来源于淋巴细胞具有降血糖的33种生物活性肽及其应用
阅读说明：本技术 来源于淋巴细胞具有降血糖的33种生物活性肽及其应用 (33 bioactive peptides derived from lymphocytes and having blood sugar reducing effect, and application thereof ) 是由 张少辉 占文静 张伯宇 于 2021-01-19 设计创作，主要内容包括：本发明涉及蛋白领域,具体涉及来源于淋巴细胞具有降血糖功效的生物活性肽及其应用,共包含33种生物活性肽。本发明依据生物信息学数据库BIOPEP对上述33种生物活性肽的生物活性进行检索,发现这33种生物活性肽均具有降血糖(DPP-IV抑制活性)功效,能够延长胰高血糖素肽-1的作用时间,促进胰岛素的分泌,从而具有降低血糖功效,对开发具有降血糖的食品、保健品和药物具有十分重要的意义。(The invention relates to the field of protein, in particular to bioactive peptide which is derived from lymphocyte and has the efficacy of reducing blood sugar and application thereof, and the bioactive peptide comprises 33 bioactive peptides. According to the invention, the biological activities of the 33 biological active peptides are searched according to a BIOPEP (bioinformatics database), and the 33 biological active peptides are found to have the effect of reducing blood sugar (DPP-IV inhibitory activity), can prolong the action time of glucagon-like peptide-1 and promote the secretion of insulin, so that the biological active peptides have the effect of reducing blood sugar and have very important significance for developing foods, health-care products and medicines with the effect of reducing blood sugar.)
技术领域
本发明涉及蛋白领域，尤其是涉及来源于淋巴细胞具有降血糖活性的33种生物活性肽及其应用。
背景技术
近年来，生物活性肽已经成为人们耳熟能详的一个词语。因其具有很多潜在的生物功能，所以引起人们越来越多的关注，成为科学研究的热点之一。目前很多生物活性肽的有益效果也已经得到了很好的证明，如抗癌、降血压、抗菌、降胆固醇、抗糖尿病等等特性。当前最权威的生物活性肽数据库BIOPEP中已报告了3000多个不同的生物活性肽。
在日常的代谢中，食物的摄入会使肠促胰素(GLP-1和GIP)的释放，肠促胰素可以增加血液中的胰岛素浓度，从而降低血糖，维持体内的血糖平衡。而DPP-IV会降解肠促胰素，从而血液中胰岛素含量下降，血糖升高。
随着糖尿病患者的人数日益增多，开发更安全有效天然的降血糖产品是人们所关注的问题，尤其是对于II型糖尿病的预防，II型糖尿病是由于血糖升高导致的代谢紊乱，DPP-IV抑制剂是治疗II型糖尿病的常用药物，它可以使肠促胰素维持促进胰岛素分泌的作用，达到降血糖的目的。早在1988年，Liddle等人发现蛋白质消化可以促进小鼠体内肠道激素的分泌和表达。Carcon等人牛血红蛋白消化物对肠激素的释放和DPP-IV活性的抑制具有显著作用，并且这些激素的基因也表现出高表达的现象。近几年，Fernando等人发现通过酶解的方式从沙丁鱼中分离的多肽在400-1400Da的范围内具有较高的DPP-IV抑制活性，内切酶和外切肽酶协同的方式能产生更高活性的多肽产物。
然而有明确降血糖活性的生活活性肽还不多，因此，具有降血糖活性的生物活性肽是蛋白领域的需要研究的方向之一。
发明内容
本发明的目的在于提供来源于淋巴细胞内具有降血糖活性的生物活性及其应用。进一步地，提供来源于淋巴细胞内具有DPP-IV抑制活性的生物活性及其应用。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
本发明第一方面，提供来源于淋巴细胞内具有降血糖活性的生物活性肽，所述生物活性肽选自以下生物活性肽中的一种或几种：
AKRTKKVGIVGKY、ALKAKKAVLKGVHSH、EVEQKKKRTFR、HLKIVYRR、KGNLRRTGQEVAQAQES、KQLDDLKVELSQLR、KVTQYKKGKDSLY、NELRVAPEEHPVLLTEAPLNPK、NIRASMQQQQQLASARNR、NLVIVKKGEKDIPGLTDTTVPR、NPFVTSDR、NVLKVTKAAGTK、PAVTQHAPYFKGTAV、RDTKSITFSKL、RIGVPSATEIIKASSKDAIRL、RKAVIVKNIDDGTSDRPY、RVTIAQGGVLPNIQAV、SLVSKGILVQTKGTGASGSF、STITSREIQTAV、TKVKAAPEESEAQAEGCSEERTY、TLVITDKEKAEKLK、TYVPVTTFK、VEKGIIDPTKVVRT、VKLTAELIEQAAQY、VRYSLDPENPTKSCK、NQILRIEEELGSKAKFAGRSF、SLADLQNDEVAFRKF、IGPEYQQDLDRELY、KKEKVLATVTKTVGGDK、LLPKKSSATVGPKAPAVGK、PKRKVSADGAAKAEPKRR、RSAINEVVTREY、SEGVFLLTTTPRPV，
其氨基酸序列对应如下：
Ala-Lys-Arg-Thr-Lys-Lys-Val-Gly-Ile-Val-Gly-Lys-Tyr，
Ala-Leu-Lys-Ala-Lys-Lys-Ala-Val-Leu-Lys-Gly-Val-His-Ser-His，
Glu-Val-Glu-Gln-Lys-Lys-Lys-Arg-Thr-Phe-Arg，
