阅读说明：本技术 用于dna分子检测的小型昆虫浸制标本的简易长期保存方法 (Simple long-term preservation method of small insect impregnated specimen for DNA molecule detection ) 是由 刘霞 徐正会 于 2020-12-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种用于DNA分子检测的小型昆虫浸制标本的简易长期保存方法,包括以下步骤：采集的新鲜昆虫标本放在装有无水乙醇的离心管中,加入无水乙醇至离心管的4/5高度,并书写标签投入离心管中；解剖镜下分类,同一采集地同种昆虫放入同一离心管；分类完毕后将同一采集地的离心管放入同一密闭容器,在容器中放入一片用透水材料包装的镁片,在容器中加无水乙醇至淹没镁片包装物；然后将该密闭容器避光保存,定期添加容器中的无水乙醇即可。本发明解决了因离心管密封性欠佳导致其中的保存液挥发的问题,同时可以降低外容器中的无水乙醇的含水量,使昆虫浸制标本得到长期或永久良好保存,并可根据标签标识快速查找。(The invention discloses a simple long-term preservation method of a small insect impregnated specimen for DNA molecule detection, which comprises the following steps: putting the collected fresh insect specimen into a centrifuge tube filled with absolute ethyl alcohol, adding the absolute ethyl alcohol to 4/5 height of the centrifuge tube, and putting a written label into the centrifuge tube; classifying under a dissecting mirror, and putting the same kind of insects in the same collection place into the same centrifugal tube; after classification, putting centrifuge tubes in the same collection place into the same closed container, putting a magnesium sheet packaged by a permeable material into the container, and adding absolute ethyl alcohol into the container until the magnesium sheet package is submerged; then storing the sealed container in dark place, and periodically adding anhydrous ethanol in the container. The invention solves the problem of volatilization of the preservation solution caused by poor sealing property of the centrifugal tube, and can reduce the water content of absolute ethyl alcohol in the outer container, so that the insect impregnated specimen can be preserved for a long time or permanently and can be quickly searched according to the label identification.)

用于DNA分子检测的小型昆虫浸制标本的简易长期保存方法

技术领域

本发明涉及昆虫标本保存技术领域，尤其是一种用于DNA分子检测的小型昆虫浸制标本的简易长期保存方法。

背景技术

目前，昆虫浸制标本的保存主要使用市场上售卖的2 ml或5 ml离心管进行保存，保存液使用75%酒精溶液或95%酒精溶液，但是对于进行DNA分子检测来说，水溶液会造成DNA分子水解，影响检测结果，因此应使用无水乙醇作为保存液。但目前市场上售卖的离心管密封性较差，乙醇又是一种非常容易挥发的溶剂，实践中发现2 ml离心管内的保存液1年后明显减少或挥发殆尽，需要重新开盖添加保存液，费时费力，且容易对标本造成损坏；另外，容器中保存的离心管数量较多，查找标本困难；若开发一种完全密封的离心管，成本较高。此外，由于取放盛放标本的离心管时需要敞开容器，空气中的水分会进入容器中的无水乙醇，进而可能影响离心管中无水乙醇的纯度。

综上，现有的昆虫浸制标本保存问题是：75%酒精溶液或95%酒精溶液无法应用于DNA分子检测场合的标本制作；将昆虫浸制标本保存在目前市场上售卖的2 ml和5 ml离心管中，由于离心管的密封性欠佳，导致其中的保存液（无水乙醇）很容易挥发，以及取放标本过程中水分进入乙醇，导致乙醇浓度下降，不能长期或永久保存，且查找标本困难。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供一种用于DNA分子检测的小型昆虫浸制标本的简易长期保存方法，所述保存方法包括以下步骤：

步骤一：将采集的新鲜小型昆虫标本用无水乙醇清洗干净；

步骤二：将步骤一清洗干净的小型昆虫标本放入离心管中，加入无水乙醇至离心管的4/5高度，并书写标签投入离心管中；

步骤三：将步骤二的离心管插入托盘上的圆孔中，所述的托盘上均匀分布有若干个用于插放离心管的圆孔，圆孔的内径与插放的离心管外径相配合；托盘放置在带盖的容器中，容器内壁设有一个或多个用于安放托盘的台阶、且台阶的形状与托盘的周边形状配合，所述容器内位于底部中央制有一凹槽，用于放置透水材料包裹的镁片封装物，容器内加入无水乙醇直至淹没镁片封装物；

步骤四：将所述的容器盖紧密封后避光保存；

步骤五：定时检查离心管和容器中无水乙醇的挥发情况，若发现无水乙醇挥发殆尽或明显减少，重新加入无水乙醇。

进一步，步骤一中，小型昆虫标本放在装有无水乙醇的离心管中，在-20℃低温冰箱保存，分批次取出用无水乙醇清洗干净。

进一步，步骤二中，将清洗干净的小型昆虫标本在解剖镜下进行分类，同一离心管中的昆虫标本为同一采集地的同种昆虫，如果同一采集地同种昆虫标本数量较多，分装入多个离心管；同一采集地不同种昆虫标本分装入不同的离心管，以便于查找，但同巢的昆虫标本装入同一离心管。

