具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。

实施例1含杂交构树的发酵饲料的制备

(1)取下述原料备用，其重量百分比分别为：玉米20％、喷浆玉米皮10％、杂交构树粉28％、豆粕15％、麦麸15％、米糠粕10％、糖蜜2％；

(2)将第(1)步准备的原料混合，分别取混合物重量24％、33％和43％的不含氟的水，将复合菌剂和复合酶制剂溶于水中，均匀喷洒在混合物上，使得混合物水分含量为30％、35％和40％左右，充分混匀；

(3)充分混匀后，装入呼吸袋中密封，于25～30℃条件下发酵5天，即得所述发酵饲料。

其中，杂交构树粉由广西南宁荣港生物科技有限公司提供，杂交构树茎秆高至1～1.2m时，于末叶处连茎秆伐下，将鲜构树叶和茎秆于阴凉处晾置2天后，通过磨浆机粉碎，粒度≤2mm。玉米、豆粕、麦麸、米糠粕和喷浆玉米皮粉碎，粒度≤2mm。

其中复合菌剂由乳酸菌、芽孢杆菌和酿酒酵母菌组成。

所述复合菌剂中乳酸菌由植物乳杆菌P-8、干酪乳杆菌HM-10、植物乳杆菌LP6和植物乳杆菌KT-LP9组成；芽孢杆菌由枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌组成。

上述菌株均为现有菌株，本发明不涉及上述菌株的选育分离工作。以下实施例中使用的植物乳杆菌LP6，已于2017年9月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC No.13458，保藏地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。公开号为CN107964520A的中国发明专利《一种复合乳酸菌微生态制剂及其制备方法与应用》已公开该菌株。

植物乳杆菌P-8，已于2012年06月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC No.6312，保藏地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，科学院微生物研究所，邮编：100101，分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。公开号为CN102618461B的中国发明专利《一株可以促进肠道中SIgA分泌的益生菌及其检测方法》已公开该菌株。

植物乳杆菌KT-LP9和干酪乳杆菌HM-10由内蒙古和美科盛生物技术有限公司提供；酿酒酵母菌是猪专用酵母菌，由安琪酵母股份有限公司提供，有效活菌数≥2×10¹⁰CFU/g；枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌由天津博菲德科技有限公司提供，有效活菌数≥2×10¹⁰CFU/g。

每千克发酵饲料原料中所述复合菌剂中各菌的接种量为：植物乳杆菌P-8 1×10⁹CFU、干酪乳杆菌HM-10 10×10⁹CFU、植物乳杆菌LP61×10⁹CFU、植物乳杆菌KT-LP9 10×10⁹CFU、枯草芽孢杆菌8×10⁹CFU、地衣芽孢杆菌8×10⁹CFU、酿酒酵母菌10×10⁸CFU。

复合酶制剂中各酶由天津博菲德科技有限公司提供，其中果胶酶：天津博菲德科技有限公司，产品代号P891，酶活10000U/g；纤维素酶：天津博菲德科技有限公司，产品代号P921，酶活10000U/g；木聚糖酶：天津博菲德科技有限公司，产品代号818，酶活300000U/g；β-葡聚糖酶：天津博菲德科技有限公司，产品代号P862，酶活50000U/g；β-甘露聚糖酶：天津博菲德科技有限公司，产品代号832，酶活20000U/g；酸性蛋白酶：天津博菲德科技有限公司，产品代号P902，酶活50000U/g；中性蛋白酶：天津博菲德科技有限公司，产品代号P901，酶活10000U/g；单宁酶：四川华源盛泰生物科技有限公司，酶活500U/g；