His-Leu-Lys-Ile-Val-Tyr-Arg-Arg，
Lys-Gly-Asn-Leu-Arg-Arg-Thr-Gly-Gln-Glu-Val-Ala-Gln-Ala-Gln-Glu-Ser，
Lys-Gln-Leu-Asp-Asp-Leu-Lys-Val-Glu-Leu-Ser-Gln-Leu-Arg，
Lys-Val-Thr-Gln-Tyr-Lys-Lys-Gly-Lys-Asp-Ser-Leu-Tyr，
Asn-Glu-Leu-Arg-Val-Ala-Pro-Glu-Glu-His-Pro-Val-Leu-Leu-Thr-Glu-Ala-Pro-Leu-Asn-Pro-Lys，
Asn-Ile-Arg-Ala-Ser-Met-Gln-Gln-Gln-Gln-Gln-Leu-Ala-Ser-Ala-Arg-Asn-Arg，
Asn-Leu-Val-Ile-Val-Lys-Lys-Gly-Glu-Lys-Asp-Ile-Pro-Gly-Leu-Thr-Asp-Thr-Thr-Val-Pro-Arg，
Asn-Pro-Phe-Val-Thr-Ser-Asp-Arg，
Asn-Val-Leu-Lys-Val-Thr-Lys-Ala-Ala-Gly-Thr-Lys，
Pro-Ala-Val-Thr-Gln-His-Ala-Pro-Tyr-Phe-Lys-Gly-Thr-Ala-Val，
Arg-Asp-Thr-Lys-Ser-Ile-Thr-Phe-Ser-Lys-Leu，
Arg-Ile-Gly-Val-Pro-Ser-Ala-Thr-Glu-Ile-Ile-Lys-Ala-Ser-Ser-Lys-Asp-Ala-Ile-Arg-Leu，
Arg-Lys-Ala-Val-Ile-Val-Lys-Asn-Ile-Asp-Asp-Gly-Thr-Ser-Asp-Arg-Pro-Tyr，
Arg-Val-Thr-Ile-Ala-Gln-Gly-Gly-Val-Leu-Pro-Asn-Ile-Gln-Ala-Val，
Ser-Leu-Val-Ser-Lys-Gly-Ile-Leu-Val-Gln-Thr-Lys-Gly-Thr-Gly-Ala-Ser-Gly-Ser-Phe，
Ser-Thr-Ile-Thr-Ser-Arg-Glu-Ile-Gln-Thr-Ala-Val，
Thr-Lys-Val-Lys-Ala-Ala-Pro-Glu-Glu-Ser-Glu-Ala-Gln-Ala-Glu-Gly-Cys-Ser-Glu-Glu-Arg-Thr-Tyr，
Thr-Leu-Val-Ile-Thr-Asp-Lys-Glu-Lys-Ala-Glu-Lys-Leu-Lys，
Thr-Tyr-Val-Pro-Val-Thr-Thr-Phe-Lys，
Val-Glu-Lys-Gly-Ile-Ile-Asp-Pro-Thr-Lys-Val-Val-Arg-Thr，
Val-Lys-Leu-Thr-Ala-Glu-Leu-Ile-Glu-Gln-Ala-Ala-Gln-Tyr，
Val-Arg-Tyr-Ser-Leu-Asp-Pro-Glu-Asn-Pro-Thr-Lys-Ser-Cys-Lys，
Asn-Gln-Ile-Leu-Arg-Ile-Glu-Glu-Glu-Leu-Gly-Ser-Lys-Ala-Lys-Phe-Ala-Gly-Arg-Ser-Phe，
Ser-Leu-Ala-Asp-Leu-Gln-Asn-Asp-Glu-Val-Ala-Phe-Arg-Lys-Phe，
Ile-Gly-Pro-Glu-Tyr-Gln-Gln-Asp-Leu-Asp-Arg-Glu-Leu-Tyr，
Lys-Lys-Glu-Lys-Val-Leu-Ala-Thr-Val-Thr-Lys-Thr-Val-Gly-Gly-Asp-Lys，
Leu-Leu-Pro-Lys-Lys-Ser-Ser-Ala-Thr-Val-Gly-Pro-Lys-Ala-Pro-Ala-Val-Gly-Lys，
Pro-Lys-Arg-Lys-Val-Ser-Ala-Asp-Gly-Ala-Ala-Lys-Ala-Glu-Pro-Lys-Arg-Arg，
Arg-Ser-Ala-Ile-Asn-Glu-Val-Val-Thr-Arg-Glu-Tyr，
Ser-Glu-Gly-Val-Phe-Leu-Leu-Thr-Thr-Thr-Pro-Arg-Pro-Val。
分别如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：33所示。
较优的，所述33种生物活性肽为小鼠脾脏来源淋巴细胞肽。
较优的，所述33种生物活性肽具有DPP-IV抑制活性。
本发明还提供编码上述33种所述生物活性肽的多核苷酸。
本发明第二方面，通过研究确定了所述33种生物活性肽的生物活性，可以通过计算机生物信息方法进行数据库检索和氨基酸序列匹配确定。
本发明第三方面，提供了所述33种生物活性肽在制备具有降血糖功能的食品、保健品、药物或化妆品中的应用。
具体而言，本发明的33种生物活性肽可以用于制备具有降血糖活性的药物。
具体而言，本发明的33种生物活性肽可以用于制具有DPP-IV抑制活性的食品、保健品、药物或化妆品。即，提供了33种生物活性肽在制备具有DPP-IV抑制活性的食品、保健品、药物或化妆品中的应用。
本发明第四方面，提供了一种降血糖产品，包括所述33种生物活性肽、所述33种生物活性肽的衍生物中的任意一种或几种的组合，所述的降血糖产品包括降血糖食品降血糖保健品或降血糖药物。
所述33种生物活性肽的衍生物是指具有与具体所述生物活性肽相同的活性或更优的活性。
所述33种生物活性肽的衍生物，是指在33种具体所述生物活性肽的氨基酸侧链基团上、氨基端或羧基端进行羟基化、羧基化、羰基化、甲基化、乙酰化、磷酸化、酯化或糖基化等修饰，得到的生物活性肽衍生物。
本发明第五方面，提供了所述33种生物活性肽的制备方法，可以通过基因工程的方法人工合成，可以从细胞中通过分离纯化的方法直接获得，可以直接通过化学合成制备。
通过基因工程的方法人工合成所述33种生物活性肽是本领域技术人员能够实现的技术方案，例如可以是以DNA重组技术为基础，通过合适的DNA模板来控制多肽的序列合成。
关于从细胞中通过分离纯化的方法直接获得的方式可以为：基于给定的所述33种生物活性肽的氨基酸序列，采用生物学技术上常规的酶解、纯化方法从小鼠脾脏来源淋巴细胞获得所述33种生物活性肽。
