具体实施方式

本文中的方法、系统、组合物等涉及这样的岩藻糖酶：所述岩藻糖酶能够酶促水解原料褐藻糖胶组合物，以获得所需的相对于原料褐藻糖胶组合物的较低分子量分布的褐藻糖胶。因此，本文所讨论的岩藻糖酶用于选择性地、可控制地裂解褐藻糖胶以减小其尺寸，从而选择性地、可控制地降低原料组合物中的褐藻糖胶的分子量分布，以提供包含改性褐藻糖胶的所需的较低分子量分布的改性褐藻糖胶组合物。

在附图中以岩藻多糖作为褐藻糖胶的实施例示出了方法等的某些实施方式作为实施例。讨论了相应的天然和合成岩藻糖酶的编码区岩藻糖酶基因序列和岩藻糖酶氨基酸序列的组成。作为原料褐藻糖胶组合物的酶促水解产物而获得的较低分子量的褐藻糖胶组合物具有相对于原料褐藻糖胶分布的较低的平均分子量分布。分子量分布的这种转变可能伴随着分布的分散性和形状的改变。

转向本文讨论的某些岩藻糖酶的开发，从收集自卡布罗湾(Cadboro Bay)和维罗海滩(Willows Beach)(维多利亚，温哥华岛，不列颠哥伦比亚省，加拿大)的海岸的褐色大型藻类中分离出了溶于岩藻多糖的(fucoidanolytic，岩藻多糖溶解的)嗜冷单胞菌属的菌种SW5A和SW19D。从培养的嗜冷单胞菌属的菌种SW5A和SW19D中提取出了基因组DNA，并且在Illumina MiSeq平台上进行了其基因组的下一代测序。注释基因组以标识对碳水化合物活性酶编码的推定基因。在该注释过程中，在嗜冷单胞菌属的菌种嗜冷单胞菌属sp.SW5A和嗜冷单胞菌属sp.SW19D的基因组中标识了对P5AFcnA和P19DFcnA酶编码的岩藻糖酶基因序列。

从嗜冷单胞菌属的菌种嗜冷单胞菌属sp.SW5A和嗜冷单胞菌属sp.SW19D的基因组获得了对P5AFcnA和P19DFcnA酶编码的岩藻糖酶基因序列。从订购了对P5AFcnA和P19DFcnA酶编码的合成岩藻糖酶基因，其经过密码子优化用于在大肠杆菌中表达，并且被预先插入到大肠杆菌表达质粒pET28a中。这些构建体称为pET28a_p5AFcnA和pET28a_P19DFcnA。通过双向DNA测序证实了构建体的序列保真度。在具有六组氨酸标签的大肠杆菌过表达系统中表达了岩藻糖酶。为了纯化重组蛋白，对细胞进行了采集、化学裂解并离心以从细胞裂解物上清液中分离出细胞碎片。然后通过固定化镍亲和色谱法从裂解物中纯化蛋白质。将纯化的蛋白质用0.5M NaCl缓冲液透析到20mM Tris pH 8.5中，并且浓缩至29μM以备后用。天然的和合成的P5AFcnA岩藻糖酶的岩藻糖酶基因的编码区序列分别示于表1A和1B中，其分别为SEQ ID NO.1和2。天然的和合成的P19DFcnA岩藻糖酶的岩藻糖酶基因的编码区序列分别示于表1C和1D中，其分别为SEQ ID NO.3和4。天然的和合成的P5AFcnA岩藻糖酶的氨基酸序列分别示于表1E和1F中，其分别为SEQ ID NO.5和6。天然的和合成的P19DFcnA岩藻糖酶的氨基酸序列分别示于表1G和1H中，其分别为SEQ ID NO.7和8。在一些实施方式中，在合适的表达载体中可控制地表达本文所示的核酸序列，https://en.wikipedia.org/wiki/Expression_vector。这样的表达载体可以针对原核或真核表达进行优化，并且根据需要可以包括质粒、表达病毒、无细胞系统等。根据需要，表达载体还可以包括所选择的引物、复制起点等。

以下将表1A所示的岩藻糖酶基因序列SEQ ID NO.1称为天然P5AFcnA基因序列。以下将表1B所示的岩藻糖酶基因序列SEQ ID NO.2称为合成的P5AFcnA基因序列。以下将表1C所示的岩藻糖酶基因序列SEQ ID NO.3称为天然的P19DFcnA基因序列。以下将表1D所示的岩藻糖酶基因序列SEQ ID NO.4称为合成的P19DFcnA基因序列。针对用大肠杆菌表达酶优化了合成序列。以下将表1E所示的氨基酸序列SEQ ID NO.5称为天然的P5AFcnA氨基酸序列。以下将表1F所示的氨基酸序列SEQ ID NO.6称为合成的P5AFcnA氨基酸序列。以下将表1G所示的氨基酸序列SEQ ID NO.7称为天然的P19DFcnA氨基酸序列。以下将表1H所示的氨基酸序列SEQ ID NO.8称为合成的P19DFcnA氨基酸序列。

褐藻糖胶的酶促水解

图1的流程图描绘了示例性方法[100]，用于通过原料褐藻糖胶组合物的酶促水解来获得所需的相对于原料褐藻糖胶组合物的较低分子量的褐藻糖胶组合物，即，用于降低组合物中的褐藻糖胶的平均分子量平均值。在该示例性的非限制性方法中，该方法包括：提供[110]水溶液(即，人造的、通常是缓冲的溶液)形式的原料褐藻糖胶组合物；将溶液形式的原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]，以产生包含水解的褐藻糖胶组合物的溶液、岩藻糖酶和水解残余分子；以及将包含水解的褐藻糖胶组合物的溶液与水解残余分子和岩藻糖酶分离[130]，以获得所需的较低分子量的褐藻糖胶组合物。

