一种抗sar-cov-2抗体或其抗原结合片段及其应用
阅读说明：本技术 一种抗sar-cov-2抗体或其抗原结合片段及其应用 (anti-SAR-COV-2 antibody or antigen binding fragment thereof and application thereof ) 是由 万晓春 李俊鑫 何燕 于 2020-06-08 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种抗SAR-COV-2抗体或其抗原结合片段及其应用,具体公开了,其具有SEQ ID No：1-3所示的重链互补决定区,以及SEQ ID No：4-6所示的轻链互补决定区,或具有SEQ ID No：7-9所示的重链互补决定区,以及SEQ ID No：10-12所示的轻链互补决定区,或具有SEQ ID No：13-15所示的重链互补决定区,以及SEQ ID No：16-18所示的轻链互补决定区,或具有SEQ ID No：19-21所示的重链互补决定区,以及SEQ ID No：22-24所示的轻链互补决定区。本发明的抗体为人源化抗体,其副作用低,亲和力和特异性高。(The invention relates to an anti-SAR-COV-2 antibody or an antigen binding fragment thereof and application thereof, and particularly discloses an anti-SAR-COV-2 antibody or an antigen binding fragment thereof, which has the amino acid sequence shown in SEQ ID No: 1-3, and SEQ ID No: 4-6, or a light chain complementarity determining region having a sequence set forth in SEQ ID No: 7-9, and the heavy chain complementarity determining region of SEQ ID No: 10-12, or a light chain complementarity determining region having a sequence set forth in SEQ ID No: 13-15, and SEQ ID No: 16-18, or a light chain complementarity determining region having a sequence set forth in SEQ ID No: 19-21, and SEQ ID No: 22-24. The antibody of the present invention is a humanized antibody, and has low side effects and high affinity and specificity.)
技术领域
本发明属于免疫学抗体领域，具体地涉及抗SAR-COV-2(COVID-19)全人源单克隆抗体及其应用。
背景技术
在2018年全球十大畅销药中，有8个是全人源或人源化单克隆抗体药物。排名第一的是艾伯维公司治疗关节炎的抗TNFa单克隆抗体Humira，这是一个全人源单克隆抗体，已经是连续6年销售额100亿以上的药王。从1986年第一个单克隆抗体药物上市开始，单抗药物经历了鼠源单抗药物(如Orthoclone OKT3)、嵌合单抗药物(Rituximab)、人源化单抗药物(Herceptin)和全人源单抗药物(Humira)等阶段。由于人体出现抗鼠抗体反应(HAMA)，鼠源单抗药物、嵌合单抗药物已经逐渐被淘汰，目前占据市场的单克隆抗体药物全都是人源化单克隆抗体药物。与国际先进的人源抗体生产技术相比，深圳乃至全中国都有很大差距，主要表现在人源抗体药物领域的创新能力薄弱，自主研发的品种少，目前还没有原创人源化单克隆抗体药物上市的报道，庞大的抗体药物市场被国外药企占领。我国要改变落后局面，争夺消费潜力巨大的国内外抗体药物市场，亟需攻克全人源单克隆抗体技术。
人源单克隆抗体在治疗炎症、癌症、流行性感冒特别是冠状病毒感染等方面具有高特异性的显著疗效。COVID-19是由一种SAR-COV-2冠状病毒引起的急性呼吸道传染病,在2020年造成了全球大流行，严重威胁人类的生命财产。截止2020年05月22日，全球一共有5113375人感染SAR-COV-2，死亡330052人，至今仍然缺乏有效的药物和疫苗。新冠状病毒在入侵细胞时需要依赖病毒自身表达的特定分子刺突蛋白(Spike，S蛋白)与人细胞上的受体结合，才能感染细胞，并进一步扩增。中和病毒的人源抗体是人B淋巴细胞产生的某些特异抗体，能够与病毒表面的抗原结合，从而阻止该病毒黏附靶细胞受体，防止病毒侵入细胞，能够高效防治SAR-COV-2流行性感冒。但目前仍无有效的人源特异性抗体问世。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种抗SAR-COV-2的抗体或其抗原结合片段，其特异性中和SAR-COV-2。
本发明一方面提供一种分离的抗SAR-COV-2的抗体或其抗原结合片段，所述的抗体或其抗原结合片段特异性结合SAR-COV-2表面S蛋白；其具有如下任一组的三个重链互补决定区(HCDR)和三个轻链互补决定区(LCDR)：
1)9g8
HCDR1：GGSITTSSDY SEQ ID No：1；
HCDR2：IYYSGRT SEQ ID No：2；
HCDR3：ARRLTYYYDSSGYANWYFDL SEQ ID No：3；
LCDR1：QRFSTF SEQ ID No：4；
LCDR:2：AAS SEQ ID No：5；
LCDR3：QQSYSIPYS SEQ ID No：6；或者
2)6J19
HCDR1：GFTFSSYS SEQ ID No：7；
HCDR2：ISSSGTFI SEQ ID No：8；
HCDR3：ARERFVGVLDI SEQ ID No：9；
LCDR1：SSNIGRST SEQ ID No：10；
LCDR:2：SSY SEQ ID No：11；
LCDR3：AAWDDSLNGPV SEQ ID No：12；或者
3)7N13
HCDR1：GFTFSSYS SEQ ID No：13；
HCDR2：ISSSSSTM SEQ ID No：14；
HCDR3：ARGVGATGELFDY SEQ ID No：15；
LCDR1：QGIGNE SEQ ID No：16；
LCDR:2：AAS SEQ ID No：17；
LCDR3：LQDYNYPRT SEQ ID No：18；或者
4)8L19
HCDR1：GFTFSNYS SEQ ID No：19；
HCDR2：ISTTGTYT SEQ ID No：20；
HCDR3：ARPYYYGSGSPDY SEQ ID No：21；
LCDR1：QSISTF SEQ ID No：22；
LCDR:2：AAS SEQ ID No：23；
LCDR3：HQTYSKPWT SEQ ID No：24；或者
5)6M9
HCDR1：GFTFRNYD SEQ ID No：25；
HCDR2：ISGSGIDT SEQ ID No：26；
HCDR3：VRGLAGAFDY SEQ ID No：27；
LCDR1：QSVTSGY SEQ ID No：28；
LCDR:2：GTS SEQ ID No：29；
LCDR3：QQHRSSPMYS SEQ ID No：30。
本发明另一个方面提供了一种分离的抗SAR-COV-2的抗体或其抗原结合片段，其具有如下所示的重链可变区和轻链可变区；
1)9g8
重链可变区：
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITTSSDYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGRTYYNPSLKSRVTISVDTSKNDFSLKLSSVTAADTAVYYCARRLTYYYDSSGYANWYFDLWGRGTLVTVSS SEQ ID No：31
轻链可变区：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQRFSTFLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSIPYSFGQGTKLEIKR SEQ ID No：32；或者
2)6J19
重链可变区：
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMKWVRQAPGKGLEWVSTISSSGTFIKYADSLQGRFTITRDNAKTAVYLQMNSLRVEDTAVYYCARERFVGVLDIWGQGTMVTVSS SEQ ID No：33
轻链可变区：
QSVLTQPPSASGTPGERVTISCSGSSSNIGRSTVSWYQQLPGTAPKLLMYSSYQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVLG SEQ ID No：34；或者
3)7N13
重链可变区：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTMYYGDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARGVGATGELFDYWGQGTLVTASS SEQ ID No：35
轻链可变区：
AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRATQGIGNELGWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQDYNYPRTFGQGTKVEIKR SEQ ID No：36；或者
4)8L19
重链可变区：
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAVSGFTFSNYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISTTGTYTHYAGSVKGRFTISRDNAKNSLFLRMNSLRAEDTAVYYCARPYYYGSGSPDYWGQGTLVTVSS SEQ ID No：37
轻链可变区：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTFLNWYQQKPGKAPNLLIYAASSLQRGVPSRFTGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQTYSKPWTFGRGTKVEIER SEQ ID No：38；或者