其中，各种酶的酶活性单位U定义如下：

果胶酶：1g酶粉或1ml酶液，在50℃、pH为3.5的条件下，1小时分解果胶产生1mg游离半乳糖醛酸，为一个酶活性单位U；纤维素酶：在37℃、pH为5.5的条件下，每分钟从浓度为4mg/ml的羧甲基纤维素钠溶液中释放1μmol还原糖所需的酶量，为一个酶活性单位U。；木聚糖酶：在37℃、pH为5.5的条件下，每分钟从浓度为5mg/ml的木聚糖溶液中降解释放1μmol还原糖所需要的酶量，为一个酶活力单位U；β-葡聚糖酶：在37℃、pH为5.5的条件下，每分钟从浓度为4mg/ml的β-葡聚糖溶液中释放1μmol还原糖所需的酶量，为一个酶活力单位U；β-甘露聚糖酶：在37℃、pH为5.5的条件下，每分钟从浓度为3mg/ml的甘露聚糖(LBG，槐豆胶，Sigma：G0753)溶液中降解释放1μmol还原糖所需要的酶量，为一个酶活力单位U；酸性蛋白酶：在40℃和pH为3.0的条件下，1min水解酪蛋白产生相当于1μg酚基氨基酸(由酪氨酸等同物)的酶量，为一个酶活力单位U；中性蛋白酶：在40℃和pH为7.2的条件下，1min水解酪蛋白产生相当于1μg酚基氨基酸(由酪氨酸等同物)的酶量，为一个酶活力单位U；单宁酶：在30℃、pH值为5.0的条件下，每分钟降解没食子酸丙酯(PG)溶液解释放1μmol没食子酸所需的酶量，为一个酶活力单位U。

每千克发酵饲料原料中所述复合酶制剂中各酶添加量为：果胶酶180U、纤维素酶180U、木聚糖酶5400U、β-葡聚糖酶240U、β-甘露聚糖酶600U、酸性蛋白酶1500U、中性蛋白酶1500U和丹宁酶150U。

发酵饲料呈酸香味和酒香味，无不良气味，浅绿色或黄绿色，松散柔软无结块，此时发酵饲料中各菌含量见表3，理化指标见表4。

表3发酵饲料中各菌量

表4发酵饲料中各理化指标

实施例2含杂交构树的发酵饲料的制备

(1)取下述原料备用，其重量百分比分别为：玉米15％、喷浆玉米皮15％、杂交构树粉20％、豆粕20％、麦麸12％、米糠粕15％、糖蜜3％；

(2)将第(1)步准备的原料混合，分别取混合物重量19％的不含氟的水，将复合菌剂和复合酶制剂溶于水中，均匀喷洒在混合物上，使得混合物水分含量为30％左右，充分混匀；

(3)充分混匀后，装入呼吸袋中密封，于25～30℃条件下发酵5天，即得所述发酵饲料。

所用复合菌剂和复合酶剂同实施例1。

实施例3含杂交构树的发酵饲料的制备

(1)取下述原料备用，其重量百分比分别为：玉米25％、喷浆玉米皮5％、杂交构树粉35％、豆粕10％、麦麸16％、米糠粕9％；

(2)将第(1)步准备的原料混合，分别取混合物重量19％的不含氟的水，将混合菌剂和复合酶制剂溶于水中，均匀喷洒在混合物上，使得混合物水分含量为30％左右，充分混匀；

(3)充分混匀后，装入呼吸袋中密封，于25～30℃条件下发酵5天，即得所述发酵饲料。

所用复合菌剂和复合酶剂同实施例1。

实施例4含杂交构树的发酵饲料的制备

(1)取下述原料备用，其重量百分比分别为：玉米25％、喷浆玉米皮8％、杂交构树粉35％、豆粕10％、麦麸16％、米糠粕5％、糖蜜1％；

(2)将第(1)步准备的原料混合，分别取混合物重量19％的不含氟的水，将复合菌剂和复合酶制剂溶于水中，均匀喷洒在混合物上，使得混合物水分含量为30％左右，充分混匀；