提供[110]原料褐藻糖胶组合物可以包括：提供褐藻糖胶/原料岩藻多糖组合物，其是从以下各项中的至少一项中提取的：小腺囊藻(Adenocystis utricularis)、泡叶藻(Ascophyllum nodosum)、绳藻(Chorda filum)、Cystoseirabies marina、南极公牛藻(Durvillaea antarctica)、褐藻门昆布(Ecklonia kurome)、极大昆布(Eckloniamaxima)、爱森藻(Eisenia bicyclis)、岩藻(Fucus evanescens)、墨角藻(Fucusvesiculosis)、羊栖菜(Hizikia fusiforme)、伸长海条藻(Himanthalia Elongata)、笼目海带(Kjellmaniella crassifolia)、Laminaria brasiliensis、拟菊苣海带(Laminariacichorioides)、极北海带(Laminaria hyperborea)、日本真海带(Laminaria japonica)、糖海带(Laminaria saccharina)、Lessonia trabeculata、巨藻(Macrocystis pyrifera)、Pelvetia fastigiata、沟鹿角菜(Pelvetia Canaliculata)、Saccharina japonica、糖海带(Saccharina latissima)、Sargassum stenophylum、鼠尾藻(Sargassum thunbergii)、海嵩子(Sargassum confusum)、马尾藻科植物羊栖菜(Sargassum fusiforme)及裙带菜(Undaria pinnatifida)。在某些实施方式中，褐藻糖胶可以从Saccharina japonica、极北海带(Laminaria hyperborea)、Macrocystis pyifera和绳藻(Chorda filum)中的至少一种获得。

提供[110]水溶液形式的原料褐藻糖胶组合物可以包括：以约0.01％w/v至约30％w/v之间的褐藻糖胶浓度提供溶液形式的原料褐藻糖胶组合物。提供[110]水溶液形式的原料褐藻糖胶组合物可以包括：以约0.05％w/v至约10％w/v之间的褐藻糖胶浓度提供溶液形式的原料褐藻糖胶组合物。提供[110]水溶液形式的原料褐藻糖胶组合物可以包括：以约0.1％w/v至约5％w/v之间的褐藻糖胶浓度提供溶液形式的原料褐藻糖胶组合物。

提供[110]水溶液形式的原料褐藻糖胶组合物可以包括：提供溶液形式的原料褐藻糖胶组合物，该溶液包含以下各项中的至少一项：磷酸二氢钠、磷酸二钠、磷酸三钠、磷酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲盐水、三甲基甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液(也称为Tris缓冲液)、氯化钠、Trizma^TM缓冲液、β-羟基-4-(2-羟乙基)哌嗪-1-丙磺酸(也称为HEPPSO)缓冲液、哌嗪-l,4-双(2-羟基丙磺酸)二水合物(也称为POPSO)缓冲液、三乙醇胺(TEA)缓冲液、3-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]丙烷-1-磺酸(EPPS)缓冲液、甘氨酸缓冲液、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-(4-丁磺酸)(HEPBS)缓冲液、2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸(HEPES)缓冲液、[三(羟甲基)甲胺基]丙磺酸(TAPS)缓冲液、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇(也称为AMPD)缓冲液、N-三(羟甲基)甲基-4-氨基-丁磺酸(也称为TABS)缓冲液、N-(l,1-二甲基-2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基-丙磺酸(AMPSO)缓冲液、2-(环己基氨基)乙磺酸(CHES)缓冲液、3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙烷-磺酸(CAPSO)缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇(也称为AMP)缓冲液、3-(环己基氨基)-1-丙烷-磺酸(CAPS)缓冲液、4-(环己基氨基)-1-丁磺酸(CABS)缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、柠檬酸磷酸盐缓冲液、碳酸钠-碳酸氢盐缓冲液和碳酸氢铵。缓冲溶液可具有的pH为例如弱酸性至弱碱性，例如约5.5-10.5、6.5-9.0、7.5-8.8或8.0-8.5的pH。

将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括：将原料褐藻糖胶组合物与嗜冷单胞菌属岩藻糖酶一起温育。将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括：将原料褐藻糖胶组合物与通过大肠杆菌生产的重组岩藻糖酶一起温育。将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括：将原料褐藻糖胶组合物与P5AFcnA和P19DFcnA岩藻糖酶(例如，合成生产的非天然P5AFcnA和P19DFcnA岩藻糖酶)中的至少一种或两种一起温育。将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括将原料褐藻糖胶组合物与这样的岩藻糖酶一起温育：该岩藻糖酶通过大肠杆菌或嗜冷单胞菌属的菌种或任何其他合适的原核或真核宿主/产物物种而从其岩藻糖酶基因或改性的岩藻糖酶基因被转译。本文的方法可包括通过表达以下各项中的至少一项的岩藻糖酶基因序列来产生酶：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，其中，少于5％的密码子被取代。将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括将原料褐藻糖胶组合物与通过这样的序列编码的岩藻糖酶一起温育：在该序列中，天然的P5AFcnA序列SEQ ID NO.1和5的至少一个、三个或五个但少于1％、3％或5％的密码子或氨基酸分别被取代。将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括将原料褐藻糖胶组合物与通过这样的序列编码的岩藻糖酶一起温育：在该序列中，合成的P5AFcnA序列SEQ ID NO.2和6的少于1％、3％或5％的密码子或氨基酸分别被取代。将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括将原料褐藻糖胶组合物与通过这样的序列编码的岩藻糖酶一起温育：在该序列中，天然的P19DFcnA序列SEQ ID NO.3和7的至少一个、三个或五个但少于1％、3％或5％的密码子或氨基酸分别被取代。将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括将原料褐藻糖胶组合物与通过这样的序列编码的岩藻糖酶一起温育：在该序列中，合成的P19DFcnA序列SEQ ID NO.4和8的少于1％、3％或5％的密码子分别被取代。

将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括：将原料褐藻糖胶组合物-岩藻糖酶混合物保持在约0℃至约60℃之间、约15℃至40℃之间、约20℃至30℃之间，例如，约23℃、约25℃和约27℃。