5)6M9
重链可变区：
EVQLLESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFRNYDINWVRQAPGKGLEWVSSISGSGIDTYYGDSVEGRFTVSRDNAESSVLLEMNSLRADDTAVFYCVRGLAGAFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID No：39
轻链可变区：
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVTSGYLAWYQQKPGQAPRLLIHGTSRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHRSSPMYSFGQGSKLEIKR SEQ ID No：40。
在本发明的技术方案中，所述的抗体或其抗原结合片段为人源化抗体，更优选为全人源化抗体。
在本发明的技术方案中，所述的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体，优选为单克隆抗体。
在本发明的技术方案中，所述的抗体或其抗原结合片段特异性结合SAR-COV-2表面S蛋白。
本发明再一个方面提供了一种核苷酸序列，其编码如前述的抗体或其抗原结合片段。
本发明再一个方面提供了一种载体，包含前述的核苷酸序列。
本发明再一个方面提供了一种宿主细胞，包含前述载体或载体组，优选地，所述宿主细胞是原核的或真核的，更优选的选自酵母细胞、哺乳动物细胞或适用于制备抗体或其抗原结合片段的其它细胞。
本发明再一个方面提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含如前述的抗体或其抗原结合片段。
本发明再一个方面提供了一种检测试剂，所述检测试剂包含如前述的抗体或其抗原结合片段。
本发明再一个方面提供了上述抗体或其抗原结合片段作为检测试剂的用途，所述试剂用于以下用途的试剂：酶联免疫吸附检测(ELISA)、免疫印迹(Western Blot)、流式细胞术(FACS)、免疫组织化学(IHC)检测或者免疫PCR。
在上述在免疫学检测中，抗体或其抗原结合片段可单独或与通过化学键偶联，静电吸附或者亲疏水性吸附，而连接缀合物包括辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶(AP)，生物素(Biotin)，异硫氰酸荧光素(FITC)，Cy3、Cy5、磁珠和琼脂糖等缀合物连接。
在本发明的技术方案中，检测试剂可用于非诊断或治疗目的检测。
本发明再一个方面提供了一种药物组合物，其如前所述的分离的抗体或其抗原结合片段和药物上可接受辅料。
在本发明的技术方案中，其中所述抗体或其抗原结合片段阻断或降低SAR-COV-2的S蛋白与受试者的细胞表面受体结合，所述细胞表面受体优选为细胞血管紧张素转化酶相关性羧肽酶(ACE2)。
本发明再一个方面提供了一种抗SAR-COV-2的抗体或其抗原结合片段在制备预防、治疗或缓解SAR-COV-2感染的至少一种症状或适应症的药物中的用途。
在本发明的技术方案中，所述的药物为口服或注射制剂。
本发明再一个方面提供了一种预防、治疗或缓解SAR-COV-2感染的至少一种症状或适应症的方法，所述方法包括将前述任一项的抗体或其抗原结合片段或前述药物组合物施用于受试者。
在本发明的技术方案中，其中所述至少一种症状或适应症选自下组：肺部炎症、肺泡损伤、发热、咳嗽、呼吸困难、低血氧症、急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、凝血功能障碍、代谢性酸中毒、鼻塞、流涕、咽痛、腹泻、器官衰竭、败血性休克和死亡。
在本发明的技术方案中，其中所述药物组合物或所述抗体或其抗原结合片段与第二治疗剂组合施用。其中所述第二治疗剂选自下组：抗炎症药物(如皮质类固醇和非甾体抗炎症药物)、抗病毒药物、针对SAR-COV-2的S蛋白的不同的抗体、对于SAR-COV-2的疫苗、抗生素、膳食补充剂如抗氧化剂和治疗SAR-COV-2感染的任何其他姑息疗法、缓解上述症状或适应症的药物。
在本发明的技术方案中，其中所述药物组合物或所述抗体或其抗原结合片段通过皮下、静脉内、皮内、腹膜内、口服、肌内或颅内施用。
有益效果
(1)本发明所述抗SAR-COV-2抗体可以靶向结合SAR-COV-2病毒的S蛋白，特异性高，能有效阻断SAR-COV-2病毒表面S蛋白与受试者细胞表面受体的结合。
(2)相比鼠源抗体，本发明全人源抗体的基因完全来源于人的基因，没有其他种属的成分，在人体内不发生抗鼠抗抗体等毒副作用，具有更好的生物相容性，更适合和更有潜力成为治疗流感病毒的大分子药物。
(3)相较于现有技术提供的噬菌体展示技术制备抗SAR-COV-2病毒人源单克隆抗体的方法，本发明采用的单个B细胞开发抗SAR-COV-2病毒的抗体具有操作简单快捷，生产的人源抗体具有高亲和力和特异性等优点。
附图说明
图1为实施例1NTH-3T3表达CD40L的流式检测结果图。
图2为实施例1流式细胞仪分选记忆B细胞结果图。
图3为实施例1ELISA实验结果图。
图4为实施例2琼脂糖凝胶电泳结果图。
具体实施方式
为了对本申请的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现结合具体实施例对本申请的技术方案进行以下详细说明，应理解这些实例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围。实施例中，各原始试剂材料均可商购获得，未注明具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件，或按照仪器制造商所建议的条件。
如本文所用，术语“抗体”是指包含至少一个抗原结合位点的分子，所述抗原结合位点免疫特异性地结合至特定的目标抗原靶标。因此，术语“抗体”包括但不限于全长抗体和/或其变体，其片段，肽体及其变体，单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、由至少两个完整的抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体和模拟抗体的结构和/或功能的抗体模拟物或其指定片段或部分，包括单链抗体及其片段。抗体与靶标的结合可引起多种作用，例如但不限于这种结合在体外、原位和/或体内调节、减少、增加、拮抗、激动、减轻、减缓、阻断、抑制、消除和/或干扰至少一种靶标活性或结合，或受体活性或结合。因此，本公开的抗体涵盖能够结合生物分子(例如抗原或受体)或其部分的抗体片段，包括但不限于Fab、Fab'和F(ab')2、pFc'、Fd、单结构域抗体(sdAb)、可变片段(Fv)、单链可变片段(scFv)或二硫化物连接的Fv(sdFv)；双功能抗体或二价双功能抗体；线性抗体；单链抗体分子；由抗体片段形成的多特异性抗体。抗体可以是任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)，类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指得自一群基本上同种的抗体的抗体，即除了可能存在少量可能天然发生的突变之外，构成群体的各个抗体是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单个抗原位点。此外，与包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物相反，每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除了其特异性之外，单克隆抗体的优点还在于其可以未污染其它抗体而合成。修饰语“单克隆”不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。
如本文所用，术语HCDR与重链互补决定区含义相同，LCDR与轻链互补决定区含义相同。
如本文所用，单克隆抗体包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而所述链剩余的与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，且这些抗体的片段，表现出所需的生物活性。
如本文所用，术语“SAR-COV-2”也称作“新型冠状病毒”，指新发生的引起新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的病毒。
如本文所用，S蛋白指冠状病毒上的刺突蛋白(Spike protein)，SARS-CoV-2通过病毒表面的刺突蛋白识别人体内细胞表面的ACE2并侵染宿主细胞。通过阻断冠状病毒SARS-CoV-2表面的S蛋白可以有效抑制病毒黏附靶细胞受体，防止病毒侵入细胞。
如本文使用的术语"人源化抗体"包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区的抗体。本发明的人人源化抗体可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如由随机或体外位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。
如本文使用的术语抗"抗原结合片段"等包括任何天然存在的、酶学可获得的、合成的或基因工程的特异性结合抗原以形成复合物的多肽或糖蛋白。如本文使用的术语抗体的"抗原结合片段"与SAR-COV-2的S蛋白具有结合能力的一个或多个片段。
一方面，本发明提供一种分离的抗SAR-COV-2的抗体或其抗原结合片段，所述的抗体或其抗原结合片段特异性结合SAR-COV-2表面S蛋白；其具有如下任一组的三个重链互补决定区(HCDR)和三个轻链互补决定区(LCDR)：
1)9g8
HCDR1：GGSITTSSDY SEQ ID No：1；
HCDR2：IYYSGRT SEQ ID No：2；
HCDR3：ARRLTYYYDSSGYANWYFDL SEQ ID No：3；
LCDR1：QRFSTF SEQ ID No：4；
LCDR:2：AAS SEQ ID No：5；
LCDR3：QQSYSIPYS SEQ ID No：6；或者
2)6J19
HCDR1：GFTFSSYS SEQ ID No：7；
HCDR2：ISSSGTFI SEQ ID No：8；
HCDR3：ARERFVGVLDI SEQ ID No：9；
LCDR1：SSNIGRST SEQ ID No：10；
LCDR:2：SSY SEQ ID No：11；
LCDR3：AAWDDSLNGPV SEQ ID No：12；或者
3)7N13
HCDR1：GFTFSSYS SEQ ID No：13；
HCDR2：ISSSSSTM SEQ ID No：14；
HCDR3：ARGVGATGELFDY SEQ ID No：15；
