岩青兰的应用
阅读说明：本技术 岩青兰的应用 (Application of Dracocephalum rupestre ) 是由 李会芳 程生辉 王智深 郎霞 于 2021-02-01 设计创作，主要内容包括：本发明公开了岩青兰的应用。本发明岩青兰应用于制备解酒的产品中或制备用于防治酒精性肝损伤的产品中。本发明通过实验表明岩青兰高、中、低剂量组醒酒时间均显著缩短,证明本发明岩青兰茶有一定的解酒作用,且效果呈剂量依赖性。本发明岩青兰对酒精性肝损伤具有保护作用,其对酒精性肝损伤大鼠血清中AST、TC、TG具有不同程度的降低作用。本实验为岩青兰的临床运用提供了实验依据,为其进一步开发和利用奠定了基础,其作用机制有待于进一步深入研究。(The invention discloses application of Dracocephalum rupestre Hance. The dracocephalum rupestre linn is applied to preparing a product for relieving alcoholism or a product for preventing and treating alcoholic liver injury. Experiments show that the sobering-up time of the high, medium and low dosage groups of the glaucophyllum cochinchinensis is obviously shortened, and the glaucophyllum cochinchinensis tea has a certain sobering-up effect and the effect is dose-dependent. The dracocephalum rupestre Hance has a protection effect on alcoholic liver injury, and has reduction effects on AST, TC and TG in serum of rats with alcoholic liver injury to different degrees. The experiment provides experimental basis for the clinical application of the dracocephalum rupestre hance, lays a foundation for the further development and utilization of the dracocephalum rupestre hance, and the action mechanism of the dracocephalum rupestre hance is to be further deeply researched.)
技术领域
本发明涉及岩青兰的应用，属于中药应用领域。
背景技术
岩青兰(Dracocephalum rupestre Hance)又名毛建草，是唇形科(Lamiaceae)青兰属植物。该植物为多年生草本，株高15～42cm，叶片三角状卵形，边缘具圆锯齿；花期7-9月份，轮伞花序，花冠紫蓝色，全草具香气。在我国岩青兰主要分布在河北、山西、青海、内蒙古和辽宁等地，生于海拔650～2400m草原、草坡或疏林下。据《中药大辞典》记载，岩青兰可全草代茶，主治外感风热、头痛寒热、咳嗽、黄疸性肝炎。除作为传统药材外，山西等地已将岩青兰开发成茶饮。已有研究发现，岩青兰同属植物提取物具有抗氧化、抗肿瘤、抗高原缺氧、保护心血管系统等药理作用。
酒精中毒是指短时间内摄入大量酒精或酒类饮料，导致中枢神经先兴奋，又转为抑制状态的症状。酒精中毒可分为兴奋期、共济失调期以及昏睡期。兴奋期有的表现为兴奋、欣快、语言增多等，甚至表现粗鲁，有攻击行为；有的却沉默、话少。共济失调期表现为行动笨拙、步态不稳、口齿不清、视物不清、恶心、呕吐等。昏睡期患者可有昏睡、体温下降、血压降低等症状，甚至出现呼吸、循环麻痹，严重者可致死。
酒精性肝损伤(alcoholic liver disease，ALD)是指因短期大量饮酒或长期酗酒造成的肝脏中毒性病理性损害，初期表现为肝细胞脂肪变性，进而发展为酒精性肝炎，最终导致肝纤维化、酒精性肝硬化。临床主要特征为恶心、呕吐、乏力、黄疸、伴有肝脏肿大和压痛。初期主要特征是肝细胞中甘油三酯(TG)累积；中期是短期内肝细胞大量坏死引起的一组临床病理综合征，可发生于有或无肝硬化的基础上；后期主要特征是由活化的肝星状细胞(HSC)产生的细胞外基质蛋白(例如胶原)的积累。