将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括：以至少一种形式搅动混合物，例如通过搅拌、摇动、晃动或混合原料褐藻糖胶组合物-岩藻糖酶混合物，例如持续至少1分钟至整个温育期。

将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括：将原料褐藻糖胶组合物-岩藻糖酶混合物温育约30分钟至约300小时之间、约1小时至约100小时之间、约2小时至约50小时之间、约3小时至约24小时，例如约5小时、约10小时、约15小时和约20小时。

将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括：温育原料褐藻糖胶组合物-岩藻糖酶混合物直至在褐藻糖胶组合物中获得所需的分子量。将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括：温育原料褐藻糖胶组合物-岩藻糖酶混合物直至在褐藻糖胶组合物中获得的平均分子量降低至少约5％或10％、在褐藻糖胶组合物中获得的平均分子量降低至少约20％，例如，直至在褐藻糖胶组合物中获得的平均分子量降低约40％、约50％或约60％。将原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育[120]可包括：温育原料褐藻糖胶组合物-岩藻糖酶混合物直至原料褐藻糖胶组合物中的褐藻糖胶中的至少5％或10％的糖苷键被水解、原料褐藻糖胶组合物中的褐藻糖胶中的至少20％的糖苷键被水解，例如，直至约40％、约50％和约60％的糖苷键被水解。

将包含水解的褐藻糖胶组合物的溶液与水解残余分子和岩藻糖酶分离[130]可包括：在分离之前，用猝灭剂淬灭包含水解的褐藻糖胶组合物的溶液中的岩藻糖酶，以终止水解。猝灭溶液中的岩藻糖酶可包括：使溶液呈碱性。使溶液呈碱性可包括：将溶液的pH增加至约9-14。使溶液呈碱性可包括：向溶液中添加NaOH、KOH和LiOH中的至少一种。淬灭溶液中的岩藻糖酶还可以包括或替代性地包括：将溶液加热至60-100℃之间，例如加热至约80℃或以上。猝灭溶液中的岩藻糖酶还可以包括或替代性地包括：用沉淀剂(诸如乙醇、异丙醇、丙醇和甲醇中的至少一种)沉淀岩藻糖酶。

将水解的褐藻糖胶组合物与水解残余分子和岩藻糖酶分离[130]可包括：通过切向流过滤(TFF)过滤器对溶液进行渗滤。渗滤可包括：用蒸馏水、盐溶液和缓冲溶液中的至少一种渗滤包含水解的褐藻糖胶组合物的溶液。渗滤可包括：通过具有截留分子量小于所需褐藻糖胶组合物中的所需分子量的TFF过滤器来渗滤包含水解的褐藻糖胶组合物的溶液。渗滤可包括：通过截留分子量为5kDa、10kDa、30kDa、50kDa、70kDa或100kDa中的任一种的TFF过滤器来渗滤溶液中的原料褐藻糖胶组合物。将水解的褐藻糖胶组合物与水解残余分子和岩藻糖酶分离[130]可包括离心、过滤和沉降中的至少一种。

实施例

将图1中所讨论的上述方法应用于提取自Saccharina japonica、泡叶藻(Ascophyllum nodosum)、沟鹿角菜(Pelvetia Canaliculata)、墨角藻(Fucusvesiculosus)、极北海带(Laminaria hyperborea)和巨藻(Macrocystis pyrifera)的单独的原料岩藻多糖组合物。所用的岩藻糖酶是先前讨论的MfFcnA岩藻糖酶(Colin等人，2006)以及如上所述获得的P5AFcnA和P19DFcnA岩藻糖酶。将原料岩藻多糖组合物以约0.1至0.2％w/v溶解在具有0.5M NaCl的pH 8.5的20mM Tris缓冲液中。分别添加具有0.5M NaCl的pH 8.5的同一Tris缓冲液中的MfFcnA、P5AFcnA或P19DFcnA的29μM溶液，以将原料岩藻多糖组合物的溶液分离至10μM岩藻糖酶的最终浓度。将原料岩藻多糖组合物-岩藻糖酶混合物全部在25℃下在定轨摇床上以100rpm温育15小时。

15小时后，使用碳水化合物-聚丙烯酰胺凝胶电泳(C-PAGE)技术分析每种单独的原料岩藻多糖组合物-岩藻糖酶混合物中水解的发生：将10μL水解的岩藻多糖组合物-岩藻糖酶混合物与10μL加载染料(10％v/v甘油、0.01％w/v溴酚蓝的水溶液)混合。将得到的混合物加载到在冰上运行的24％w/v C-PAGE凝胶上，首先在100伏的电压下持续15分钟，其次在150伏的电压下持续20分钟，最后在200伏的电压下持续20分钟。

C-PAGE分析的结果示出在下文表2中，其中评估了水解的发生。C-PAGE凝胶上不存在水解和存在水解的实施例示出在图2A、图2B和图2C中。在表中，“+”表示在凝胶上观察到褐藻糖胶组合物的水解，“-”表示在凝胶上未观察到褐藻糖胶组合物的水解，而“+/-”表示观察到最小的水解。

表2.使用三种不同的岩藻糖酶对岩藻多糖的酶促水解

在不同条件下，将上文和图1中所讨论的方法应用于提取自以下不同来源的单独的原料岩藻多糖组合物：巨藻(Macrocystis pyrifera)、绳藻(Chorda filum)、泡叶藻(Ascophylum nodosum)、极北海带(Laminaria hyperborea)、Saccharina japonica和墨角藻(Fucus vesiculosus)。将原料岩藻多糖组合物以0.25％w/v溶解，并与1μM的相同岩藻糖酶一起在室温下温育40小时。使用同一Tris缓冲液组合物，将其pH调节至8.0。

在C-PAGE上进行分析，结果示出在下文表3中，其中评估了水解的发生。在表中，“+”表示在凝胶上观察到褐藻糖胶组合物的水解，“-”表示在凝胶上未观察到褐藻糖胶组合物的水解，而“+/-”表示观察到最小的水解。