LCDR1：QGIGNE SEQ ID No：16；
LCDR:2：AAS SEQ ID No：17；
LCDR3：LQDYNYPRT SEQ ID No：18；或者
4)8L19
HCDR1：GFTFSNYS SEQ ID No：19；
HCDR2：ISTTGTYT SEQ ID No：20；
HCDR3：ARPYYYGSGSPDY SEQ ID No：21；
LCDR1：QSISTF SEQ ID No：22；
LCDR:2：AAS SEQ ID No：23；
LCDR3：HQTYSKPWT SEQ ID No：24；或者
5)6M9
HCDR1：GFTFRNYD SEQ ID No：25；
HCDR2：ISGSGIDT SEQ ID No：26；
HCDR3：VRGLAGAFDY SEQ ID No：27；
LCDR1：QSVTSGY SEQ ID No：28；
LCDR:2：GTS SEQ ID No：29；
LCDR3：QQHRSSPMYS SEQ ID No：30。
另一个方面提供了一种分离的抗SAR-COV-2的抗体或其抗原结合片段，其具有如下所示的重链可变区和轻链可变区；
1)9g8
重链可变区：
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITTSSDYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGRTYYNPSLKSRVTISVDTSKNDFSLKLSSVTAADTAVYYCARRLTYYYDSSGYANWYFDLWGRGTLVTVSS SEQ ID No：31
轻链可变区：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQRFSTFLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSIPYSFGQGTKLEIKR SEQ ID No：32；或者
2)6J19
重链可变区：
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMKWVRQAPGKGLEWVSTISSSGTFIKYADSLQGRFTITRDNAKTAVYLQMNSLRVEDTAVYYCARERFVGVLDIWGQGTMVTVSS SEQ ID No：33
轻链可变区：
QSVLTQPPSASGTPGERVTISCSGSSSNIGRSTVSWYQQLPGTAPKLLMYSSYQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVLG SEQ ID No：34；或者
3)7N13
重链可变区：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTMYYGDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARGVGATGELFDYWGQGTLVTASS SEQ ID No：35
轻链可变区：
AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRATQGIGNELGWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQDYNYPRTFGQGTKVEIKR SEQ ID No：36；或者
4)8L19
重链可变区：
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAVSGFTFSNYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISTTGTYTHYAGSVKGRFTISRDNAKNSLFLRMNSLRAEDTAVYYCARPYYYGSGSPDYWGQGTLVTVSS SEQ ID No：37
轻链可变区：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTFLNWYQQKPGKAPNLLIYAASSLQRGVPSRFTGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQTYSKPWTFGRGTKVEIER SEQ ID No：38；或者
5)6M9
重链可变区：
EVQLLESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFRNYDINWVRQAPGKGLEWVSSISGSGIDTYYGDSVEGRFTVSRDNAESSVLLEMNSLRADDTAVFYCVRGLAGAFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID No：39
轻链可变区：
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVTSGYLAWYQQKPGQAPRLLIHGTSRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHRSSPMYSFGQGSKLEIKR SEQ ID No：40。
在一些实施方式中，所述的抗体为人源化抗体，在一些具体的实施例中，优选为全人源化抗体。
在一些实施方式中，所述的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体，优选为单克隆抗体。
在一些实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段特异性结合SAR-COV-2表面S蛋白。
在一些实施方式中，该抗体的重链可变区或轻链可变区的氨基酸序列可为经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。
在一些实施方式中，经ELISA实验验证，本发明所述抗SAR-COV-2抗体或抗原结合片段可以靶向结合SAR-COV-2病毒的S蛋白。本申请所述抗体为全人源性单克隆抗体，相比鼠源抗体，全人源抗体的基因完全来源于人的基因，没有其他种属的成分，在人体内不发生抗鼠抗抗体等毒副作用，具有更好的生物相容性，更适合和更有潜力成为治疗流感病毒的大分子药物。
另一方面，本申请提供编码本申请所述的抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体的基因。在一些实施方式中，所述基因包含编码具有上述所示的氨基酸的核苷酸序列。
在一些具体实施方式中，该核苷酸序列如下所示(以下序列仅为示例性，本领域技术人员根据具体的氨基酸序列，可以设计其他可以翻译为所需氨基酸序列的核苷酸序列)：
1)9g8
编码重链可变区的核苷酸序列为：
gtctctggtggctctatcaccactagtagtgactactggggctggatccgccagcccccagggaaggggctggagtggattgggagtatctattatagtgggagaacctactacaacccgtccctcaagagtcgagtcaccatatccgtagacacgtccaagaacgacttctctctgaagctgagctctgtgaccgccgcagacacggctgtgtattactgtgcgagacgccttacgtattactatgatagtagtggttatgcgaactggtacttcgatctctggggccgtggcaccctggtcactgtctcctca；SEQ ID No：41
编码轻链可变区的核苷酸序列为：
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagaggttcagcacctttttaaattggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcacgatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagttacagtatcccgtactcttttggccaggggaccaagctggagatcaaacga SEQ ID No：42
2)6J19
编码重链可变区的序列为：
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggccTggtcaAgcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtagttatagtatgaagtgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccatcagtagtagtggtactttcataaagtatgcagactcactgcagggccgattcaccatcaccagagacaacgccaagaccgcagtgtatctgcaaatgaacagcctgagagtcgaggacacggctgtttattactgtgcgagagaacgattcgttggtgttttggatatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttca；SEQ ID No：43
编码轻链可变区的核苷酸序列为：
Cagtctgtgctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccggggagagggtcaccatctcttgttctggaagcagctccaacatcggaaggagtactgtaagctggtaccagcagctcccaggaacggcccccaaactcctcatgtatagtagttatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccagtctgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatgacagcctgaatggtccggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt SEQ ID No：44
3)7N13
编码重链可变区的核苷酸序列为：
GaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttgGtacagcCTGgggggTCcctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtagttatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtttcatatattagtagtagtagtagtaccatgtactacggagactctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagacgaggacacggctgtgtattactgtgcgagaggagtgggagccacgggggaactctttgactactggggccagggaaccctggtcaccgcctcctca：SEQ ID No：45
