网织血小板检测染液、检测试剂、检测试剂的制备方法、样本分析仪检测方法及样本分析仪
阅读说明：本技术 网织血小板检测染液、检测试剂、检测试剂的制备方法、样本分析仪检测方法及样本分析仪 (Dye solution for detecting reticulocyte, detection reagent, preparation method of detection reagent, detection method of sample analyzer and sample analyzer ) 是由 吕碧玉 郑剑通 吴忠芬 周贤波 于 2021-08-30 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种网织血小板检测染液、检测试剂、检测试剂的制备方法、样本分析仪检测方法及样本分析仪,提供的核酸染料可用于血液分析仪,以满足对网织血小板计数准确和快速的检测要求。网织血小板计数通过试剂处理,增加特异性的网织血小板核酸染料以及网织血小板细胞膜的处理试剂,采用核酸荧光染色及半导体激光流式细胞术在RET通道这单一通道中即可准确计数网织血小板。即通过检测试剂处理网织红细胞以及网织血小板形态,将二者球形化的同时,改变各类型细胞膜形态,便于网织红细胞和网织血小板的核酸分别与染料特异性地结合,从而实现网织血小板的计数。(The invention provides a dyeing liquid for detecting reticulocyte, a detection reagent, a preparation method of the detection reagent, a detection method of a sample analyzer and the sample analyzer. The count of the reticulocytes is processed by a reagent, specific reticulocyte nucleic acid dye and a processing reagent of reticulocyte membranes are added, and the reticulocytes can be accurately counted in a single channel of an RET channel by adopting nucleic acid fluorescent staining and semiconductor laser flow cytometry. The method comprises the steps of treating the shapes of reticulocytes and reticulocytes by a detection reagent, changing the shapes of cell membranes of various types while spheroidizing the two forms, so that the nucleic acids of the reticulocytes and the reticulocytes are respectively and specifically combined with dyes, and counting the reticulocytes.)
技术领域
本发明涉及血液检测
技术领域
，特别涉及一种网织血小板检测染液、检测试剂、检测试剂的制备方法、样本分析仪检测方法及样本分析仪。背景技术
人的血液中含有红细胞、白细胞、血小板等各种血细胞。其中，血小板是直径2~3um的无核细胞。正常人的血液中有15万~35万个/ul血小板。