本发明33种生物活性肽的有益效果为：本发明的小鼠脾脏来源淋巴细胞33种生物活性肽具有较好的降血糖活性(DPP-IV抑制活性)；本发明的33种生物活性肽能够延长胰高血糖素肽-1的作用时间，促进胰岛素的分泌，从而降低血糖，对开发具有降血糖的食品、保健品和药物具有十分重要的意义。
具体实施方式
在进一步描述本发明具体实施方案之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodic updates；theseries METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS INENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。
下面通过具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
BIOPEP预测来源于淋巴细胞的多肽的生物活性
1.分析方法：
使用NanoHPLC-MS/MS分析淋巴细胞内多肽。利用PEAKS X软件对样品进行搜库分析。小鼠蛋白数据库下载自UniProt网站(16992条)。分析参数为：母离子质量容差：10ppm，二级谱图质量容差：0.020u，固定修饰为Carbamidomethyl(C)，可变修饰为Deamidation(NQ)，Oxidation(M)，非酶切方式。通过搜库分析，得到样品中多肽序列。生物信息学数据库BIOPEP(http://www.uwm.edu.pl/biochemia/index.php/en/biopep)中报告了大约50种生物活性，其中生物活性肽的总数为4042个肽(2020年9月访问)。利用BIOPEP中的“PROFILESOF POTENTIAL BIOLOGICAL ACTIVITY”，输入已知的多肽序列，可以确定多肽可能的生物活性片段，进而预测该条多肽具有的生物活性。
2.实验结果及分析：
通过BIOPEP数据库检索的DPP-IV抑制活性片段如表1所示。
表1 33种生物活性肽的DPP-IV抑制活性片段
由表1可知，来源于淋巴细胞的生物活性肽主要显示出DPP-IV抑制活性，因此判断来源于淋巴细胞的33种生物活性肽具有DPP-IV抑制活性。
基于此，对所述33种生物活性肽、所述33种生物活性肽的衍生物中的任意一种或几种进行组合，以后同样具有降血糖活性，所以可以将所述33种生物活性肽、所述33种生物活性肽的衍生物中的任意一种或几种的组合以获得降血糖产品。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 浙江辉肽生命健康科技有限公司
<120> 来源于淋巴细胞具有降血糖的33种生物活性肽及其应用
<160> 33
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Ala Lys Arg Thr Lys Lys Val Gly Ile Val Gly Lys Tyr
1 5 10
<210> 2
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Ala Leu Lys Ala Lys Lys Ala Val Leu Lys Gly Val His Ser His
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Glu Val Glu Gln Lys Lys Lys Arg Thr Phe Arg
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<212> PRT
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His Leu Lys Ile Val Tyr Arg Arg
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Lys Gly Asn Leu Arg Arg Thr Gly Gln Glu Val Ala Gln Ala Gln Glu
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Ser
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<212> PRT
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
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<210> 8
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Asn Glu Leu Arg Val Ala Pro Glu Glu His Pro Val Leu Leu Thr Glu
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Ala Pro Leu Asn Pro Lys
20
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Asn Ile Arg Ala Ser Met Gln Gln Gln Gln Gln Leu Ala Ser Ala Arg
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Asn Arg
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Asn Leu Val Ile Val Lys Lys Gly Glu Lys Asp Ile Pro Gly Leu Thr
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Asp Thr Thr Val Pro Arg
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<212> PRT
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Asn Pro Phe Val Thr Ser Asp Arg
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Asn Val Leu Lys Val Thr Lys Ala Ala Gly Thr Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Pro Ala Val Thr Gln His Ala Pro Tyr Phe Lys Gly Thr Ala Val