编码轻链可变区的核苷酸序列为：
gccaTccagatgacccaGTCtccatCctccctgtctgcatCtgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaactcagggaattggaaatgaattagggtggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatccagtttacaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatTttgcaacttattactgtctacaagattacaattaccctcgtacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaacga SEQ ID No：46
4)8L19
编码重链可变区的核苷酸序列为：
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggccTggtcaAgcctggggggtccctgagactctcctgtgcagtctctggattcaccttcagtaactatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtactactggtacttacacacactacgccggctcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaactcgctgtttttgcgaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgaggccctattactatggttcggggagtcctgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca SEQ IDNo：47
编码轻链可变区的核苷酸序列为：
gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcacctttttgaattggtatcagcagaagcccgggaaagcccctaatctcctgatctatgctgcatccagtttgcaacgtggggtcccatcaaggttcactggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaccagacttacagtaagccctggacgttcggccgagggaccaaggtggaaatcgaacga SEQ ID No：48
5)6M9
编码重链可变区的核苷酸序列为：
Gaggtgcagctgttggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcaggaactatgacatcaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatcgattagtggtagtggtattgacacatactacggagactcagtggagggccgattcaccgtctccagagacaacgccgagagctcagtattactggagatgaacagcctgagagccgacgatacggctgtattttactgtgtgaggggtctggctggcgcctttgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca SEQ ID No：49
编码轻链可变区的核苷酸序列为：
GaaattGtGttgacGcagTCtccagGcAccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttaccagcggctacttagcctggtaccagcagaaacctggccaggctcccaggctcctcatccatggtacatccaggagggccactggcatcccagacaggttcagtggcagtgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagactggagcctgaagattttgcagtctattactgtcagcagcatcgtagctcacccatgtacagttttggccaggggagcaagctggagatcaaacga SEQ ID No：50
另一方面，本发明提供含如上所述核苷酸序列的载体。
再一方面，本申请提供含如上所述核苷酸序列或如上所述载体的细胞。
再一方面，本申请提供一种产生所述抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合SAR-COV-2的生物活性片段的方法，该方法包括培养含编码抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体的重轻链的上述基因或上述载体的基因工程细胞或直接培养上述细胞，收集，纯化得所述抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体。
现有技术中存在采用噬菌体展示技术制备抗SAR-COV-2病毒人源单克隆抗体的方法，尽管该方法具有生产成本低、不经过免疫和细胞融合等繁琐工作的优点，但是其缺点也比较明显，从非免疫抗体库中获得的抗体往往亲和力不足、受外源基因转化率的限制、抗体库的库容量不足以涵盖动物的抗体多样性等。所以本发明提供了一种抗体的筛选方法，其从病人的血液中分离分泌功能抗体的B细胞，然后提取RNA和合成cDNA，从中克隆分泌目的抗体的基因，最后重组和表达全人源单克隆抗体。该技术操作简单快捷，生产的人源抗体具有高亲和力和特异性，此外，可进一步采用改进的从记忆B细胞中分离具有中和病毒功能或杀伤肿瘤功能的本申请所述单克隆抗体技术，更是大大减少了繁琐操作和成本。
另一方面，本申请提供一种药物组合物，其包含本申请所述的抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合SAR-COV-2的生物活性片段。
另一方面，本申请提供所述的抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合SAR-COV-2的生物活性片段或所述的药物组合物在制备用于治疗由SAR-COV-2病毒引起的疾病的药物中的应用。
另一方面，本申请提供一种检测SAR-COV-2病毒水平的试剂盒，其含有本申请所述的抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合SAR-COV-2的生物活性片段；在一些实施方式中，所述的试剂盒还含有第二抗体和用于检测的酶或荧光或放射标记物，以及缓冲液；所述第二抗体例如为抗本申请所述单克隆抗体的抗抗体。
实施例1
(1)构建稳定表达CD40L的NTH-3T3细胞系(3T3-CD40L)
利用慢病毒建立3T3-CD40L饲养细胞。构建慢病毒表达载体pLVX-CD40L，转染293T细胞，转染第四天收集病毒上清液。活化NIH-3T3细胞，培养3代后用慢病毒感染，继续培养并传代3次。利用流式细胞仪进行分选FITC荧光强度在MFI附近的细胞，重新加入至培养瓶中，37℃，5％CO2培养箱中培养和检测，检测结果如图1所示，其是将表达CD40L的3T3细胞和空载体pLVX(带有ZxGreen)转染的3T3细胞分别用带有APC的抗CD40L染色，然后上流式细胞仪分析。结果发现，所有3T3-CD40L饲养细胞都表达CD40L。当细胞长到80％～90％时，消化收集细胞，浓度为每毫升1×107细胞。置于辐射仪中进行5000rads辐射，冻存液重悬细胞，浓度为每毫升3.5×107细胞，分装1ml在冷冻小管，液氮冻存(可以保存2年)。
(2)记忆B细胞的分选和活化
用淋巴分离液分离和冻存曾经感染SAR-COV-2病毒的康复病人的外周血单个核细胞(PBMC)，每管10～50×106细胞，冻存在液氮罐中。配制PBMC流式染色液，其成分如下表1所示
表1 PBMC流式染色液
抗体
体积(μL)
CD19-PE-Cy7
0.5
IgM-PE
1.0
IgA-APC
2.5
IgD-FITC
2.5
PBS-1％(wt/vol)BSA
43.5
解冻PBMC，加入上述PBMC流式染色液并在流式细胞仪上分选，结果如图2所示，分选出CD19+IgM–IgA–IgD–的记忆B细胞，细胞纯度需在90％以上，若低于90％，重复分选过程。配制激活B细胞的混合培养基，如下表2所示：
表2
组分
体积
完全IMDM培养基
336mL
IL-2(10,000U mL<sup>-1</sup>)
3.5mL
IL-21(100μg mL<sup>-1</sup>)
175μL
步骤(1)中得到的3T3-CD40L
10mL
将记忆B细胞加入到混合培养基中，混匀后有限稀释在384孔板，每孔1个细胞，体积为50μl，置于37℃，5％CO2培养箱中静置培养。13天后，取上清液获得人源单克隆抗体9g8、6J19、7N13、8L19和6M9。
(3)人源单克隆抗体结合SAR-COV-2病毒的表面抗原S蛋白实验
SAR-COV-2病毒的表面抗原S蛋白购自义翘神州公司，具有免疫原性，抗S蛋白抗体可用于检测和治疗SAR-COV-2冠状病毒。对上述获得的5种人源单克隆抗体6J19、7N13、8L19和6M9进行ELISA实验，具体地：
(1)将100ng/100μl的SAR-COV-2病毒的HA蛋白包被在96孔酶标板中，每孔100μl；
(2)放置4℃冰箱过夜；
(3)用PBST溶液洗涤三遍，每孔加5％的脱脂奶粉溶液200μl，37℃孵育1小时；
(4)用PBST溶液洗涤三遍，加100μl没有感染病毒的正常人血清(阴性对照)或上清液，各三个重复；
(5)37℃孵育1小时后用PBST溶液洗涤三遍；
(6)以1:5000稀释带HRP的抗人IgG抗体(abcam)，加入酶标版中，每孔100μl；
(7)37℃孵育1小时后用PBST溶液洗涤三遍；
(8)每孔加100μl TMB底物溶液(Thermo Scientific)，37℃5分钟；
(9)每孔加终止溶液2M硫酸100μl，立刻在酶标仪中450nm波长检测吸光值。其结果如图3所示，ELISA实验表明本发明获得的人源单克隆抗体6J19、7N13、8L19和6M9均可以靶向结合SAR-COV-2病毒的S蛋白。
实施例2人源化单克隆抗体基因的克隆
将实施例1获得的能够分泌结合SAR-COV-2病毒的抗体的B细胞进行裂解，取裂解液进行RNA的反转录，获得人源抗体基因的PCR模板cDNA。设计和合成克隆抗体基因的引物，以cDNA为模板克隆抗体的重链和轻链的基因，并且送金唯智公司测序。具体地：