但是，人们都知道，一旦患上特发性血小板减少紫癜等血小板减少症和急性白血病等病症，血液中的血小板数就会减少。一般来说，血液中的血小板一旦低于10000个/ul，就需要输血。因此，迅速、准确地测定血小板数在临床上是很重要的。
当前市面上较多采用RET通道，根据体积大小将红细胞及血小板区分开后，再利用荧光染料与核酸结合后的荧光强度，区分成熟血小板以及网织血小板。但该方法易受小体积血小板以及低值血小板的干扰，导致网织血小板计数不准确。
在此基础上，现有采用PLT-F通道，只进行特殊荧光染料对血小板的特异性染色方法，使网织血小板计数具有较高的精密度以及准确度。但该方法是在RET通道的基础上新增PLT-F的血细胞检测通道，试剂耗量增大，且成本较高。
发明内容
本发明的范围只由后附权利要求书所规定，在任何程度上都不受这一节发明内容的陈述所限。
本发明的目的就是针对现有技术的上述问题，提供一种可用于样本分析仪，以满足对网织血小板计数准确和快速的检测要求的网织血小板检测染液、检测试剂、检测试剂的制备方法、样本分析仪检测方法及样本分析仪。
为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
本发明公开了一种网织血小板检测染液，包括荧光染料和醇，所述荧光染料包括聚次甲基和噁嗪染料，其中，
所述聚次甲基的结构通式如下式I所示：
式I：
式中，Y-为PF6 -、HSO3 -、X-（X为卤素）、BF4 -或CF3SO3 -；Z为、或； R1、R2和R3为不小于2个碳的烷基、酯基或醚基，R4为不小于2个碳的烷基；
所述噁嗪染料的结构通式如下式II所示：
式II：
式中，R为或；
所述醇为异丙醇和乙二醇中的至少一种。
优选地，所述聚次甲基具有如下式III所示的结构，
式III。
优选地，所述噁嗪染料具有如下式Ⅳ所示的结构，
式Ⅳ。
本发明还公开了一种网织血小板检测试剂，包括如上所述的网织血小板检测染液和稀释液，所述稀释液的PH值为7.5~11。
进一步地，所述稀释液包含用于保持所述PH值的缓冲体系，所述缓冲体系为甘氨酸缓冲体系、磷酸盐缓冲体系、柠檬酸钠缓冲体系、Tris缓冲体系和Tricine缓冲体系中的一种或多种。
进一步地，所述稀释液包含钠盐，所述钠盐为氯化钠、磷酸钠和亚硫酸钠中的一种或多种。
进一步地，所述稀释液包含表面活性剂，所述表面活性剂为非离子表面活性剂、两性表面活性剂和阳性表面活性剂中的至少一种。
进一步地，所述稀释液包含防腐剂，所述防腐剂为邻苯二甲酸氢钾、甲醛、苯甲酸和Proclin 300中的一种或多种。
进一步地，所述R1为CH3CH2-或CH3CH2CH2-；所述R2为CH3COOCH2CH2CH2-；所述R3为C6H5OCH2-、C6HSOCH2CH2-或CH3OCH2CH2-。
本发明还公开了一种网织血小板检测试剂的制备方法，所述方法包括：将如上所述的检测染液和所述稀释液按一定比例配置成预设容量后，在常温下搅拌均匀，使用0.22um滤膜进行过滤，过滤后的滤液对试样进行检测。
本发明还公开了一种样本分析仪检测方法，所述方法包括以下步骤：采用如上所述的网织血小板检测试剂，用所述检测试剂处理试样，通过检测试剂处理试样中的网织红细胞以及网织血小板形态，将二者球形化的同时，改变各类型细胞膜形态，使得网织红细胞和网织血小板的核酸分别与所述荧光染料特异性地结合，实现网织血小板的计数。
本发明还公开了一种采用上述样本分析仪检测方法的样本分析仪，所述样本分析仪包括：
样本制备部件，所述样本制备部件将所述检测染料和所述稀释液混制成测定试样；
光源，所述光源用光照射所述样本制备部件制备的所述测定试样；
受光部件，所述受光部件接受所述光源照射所述测定试样时所述测定试样中的细胞产生的荧光和散射光，并输出所接受的荧光的相关荧光信号和所接受的散射光的相关散射光信号；
细胞分析部件，所述细胞分析部件根据所述受光部件输出的荧光信号和散射光信号，将显示出一定范围的荧光强度和散射光强度的细胞作为网织红细胞及网织血小板检测出来；
