+): m/z434.23[M+H]。
化合物4的合成:
反应瓶中加入1g化合物3,体系加入10mL无水二氯甲烷，和80mg的 Grubbs’2nd催化剂。该反应在氮气保护下，回流反应2天。反应结束后， 反应液用二氯甲烷稀释，依次用水、饱和食盐水洗涤，有机相浓缩至干，经硅 胶柱层析分离可得到710mg的化合物4,收率76％，ESI-MS(+):m/z406.21 [M+H]。
实施例3：
化合物3b的合成:
反应瓶中加入2g化合物3a，溶于甲苯(60mL)中，760mg多聚甲醛和 88mg对甲苯磺酸，体系接分水器加热至130℃，反应1h。反应结束后，体 系浓缩至干，加乙酸乙酯萃取，依次用饱和碳酸氢钠、水、饱和食盐水洗涤。 有机相浓缩至干，粗品经硅胶柱层析分离可得1.89g化合物3b,收率92％， ESI-MS(+):m/z406.21[M+H]。
化合物3c的合成:
反应瓶中加入1.6g化合物3b和30mL氯仿中，体系降温至0℃，加入三 异丙基硅烷3mL，缓慢滴加30mL三氟乙酸。体系在25℃下反应24h。体系 浓缩至干，加乙酸乙酯萃取，依次用饱和碳酸氢钠、水、饱和食盐水洗涤。有 机相浓缩至干，粗品经硅胶柱层析分离可得1.43g化合物3c,收率89％，ESI- MS(+):m/z408.22[M+H]。
化合物3f的合成:
反应瓶中加入1.3g化合物3c和5mL THF与5mL DMF的混合溶液， 加入477mg的N-羟基琥珀酰亚胺，体系降温至0℃。缓慢加入1.1g的1-乙基 -(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐。体系在25℃下反应24h。加乙酸乙 酯萃取，依次用饱和碳酸氢钠、水、饱和食盐水洗涤。有机相浓缩至干得到化 合物3d的粗品，无需纯化直接用于下一步反应。
将上一步得到的化合物3d溶于15mL丙酮中，反应体系降温至0℃，缓 慢加入573mg化合物3e的盐酸盐，体系中滴入15mL 10％的碳酸钠水溶液。 体系在25℃下反应24h。体系浓缩至干，加乙酸乙酯萃取，依次用饱和碳酸 氢钠、水、饱和食盐水洗涤。有机相浓缩至干，粗品经硅胶柱层析分离可得 1.46g化合物3f,收率86％，ESI-MS(+):m/z533.30[M+H]。
化合物5的合成：
反应瓶中加入1.3g化合物3f,体系加入10mL无水二氯甲烷，和85mg的 Grubbs’2nd催化剂。该反应在氮气保护下，回流反应2天。反应结束后， 反应液用二氯甲烷稀释，依次用水、饱和食盐水洗涤，有机相浓缩至干，经硅 胶柱层析分离可得到960mg的化合物5,收率78％，ESI-MS(+):m/z505.27 [M+H]。
化合物6的合成：
反应瓶中加入960mg的化合物5和15mL四氢呋喃，加入225.3mg的 10％Pd/C。体系45℃氢化反应8h。反应结束后，硅藻土助滤，滤饼用乙酸乙 酯洗涤2次。合并有机相，浓缩至干，经硅胶柱层析分离可得896mg化合物 6,收率93％，ESI-MS(+):m/z507.28[M+H]。
实施例4：
化合物4b的合成：
反应瓶中加入1.4ml化合物4a和20ml无水二氯甲烷，体系降温至10℃ 以下，缓慢滴加1ml氯磺酰异氰酸酯，体系在氮气保护下回流。反应结束后， 体系中加入10ml的10％亚硫酸钠和10ml的10％氢氧化钾水溶液，调节ph 至9。分出有相相，水洗后浓缩至干。体系过硅胶柱纯化得到1.2g化合物4b， 收率77％，ESI-MS(+):m/z154.12[M+H]。
化合物4c的合成：