发明内容
本发明的目的是提供岩青兰的应用，本发明通过实验表明岩青兰能解酒，并对酒精性肝损伤具有保护作用。
本发明提供的岩青兰在如下1)或2)中的应用：
(A1)作为解酒的药物；
(A1)制备用于解酒的产品。
上述的应用中，所述用于解酒的产品包括药物和/或保健品。
本发明还提供了一种用于解酒的产品，该用于解酒的产品含有上述的岩青兰。
上述的用于解酒的产品中，所述用于解酒的产品为药物时，其为药学上可接受的剂型。
本发明中，所述岩青兰作为解酒的药物时，可为岩青兰水提物制成。
本发明还提供了岩青兰在如下a)或b)中的应用：
a)作为防治酒精性肝损伤的药物；
b)制备用于防治酒精性肝损伤的产品。
上述的应用中，所述用于防治酒精性肝损伤的产品包括药物和/或保健品。
本发明进一步提供了一种用于防治酒精性肝损伤的产品，该用于防治酒精性肝损伤的产品的活性成分为岩青兰。
上述的用于防治酒精性肝损伤的产品中，所述用于防治酒精性肝损伤的产品为药物时，其为药学上可接受的剂型。
本发明中，所述岩青兰作为防治酒精性肝损伤的药物可为岩青兰水煎液；
所述用于防治酒精性肝损伤的产品可为含岩青兰水煎液的产品。
本发明具有以下优点：
本发明通过实验表明岩青兰高、中、低剂量组醒酒时间均显著缩短，证明本发明岩青兰茶有一定的解酒作用，且效果呈剂量依赖性。本发明岩青兰对酒精性肝损伤具有保护作用，其对酒精性肝损伤大鼠血清中AST、TC、TG具有不同程度的降低作用。本实验为岩青兰的临床运用提供了实验依据，为其进一步开发和利用奠定了基础，其作用机制有待于进一步深入研究。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、
1实验材料
1.1动物
昆明小鼠60只，雌雄各半，体重：18-20g，购自山西医科大学验动物中心，动物合格证号-SCXK(晋)2015-0001。小鼠常规适应饲养7d，摄食饮水正常。
1.2药物与试剂
岩青兰(购买自山西省神池县)；盐酸纳洛酮注射液(海南灵康制药有限公司，批号：190101112)；50％无水乙醇溶液；生理盐水(0.9％的氯化钠，石家庄四药有限公司，批号：1701253204)
1.3仪器
BCD-229KCK冰箱(合肥美菱股份有限公司)；HH-2数显恒温水浴锅(金坛市杰瑞尔电器有限公司)；PL-S40型康士洁牌数码超声仪；YP601N型电子天平(分度值：0.1g，用于小鼠称重)；PA224型电子精密天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)。
2实验方法
2.1动物分组
昆明小鼠50只，每组10只，分为模型组、阳性组(盐酸纳洛酮注射液0.002g/kg，腹腔注射)和岩青兰高(3g/kg)、中(1.5g/kg)、低(0.75g/kg)剂量组共5组。其中，盐酸纳洛酮适用于酒精急性中毒，其中g/kg是指动物每kg体重给药剂量g，下同。
岩青兰高、中、低剂量组采用岩青兰水煎液，其制备方法如下：将岩青兰药材饮片252g用10倍量水浸泡1小时后，开始第一次煎煮，用大火煮沸后改为小火煎煮1小时，煎煮完成后取药液。进行第二次煎煮，用第一次煎煮的药渣加8倍量水接着煎煮，沸腾后改用小火煎煮1小时，取药液，合并2次药液，浓缩至840ml。后配置为高剂量组3g/kg、中剂量组1.5g/kg、低剂量组0.75g/kg所需不同浓度岩青兰水煎液标记后置于4℃冰箱中保存，待用。
2.2动物给药
各组提前禁食16h，末次给药后2h，各组给予相应的50％酒精(20mL/kg)，30min后阳性组给予盐酸纳洛酮(腹腔注射，0.002g/kg)，岩青兰高剂量组、中剂量组、低剂量组分别灌胃给药。实验过程中密切观察小鼠翻正反射消失和恢复的情况，同时作好记录。醉酒潜伏期：小鼠给予酒精开始到小鼠出现翻正反射消失所用的时间；睡眠时间：小鼠翻正反射消失直到小鼠再次恢复所消耗的时间；醒酒时间：从小鼠给予酒精到小鼠重新恢复的时间差。
2.3统计学分析
实验数据用SPSS 22.0统计软件进行统计检验，计量资料采用单因素方差分析，计数资料采用fisher检验，P＜0.05为组间差异具有统计学意义。
3实验结果
3.1岩青兰不同剂量组小鼠给酒后不同时间点翻正反射消失的情况，如表1所示。
表1岩青兰不同剂量组小鼠给酒后不同时间点翻正反射消失的只数(n＝10)
注：与模型组比较，*P＜0.05。