输出部件，所述输出部件根据所述细胞分析部件的检测结果进行输出。
本发明还公开了一种如上所述的网织血小板检测染液或如上所述的网织血小板检测试剂在对生物样品进行染色中的应用。
综上所述，本发明提供了一种网织血小板检测染液、检测试剂、检测试剂的制备方法、样本分析仪检测方法及样本分析仪，提供的核酸染料可用于样本分析仪，以满足对网织血小板计数准确和快速的检测要求。网织血小板计数通过试剂处理，增加特异性的网织血小板核酸染料以及网织血小板细胞膜的处理试剂，采用核酸荧光染色及半导体激光流式细胞术在RET通道这单一通道中即可准确计数网织血小板。即通过检测试剂处理网织红细胞以及网织血小板形态，将二者球形化的同时，改变各类型细胞膜形态，便于网织红细胞和网织血小板的核酸分别与染料特异性地结合，从而实现网织血小板的计数。
附图说明
图1为采用配套试剂在希森美康XN1000仪器上测出的PLT-F通道图形。
图2为本发明采用检测试剂在配套血细胞分析仪上测出的RET通道图形。
具体实施方式
下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
血液中网织血小板的检测在检验医学领域具有重要意义，本发明提供一种可快速准确地测定血液中网织血小板的检测染液，可以应用于基于流式技术的血液分析仪器，对血液中的网织血小板快速标记。
本发明还提供一种网织血小板检测试剂，该检测试剂主要含有两种功能试剂组分，一种为标记网织血小板内残留RNA物质的检测染液，另一种为能够快速使血液中红细胞系成为等体积球状的球形化试剂。本发明所采用的荧光染料能够被半导体激光器激发，这样标记了荧光染料的网织血小板能够被廉价的半导体激光器所激发发光，发射的荧光信号被收集分析后，能够快速准确地计数血液样本中的网织血小板。
本发明提供一种网织血小板检测染液，该检测染液包括荧光染料和醇，所述荧光染料包括聚次甲基和噁嗪染料，其中，
所述聚次甲基的结构通式如下式I所示：
式I：
式中，Y-为PF6 -、HSO3 -、X-（X为卤素）、BF4 -或CF3SO3 -；Z为、或 ；R1、R2和R3为不小于2个碳的烷基、酯基或醚基，R4为不小于2个碳的烷基；
所述噁嗪染料的结构通式如下式II所示：
式II：
式中，R为或；
所述醇为异丙醇和乙二醇中的至少一种。所述R1为CH3CH2-或CH3CH2CH2-；所述R2为CH3COOCH2CH2CH2-；所述R3为C6H5OCH2-、C6HSOCH2CH2-或CH3OCH2CH2-。
优选地，所述聚次甲基具有如下式III所示的结构，
式III。
优选地，所述噁嗪染料具有如下式Ⅳ所示的结构，
式Ⅳ。
本发明还提供一种网织血小板检测试剂，包括如上所述的网织血小板检测染液和稀释液，所述稀释液的PH值范围控制在7.5~11为宜。PH值低于上述范围太多，红细胞就易于脆化、溶血，杂质破碎红细胞量也可能增加。而PH值过高，则红细胞膜上的酸性官能基易离解与阳离子型色素结合，从而增加破碎红细胞非特异性染色的机会。
为了保证所述稀释液的PH值范围稳定在7.5~11，可使用缓冲剂调整。因此，所述稀释液可包含用于保持所述PH值的缓冲体系，所述缓冲体系例如为甘氨酸缓冲体系、磷酸盐缓冲体系、柠檬酸钠缓冲体系、Tris缓冲体系和Tricine缓冲体系等中的一种或多种。
为了使本发明的检测试剂的渗透压在适于红细胞溶血的范围内，所述稀释液还可以包含钠盐，所述钠盐例如为氯化钠、磷酸钠和亚硫酸钠等中的一种或多种。
为了使检测试剂的表面张力显著下降，所述稀释液还包含表面活性剂，所述表面活性剂可以为非离子表面活性剂、两性表面活性剂和阳性表面活性剂中的至少一种。
所述稀释液还包含防腐剂，防腐剂可以有效地控制试剂中微生物的生长，所述防腐剂可以为邻苯二甲酸氢钾、甲醛、苯甲酸和Proclin 300等中的一种或多种。
本发明还提供一种网织血小板检测试剂的制备方法，所述方法包括：将如上所述的检测染液和所述稀释液按一定比例配置成预设容量后，在常温下搅拌均匀，使用0.22um滤膜进行过滤，过滤后的滤液对试样进行检测。
