具体实施方式

下面对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。

实施例1

一种含有干细胞提取液的代谢和免疫增强及改善亚健康制剂，每100mL的改善亚健康制剂，包括干细胞提取液冻干粉10mg，β烟酰胺单核苷酸(NMN)50mg，辅酶Q1010mg，黄芪多糖1g，灵芝提取物1g，人参皂苷A210mg，党参提取物1g，冬虫夏草提取物1g，褪黑素1mg、红花提取物1g、石斛提取物1g和表没食子儿茶素没食子酸酯1g，其余为去离子水。

所述干细胞提取液指灯塔水母干细胞的提取液。

所述灯塔水母干细胞的提取液是通过以下步骤获得的：

(1)将活水螅清洁饲养24-48小时，用无菌生理盐水反复冲洗后，70％酒精消毒，在4℃无菌条件下去皮去触手，粉碎过滤，加细胞分离消化液和缓冲培养液后制成单细胞悬液，生理盐水离心洗剂3次，加适量培养基后，与带有选择标记的干细胞标志物抗体37℃二氧化碳孵箱中孵育45分钟，4℃冰浴过夜；

(2)用流式细胞仪对上述带有干细胞标记的细胞悬液进行干细胞分离，收集干细胞，4℃无菌条件下离心洗剂三次，去除标记物，加缓冲液制成细胞悬液；

(3)将所述细胞悬浮液加入预冷缓冲液中无菌条件下超声破碎细胞，4℃离心，收集上清液，测量蛋白质浓度，制成每ml含有1-2×10⁸个细胞的干细胞提取物；

(4)将所得的干细胞提取物与白蛋白、生理盐水混合物、辅料混合均匀即得。

所述灵芝提取物是通过以下步骤获得的：将灵芝置于水中在温度为95℃的条件下提取，得到提取液，将提取液浓缩后加入无水乙醇，静置36h后，冷冻干燥得到灵芝提取物。

所述党参提取物是通过以下步骤获得的：将党参置于水中在温度为95℃的条件下加热回流提取，得到提取液，提取两次，将两次提取液合并后进行浓缩，再进行离心分离，得到沉淀物，将沉淀物干燥后得到党参提取物。

所述冬虫夏草提取物是通过以下步骤获得的：将冬虫夏草置于水中在温度为95℃的条件下回流提取，得到提取液，向所述提取液中加入无水乙醇，静置36h后，离心分离，得到沉淀物，将沉淀物干燥后得到冬虫夏草提取物。

所述红花提取液是通过以下步骤获得的：将红花粉碎后采用75v/v％乙醇水溶液在温度为35℃条件下进行提取，得到乙醇提取液，将所述乙醇提取液浓缩后经过大孔树脂，采用85v/v％的乙醇水溶液洗脱，浓缩后得到红花提取液。

所述新鲜石斛提取液是通过以下步骤获得的：将新鲜石斛破碎后置于水中在温度为95℃的条件下进行提取，得到水提液，将所述水提液浓缩后加入95v/v％乙醇水溶液溶解，经过HLB柱，采用乙醇洗脱，浓缩后得到新鲜石斛提取液。

一种含有干细胞提取液的改善复亚健康制剂，采用0.22μm无菌滤膜除菌，超滤去色后进行无菌封装。

实施例2

一种含有干细胞提取液的代谢和免疫增强及改善亚健康制剂，每100mL的改善亚健康制剂，包括干细胞提取液冻干粉125mg，β烟酰胺单核苷酸(NMN)325mg，辅酶Q1060mg，黄芪多糖4g，灵芝提取物4g，人参皂苷A2120mg，党参提取物2.5g，冬虫夏草提取物2g，褪黑素10mg、红花提取物2.5g、石斛提取物2.5g和表没食子儿茶素没食子酸酯2.5g，其余为去离子水。