(3)充分混匀后，装入呼吸袋中密封，于25～30℃条件下发酵5天，即得所述发酵饲料。

所用复合菌剂和复合酶剂同实施例1。

对比例1单复合菌剂发酵饲料的制备

(1)取下述原料备用，其重量百分比分别为：玉米20％、喷浆玉米皮10％、杂交构树粉28％、豆粕15％、麦麸15％、米糠粕10％、糖蜜2％；

(2)将第(1)步准备的原料混合，分别取混合物重量19％的不含氟的水，将复合菌剂溶于水中，均匀喷洒在混合物上，使得混合物水分含量为30％左右，充分混匀；

(3)充分混匀后，装入呼吸袋中密封，于25～30℃条件下发酵5天，即得所述发酵饲料。

所用复合菌剂同实施例1。

对比例2单复合酶制剂发酵饲料的制备

(1)取下述原料备用，其重量百分比分别为：玉米20％、喷浆玉米皮10％、杂交构树粉28％、豆粕15％、麦麸15％、米糠粕10％、糖蜜2％；

(2)将第(1)步准备的原料混合，分别取混合物重量19％的不含氟的水，将复合酶制剂溶于水中，均匀喷洒在混合物上，使得混合物水分含量为30％左右，充分混匀；

(3)充分混匀后，装入呼吸袋中密封，于25～30℃条件下发酵5天，即得所述发酵饲料。

所用复合酶制剂同实施例1。

实施例5不同处理所得发酵饲料酸溶蛋白检测

分别对实施例1处理前的混合原料、对比例1的单复合菌处理制备的发酵饲料、对比例2的单复合酶处理的发酵饲料和实施例1菌酶协同处理的发酵饲料中的酸溶蛋白的含量进行检测，所得结果见表5。

表5不同处理所得发酵饲料酸溶蛋白含量

酸溶蛋白是较低分子量的蛋白水解物，包括肽和游离氨基酸，从检测结果说明实施例1菌酶协同处理的发酵饲料酸溶蛋白含量高，即大分子蛋白质降解程度高，可以提高饲料消化利用率。

实施例6含杂交构树的发酵饲料在生长育肥猪上的应用

选择320头80kg左右的健康状况良好的肥育猪(杜×长×大)，随机分为4组，每组4栏，每栏20头猪。试验Ⅰ组为对照组，饲喂基础饲粮，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别在基础饲粮中添加5％、10％和15％的实施例1中30％水分含量的杂交构树发酵饲料。根据生长育肥猪营养需要调整配方，使对照组和试验组日粮配方营养组成基本一致。试验预试期3d，正式期4周。4组猪除饲喂的饲料不同外，其他饲养条件和管理方式均保持一致。试验期内，采取人工喂料，猪自由采食和饮水。以栏为单位记录肥育猪每周的采食量。在正试第1天和试验第4周早上空腹称重，以栏为单位计算平均体重。试验结束时，每组每栏圈随机选取1头猪进行屠宰，测定屠宰率和肉质。

结果分析：

1、对育肥猪生产性能的影响

如表6所示，日粮中添加5％、10％和15％的杂交构树发酵饲料均会提高育肥猪的干物质采食量，增加平均日增重，降低料重比，差异显著，其中添加10％的试验组日增重最高，料重比最低。

表6对育肥猪生产性能的影响

注：同一行的不同字母表示在P＝0.05的水平上差异显著。

2、对育肥猪屠宰性能的影响

如表7所示，肥育猪日粮中添加5％、10％和15％的构树发酵饲料均会提高屠宰率和瘦肉率，降低背膘厚度。添加量为10％和15％时，屠宰率、瘦肉率和背膘厚度与对照组差异显著，10％和15％添加量的试验组之间差异不显著。

表7对屠宰性能的影响

注：同一行的不同字母表示在P＝0.05的水平上差异显著。

3、对育肥猪健康状况的影响

如表8所示，肥育猪日粮中添加5％、10％和15％的杂交构树发酵饲料均会提高免疫力，降低发病率。但日粮中杂交构树发酵饲料的添加量增多，会影响猪的肠道的菌群结构和pH，从而影响免疫力。因此添加10％杂交构树发酵饲料的试验组为最优添加量。

表8对健康状况的影响

4、对育肥猪猪肉品质的影响

如表9所示，与对照组比较，日粮中添加10％的杂交构树发酵饲料的试验组猪肉中蛋白质、钙、硒和氨基酸含量增加，分别为21.7g/100g、77.6mg/100g、5.8ug/100g和19.9g/100g，比对照组分别增加181.8％、2487％、161.3％和189.5％。胆固醇含量降低为58.8mg/100g，比对照组降低36.77％。说明，日粮中添加杂交构树发酵饲料，可改善猪肉品质。