反应瓶中加入1.1g化合物4b，231mg四丁基溴化铵，15mL四氢呋喃。 体系25℃下加入290mg氢氧化钠和1.12g碘甲烷。维持温度不变反应8小 时。反应结束后，调节pH至4，二氯甲烷萃取，有机相水洗后浓缩至干。体 系过硅胶柱纯化得到1.13g化合物4c，收率94％，ESI-MS(+):m/z168.13[M+H]。
化合物4d合成：
反应瓶中加入1g化合物4e，体系中加入15mL 6M盐酸中，体系在60℃ 下反应8小时。反应结束后，体系浓缩至干，二氯甲烷多次萃取，有机相水 洗后浓缩至干。体系过硅胶柱纯化得到720mg化合物4d，收率65％，ESI- MS(+):m/z186.14[M+H]。
化合物7的合成：
反应瓶中加入0.7g化合物4d,10mL 10％的碳酸钠和10mL丙酮的混合 液中，体系降温至0℃，加入1.17g的Fmoc-Cl。体系维持0℃反应1小时后， 升至室温反应5小时。调节pH至3，乙酸乙酯多次萃取，有机相水洗后浓缩 至干。体系过硅胶柱纯化得到1.37g化合物7，收率92％，ESI-MS(+): m/z394.2[M+H]。
实施例5：
化合物5b的合成：
反应瓶中加入3g化合物5a,3.74g碳酸铯和30mL DMF，体系降温至0℃， 加入3.78g的溴乙酸叔丁酯。体系缓慢升至室温反应5小时。体系加水，用乙 酸乙酯多次萃取，有机相水洗后浓缩至干。体系过硅胶柱纯化得到4.26g化合 物5b，收率85％，ESI-MS(+):m/z285.12[M+H]。
化合物5c的合成：
氮气保护下，反应瓶中加入4.73g的2-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-(二甲氧基 膦酰基)乙酸苄酯、1.78g DBU和25ml的二氯甲烷。体系室温下搅拌20分钟。 缓慢滴入化合物5b(3g)的二氯甲烷(25ml)溶液。体系室温下反应18小时。 体系浓缩至干，用乙酸乙酯溶解，饱和食盐水洗涤，有机相浓缩至干，过硅胶 柱纯化得到4.66g化合物5c，收率78％，ESI-MS(+):m/z566.22[M+H]。
化合物5d的合成：
反应瓶中加入3g化合物5c,20ml甲醇，和35mg的(+)-1,2-二((2S,5S)-2,5- 二乙基磷杂环戊-1-基)苯(环辛二烯)四氟硼酸酸铑(I)，体系在60psi的氢气 环境下还原。反应结束后，体系过硅藻土过滤，滤液浓缩至干，得到粗品，直 接用于下一步反应。
化合物5e的合成：
反应瓶中加入3g的化合物5d和25mL甲醇，加入0.6g的10％Pd/C。 体系40℃氢化反应12h。反应结束后，硅藻土助滤。有机相浓缩至干，经硅 胶柱层析分离可得1.6g化合物5e,收率92％，ESI-MS(+):m/z330.14[M+H]。
化合物8的合成：
反应瓶中加入1.5g化合物5e，15ml四氢呋喃和10ml水，搅拌状态下加 入1g碳酸氢钠，加入1.62g芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺，体系室温下搅拌15小 时。体系浓缩除去四氢呋喃，水相调节pH至干1～2，用乙酸乙酯萃取，有机 相洗涤后浓缩至干，过硅胶柱纯化得到2g化合物8，收率81％，ESI-MS(+): m/z566.22[M+H]。
实施例6：
化合物6b的合成：
反应瓶中加入3g化合物6a,3.59g的叔丁基N-(二苯基亚甲基)甘氨酸 酯,30ml无水四氢呋喃，2.13g碳酸铯。体系室温下反应至完全。体系浓缩至 干，加乙酸乙酯和水萃取，有机相浓缩至干，过硅胶柱纯化得到4.64g化合物 6b，收率74％，ESI-MS(+):m/z567.3[M+H]。