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<212> PRT
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Arg Asp Thr Lys Ser Ile Thr Phe Ser Lys Leu
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Arg Ile Gly Val Pro Ser Ala Thr Glu Ile Ile Lys Ala Ser Ser Lys
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Asp Ala Ile Arg Leu
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Arg Lys Ala Val Ile Val Lys Asn Ile Asp Asp Gly Thr Ser Asp Arg
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Pro Tyr
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Arg Val Thr Ile Ala Gln Gly Gly Val Leu Pro Asn Ile Gln Ala Val
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<212> PRT
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Ser Leu Val Ser Lys Gly Ile Leu Val Gln Thr Lys Gly Thr Gly Ala
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Ser Gly Ser Phe
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Ser Thr Ile Thr Ser Arg Glu Ile Gln Thr Ala Val
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<210> 20
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Thr Lys Val Lys Ala Ala Pro Glu Glu Ser Glu Ala Gln Ala Glu Gly
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Cys Ser Glu Glu Arg Thr Tyr
20
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Thr Leu Val Ile Thr Asp Lys Glu Lys Ala Glu Lys Leu Lys
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Thr Tyr Val Pro Val Thr Thr Phe Lys
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
Val Glu Lys Gly Ile Ile Asp Pro Thr Lys Val Val Arg Thr
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Val Arg Tyr Ser Leu Asp Pro Glu Asn Pro Thr Lys Ser Cys Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
Asn Gln Ile Leu Arg Ile Glu Glu Glu Leu Gly Ser Lys Ala Lys Phe
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Ala Gly Arg Ser Phe
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Ser Leu Ala Asp Leu Gln Asn Asp Glu Val Ala Phe Arg Lys Phe
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
Ile Gly Pro Glu Tyr Gln Gln Asp Leu Asp Arg Glu Leu Tyr
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Lys Lys Glu Lys Val Leu Ala Thr Val Thr Lys Thr Val Gly Gly Asp
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Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Leu Leu Pro Lys Lys Ser Ser Ala Thr Val Gly Pro Lys Ala Pro Ala
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Val Gly Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Pro Lys Arg Lys Val Ser Ala Asp Gly Ala Ala Lys Ala Glu Pro Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
Ser Glu Gly Val Phe Leu Leu Thr Thr Thr Pro Arg Pro Val
1 5 10
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