(1)将裂解后的B细胞液转移至96孔板(Eppendorf，030133366)。
(2)反转录体系：150ng随机引物(invitrogen,48190-011),0.5μl 10mM dNTP(Invitrogen,18427-088),1μl 0.1M DTT(Invitrogen,18080-044),0.5％v/v Igepal CA-630(Sigma,I3021-50ML),4U RNAsin(Promega),6U Prime RNAse Inhibitor(Eppendorf)and 50UIII reverse transcriptase(Invitrogen,18080-044)，补DEPC水至14μl/well。
(3)反转录反应程序：42℃，10min；25℃，10min；50℃，60min；94℃，5min。
(4)cDNA保存在-20℃。
(5)引物的设计和合成:
正向引物5′-3′序列(Forward Primer 5′-3′sequence)
重链可变区PCR引物:
5′VH1 CTGCAACCGGTGTACATTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAG(SEQ ID NO:51)
5′VH1/5 CTGCAACCGGTGTACATTCCGAGGTGCAGCTGGTGCAG(SEQ ID NO:52)
5′VH3 CTGCAACCGGTGTACATTCTGAGGTGCAGCTGGTGGAG(SEQ ID NO:53)
5′VH3-23 CTGCAACCGGTGTACATTCTGAGGTGCAGCTGTTGGAG(SEQ ID NO:54)
5′VH4 CTGCAACCGGTGTACATTCCCAGGTGCAGCTGCAGGAG(SEQ ID NO:55)
5′VH 4-34CTGCAACCGGTGTACATTCCCAGGTGCAGCTACAGCAGTG(SEQ ID NO:56)
5′VH 1-18 CTGCAACCGGTGTACATTCCCAGGTTCAGCTGGTGCAG(SEQ ID NO:57)
5′VH 1-24 CTGCAACCGGTGTACATTCCCAGGTCCAGCTGGTACAG(SEQ ID NO:58)
5′VH3-33 CTGCAACCGGTGTACATTCTCAGGTGCAGCTGGTGGAG(SEQ ID NO:59)
5′VH 3-9 CTGCAACCGGTGTACATTCTGAAGTGCAGCTGGTGGAG(SEQ ID NO:60)
5′VH4-39 CTGCAACCGGTGTACATTCCCAGCTGCAGCTGCAGGAG(SEQ ID NO:61)
5′VH 6-1 CTGCAACCGGTGTACATTCCCAGGTACAGCTGCAGCAG(SEQ ID NO:62)
3′JH 1/2/4/5 TGCGAAGTCGACGCTGAGGAGACGGTGACCAG(SEQ ID NO:63)
3′JH 3 TGCGAAGTCGACGCTGAAGAGACGGTGACCATTG(SEQ ID NO:64)
3′JH 6 TGCGAAGTCGACGCTGAGGAGACGGTGACCGTG(SEQ ID NO:65)
κ轻链可变区PCR引物
5′Vκ 1-5 CTGCAACCGGTGTACATTCTGACATCCAGATGACCCAGTC(SEQ ID NO:66)
5′Vκ 1-9 TTGTGCTGCAACCGGTGTACATTCAGACATCCAGTTGACCC AGTCT(SEQ ID NO:67)
5′Vκ 1D-43 CTGCAACCGGTGTACATTGTGCCATCCGGATGACCCAGTC(SEQ ID NO:68)
5′Vκ 2-24 CTGCAACCGGTGTACATGGGGATATTGTGATGACCCAGAC(SEQ ID NO:69)
5′Vκ 2-28 CTGCAACCGGTGTACATGGGGATATTGTGATGACTCAGTC(SEQ ID NO:70)
5′Vκ 2-30 CTGCAACCGGTGTACATGGGGATGTTGTGATGACTCAGTC(SEQ ID NO:71)
5′Vκ 3-11 TTGTGCTGCAACCGGTGTACATTCAGAAATTGTGTTGACAC AGTC(SEQ ID NO:72)
5′Vκ 3-15 CTGCAACCGGTGTACATTCAGAAATAGTGATGACGCAGTC(SEQ ID NO:73)
5′Vκ 3-20 TTGTGCTGCAACCGGTGTACATTCAGAAATTGTGTTGACG CAGTCT(SEQ ID NO:74)
5′Vκ 4-1 CTGCAACCGGTGTACATTCGGACATCGTGATGACCCAGTC(SEQ ID NO:75)
3′Jκ 1/4 GCCACCGTACGTTTGATYTCCACCTTGGTC(SEQ ID NO:76)
3′Jκ 2 GCCACCGTACGTTTGATCTCCAGCTTGGTC(SEQ ID NO:77)
3′Jκ 3 GCCACCGTACGTTTGATATCCACTTTGGTC(SEQ ID NO:78)
3′Jκ 5 GCCACCGTACGTTTAATCTCCAGTCGTGTC(SEQ ID NO:79)
(6)用KOD-Plus-Neo(TOYOBO，KOD401)试剂盒PCR分别扩增抗体基因的重链和轻链，40μL体系：3.5μL cDNA，20nM混合引物，4μL缓冲液(buffer)，4μL 2mM dNTPs，2.4μLMgSO4，1μL KOD。
(7)反应程序：94℃，2min；45个循环：98℃，10s；58℃，30s；68℃，28s。
(8)进行琼脂糖凝胶，结果如图4发现，五个抗体的轻链分别约为300bp，重链大小约是400bp。
(9)送PCR扩增产物到金唯智生物科技有限公司进行测序
(10)5种抗体可变区序列如下所述：
1)9g8
重链可变区：
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITTSSDYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGRTYYNPSLKSRVTISVDTSKNDFSLKLSSVTAADTAVYYCARRLTYYYDSSGYANWYFDLWGRGTLVTVSS SEQ ID No：31
轻链可变区：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQRFSTFLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSIPYSFGQGTKLEIKR SEQ ID No：32；或者
2)6J19
重链可变区：
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMKWVRQAPGKGLEWVSTISSSGTFIKYADSLQGRFTITRDNAKTAVYLQMNSLRVEDTAVYYCARERFVGVLDIWGQGTMVTVSS SEQ ID No：33
轻链可变区：
QSVLTQPPSASGTPGERVTISCSGSSSNIGRSTVSWYQQLPGTAPKLLMYSSYQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVLG SEQ ID No：34；或者
3)7N13
重链可变区：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTMYYGDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARGVGATGELFDYWGQGTLVTASS SEQ ID No：35
轻链可变区：
AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRATQGIGNELGWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQDYNYPRTFGQGTKVEIKR SEQ ID No：36；或者
4)8L19
重链可变区：
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAVSGFTFSNYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISTTGTYTHYAGSVKGRFTISRDNAKNSLFLRMNSLRAEDTAVYYCARPYYYGSGSPDYWGQGTLVTVSS SEQ ID No：37
轻链可变区：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTFLNWYQQKPGKAPNLLIYAASSLQRGVPSRFTGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQTYSKPWTFGRGTKVEIER SEQ ID No：38；或者
5)6M9
重链可变区：
EVQLLESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFRNYDINWVRQAPGKGLEWVSSISGSGIDTYYGDSVEGRFTVSRDNAESSVLLEMNSLRADDTAVFYCVRGLAGAFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID No：39
轻链可变区：
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVTSGYLAWYQQKPGQAPRLLIHGTSRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHRSSPMYSFGQGSKLEIKR SEQ ID No：40。
对应地，其CDR区序列如下所示：
1)9g8
HCDR1：GGSITTSSDY SEQ ID No：1；
HCDR2：IYYSGRT SEQ ID No：2；
HCDR3：ARRLTYYYDSSGYANWYFDL SEQ ID No：3；
LCDR1：QRFSTF SEQ ID No：4；
LCDR:2：AAS SEQ ID No：5；
LCDR3：QQSYSIPYS SEQ ID No：6；或者
2)6J19
HCDR1：GFTFSSYS SEQ ID No：7；
HCDR2：ISSSGTFI SEQ ID No：8；
HCDR3：ARERFVGVLDI SEQ ID No：9；
LCDR1：SSNIGRST SEQ ID No：10；
LCDR:2：SSY SEQ ID No：11；
LCDR3：AAWDDSLNGPV SEQ ID No：12；或者
3)7N13
HCDR1：GFTFSSYS SEQ ID No：13；