由于实验过程中各种条件的影响，表1中仅列出各组小鼠给酒精后部分时间点小鼠翻正反射消失的只数，小鼠被给予50％的酒精0.5h后，模型组有8只，阳性组7只，高剂量组4只，中剂量组2只，低剂量组2只出现翻正反射消失现象；小鼠被给予50％的酒精1.5h后，模型组、阳性组、高剂量组小鼠全部出现翻正反射消失现象，中剂量组7只，低剂量组9只出现翻正反射消失现象，其余小鼠均为醉酒症状：嗜睡，行动摇摆不定，随着时间的推移到给酒后4h，阳性组小鼠已经有一半开始恢复翻正反射，高、中、低剂量组也开始恢复翻正反射，给酒后7h，阳性组小鼠已经全部苏醒，高剂量组恢复翻正反射小鼠最多，给酒后9h，中剂量组小鼠逐渐苏醒，低剂量组还有6只未苏醒，且给各组小鼠食物，高、中剂量组小鼠均基本可进食，低剂量组小鼠基本不进食，综上，经fisher检验本发明岩青兰高、中剂量组能减少小鼠出现翻正反射消失的只数。
3.2岩青兰各组对小鼠醉酒潜伏期、睡眠时间以及醒酒时间的影响，如表2所示。
表2岩青兰对小鼠醉酒潜伏期、睡眠时间以及醒酒时间的影响(n＝10)
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
由表2中结果可知，与模型组比较，本发明岩青兰高、中、低剂量组小鼠的醉酒潜伏期时间无显著差异；与模型组比较，阳性组、本发明岩青兰高、中、低剂量组睡眠时间均显著缩短(P<0.01)，存在一定的剂量依赖性；与模型组比较，阳性组、本发明岩青兰高、中、低剂量组醒酒时间均显著缩短(P<0.01)，也存在一定的剂量依赖性，综上，岩青兰茶有一定的解酒作用，且效果呈剂量依赖性。
实施例2、
1.实验材料
1.1药物和试剂
岩青兰药材：购自山西省神池县；东宝肝泰片：通化东宝药业股份有限公司，批号：180113；谷丙转氨酶(ALT)检测试剂盒：南京建成生物工程研究所，货号：C009-2，批号：20190425；谷草转氨酶(AST)检测试剂盒：南京建成生物工程研究所，货号：C010-2，批号：20190319；总胆固醇(T-CHO)检测试剂盒：南京建成生物工程研究所，货号：A111-1，批号：20190223；甘油三酯(TG)检测试剂盒：南京建成生物工程研究所，货号：A110-1，批号：20190227。
1.2仪器
酶标分析仪：北京普朗新技术有限公司，型号：DNM-9602；
电子分析天平，购自上海舜宇恒平科学仪器有限公司，型号：FFA224；
微量移液器，购自塞默飞世尔(上海)仪器有限公司，型号：40270530；
电子天平，购自上海有声衡器有限公司，型号；IC-1；
旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂，型号：RE-2000B。
1.3实验动物
SPF级健康SD大鼠，雌雄各半，体重：(180～220)g，购自山西医科大学动物中心，合格证编号：20180006003154，大鼠适应常规饲养1周，期间自由饮水摄食。
2实验方法：
2.1药物制备
岩青兰水煎液的制备方法：与本发明实施例1中相同。
阳性对照组药物制备：取东宝甘泰片，用蒸馏水配成浓度为0.036g/ml的溶液，大鼠的给药剂量为0.36g/kg，约等于6倍临床成人量，标记，置于4℃冰箱保存，待用。
10％水合氯醛溶液制备：取水合氯醛5g，加入50ml蒸馏水，配置成10％水合氯醛溶液，标记，置于4℃冰箱保存，待用。
10％中性福尔马林溶液制备：量取甲醛220ml，磷酸二氢钠8.8g，磷酸氢二钠14.3g，加蒸馏水配置成2200ml10％福尔马林溶液，测其pH值为7.2-7.4，为中性福尔马林溶液，标记，置于4℃冰箱保存，待用。
2.2造模及给药方案
72只大鼠随机分成6组：空白组、模型组、阳性药组(东宝肝泰片)、岩青兰高(3g/kg)、中(1.5g/kg)、低(0.75g/kg)剂量组共6组，每组12只动物。除空白组灌服蒸馏水外，其余各组上午以50％的无水乙醇(以蒸馏水稀释)1ml/100g分别灌胃。阳性药组(东宝肝泰片)、岩青兰高剂量组、中剂量组、低剂量组每日下午按1ml/100g分别灌胃给药，连续灌胃6周，每周称重2次，根据体重调整各组给酒量和给药量。实验第6周结束后，大鼠禁食不禁水12小时，10％水合氯醛麻醉(给药剂量3ml/kg)，腹主动脉取血，将全血注入空白洁净试管内，离心后(3000r/min，15min，4℃)分离血清，-80℃冻存待检血清中ALT、AST、TC、TG。
2.3ALT、AST、TC、TG测定方法
2.3.1微板法测定ALT