表3.使用三种不同的岩藻糖酶对岩藻多糖的酶促水解

表2和表3连同图2A、图2B和图2C表明，与先前讨论的MfFcnA岩藻糖酶相比，P5AFcnA岩藻糖酶和P19DFcnA岩藻糖酶显示了不同的酶活性。P5AFcnA岩藻糖酶和P19DFcnA岩藻糖酶能够酶促降解从极北海带(Laminaria hyperborea)和巨藻(Macrocystispyifera)提取的岩藻多糖，并且可以在更大程度上降解Saccharina japonica，而MfFcnA岩藻糖酶无法做到这一点。两个单独实验之间结果的差异说明了这样的事实：从不同来源甚至相同物种中提取的岩藻多糖可能在骨架结构上显示出细微差异，这可能取决于地理或季节变化。

本申请进一步涉及根据本文所讨论的方法、系统等的各种要素制备的褐藻糖胶组合物，以及使用所述组合物的方法及配置成执行本文的方法并获得所需褐藻糖胶组合物的系统和器械等。

附图标号列表：

100 用于通过酶促水解原料褐藻糖胶组合物来获得所需的相对于原料褐藻糖胶组合物的较低分子量的褐藻糖胶组合物的方法。

110 提供水溶液形式的原料褐藻糖胶组合物。

120 将溶液形式的原料褐藻糖胶组合物与岩藻糖酶一起温育，以产生包含水解的褐藻糖胶组合物的溶液、岩藻糖酶和水解残余分子。

130 将包含水解的褐藻糖胶组合物的溶液与水解残余分子和岩藻糖酶分离，以获得所需分子量的褐藻糖胶组合物。

除非上下文或定义另有清楚说明，否则本文中使用的所有术语均按照其普通含义使用。另外，除非另有明确说明，否则在说明书中使用的“或”包括“和”，反之亦然。除非另有明确指出或上下文另有清楚说明，否则非限制性术语不应解释为限制性的(例如，“包括(including)”、“具有”和“包含(comprising)”通常表示“包括但不限于”)。除非另有明确指出或上下文另有清楚说明，否则单数形式(包括在权利要求书中，诸如“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”)包括复数引用。

除非另有指出，否则本文中对实施方式的一个或多个特征的条件或关系特征进行修饰的形容词(诸如“基本上”和“约”)表示，该条件或特征被定义为，对于该实施方式针对预期应用的操作而言，处于可接受的允许范围内。

本发明的方法、组合物、系统等的范围包括装置(means)加功能以及步骤加功能这两种概念。然而，除非在权利要求中具体地陈述词语“装置”，否则权利要求不应被解释为表示“装置加功能”的关系，而在权利要求中具体地陈述词语“装置”的情况下，权利要求应解释为表示“装置加功能”的关系。类似地，除非在权利要求中具体地陈述词语“步骤”，否则权利要求不应解释为表示“步骤加功能”的关系，而在权利要求中具体地陈述词语“步骤”的情况下，权利要求应解释为表示“步骤加功能”的关系。

根据以上所述，应当理解，尽管出于说明的目的已经在本文中讨论了具体的实施方式，但是可以在不背离本文所讨论的精神和范围的情况下进行各种修改。因此，系统和方法等包括对本文提出的主题所做的这样的修改以及所有排列和组合，并且仅受所附权利要求或在本文的讨论和附图中具有足够支持的其他权利要求的限制。