化合物6c/6d的合成：
反应瓶中加入3g化合物6b,0.6g 10％的钯炭,30ml乙醇和乙酸(9：1)的 混合溶液，体系在30psi氢气环境下氢化反应48小时。反应结束后，体系用 硅藻土助滤。滤液浓缩至干，加二氯甲烷和水萃取，有机相浓缩至干，过硅胶 柱纯化得到0.62g化合物6c(收率33％，ESI-MS(+):m/z355.22[M+H])和0.71g 化合物6d(收率38％，ESI-MS(+):m/z355.22[M+H])。
化合物9的合成：
反应瓶中加入0.5g化合物6c,10ml二氯甲烷，和6ml的三氟乙酸，滴入 0.2ml的三乙基硅烷。体系反应1小时。体系浓缩至干，加二氯甲烷和水萃取， 有机相浓缩至干。
体系加入9ml四氢呋喃和3ml水，搅拌状态下加入0.3g碳酸钠，加入 0.475g芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺，体系室温下搅拌15小时。体系浓缩除去四氢 呋喃，水相调节pH至1～2，用乙酸乙酯萃取，有机相洗涤后浓缩至干，过硅 胶柱纯化得到0.47g化合物9，收率79％，ESI-MS(+):m/z421.17[M+H]。
实施例7：
化合物7c的合成：
氮气保护下，反应瓶中加入5g化合物7a,40ml的无水四氢呋喃，体系降 温至-78℃，滴入DSC19ml丁基锂的己烷溶液(1.6M),体系低温下搅拌1小 时。体系中滴入15ml正己醛(2.75g)的四氢呋喃溶液，体系升温至室温反应8 小时。体系加入水淬灭反应，减压除去溶剂。加二氯甲烷和水萃取，有机相浓 缩至干，过硅胶柱纯化得到3.26g化合物7c,收率76％，ESI-MS(+): m/z157.12[M+H]。
化合物7e的合成：
反应瓶中加入3.38g化合物7d,30ml无水四氢呋喃，体系降温至0℃。加 入1.28g氢化钠，体系反应1小时后，加入2.5g化合物7c。体系升温至40℃ 至反应至完全。体系加水淬灭，浓缩至干，加乙酸乙酯和水萃取，有机相浓缩 至干，过硅胶柱纯化得到4.29g化合物7e，收率73％，ESI-MS(+): m/z368.25[M+H]。
化合物7f的合成：
反应瓶中加入4g化合物7e,40ml的无水四氢呋喃，体系降温至0℃，加 入1.85g碘甲烷和4.87g的KHMDS,体系低温下搅拌1小时。体系升温至室温 反应8小时。体系加入水淬灭反应，减压除去溶剂。加二氯甲烷和水萃取，有 机相浓缩至干，过硅胶柱纯化得到2.95g化合物7f,收率71％，ESI-MS(+): m/z382.27[M+H]。
化合物7g的合成：
反应瓶中加入2.8g化合物7f,0.4g 10％的钯炭,30ml甲醇，体系在室温下 氢化反应48小时。反应结束后，体系用硅藻土助滤，滤液浓缩至干，过硅胶 柱纯化得到1.33g化合物7g,收率96％，ESI-MS(+):m/z188.16[M+H]；
化合物10的合成：
反应瓶中加入1.25化合物7g的粗品，加入8ml的二和8ml的6N的盐 酸；体系加热至40℃反应5小时。体系降温，用乙酸乙酯和水萃取，有机相 浓缩至干，过硅胶柱纯化得到1.05g化合物10,收率91％，ESI-MS(+): m/z174.12[M+H]；
实施例8：
Fmoc-Gly-OH上载到Rink Amide-AM Resin树脂：
DCM(二氯甲烷)溶胀Rink Amide-AM Resin树脂，将Fmoc-Gly-OH溶 解在DMF溶液中，在缩合剂HBTU/DIEA或DIC/HOBt或PyBOP或其他类 似缩合剂作用下偶联到树脂上，洗涤树脂；
脱Fmoc保护：