表9对猪肉品质的影响

综上所述，本发明所述含杂交构树的发酵饲料有利于增加育肥猪的日增重并改善屠宰性能、猪肉品质，增强猪的免疫功能。

实施例7含杂交构树的发酵饲料在妊娠母猪上的应用

选择胎次、体重相近的杜×长×大经产母猪32头，随机分为4组，每组8头。试验Ⅰ组为对照组，饲喂基础饲粮，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别在基础饲粮中添加10％、15％和20％实施例1中的杂交构树发酵饲料(30％水分)，根据妊娠母猪营养需要调整配方，使对照组和试验组日粮配方营养组成基本一致。从母猪空怀期开始进行饲喂，饲养日期为160d。试验期间，每日饲喂2次，自由采食和饮水。试验期间记录母猪的配种受胎情况、产仔数、活仔数和初生仔猪的重量。

如表10所示，肥育猪日粮中添加10％、15％和20％的杂交构树发酵饲料均会增加总产仔数、活仔数和平均初生重，且与对照组差异显著。

表10对母猪生产性能的影响

注：同一行的不同字母表示在P＝0.05的水平上差异显著。

实施例8含杂交构树的发酵饲料在肉禽上的应用

选取270只健康的1日龄AA肉公鸡，随机分为3个处理，每个处理6个重复，每个重复15只鸡。试验Ⅰ组为对照组，饲喂基础饲粮，Ⅱ、Ⅲ组分别在基础饲粮中添加5％和10％的实施例1中30％水分含量的杂交构树发酵饲料。根据肉鸡营养需要调整配方，使各组日粮配方营养组成基本一致。采用笼养的方式进行饲喂，试验期的饲养管理严格按照《AA肉鸡饲养管理手册》进行。整个饲养期鸡只自由采食和饮水。试验期42d，在试验期第42d准确称取每个重复鸡只的体重，以重复为单位统计鸡只的耗料量和体重，分别计算平均日增重、平均日采食量和饲料料重比。

如表11所示，相比于对照组，添加5％和10％本发明发酵饲料显著提高肉鸡平均日增重(P<0.05)，降低了料重比(P<0.05)。

表11对肉鸡生长性能的影响

注：同列数据无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)，不同字母表示差异显著(P<0.05)；下表同。

实施例9含杂交构树的发酵饲料在蛋禽上的应用

选择367日龄海兰褐蛋鸡，将12 000只蛋鸡随机分成3个处理组，每组4 000只，每组设5个重复，采用四层阶梯笼养，自由采食，自由饮水，按免疫程序正常接种免疫，定期消毒。试验Ⅰ组为对照组，饲喂基础饲粮，Ⅱ和Ⅲ组分别在基础饲粮中添加2％、5％的实施例1中30％水分含量的杂交构树发酵饲料。根据蛋鸡营养需要调整配方，使各组日粮配方营养组成基本一致。每日6:30、11:30、17:30喂料，每日11:00、17:00捡蛋，捡蛋后分别进行计数、标记、存放，同时计算每日的产蛋率、破损率。该试验预饲7d，正式试验45d。记录试验期间整体蛋重。试验结束时，每组分别随机抽取30枚蛋，于当日进行蛋品质测定。

由表12可知，试验第45天，日粮中添加2％和5％本发明发酵饲料在产蛋率和日采食量有升高的趋势，蛋破损率和死淘率有下降的趋势，但与对照组无显著差异(P>0.05)，平均日产蛋重比显著高于对照组(P<0.05)。

表12对蛋鸡生产性能的影响

注：同行指标相比，*表示差异显著(P＜0.05)；**表示差异极显著(P＜0.01)。

综上所述，本发明所述含杂交构树的发酵饲料对畜而言：增加育肥猪的日增重并改善屠宰性能、猪肉品质，增强猪的免疫功能，提高妊娠母猪的生产性能；对禽而言：提高肉禽平均日增重，降低料重比，和提高蛋禽产蛋率和日采食量，降低蛋破损率和死淘率，增加平均日产蛋重，本饲料的开发具有巨大经济价值。