序列表

<110> ARC医疗器械股份有限公司

<120> 褐藻糖胶的酶促水解

<130> 1946-023-05

<160> 112

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 1

atgttaattt cagttactgt tttagtaggc tgtggaagca gtagtgatga agttgagtct 60

<210> 2

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 2

acaaatacaa ctgactcata taacattaat aacacagaag cgactggtat tgaatacaat 60

<210> 3

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 3

gctagttgga tggcaggtac ttgggggatt acacaacgtg tagacggtgg ttataaattg 60

<210> 4

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 4

gataactccg cagactcctc taattggcag gcaggtgcag aagaaattgt tactaacatt 60

<210> 5

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 5

cctgcggcag aatacgtcat aacatcattt acccacccag cgcacggtca cctattcaca 60

<210> 6

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 6

ttacgaacta ataataatgt ggatgtatca gcaattcacc ctgatatggt acccacatta 60

<210> 7

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 7

gaaaatgaaa aaatcattct tgatgttatt aatatatatc gcgctgcggg taaaaaagta 60

<210> 8

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 8

attctatatt taaattcagc aggaccttca atggcagagg agcgaggtga tactgatatc 60

<210> 9

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 9

caagctgcat gggatgaata ctatatcaat gagtgggatg gagatgaagc agctgcttgg 60

<210> 10

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 10

cgtaatttag ctcgaggata tgtagagcgt ttcgatggtt tagtagatgg ctattggtta 60

<210> 11

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 11

gacaactcca gaaacttgcc aggtgaggta tctgactttg ttgctatgct gcgtagcgtt 60

<210> 12

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 12

gatcccgaat taacgattgc cgttaattat gaccaacact actttaccga tgataacgga 60

<210> 13

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 13

gaatatttat atgttgattc tgacggttta gatgatgaag atgaaagcga ttataaaata 60

<210> 14

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 14

gtaaaacatg tagtgacaaa tgaatacatg gattttacta acggacatgt cacaccatta 60

<210> 15

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 15

gggcgaggtg cgcctcccaa ttcttgggct tatgaggaat atactattcc agatatgatt 60

<210> 16

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 16

gaggtaccat gggaaaccta tgatggcagt aaatatgcat taaaacacgg ctggttccct 60

<210> 17

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 17

attagaaact cgtggagtgg ttcaaaagct gaacttatgt ttgatgttga gcaagcttat 60

<210> 18

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 18

cgatttgtta gaacagttac tgatggagga gctgcaatga catggtcaag cactcaagac 60

<210> 19

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 19

aatggctaca tgactgccga tgaaatgagt ataatgattg aaattagtaa tagaatgaca 60

<210> 20

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 20

caaaccccta aaccagatta ctcagtttat gaaaggccaa aaggcgcata tctagtgagt 60

<210> 21

<211> 12

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 21

gaaatagaat aa 12

<210> 22

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 22

atgggcagca gccatcatca tcatcatcac agcagcggcc tggtgccgcg cggcagccat 60

<210> 23

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 23

atgggtagca gcagcgacga ggttgaaagc accaacacca ccgatagcta caacattaac 60

<210> 24

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 24

aacaccgagg cgaccggcat cgaatataac gcgagctgga tggcgggtac ctggggcatt 60

<210> 25

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 25

acccagcgtg tggacggtgg ctacaagctg gacaacagcg cggatagcag caactggcaa 60

<210> 26

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 26

gcgggtgcgg aggaaattgt gaccaacatc ccggcggcgg aatacgttat taccagcttc 60

<210> 27

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 27

acccatccgg cgcatggtca cctgtttacc ctgcgtacca acaacaacgt ggacgttagc 60

<210> 28

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 28

gcgatccacc cggatatggt tccgaccctg gagaacgaaa aaatcattct ggacgtgatc 60

<210> 29

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 29

aacatttacc gtgcggcggg taagaaagtt atcctgtatc tgaacagcgc gggtccgagc 60

<210> 30

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 30

atggcggagg aacgtggcga caccgatatt caggcggcgt gggatgagta ctatatcaac 60

<210> 31

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 31

gagtgggatg gtgatgaagc ggcggcgtgg cgtaacctgg cgcgtggcta cgtggagcgt 60

<210> 32

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 32

ttcgacggtc tggttgatgg ctattggctg gacaacagcc gtaacctgcc gggtgaagtg 60

<210> 33

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 33

agcgactttg ttgcgatgct gcgtagcgtg gatccggagc tgaccattgc ggttaactac 60

<210> 34

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 34

gatcaacact atttcaccga cgataacggt gaatacctgt atgtggacag cgatggcctg 60

<210> 35

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 35

gacgatgagg acgaaagcga ttacaagatc gttaaacacg tggttaccaa cgagtatatg 60

<210> 36

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 36

gactttacca acggtcatgt gaccccgctg ggtcgtggcg cgccgccgaa cagctgggcg 60

<210> 37

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 37

tacgaggaat ataccattcc ggacatgatc gaggttccgt gggaaaccta cgatggtagc 60

<210> 38

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 38

aagtatgcgc tgaaacacgg ctggttcccg attcgtaaca gctggagcgg cagcaaggcg 60

<210> 39

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 39