20％Pip(哌啶)/DMF溶液脱Fmoc保护，DMF洗涤树脂；
Fmoc-N-Me-Cys(Trt)-OH偶联到肽树脂上：
加入Fmoc-N-Me-Cys(Trt)-OH的DMF溶液，在缩合剂HBTU/DIEA或 DIC/HOBt或PyBOP或其他类似缩合剂作用下偶联到树脂上，洗涤树脂；
氨基酸偶联：
按本发明分子结构的氨基酸顺序将Fmoc-Leu-OH,Fmoc-1-methyl-11-(methylamino)-12-oxoazacyclododecane-2-carboxylic acid，Fmoc-(1-(2-(tert-butoxy)-2-oxoethyl)-L-Trp-OH，Fmoc-Dab(Boc)-OH,Fmoc-Trp(Boc)-OH,Fmoc- tras-D-Hmp(tBu)-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-L-Dap(Boc)-OH,Fmoc-D-Pro-OH, Fmoc-D-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,氯乙酸
顺序依次偶联、脱保护循环直至偶联到肽树脂上(偶联参照前述“Fmoc- N-Me-Cys(Trt)-OH偶联到肽树脂”，脱Fmoc保护参照前述“脱Fmoc保护”)；
将肽链脱去Cys上的Mmt基团：
将树脂加入1％TFA(三氟乙酸)的DCM溶液，洗涤树脂；
将线性肽链在固相树脂环化形成环肽：
将树脂溶胀在DCM中，在三(2-羧乙基)膦(TCEP)和二异丙基乙胺 (DIEA)作用下线性肽成环。
切割树脂并脱去环肽上所有保护基团得到产物：
按体积比例(TFA:EDT:TIS:H2O＝95:2:2:1)配制裂解液，将环肽树脂加 入裂解液，反应脱除侧链。真空旋蒸除去TFA，将MTBE(甲基叔丁基醚) 加入浓缩液析出白色固体。收集析出物，反复洗涤后干燥；
色谱纯化：
采用C8或C18柱进行多步反相色谱纯化，最后转盐成某种酸的盐溶液 或游离型溶液，经冷冻干燥后得到粉末状混合物。ESI-MS(+):m/z 1870.91 [M+H],m/z 936.21[M+2H],m/z 624.44[M+3H]
实施例9：
Fmoc-Gly-OH上载到Rink Amide-AM Resin树脂：
DCM(二氯甲烷)溶胀Rink Amide-AM Resin树脂，将Fmoc-Gly-OH溶 解在DMF溶液中，在缩合剂HBTU/DIEA或DIC/HOBt或PyBOP或其他类 似缩合剂作用下偶联到树脂上，洗涤树脂；
脱Fmoc保护：
20％Pip(哌啶)/DMF溶液脱Fmoc保护，DMF洗涤树脂；
Fmoc-N-Me-Cys(Trt)-OH偶联到肽树脂上：
加入Fmoc-N-Me-Cys(Trt)-OH的DMF溶液，在缩合剂HBTU/DIEA或 DIC/HOBt或PyBOP或其他类似缩合剂作用下偶联到树脂上，洗涤树脂；
氨基酸偶联：
按本发明分子结构的氨基酸顺序将Fmoc-Leu-OH,Fmoc-2- (methylamino)hex-5-enoic acid，Fmoc-2-aminohex-5-enoic acid，Fmoc-(S)-2- amino-3-(1-(2-(tert-butoxy)-2-oxoethyl)-1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-3-yl)propanoic acid，Fmoc-Dab(Dde)-OH,Fmoc-(S)-2-amino-3-(1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-3- yl)propanoic acid,Fmoc-tras-D-Hmp(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-L-Dap(Boc)- OH,Fmoc-D-Pro-OH,Fmoc-D-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH, 氯乙酸。