所述干细胞提取液指灯塔水母干细胞的提取液。

所述灯塔水母干细胞的提取液是通过以下步骤获得的：

(1)将活水螅清洁饲养24-48小时，用无菌生理盐水反复冲洗后，70％酒精消毒，在4℃无菌条件下去皮去触手，粉碎过滤，加细胞分离消化液和缓冲培养液后制成单细胞悬液，生理盐水离心洗剂3次，加适量培养基后，与带有选择标记的干细胞标志物抗体37℃二氧化碳孵箱中孵育45分钟，4℃冰浴过夜；

(2)用流式细胞仪对上述带有干细胞标记的细胞悬液进行干细胞分离，收集干细胞，4℃无菌条件下离心洗剂三次，去除标记物，加缓冲液制成细胞悬液；

(3)将所述细胞悬浮液加入预冷缓冲液中无菌条件下超声破碎细胞，4℃离心，收集上清液，测量蛋白质浓度，制成每ml含有1-2×10⁸个细胞的干细胞提取物；

(4)将所得的干细胞提取物与白蛋白、生理盐水混合物、辅料混合均匀即得。

所述灵芝提取物是通过以下步骤获得的：将灵芝置于水中在温度为95℃的条件下提取，得到提取液，将提取液浓缩后加入无水乙醇，静置36h后，冷冻干燥得到灵芝提取物。

所述党参提取物是通过以下步骤获得的：将党参置于水中在温度为95℃的条件下加热回流提取，得到提取液，提取两次，将两次提取液合并后进行浓缩，再进行离心分离，得到沉淀物，将沉淀物干燥后得到党参提取物。

所述冬虫夏草提取物是通过以下步骤获得的：将冬虫夏草置于水中在温度为95℃的条件下回流提取，得到提取液，向所述提取液中加入无水乙醇，静置36h后，离心分离，得到沉淀物，将沉淀物干燥后得到冬虫夏草提取物。

所述红花提取液是通过以下步骤获得的：将红花粉碎后采用75v/v％乙醇水溶液在温度为35℃条件下进行提取，得到乙醇提取液，将所述乙醇提取液浓缩后经过大孔树脂，采用85v/v％的乙醇水溶液洗脱，浓缩后得到红花提取液。

所述新鲜石斛提取液是通过以下步骤获得的：将新鲜石斛破碎后置于水中在温度为95℃的条件下进行提取，得到水提液，将所述水提液浓缩后加入95v/v％乙醇水溶液溶解，经过HLB柱，采用乙醇洗脱，浓缩后得到新鲜石斛提取液。一种含有干细胞提取液的改善复亚健康制剂，采用0.22μm无菌滤膜除菌，超滤去色后进行无菌封装。

实施例3

一种含有干细胞提取液的代谢和免疫增强及改善亚健康制剂，每100mL的改善亚健康制剂，包括干细胞提取液冻干粉250mg，β烟酰胺单核苷酸650mg，辅酶Q10120mg，黄芪多糖8g，灵芝提取物8g，人参皂苷A2240mg，党参提取物5g，冬虫夏草提取物3g，褪黑素20mg、红花提取物5g、石斛提取物5g和表没食子儿茶素没食子酸酯5g，其余为去离子水。

所述干细胞提取液指灯塔水母干细胞的提取液。

干细胞是一种具有再生和自我更新的细胞，即具有增殖、自我修复、大量制造及分化成后代能力的细胞。对于人体坏死或病变组织的修复，对老化凋亡细胞的替换都具有重要意义。但人体干细胞培养技术复杂，费用昂贵，做一次治疗动辄几十万元，但动植物的干细胞，特别是灯塔水母干细胞海水即可养殖，费用低廉，可大量养殖，广泛使用，真正使干细胞的好处进到寻常百姓家。

本实施例所用的灯塔水母(Turritopsis nutricula)干细胞是从其幼年阶段生命形式水螅(Hydra)中提取干细胞(见申请人专利：CN105920044B，一种水螅干细胞制剂及其制备方法与应用)。

灯塔水母水螅属腔肠动物，其身体主要由干细胞构成。目前研究发现，灯塔水母天生具有“返老还童”的能力，是现今世界上唯一不死的生物。灯塔水母“返老还童”是通过细胞转分化过程实现的，即从老年转化为幼年类型。所以说，灯塔水母的生命是没有终结的。灯塔水母在死前回到了生命的开端，重新演绎了自己的生长发育。