本发明还提供一种样本分析仪检测方法，所述方法包括以下步骤：采用如上所述的网织血小板检测试剂，用所述检测试剂处理试样，通过检测试剂处理试样中的网织红细胞以及网织血小板形态，将二者球形化的同时，改变各类型细胞膜形态，使得网织红细胞和网织血小板的核酸分别与所述荧光染料特异性地结合，实现网织血小板的计数。
本发明还提供一种采用上述样本分析仪检测方法的样本分析仪，所述样本分析仪包括：样本制备部件，所述样本制备部件将所述检测染料和所述稀释液混制成测定试样；光源，所述光源用光照射所述样本制备部件制备的所述测定试样；受光部件，所述受光部件接受所述光源照射所述测定试样时所述测定试样中的细胞产生的荧光和散射光，并输出所接受的荧光的相关荧光信号和所接受的散射光的相关散射光信号；细胞分析部件，所述细胞分析部件根据所述受光部件输出的荧光信号和散射光信号，将显示出一定范围的荧光强度和散射光强度的细胞作为网织红细胞及网织血小板检测出来；输出部件，所述输出部件根据所述细胞分析部件的检测结果进行输出。
本发明还提供一种采用如上所述的网织血小板检测染液或所述的网织血小板检测试剂在对生物样品进行染色中的应用。
下面以具体的实施例对本发明进行详细说明。
请参考图1和图2，其中，图1为采用配套试剂在希森美康XN1000仪器上测出的PLT-F通道图形。图2为本发明采用检测试剂在配套血细胞分析仪上测出的RET通道图形。
实施案例一：
如下所示的表1和表2，其中，表1为稀释液的配置数据，表2为检测染液的配置数据。
表1
表2
按照上述表格所示配制稀释液和检测染液并定容至规定量后，在常温搅拌均匀后，使用0.22um滤膜进行过滤。利用希森美康XN1000仪器PLT-F通道的配套试剂与本发明RET通道的自制试剂对网织血小板检测结果进行对比。结果详情见表3。
表3：
表3中的结果表明，本实施例中的检测试剂在配套的血细胞分析仪上IPF%（网织血小板百分比）的测定结果与XN1000仪器的测定结果偏差在允许范围内，测定结果准确。
实施案例二：
如下所示的表4和表5，其中，表4为稀释液的配置数据，表5为检测染液的配置数据。
表4
表5
按照上述表格所示配制稀释液和检测染液并定容至规定量后，在常温搅拌均匀后，使用0.22um滤膜进行过滤。利用希森美康XN1000仪器PLT-F通道的配套试剂与本发明RET通道的自制试剂对网织血小板检测结果进行对比。结果详情见表6。
表6
表6中的结果表明，本实施例中的检测试剂在配套的血细胞分析仪上IPF%（网织血小板百分比）的测定结果与XN1000仪器的测定结果偏差在允许范围内，测定结果准确。
本发明的检测试剂在保证RET%准确性的基础上，同时提高了IPF%计数的准确性；使用RET单一通道，减少了试剂耗量，也避免了小体积血小板以及低值血小板的干扰。
综上所述，本发明提供了一种网织血小板检测染液、检测试剂、检测试剂的制备方法、样本分析仪检测方法及样本分析仪，提供的核酸染料可用于样本分析仪，以满足对网织血小板计数准确和快速的检测要求。网织血小板计数通过试剂处理，增加特异性的网织血小板核酸染料以及网织血小板细胞膜的处理试剂，采用核酸荧光染色及半导体激光流式细胞术在RET通道这单一通道中即可准确计数网织血小板。即通过检测试剂处理网织红细胞以及网织血小板形态，将二者球形化的同时，改变各类型细胞膜形态，便于网织红细胞和网织血小板的核酸分别与染料特异性地结合，从而实现网织血小板的计数。
本文所描述的概念在不偏离其精神和特性的情况下可以实施成其它形式。所公开的具体实施例应被视为例示性而不是限制性的。因此，本发明的范围是由所附的权利要求，而不是根据之前的这些描述进行确定。在权利要求的字面意义及等同范围内的任何改变都应属于这些权利要求的范围。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种高温水蒸气氧化装置