顺序依次偶联、脱保护循环直至偶联到肽树脂上(偶联参照前述“Fmoc- N-Me-Cys(Trt)-OH偶联到肽树脂”步骤，脱Fmoc保护参照前述“脱Fmoc保 护”步骤)；
将肽链脱去Dab上的Dde基团：
采用3％水合肼/N,N-二甲基甲酰胺溶液脱去Dab上的Dde基团。
将保护的长脂肪侧链偶链到肽链
在缩合剂HBTU/DIEA作用下将保护的长脂肪侧链(见式SM-0)偶链到 肽链。
将肽链脱去Cys上的Mmt基团：
将树脂加入1％TFA(三氟乙酸)的DCM溶液，洗涤树脂；
将线性肽链在固相树脂环化形成环肽：
将树脂溶胀在DCM中，在三(2-羧乙基)膦(TCEP)和二异丙基乙胺 (DIEA)作用下线性肽成环。
切割树脂并脱去环肽及侧链上所有保护基团得到产物：
按体积比例(TFA:EDT:TIS:H2O＝95:2:2:1)配制裂解液，将环肽树脂加 入裂解液，反应脱除侧链。真空旋蒸除去TFA，将MTBE(甲基叔丁基醚) 加入浓缩液析出白色固体。收集析出物，反复洗涤后干燥；
色谱纯化：
采用C8或C18柱进行多步反相色谱纯化，最后转盐成某种酸的盐溶液， 经冷冻干燥后得到粉末状混合物。
按照与上述实施例同样的方法，使用市售化合物或氨基酸，或由市售化合 物适当合成的氨基酸，合成了下列实施例环肽化合物。
本申请描述了多个实施例，但是该描述是示例性的，而不是限制性的，并 且对于本领域的普通技术人员来说显而易见的是，在本申请所描述的实施例 包含的范围内可以有更多的实施例和实现方案。
实施例10：
与人PD-L1的结合的Elisa检测
96孔酶标板上铺板，PD-L1包被(Human PD-L1[28-8]SimpleStep Kit，货号ab214565)，保温37℃恒定孵育1.5小时。弃去孔内溶液，洗涤缓 冲液洗涤三次，加入含2％BSA的PBS溶液封闭1小时。再用洗涤缓冲液洗 涤3次后每孔加入生物素化的人源PD-L1抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和 素，保温37℃恒定孵育1.5小时，缓冲液洗涤三次，然后加入不同稀释倍数的 本发明化合物，保温37℃恒定孵育1.5小时，洗涤缓冲液洗涤三次，加入100 μl显色底物TMB溶液，室温反应30分钟后，以100μl 2M的盐酸溶液中止 反应并用酶标仪450nm处读取吸光度并计算OD值。每个化合物检测8-12个 浓度，采用Graphpad软件计算。
实施例11
小鼠皮下荷瘤(结肠癌)实验
30只Balb/c小鼠皮下接种小鼠结肠癌细胞CT-26，当肿瘤体积达到50～100 mm3时，小鼠随机分成6组，每组5只。第1组静脉注射生理盐水，作为空 白对照；第2-5组静脉注射本发明化合物的的生理盐水溶液(4mg.kg-1)每天 一次，作为化合物组；第3组腹腔注射鼠PD-L1单抗(克隆号10F.9G2)，剂 量为10mg.kg-1，每两天一次，作为阳性对照组。每天测量肿瘤的直径，体积 近似计算为v＝ab2/2。
结果如图1(小鼠皮下荷瘤(结肠癌)试验趋势图)所示,本发明化合物可以 显著抑制CT-26移植瘤的生长，并且期间小鼠体重不受影响。