gaactgatgt tcgacgtgga gcaggcgtac cgttttgtgc gtaccgttac cgatggtggc 60

<210> 40

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 40

gcggcgatga cctggagcac cacccaagac aacggttata tgaccgcgga tgaaatgagc 60

<210> 41

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 41

atcatgattg agatcagcaa ccgtatgacc cagaccccga agccggatta cagcgtgtat 60

<210> 42

<211> 42

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 42

gaacgtccga aaggcgcgta cctggttagc gagatcgaat aa 42

<210> 43

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 43

atgttaatcg gctgtggtgg aagtagtgca aatcaaactc aatctacgag cgaccaggac 60

<210> 44

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 44

tcatctgaag ttaatgaaac ggtgagctta gacagcgaat atacagctaa ttggatggct 60

<210> 45

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 45

ggtgcttggg gcataactca acgcgtagac ggcggttata aacttgatgc ttctgtagaa 60

<210> 46

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 46

acaggaaaat atgattgggt cgctggtgca gaagaaattg ttgaaaatat tccttcagct 60

<210> 47

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 47

ggttatgtaa ttacatcatt tactcatccc gcccatggtt ttttatatac tttaagagat 60

<210> 48

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 48

aatgaaaacg tagatgttgc tgctattcat cctgatatgg tgccttcttt agaaaatgaa 60

<210> 49

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 49

aaaatvatvt ttgatgttat taatgtatat aaatctgccg gtaagaaagt attattatat 60

<210> 50

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 50

ttgaatacgg caggtcctac tcatgctgca gatagaaact cccccgaaat tcaagatgca 60

<210> 51

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 51

tgggatgatt atgtaaatac gaattggaat ggggatcatg gtgcagcttg gaggaatcta 60

<210> 52

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 52

gttgaaggtt acgctaaaag attcaaaggt ttagttgatg ggttttggtt agataattca 60

<210> 53

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 53

aaaaacatgg ctggaggtca aaaagaaatc cctgaatttc ttgcaatgct tagagatatt 60

<210> 54

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 54

gatccgtcat ttgcaatagg cgtaaattat gaaactcatt attttgaaga tgaagatggt 60

<210> 55

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 55

aactacttaa aagtagcatc agatagcata gatgataacg atgatcgtga atacaaaata 60

<210> 56

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 56

ataaaacatg tagtgaccaa tgaatatatg gactttacta atggccatgt cactccaatg 60

<210> 57

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 57

ggacaaggtg ccccacctaa ttcttggggg tatgaagaat atacaatccc acacatgatt 60

<210> 58

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 58

gaaaaacctt gggatagtgt tgatggtaat cattatgcac ttatgcatgg ttggttccct 60

<210> 59

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 59

atcagattct cttggagcgg ttcaggtgct gagctcatgt ttgaaactga acaagcttat 60

<210> 60

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 60

cggtttgtcc gcacgatcac tgatggtggt gcagcaatga catggtcaac cactcaaaaa 60

<210> 61

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 61

aagggttata tgtcacgaga tgaaatggat ataatgattg aaattaacaa cagaatgaca 60

<210> 62

<211> 60

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 62

caagccccta aactagatta cgaagcttat gaaagaccag aaggggcata tttggttggt 60

<210> 63

<211> 12

<212> DNA

<213> 细菌

<400> 63

gaaatagaat aa 12

<210> 64

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 64

atgggcagca gccatcatca tcatcatcac agcagcggcc tggtgccgcg cggcagccat 60

<210> 65

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 65

atgaaccaga cccaaagcac cagcgaccag gatagcagcg aggtgaacga aaccgttagc 60

<210> 66

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 66

ctggacagcg aatataccgc gaactggatg gcgggtgcgt ggggcattac ccaacgtgtg 60

<210> 67

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 67

gacggtggct acaagctgga tgcgagcgtt gaaaccggta aatatgattg ggtggcgggc 60

<210> 68

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 68

gcggaggaaa ttgttgagaa catcccgagc gcgggttacg tgatcaccag cttcacccac 60

<210> 69

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 69

ccggcgcacg gctttctgta taccctgcgt gacaacgaga acgtggatgt tgcggcgatt 60

<210> 70

<211> 60

<212> DNA

<213> modifed 细菌

<400> 70

cacccggaca tggtgccgag cctggagaac gaaaagatca tcttcgatgt gatcaacgtt 60

<210> 71

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 71

tacaagagcg cgggtaagaa agttctgctg tatctgaaca ccgcgggtcc gacccatgcg 60

<210> 72

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 72

gcggaccgta acagcccgga aattcaggat gcgtgggacg attacgtgaa caccaactgg 60

<210> 73

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 73

aacggtgacc acggtgcggc gtggcgtaac ctggtggagg gttatgcgaa gcgtttcaaa 60

<210> 74

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 74

ggtctggttg acggcttttg gctggataac agcaagaaca tggcgggtgg ccaaaaagag 60

<210> 75

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 75

attccggaat tcgtggcgat gctgcgtgac attgatccga gctttgcgat cggtgttaac 60

<210> 76

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 76

tacgaaaccc actatttcga ggacgaagat ggcaactacc tgaaggttgc gagcgacagc 60

<210> 77

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 77

atcgacgata acgacgatcg tgaatacaag atcattaaac acgtggttac caacgagtat 60

<210> 78

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 78