谷丙转氨酶(ALT)在37℃及pH7.4条件下，作用于丙氨酸及ɑ-酮戊二酸组成的底物，生成丙酮酸和谷氨酸。反应30min后(固定时间)加入2,4-二硝基苯肼(DNPH)盐酸溶液，既终止反应，同时DNPH与酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙，苯腙在碱性条件下呈红棕色，于505nm比读吸光度并计算酶活力。
2.3.2微板法测定AST
AST能使α-酮戊二酸和天门冬氨酸移换氨基和酮基，生成谷氨酸和草酰乙酸。草酰乙酸在反应过程中可自行脱羧成丙酮酸。丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应生成2，4-二硝基苯腙，在碱性溶液中显红棕色。比色后，查标准曲线，可求得酶的活力单位。
2.3.3比色法测定TC
胆固醇酯在胆固醇酯酶的作用下生成胆固醇和脂肪酸。胆固醇和氧气在一氧化碳作用下生成4-AAP和过氧化氢。过氧化氢、4-AAP和苯酚在过氧化物酶的作用下生成红色醌化物和水。生成的醌类化合物颜色的深浅与胆固醇的含量成正比，分别测定校定标准管和样品管的吸光度值，计算胆固醇的含量。
2.3.4比色法测定TG
甘油三酯和水在脂肪酶的作用下生成甘油和脂肪酸。甘油和ATP在甘油激酶的作用下生成甘油-3-磷酸和ADP。甘油-3-磷酸和氧气在3-磷酸甘油氧化酶的作用下生成磷酸羟基丙酮和过氧化氢。过氧化氢、4-AAP和对氯酚在过氧化物酶作用下生成红色醌化物。生成的醌类化合物颜色的深浅与甘油三酯的含量成正比，分别测定标准管和样本管的吸光度值，可计算样本中甘油三酯的含量。
2.4观察指标
2.4.1一般形态观察：实验过程中观察大鼠体质量变化、进食、饮水、精神状态、行为情况。
2.4.2生化指标：用酶标仪检测血清中ALT、AST、TC、TG的水平。
2.4.3统计学分析：统计分析采用spss19.0，计算资料以表示，各组间数据用t检验，以P<0.05具有统计学意义。
3.实验结果
3.1岩青兰对酒精所致酒精性肝损伤的体征影响
灌胃过程中，模型组、阳性对照组及高、中、低剂量组大鼠有炸毛现象，表现为嗜睡、呆滞、醉酒状态，1-2h后开始恢复常态，有的还会出现鼻子流血，吐药的现象，出现过撕咬的现象。给药后，给药组大鼠精神状态较模型组好，活动量较模型组明显增加。实验结束后，所有大鼠体重均明显增加。
3.2岩青兰对酒精性肝损伤大鼠血清ALT、AST水平的影响
表3岩青兰水煎液对酒精性肝损伤大鼠血清ALT、AST的影响(n＝10)
注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
由表3中实验结果表明：与空白组相比，模型组大鼠血清中的ALT和AST水平明显升高，具有统计学意义(P<0.05)；与模型组相比，阳性组及本发明岩青兰高、中、低剂量组大鼠血清中的ALT水平有降低趋势，但无统计学意义；阳性组及本发明岩青兰高、中、低剂量组大鼠血清中的AST水平显著降低，具有统计学意义(P<0.05，P<0.01)，通过对比阳性组数据证明，本发明岩青兰对酒精性肝损伤有治疗作用。
3.2岩青兰对酒精性肝损伤大鼠血清TC、TG水平的影响
表4岩青兰水煎液对酒精性肝损伤大鼠血清TC、TG的影响(n＝10)
注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
由表4中实验结果表明：与空白组相比，模型组大鼠血清中的TC、TG水平明显升高，具有统计学意义(P<0.05，P<0.01)；与模型组相比，阳性药及本发明岩青兰高剂量组大鼠血清中的TC水平均明显降低(P<0.05，P<0.01)，阳性药及本发明岩青兰低剂量组大鼠血清中的TG水平均明显降低(P<0.05，P<0.01)。
4讨论
肝脏是乙醇代谢的主要部位，也是乙醇所致肝损伤的主要靶器官。而肝脏处理酒精的能力有限，超过自身所能处理的量，肝脏就不能负担，就会造成酒精性肝损伤。酒精灌胃是常用的一种造模方法。本发明中实验灌胃方法根据体重定量定时给予体积百分浓度50％酒精的方法，血清ALT、AST、TC、TG水平明显高于空白大鼠，表明模型建立成功。
血清ALT、AST的浓度是诊断肝细胞损害的敏感标志，当肝细胞受到破坏时，肝细胞内的ALT释放到血液中，使得血清ALT浓度升高，二者正常情况下含量较低，只有受到损害时细胞内液的酶会释放到血液中，这时会出现水平升高。TC和TG通常以低密度脂蛋白的形式运送到血液，当TC和TG含量升高，说明肝脏在代谢过程中遇到阻碍。本发明中通过实验研究结果表明岩青兰对酒精性肝损伤大鼠血清中AST、TC、TG具有不同程度的降低作用，说明岩青兰对酒精性肝损伤具有一定的保护作用。