灯塔水母之所以永生，是因为它有再生基因。如果将这种能够使衰老细胞逆分化成为干细胞的基因及其调节分化的细胞因子，从皮肤毛囊吸收进入皮下组织细胞，就可调节人体细胞基因逆分化，使人类细胞年轻化成为干细胞，就可以使皮肤返老还童。

灯塔水母是极富含胶原蛋白的生物。灯塔水母胶原蛋白的价值，更是难以比拟。让我们听听科学家的研究结论。世界著名的意大利莱切萨伦托大学的海洋生物学家皮莱诺教授(Prof.Piraino,a biologist at the University of Salento in Lecce,Italy)说，已经证明水母对我们很有用(从药物到营养药品甚至健康的美味都可利用)。以胶原蛋白为例，它是人类结缔组织的主要结构蛋白，也可以用作骨移植和整形手术(医美)的支架来植入人体。但并不是所有类型的动物胶原蛋白都与所有类型的人类细胞相容。这是因为水母的胶原蛋白是原始的，与多种人类细胞类型兼容(jellies'collagen is primitive andcompatible with a wide variety ofhuman cell types)。

他说，如果你把胶原蛋白分解成小块，它就会起到抗氧化剂的作用。因为它有助于吸收一种叫做自由基的化学物质，而自由基会破坏细胞(he says that if you breakcollagen into smaller pieces it acts as an antioxidant，a molecule that isdeemed healthy because it helps soak up chemicals called radicals that candamage cells.)。

他还从水母中分离出一种化合物似乎有抗癌活性。他现在正在研究这种化合物是否对一系列不同的癌症有效(that appears to have anticancer activity.He is nowworking to find out whether the compound is effective against a range ofdifferent cancers.)。

(参考文献：by Caled Davies,From Horizon Magazine,Horizon:The EUResearch&Innovation Magazine)。

所述灵芝提取物是通过以下步骤获得的：将灵芝置于水中在温度为95℃的条件下提取，得到提取液，将提取液浓缩后加入无水乙醇，静置36h后，冷冻干燥得到灵芝提取物。

所述党参提取物是通过以下步骤获得的：将党参置于水中在温度为95℃的条件下加热回流提取，得到提取液，提取两次，将两次提取液合并后进行浓缩，再进行离心分离，得到沉淀物，将沉淀物干燥后得到党参提取物。

所述冬虫夏草提取物是通过以下步骤获得的：将冬虫夏草置于水中在温度为95℃的条件下回流提取，得到提取液，向所述提取液中加入无水乙醇，静置36h后，离心分离，得到沉淀物，将沉淀物干燥后得到冬虫夏草提取物。

所述红花提取液是通过以下步骤获得的：将红花粉碎后采用75v/v％乙醇水溶液在温度为35℃条件下进行提取，得到乙醇提取液，将所述乙醇提取液浓缩后经过大孔树脂，采用85v/v％的乙醇水溶液洗脱，浓缩后得到红花提取液。

所述新鲜石斛提取液是通过以下步骤获得的：将新鲜石斛破碎后置于水中在温度为95℃的条件下进行提取，得到水提液，将所述水提液浓缩后加入95v/v％乙醇水溶液溶解，经过HLB柱，采用乙醇洗脱，浓缩后得到新鲜石斛提取液。一种含有干细胞提取液的改善复亚健康制剂，采用0.22μm无菌滤膜除菌，超滤去色后进行无菌封装。

药效学实验

一、小鼠实验

实验开始前置小鼠于游泳箱适应性游泳训练4d，5min/d，水温24±2℃。实验前1d禁食称重，并对小鼠进行负7％体质量力竭游泳，记录游泳时间，剔除力竭游泳时间及体质量差异较大的小鼠。最后筛选出100只昆明小鼠进行实验，取其中50只小鼠进行疲劳程度测定，剩下50只小鼠测定血尿素氮和乳酸。实验分为8组：正常对照组、亚健康疲劳模型组、实验组1、实验组2、实验组3每组10只。