进一步，步骤三中，所述容器的内径由上至下逐渐缩小；所述托盘边缘还制有对称的半圆孔，用于摆满离心管时取放托盘，以及补充无水乙醇时流入容器底部。

进一步，所述离心管选择2 ml规格，离心管中放置书写有采集地和昆虫标本内容的标签。所述容器外贴有标签。

本发明利用蒸发的原理，解决了因离心管密封性欠佳导致其中的保存液挥发的问题，同时可以降低外容器中的无水乙醇的含水量，使昆虫浸制标本得到长期或永久良好保存；根据标签标识可快速查找，与现有方法相比可大大节约时间。

附图说明

图1为本发明实施例一中分类编号的昆虫标本离心管实物；

图2为本发明实施例一中昆虫标本的保存塑料矿泉水瓶实物；

图3为本发明实施例一中昆虫标本的保存用整理箱实物；

图4为依据本发明原理设计的昆虫标本保存装置示意图；

图5为图4中的容器示意图；

图6为图4中的容器盖子示意图；

图7为图4中的托盘示意图；

图中标注为：1-离心管，3-容器，2-盖子，4-托盘，5-凹槽，用于放置包裹镁片的封装物；6-安放托盘的台阶。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所使用的原料、试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。

实施例一，用于DNA分子检测的小型昆虫浸制标本的简易长期保存方法，按以下步骤进行，如图1-3：

步骤一：采集的新鲜蚂蚁标本即刻放入有无水乙醇（≥99.5%）的2 ml离心管中带回实验室，放入-20℃的低温冰箱中保存，然后分批次取出用无水乙醇进行清洗；

步骤二：将清洗干净的蚂蚁标本在解剖镜下进行分类，同一采集地的同种蚂蚁标本放入同一离心管1中，加入无水乙醇至离心管的4/5高度，同巢的蚂蚁标本单独放入同一离心管，并书写标签投入其中编号记录，见图1；

步骤三：收集废弃的塑料矿泉水瓶，清水清洗干净后备用；将标记有同一采集地的离心管投入塑料矿泉水瓶，在塑料矿泉水瓶内放置用透水材料包裹镁片的封装物，然后加无水乙醇至将所有离心管淹没，并书写标签投入其中或外贴，编号记录，以便于查找，盖子盖紧，见图2。

步骤四：将盖紧的塑料矿泉水瓶整齐摆放至整理箱中避光保存，并书写标签外贴，如图3。

步骤五：每隔3-5年检查离心管和塑料矿泉水瓶中无水乙醇的挥发情况，若发现其中的无水乙醇挥发殆尽或明显减少，只需重新加无水乙醇,即可长期或永久保存。

实施例二，用于DNA分子检测的小型昆虫浸制标本的简易长期保存方法，按以下步骤进行，采用的保存装置如图4-7所示：

步骤一：采集的新鲜蚂蚁标本即刻放入有无水乙醇（≥99.5%）的2 ml离心管中带回实验室，放入-20℃的低温冰箱中保存，然后分批次取出用无水乙醇进行清洗；

步骤二：将清洗干净的蚂蚁标本在解剖镜下进行分类，同一采集地的同种蚂蚁标本放入同一离心管1中，加入无水乙醇至离心管的4/5高度，同巢的蚂蚁标本单独放入同一离心管，并书写标签投入其中编号记录；

步骤三：将离心管插入托盘4上的圆孔中，圆孔的内径与插放的离心管外径相配合，托盘4放入带容器盖子2的容器3内，所述的容器内壁制有一个或多个用于安放托盘4的台阶6、且台阶的形状与托盘的周边形状配合，所述容器的内径由上至下逐渐缩小。所述容器内在底部中央制有一凹槽5，用于放置用透水材料包裹镁片的封装物，加入无水乙醇直至将包裹镁片的封装物淹没其中，书写标签外贴在容器上；

所述的托盘上均匀分布有若干个用于插放离心管的圆孔，托盘边缘还有对称的半圆孔，用于摆满离心管时从台阶6上取放托盘，以及补充无水酒精时让酒精流入容器底部。

步骤四：将所述步骤三中的容器盖紧盖子2密封后避光保存。

步骤五：每隔3-5年定时检查离心管及容器中无水乙醇的挥发情况，若发现无水乙醇挥发殆尽或明显减少，只需重新加入无水乙醇即可长期或永久保存。

本发明实施例一或实施例二均能解决因离心管密封性欠佳导致的保存液挥发的问题，使昆虫浸制标本得到长期或永久良好保存；并可根据标签记录可快速查找，与现有方法相比可大大节约时间。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。