HCDR2：ISSSSSTM SEQ ID No：14；
HCDR3：ARGVGATGELFDY SEQ ID No：15；
LCDR1：QGIGNE SEQ ID No：16；
LCDR:2：AAS SEQ ID No：17；
LCDR3：LQDYNYPRT SEQ ID No：18；或者
4)8L19
HCDR1：GFTFSNYS SEQ ID No：19；
HCDR2：ISTTGTYT SEQ ID No：20；
HCDR3：ARPYYYGSGSPDY SEQ ID No：21；
LCDR1：QSISTF SEQ ID No：22；
LCDR:2：AAS SEQ ID No：23；
LCDR3：HQTYSKPWT SEQ ID No：24；或者
5)6M9
HCDR1：GFTFRNYD SEQ ID No：25；
HCDR2：ISGSGIDT SEQ ID No：26；
HCDR3：VRGLAGAFDY SEQ ID No：27；
LCDR1：QSVTSGY SEQ ID No：28；
LCDR:2：GTS SEQ ID No：29；
LCDR3：QQHRSSPMYS SEQ ID No：30。
最后说明的是：以上实施例仅用于说明本申请的实施过程和特点，而非限制本申请的技术方案，尽管参照上述实施例对本申请进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本申请进行修改或者等同替换，而不脱离本申请的精神和范围的任何修改或局部替换，均应涵盖在本申请的保护范围当中。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国科学院深圳先进技术研究院
<120> 一种抗SAR-COV-2抗体或其抗原结合片段及其应用
<130> CP120010319C
<160> 79
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Gly Gly Ser Ile Thr Thr Ser Ser Asp Tyr
1 5 10
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Ile Tyr Tyr Ser Gly Arg Thr
1 5
<210> 3
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Ala Arg Arg Leu Thr Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Ala Asn Trp
1 5 10 15
Tyr Phe Asp Leu
20
<210> 4
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Gln Arg Phe Ser Thr Phe
1 5
<210> 5
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
Ala Ala Ser
1
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 6
Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Tyr Ser
1 5
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 7
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser
1 5
<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 8
Ile Ser Ser Ser Gly Thr Phe Ile
1 5
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 9
Ala Arg Glu Arg Phe Val Gly Val Leu Asp Ile
1 5 10
<210> 10
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 10
Ser Ser Asn Ile Gly Arg Ser Thr
1 5
<210> 11
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 11
Ser Ser Tyr
1
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 12
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val
1 5 10
<210> 13
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 13
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser
1 5
<210> 14
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 14
Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Met
1 5
<210> 15
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 15
Ala Arg Gly Val Gly Ala Thr Gly Glu Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 16
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 16
Gln Gly Ile Gly Asn Glu
1 5
<210> 17
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 17
Ala Ala Ser
1
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 18
Leu Gln Asp Tyr Asn Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 19
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 19
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ser
1 5
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 20
Ile Ser Thr Thr Gly Thr Tyr Thr
1 5
<210> 21
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 21
Ala Arg Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Pro Asp Tyr
1 5 10
<210> 22
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 22
Gln Ser Ile Ser Thr Phe
1 5
<210> 23
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 23
Ala Ala Ser
1
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 24
His Gln Thr Tyr Ser Lys Pro Trp Thr
1 5
<210> 25
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 25
Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr Asp
1 5
<210> 26
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 26
Ile Ser Gly Ser Gly Ile Asp Thr
1 5
<210> 27
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 27
Val Arg Gly Leu Ala Gly Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 28
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 28
Gln Ser Val Thr Ser Gly Tyr
1 5
<210> 29
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 29
Gly Thr Ser
1
<210> 30
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 30
Gln Gln His Arg Ser Ser Pro Met Tyr Ser
1 5 10
<210> 31
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 31
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Thr Ser
20 25 30
Ser Asp Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Asp Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Arg Leu Thr Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Ala Asn
100 105 110
Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 32
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Arg Phe Ser Thr Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Tyr
85 90 95
Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 33