除正常对照组不做任何处理外，其余各组采用强迫小鼠每天水中站立8h，连续9d，制备疲劳性亚健康模型。具体方法：每日上午9:00，将各组小鼠放入水深为0.8cm的小鼠饲养盒内造模，当天下午17:00，将其从水盒中拿出，正常饲养。

正常对照组与模型组正常饮食，不给予药物干预。实验组1、实验组2和实验组3分别采用实施例1、实施例2和实施例3的制剂，每日灌胃1次，灌胃剂量为1g/Kg。第9d测小鼠力竭游泳时间。

观察指标小鼠力竭游泳时间；血清ALT、AST、BUN。力竭游泳标准：小鼠鼻尖没入水面连续10s。

利用SPSS13.0软件进行数据统计分析，结果以均数±标准差表示，结果用独立样本t检验进行显著性分析，显著性差异P<0.05。结果见表1。

表1各组小鼠力竭游泳时间、乳酸和尿素氮水平。

由表1结果可知，与模型组相比，实验组1-3的小鼠力竭游泳时间显著延长，说明实施例1-3的制剂均能提高小鼠的力竭游泳时间，均能够改善小鼠疲劳型亚健康的状态。

与正常对照组相比，模型组小鼠血乳酸及尿素氮水平无显著改变(P>0.05)，提示该造模方法对小鼠血乳酸及尿素氮水平无明显影响。与模型组比较，实验组1-3的小鼠游泳后血尿素氮和乳酸水平显著降低。说明实施例1-3的制剂均能能显著改善亚健康疲劳小鼠的疲劳症状及降低血液疲劳代谢产物的清除，有较好的抗亚健康的作用。

二、免疫功能

选择体重、胎次相近，健康的3-4月龄的羔羊32只(雌雄各半)，根据体重、性别随机分为4组，设对照组和试验组，采取舍饲，自由采食、饮水，投喂基础日粮，预饲1周后进行试验。

各组羔羊试验开始前均用1％阿维菌素常规剂量皮下注射驱虫，并对羊舍进行消毒。试验羔羊舍饲，每只羔羊日均喂精料补充料350g，试验组分别按照实施例1的制剂5.0g/kg、7.5g/kg、10.0g/kg的量添加到精料中，为保证提取物与精料均匀地在混合，先将其预混合，而后再混至精料中，每天分两次饲喂。分别于每日8:30和16:30进行等量饲喂，早上自由采食青贮玉米秸，下午自由采食花生秧(均为少量多次添加)，自由饮水。试验期间由同一饲养员进行饲养，每天清扫圈舍。试验期间室内温度15-25℃、室外温度25-30℃、相对湿度43.5％-49.7％。

应用SPSS11.0统计软件做数据处理，所有数据采用x±s表示，采用t检验，P＜0.05为有统计学意义。结果见表2

表2各组羔羊免疫指标

结果表明，与对照组相比，添加实施例制剂的低、中和高剂量组能显著提高IgA、IgG、IgM水平，但是高剂量组与中剂量组相差不多，饲喂两周后，低、中和高剂量组的IgA、IgG、IgM水平变化趋势相同。结果提示，复方制剂对羔羊体液免疫指标的影响差异性显著，能提高羔羊的免疫能力。

三、睡眠实验

实验对象选取标准为失眠次数一周不少于3次的35-50岁的女性100名、男性100名。具体操作为给受试人群在晚餐后服用实施例1的制剂，要求受试者在试验期间保持原来的饮食习惯，正常饮食。连续服用12周，并持续记录受试者睡眠改善情况。以每周失眠次数2次作为基本改善标准，以每周失眠次数低于2次为明显改善标准。

统计结果见表3。

表3使用者失眠状况统计。

可见，本申请的制剂能够明显改善失眠状况，连续服用效果更好，对待较为严重(每周失眠次数4次以上)的失眠，也可以有较好的改善。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本发明的保护范围。