atggatttca ccaacggtca tgtgaccccg atgggtcaag gtgctccgcc gaacagctgg 60

<210> 79

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 79

ggctacgagg aatataccat tccgcacatg atcgaaaaac cgtgggacag cgttgatggt 60

<210> 80

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 80

aaccactatg cgctgatgca cggctggttc ccgattcgtt ttagctggag cggtagcggc 60

<210> 81

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 81

gcggagctga tgttcgaaac cgaacaggcg taccgttttg ttcgtaccat taccgatggt 60

<210> 82

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 82

ggcgcggcga tgacctggag caccacccaa aagaaaggtt atatgagcgc ggacgaaatg 60

<210> 83

<211> 60

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 83

gatatcatga ttgagatcaa caaccgtatg acccaagcgc cgaagctgga ttacgaggcg 60

<210> 84

<211> 45

<212> DNA

<213> 修饰的细菌

<400> 84

tatgaacgtc cggagggtgc gtacctggtt ggcgagatcg aataa 45

<210> 85

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 85

Met Leu Ile Ser Val Thr Val Leu Val Gly Cys Gly Ser Ser Ser Asp

1 5 10 15

Glu Val Glu Ser Thr Asn Thr Thr Asp Ser Tyr Asn Ile Asn Asn Thr

20 25 30

Glu Ala Thr Gly Ile Glu Tyr Asn Ala Ser Trp Met Ala Gly Thr Trp

35 40 45

Gly Ile Thr Gln Arg Val Asp Gly Gly Tyr Lys Leu

50 55 60

<210> 86

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 86

Asp Asn Ser Ala Asp Ser Ser Asn Trp Gln Ala Gly Ala Glu Glu Ile

1 5 10 15

Val Thr Asn Ile Pro Ala Ala Glu Tyr Val Ile Thr Ser Phe Thr His

20 25 30

Pro Ala His Gly His Leu Phe Thr Leu Arg Thr Asn Asn Asn Val Asp

35 40 45

Val Ser Ala Ile His Pro Asp Met Tyr Pro Thr Leu

50 55 60

<210> 87

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 87

Glu Asn Glu Lys Ile Ile Leu Asp Val Ile Asn Ile Tyr Arg Ala Ala

1 5 10 15

Gly Lys Lys Val Ile Leu Tyr Leu Asn Ser Ala Asp Pro Ser Met Ala

20 25 30

Glu Glu Arg Gly Asp Thr Asp Ile Gln Ala Ala Trp Asp Glu Tyr Tyr

35 40 45

Ile Asn Glu Trp Asp Gly Asp Glu Ala Ala Ala Trp

50 55 60

<210> 88

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 88

Arg Asn Leu Ala Arg Gly Tyr Val Glu Arg Phe Asp Gly Leu Val Asp

1 5 10 15

Gly Tyr Trp Ile Leu Asp Asn Ser Arg Asn Leu Pro Gly Glu Val Ser

20 25 30

Asp Phe Val Ala Met Leu Arg Ser Val Asp Pro Glu Leu Thr Ile Ala

35 40 45

Val Asn Tyr Asp His Tyr Phe Thr Asp Asp Asn Gly

50 55 60

<210> 89

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 89

Glu Tyr Leu Tyr Val Asp Ser Asp Gly Leu Asp Asp Glu Asp Glu Ser

1 5 10 15

Asp Tyr Lys Ile Val Lys His Val Val Thr Asn Glu Tyr Met Asp Phe

20 25 30

Thr Asn Gly His Val Thr Pro Leu Gly Arg Gly Ala Pro Pro Asn Ser

35 40 45

Trp Ala Tyr Glu Glu Asp Thr Ile Pro Asp Met Ile

50 55 60

<210> 90

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 90

Glu Val Pro Trp Glu Thr Tyr Asp Gly Ser Lys Tyr Ala Leu Lys His

1 5 10 15

Gly Trp Phe Pro Ile Arg Asn Ser Trp Ser Gly Ser Lys Ala Glu Leu

20 25 30

Met Phe Asp Val Glu Gln Ala Tyr Arg Phe Val Arg Thr Val Thr Asp

35 40 45

Gly Gly Ala Ala Met Thr Trp Ser Thr Thr Gln Asp

50 55 60

<210> 91

<211> 43

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 91

Asn Gly Tyr Met Thr Ala Asp Glu Met Ser Ile Met Ile Glu Ile Ser

1 5 10 15

Asn Arg Met Thr Gln Thr Pro Lys Pro Asp Tyr Ser Val Tyr Glu Arg

20 25 30

Pro Lys Gly Ala Tyr Leu Val Ser Glu Ile Glu

35 40

<210> 92

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 92

Met Gly Ser Ser His His His His His His Ser Ser Gly Leu Val Pro

1 5 10 15

Arg Gly Ser His Met Gly Ser Ser Ser Asp Glu Val Glu Ser Thr Asn

20 25 30

Thr Thr Asp Ser Tyr Asn Ile Asn Asn Thr Glu Ala Thr Gly Ile Glu

35 40 45

Tyr Asn Ala Ser Trp Met Ala Gly Thr Trp Gly Ile

50 55 60

<210> 93

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 93

Thr Gln Arg Val Asp Gly Gly Tyr Lys Leu Asp Asn Ser Ala Asp Ser

1 5 10 15

Ser Asn Trp Gln Ala Gly Ala Glu Glu Ile Val Thr Asn Ile Pro Ala

20 25 30

Ala Glu Tyr Val Ile Thr Ser Phe Thr His Pro Ala His Gly His Leu

35 40 45

Phe Thr Leu Arg Thr Asn Asn Asn Val Asp Val Ser

50 55 60

<210> 94

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 94

Ala Ile His Pro Asp Met Val Pro Thr Leu Glu Asn Glu Lys Ile Ile

1 5 10 15

Leu Asp Val Ile Asn Ile Tyr Arg Ala Ala Gly Lys Lys Val Ile Leu

20 25 30

Tyr Leu Asn Ser Ala Gly Pro Ser Met Ala Glu Glu Arg Gly Asp Thr

35 40 45

Asp Ile Gln Ala Ala Trp Asp Glu Tyr Tyr Ile Asn

50 55 60

<210> 95

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 95

Glu Trp Asp Gly Asp Glu Ala Ala Ala Trp Arg Asn Leu Ala Arg Gly

1 5 10 15

Tyr Val Glu Arg Phe Asp Gly Leu Val Asp Gly Tyr Trp Leu Asp Asn

20 25 30

Ser Arg Asn Leu Pro Gly Glu Val Ser Asp Phe Val Ala Met Leu Arg

35 40 45

Ser Val Asp Pro Glu Leu Thr Ile Ala Val Asn Tyr

50 55 60

<210> 96

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 96

Asp Gln His Tyr Phe Thr Asp Asp Asn Gly Glu Tyr Leu Tyr Val Asp

1 5 10 15

Ser Asp Gly Leu Asp Asp Glu Asp Glu Ser Asp Tyr Lys Ile Val Lys

20 25 30

His Val Val Thr Asn Glu Tyr Met Asp Phe Thr Asn Gly His Val Thr

35 40 45

Pro Leu Gly Arg Gly Ala Pro Pro Asn Ser Trp Ala

50 55 60

<210> 97

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 97

Tyr Glu Glu Tyr Thr Ile Pro Asp Met Ile Glu Val Pro Trp Glu Thr

1 5 10 15

Tyr Asp Gly Ser Lys Tyr Ala Leu Lys His Gly Trp Phe Pro Ile Arg

20 25 30

Asn Ser Trp Ser Gly Ser Lys Ala Glu Leu Met Phe Asp Val Glu Gln