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Ser Ser Gly Thr Phe Ile Lys Tyr Ala Asp Ser Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ala Lys Thr Ala Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Arg Phe Val Gly Val Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 34
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 34
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Glu
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Arg Ser
20 25 30
Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Ser Ser Tyr Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 35
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Met Tyr Tyr Gly Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Val Gly Ala Thr Gly Glu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Ala Ser Ser
115 120
<210> 36
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 36
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Thr Gln Gly Ile Gly Asn Glu
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Asn Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 37
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Thr Gly Thr Tyr Thr His Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Arg Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Pro Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 38
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 38
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Thr Tyr Ser Lys Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Arg Gly Thr Lys Val Glu Ile Glu Arg
100 105
<210> 39
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 39
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ile Asp Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Glu Ser Ser Val Leu
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Phe Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Leu Ala Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 40
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 40
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile His Gly Thr Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Arg Ser Ser Pro
85 90 95
Met Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Ser Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 41
<211> 315
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 41
gtctctggtg gctctatcac cactagtagt gactactggg gctggatccg ccagccccca 60
gggaaggggc tggagtggat tgggagtatc tattatagtg ggagaaccta ctacaacccg 120
tccctcaaga gtcgagtcac catatccgta gacacgtcca agaacgactt ctctctgaag 180
ctgagctctg tgaccgccgc agacacggct gtgtattact gtgcgagacg ccttacgtat 240
tactatgata gtagtggtta tgcgaactgg tacttcgatc tctggggccg tggcaccctg 300
gtcactgtct cctca 315
<210> 42
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 42
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gaggttcagc acctttttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca cgatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta tcccgtactc ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa acga 324
<210> 43
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 43
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agttatagta tgaagtgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaacc atcagtagta gtggtacttt cataaagtat 180
gcagactcac tgcagggccg attcaccatc accagagaca acgccaagac cgcagtgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agtcgaggac acggctgttt attactgtgc gagagaacga 300
ttcgttggtg ttttggatat ctggggccaa gggacaatgg tcaccgtctc ttca 354
<210> 44
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 44
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccggggagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga aggagtactg taagctggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatgtat agtagttatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240
tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtccggtg 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 45
<211> 359
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 45
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agttatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatat attagtagta gtagtagtac catgtactac 180
ggagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggagtg 300
ggagccacgg gggaactctt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgcctcctc 359
<210> 46
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 46
gccatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaactca gggaattgga aatgaattag ggtggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tacaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtctacaa gattacaatt accctcgtac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acga 324
<210> 47
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 47
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggatt caccttcagt aactatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtacta ctggtactta cacacactac 180
gccggctcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcgctgttt 240
ttgcgaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gaggccctat 300
tactatggtt cggggagtcc tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 48
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 48
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc acctttttga attggtatca gcagaagccc 120
gggaaagccc ctaatctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180
aggttcactg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaccag acttacagta agccctggac gttcggccga 300
gggaccaagg tggaaatcga acga 324
<210> 49
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 49
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagg aactatgaca tcaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcg attagtggta gtggtattga cacatactac 180
ggagactcag tggagggccg attcaccgtc tccagagaca acgccgagag ctcagtatta 240
ctggagatga acagcctgag agccgacgat acggctgtat tttactgtgt gaggggtctg 300
gctggcgcct ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351
<210> 50
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 50
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttacc agcggctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatccat ggtacatcca ggagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtcta ttactgtcag cagcatcgta gctcacccat gtacagtttt 300
ggccagggga gcaagctgga gatcaaacga 330
<210> 51
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 51
ctgcaaccgg tgtacattcc caggtgcagc tggtgcag 38
<210> 52
<211> 38
<212> DNA
<213> 52
<400> 52
ctgcaaccgg tgtacattcc gaggtgcagc tggtgcag 38
<210> 53
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 53
ctgcaaccgg tgtacattct gaggtgcagc tggtggag 38
<210> 54
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 54
ctgcaaccgg tgtacattct gaggtgcagc tgttggag 38
<210> 55
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 55
ctgcaaccgg tgtacattcc caggtgcagc tgcaggag 38
<210> 56
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 56
ctgcaaccgg tgtacattcc caggtgcagc tacagcagtg 40
<210> 57
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 57
ctgcaaccgg tgtacattcc caggttcagc tggtgcag 38
<210> 58
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 58
ctgcaaccgg tgtacattcc caggtccagc tggtacag 38
<210> 59
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 59
ctgcaaccgg tgtacattct caggtgcagc tggtggag 38
<210> 60
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 60
ctgcaaccgg tgtacattct gaagtgcagc tggtggag 38
<210> 61
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 61
ctgcaaccgg tgtacattcc cagctgcagc tgcaggag 38
<210> 62
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 62
ctgcaaccgg tgtacattcc caggtacagc tgcagcag 38
<210> 63
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 63
tgcgaagtcg acgctgagga gacggtgacc ag 32
<210> 64
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 64
tgcgaagtcg acgctgaaga gacggtgacc attg 34
<210> 65
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 65
tgcgaagtcg acgctgagga gacggtgacc gtg 33
<210> 66
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 66
ctgcaaccgg tgtacattct gacatccaga tgacccagtc 40
<210> 67
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 67
ttgtgctgca accggtgtac attcagacat ccagttgacc cagtct 46
<210> 68
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 68
ctgcaaccgg tgtacattgt gccatccgga tgacccagtc 40
<210> 69
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 69
ctgcaaccgg tgtacatggg gatattgtga tgacccagac 40
<210> 70
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 70
ctgcaaccgg tgtacatggg gatattgtga tgactcagtc 40
<210> 71
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 71
ctgcaaccgg tgtacatggg gatgttgtga tgactcagtc 40
<210> 72
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 72
ttgtgctgca accggtgtac attcagaaat tgtgttgaca cagtc 45
<210> 73
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 73
ctgcaaccgg tgtacattca gaaatagtga tgacgcagtc 40
<210> 74
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 74
ttgtgctgca accggtgtac attcagaaat tgtgttgacg cagtct 46
<210> 75
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 75
ctgcaaccgg tgtacattcg gacatcgtga tgacccagtc 40
<210> 76
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 76
Gly Cys Cys Ala Cys Cys Gly Thr Ala Cys Gly Thr Thr Thr Gly Ala
1 5 10 15
Thr Tyr Thr Cys Cys Ala Cys Cys Thr Thr Gly Gly Thr Cys
20 25 30
<210> 77
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 77
gccaccgtac gtttgatctc cagcttggtc 30
<210> 78
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 78
gccaccgtac gtttgatatc cactttggtc 30
<210> 79
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 79
gccaccgtac gtttaatctc cagtcgtgtc 30