实施例12小鼠皮下荷瘤(乳腺癌)实验
30只Nude裸鼠腋下处皮下接种人源乳腺癌细胞系SKBR-3，当肿瘤体积 达到50～100mm3时，小鼠随机分成6组，每组5只。第1组静脉注射生理盐 水，作为空白对照；第2-5组静脉注射本发明化合物的的生理盐水溶液(4mg.kg-1)每天一次，作为化合物组；第6组腹腔注射鼠PD-L1单抗(克隆号10F.9G2)， 剂量为10mg.kg-1，每两天一次，作为阳性对照组。每天测量肿瘤的直径，体 积近似计算为v＝ab2/2。结果如图2(小鼠皮下荷瘤(乳腺癌)趋势图)所示化合 物可以显著抑制移植瘤的生长，并且期间小鼠体重不受影响。
实施例13败血症动物模型试验
选择若干大白鼠采用经典的盲肠结扎穿孔(CLP)方法进行手术操作造模， 术前对大白鼠进行乙醚麻醉，备皮后无菌操作条件下在大白鼠腹中线偏右作 长约2-3cm的纵向切口，打开腹腔后分离并暴露肠管，找到盲肠游离末端约 0.5-1cm处结扎盲肠；然后在被结扎的盲肠中点处穿孔，务必穿通全层肠壁， 随后在已结扎盲肠远端注射1mL无菌生理盐水挤压出少量肠内容物；将肠管 等内脏全部还纳入腹腔，逐层缝合关闭腹腔并消毒切口。将术后小鼠放回已灭 菌鼠笼，任其自由采食。1天后将未死亡的大白鼠随机分为5组，每组数量至 少6只以上，1组为空白对照组(每天给注射用水2次)，3组为实验药物组 (DSC1923和DSC2016组每天给药2次，每次700mg/kg，DSC1939组每2 天给药1次，每次1g/kg)，1组为抗生素(头孢米诺)组(每天给药2次， 每次200mg/kg)，观察6周考察其存活率。空白对照组存活率为14.2％(1/7)， DSC1923组为62.5％(6/8)，DSC2016组为57.1％(4/7)，DSC1939组为57.1％(4/7)，抗生素(头孢米诺)组为87.5％(7/8)。该试验证明本发明化合物 针对大白鼠败血症有治疗作用，同时因其机理与抗生素显著不同并有抑制PD- 1和PD-L1作用理解为通过免疫系统发挥其独特药理作用。
实施例14慢性HBV小鼠模型试验
选4～6周龄Balb/c小鼠若干只，将HBV表达质粒(pCI-neo-attB-CMV- HB1.3)20μg混合到生理盐水，采用水动力转染方法通关小鼠尾静脉快速注 射(转染)到Balb/c小鼠中。采用实时荧光定量PCR检测小鼠血清中的病毒 DNA含量，当达到稳定平台期约104～105copies/ml时开始分组给药。将实验 小鼠随机分为5组，每组数量至少6只以上，1组为空白对照组(每天给注射 用水1次)，3组为实验药物组(DSC1914和DSC2027组每天给药1次，每次0.5mg/kg，DSC2041组每2天给药1次，每0.75mg/kg)，1组为恩替卡韦 组(每天给药1次，每次0.07mg/kg)，观察20天考察其病毒载量。通过PCR 检测小鼠血清中病毒DNA含量，空白对照组水平仍为104～105copies/ml， DSC1914、DSC2027和DSC2041组分别为103～104水平，恩替卡韦组为102～103水平。该试验证明本发明化合物针对慢性HBV有治疗作用，可能通过抑制PD- 1和PD-L1作用调节免疫系统发挥其独特药理作用。
本申请描述了多个实施例，但是该描述是示例性的，而不是限制性的，并 且对于本领域的普通技术人员来说显而易见的是，在本申请所描述的实施例 包含的范围内可以有更多的实施例和实现方案。
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