35 40 45

Ala Tyr Arg Phe Val Arg Thr Val Thr Asp Gly Gly

50 55 60

<210> 98

<211> 53

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 98

Ala Ala Met Thr Trp Ser Thr Thr Gln Asp Asn Gly Tyr Met Thr Ala

1 5 10 15

Asp Glu Met Ser Ile Met Ile Glu Ile Ser Asn Arg Met Thr Gln Thr

20 25 30

Pro Lys Pro Asp Tyr Ser Val Tyr Glu Arg Pro Lys Gly Ala Tyr Leu

35 40 45

Val Ser Glu Ile Glu

50

<210> 99

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 99

Met Leu Ile Gly Cys Gly Gly Ser Ser Ala Asn Gln Thr Gln Ser Thr

1 5 10 15

Ser Asp Gln Asp Ser Ser Glu Val Asn Glu Thr Val Ser Leu Asp Ser

20 25 30

Glu Tyr Thr Ala Asn Trp Met Ala Gly Ala Trp Gly Ile Thr Gln Arg

35 40 45

Val Asp Gly Gly Tyr Lys Leu Asp Ala Ser Val Glu

50 55 60

<210> 100

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 100

Thr Gly Lys Tyr Asp Trp Val Ala Gly Ala Glu Glu Ile Val Glu Asn

1 5 10 15

Ile Pro Ser Ala Gly Tyr Val Ile Thr Ser Phe Thr His Pro Ala His

20 25 30

Gly Phe Leu Tyr Thr Leu Arg Asp Asn Glu Asn Val Asp Val Ala Ala

35 40 45

Ile His Pro Asp Met Val Pro Ser Leu Glu Asn Glu

50 55 60

<210> 101

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 101

Lys Ile Ile Phe Asp Val Ile Asn Val Tyr Lys Ser Ala Gly Lys Lys

1 5 10 15

Val Leu Leu Tyr Leu Asn Thr Ala Gly Pro Thr His Ala Ala Asp Arg

20 25 30

Asn Ser Pro Glu Ile Gln Asp Ala Trp Asp Asp Tyr Val Asn Thr Asn

35 40 45

Trp Asn Gly Asp His Gly Ala Ala Trp Arg Asn Leu

50 55 60

<210> 102

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 102

Val Glu Gly Tyr Ala Lys Arg Phe Lys Gly Leu Val Asp Gly Phe Trp

1 5 10 15

Leu Asp Asn Ser Lys Asn Met Ala Gly Gly Gln Lys Glu Ile Pro Glu

20 25 30

Phe Val Ala Met Leu Arg Asp Ile Asp Pro Ser Phe Ala Ile Gly Val

35 40 45

Asn Tyr Glu Thr His Tyr Phe Glu Asp Glu Asp Gly

50 55 60

<210> 103

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 103

Asn Tyr Leu Lys Val Ala Ser Asp Ser Ile Asp Asp Asn Asp Asp Arg

1 5 10 15

Glu Tyr Lys Ile Ile Lys His Val Val Thr Asn Glu Tyr Met Asp Phe

20 25 30

Thr Asn Gly His Val Thr Pro Met Gly Gln Gly Ala Pro Pro Asn Ser

35 40 45

Trp Gly Tyr Glu Glu Tyr Thr Ile Pro His Met Ile

50 55 60

<210> 104

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 104

Glu Lys Pro Trp Asp Ser Val Asp Gly Asn His Tyr Ala Leu Met His

1 5 10 15

Gly Trp Phe Pro Ile Arg Phe Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ala Glu Leu

20 25 30

Met Phe Glu Thr Glu Gln Ala Tyr Arg Phe Val Arg Thr Ile Thr Asp

35 40 45

Gly Gly Ala Ala Met Thr Trp Ser Thr Thr Gln Lys

50 55 60

<210> 105

<211> 43

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 105

Lys Gly Tyr Met Ser Ala Asp Glu Met Asp Ile Met Ile Glu Ile Asn

1 5 10 15

Asn Arg Met Thr Gln Ala Pro Lys Leu Asp Tyr Glu Ala Tyr Glu Arg

20 25 30

Pro Glu Gly Ala Tyr Leu Val Gly Glu Ile Glu

35 40

<210> 106

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 106

Met Gly Ser Ser His His His His His His Ser Ser Gly Leu Val Pro

1 5 10 15

Arg Gly Ser His Met Asn Gln Thr Gln Ser Thr Ser Asp Gln Asp Ser

20 25 30

Ser Glu Val Asn Glu Thr Val Ser Leu Asp Ser Glu Tyr Thr Ala Asn

35 40 45

Trp Met Ala Gly Ala Trp Gly Ile Thr Gln Arg Val

50 55 60

<210> 107

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 107

Asp Gly Gly Tyr Lys Leu Asp Ala Ser Val Glu Thr Gly Lys Tyr Asp

1 5 10 15

Trp Val Ala Gly Ala Glu Glu Ile Val Glu Asn Ile Pro Ser Ala Gly

20 25 30

Tyr Val Ile Thr Ser Phe Thr His Pro Ala His Gly Phe Leu Tyr Thr

35 40 45

Leu Arg Asp Asn Glu Asn Val Asp Val Ala Ala Ile

50 55 60

<210> 108

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 108

His Pro Asp Met Val Pro Ser Leu Glu Asn Glu Lys Ile Ile Phe Asp

1 5 10 15

Val Ile Asn Val Tyr Lys Ser Ala Gly Lys Lys Val Leu Leu Tyr Leu

20 25 30

Asn Thr Ala Gly Pro Thr His Ala Ala Asp Arg Asn Ser Pro Glu Ile

35 40 45

Gln Asp Ala Trp Asp Asp Tyr Val Asn Thr Asn Trp

50 55 60

<210> 109

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 109

Asn Gly Asp His Gly Ala Ala Trp Arg Asn Leu Val Glu Gly Tyr Ala

1 5 10 15

Lys Arg Phe Lys Gly Leu Val Asp Gly Phe Trp Leu Asp Asn Ser Lys

20 25 30

Asn Met Ala Gly Gly Gln Lys Glu Ile Pro Glu Phe Val Ala Met Leu

35 40 45

Arg Asp Ile Asp Pro Ser Phe Ala Ile Gly Val Asn

50 55 60

<210> 110

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 110

Tyr Glu Thr His Tyr Phe Glu Asp Glu Asp Gly Asn Tyr Leu Lys Val

1 5 10 15

Ala Ser Asp Ser Ile Asp Asp Asn Asp Asp Arg Glu Tyr Lys Ile Ile

20 25 30

Lys His Val Val Thr Asn Glu Tyr Met Asp Phe Thr Asn Gly His Val

35 40 45

Thr Pro Met Gly Gln Gly Ala Pro Pro Asn Ser Trp

50 55 60

<210> 111

<211> 60

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 111

Gly Tyr Glu Glu Tyr Thr Ile Pro His Met Ile Glu Lys Pro Trp Asp

1 5 10 15

Ser Val Asp Gly Asn His Tyr Ala Leu Met His Gly Trp Phe Pro Ile

20 25 30

Arg Phe Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ala Glu Leu Met Phe Glu Thr Glu

35 40 45

Gln Ala Tyr Arg Phe Val Arg Thr Ile Thr Asp Gly

50 55 60

<210> 112

<211> 54

<212> PRT

<213> 氨基酸

<400> 112

Gly Ala Ala Met Thr Trp Ser Thr Thr Gln Lys Lys Gly Tyr Met Ser

1 5 10 15

Ala Asp Glu Met Asp Ile Met Ile Glu Ile Asn Asn Arg Met Thr Gln

20 25 30

Ala Pro Lys Leu Asp Tyr Glu Ala Tyr Glu Arg Pro Glu Gly Ala Tyr

35 40 45

Leu Val Gly Glu Ile Glu

50