一种水蛭提取液制备方法
阅读说明：本技术 一种水蛭提取液制备方法 (Preparation method of leech extract ) 是由 甘奇超 郭平牯 彭治平 于 2020-12-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种水蛭提取液制备方法,其特征是,包括如下步骤：S4:将水蛭中间物减压抽滤后得抽滤液,真空加热浓缩至原体积的1/8～1/3；S5:加入乙醇,使乙醇浓度达到70％～92％,密封,静置20～30h；S6:再次进行减压抽滤,得滤液,浓缩至原体积的1/8～1/3,即可。本发明所得的水蛭提取液抗凝血酶含量高,收率高,提取工艺经济、稳定、可行。(The invention discloses a leech extract preparation method, which is characterized by comprising the following steps: s4, carrying out vacuum filtration on the leech intermediate to obtain a filtrate, and carrying out vacuum heating concentration to 1/8-1/3 of the original volume; s5, adding ethanol to make the ethanol concentration reach 70-92%, sealing, and standing for 20-30 h; and S6, carrying out vacuum filtration again to obtain filtrate, and concentrating the filtrate to 1/8-1/3 of the original volume. The leech extract obtained by the invention has high antithrombin content and high yield, and the extraction process is economic, stable and feasible.)
技术领域
本发明涉及水蛭加工技术领域，特别是涉及一种水蛭提取液的制备方法。
背景技术
以医蛭科动物宽体金线蛭(蚂蝗)、日本医蛭(水蛭)或尖细金线蛭(柳叶蚂蝗)为提取原料的水蛭提取液含有水蛭素、组胺样物质、肝素、抗血栓素等多种药用成分，其中,水蛭素是一种由66个氨基酸残基组成的单链多肽，具有很强的抗凝活性。水蛭提取液具有降低蛋白尿，改善肾功能，降低血脂，抗凝、抗血栓形成、抗炎、抗增殖和抗纤维化等多种药理活性，可以用于多种疾病的治疗，是一种具有广泛应用前景的药物。
现有技术中，水蛭提取液的提取工艺常用浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法，以上方法所得提取液的抗凝血酶含量在200u/g左右，从未超过210u/g，收率较低。
因此本领域技术人员致力于开发一种提高水蛭提取液抗凝血酶含量的水蛭提取液制备方法。
发明内容
有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种提高水蛭提取液抗凝血酶含量的水蛭提取液制备方法。
为实现上述目的，本发明提供了一种水蛭提取液制备方法，包括如下步骤：
S4:将水蛭中间物减压抽滤后得抽滤液，真空加热浓缩至原体积的1/8～1/3；
S5:加入乙醇，使乙醇浓度达到70％～92％，密封，静置20～30h；
S6:再次进行减压抽滤，得滤液，浓缩至原体积的1/8～1/3，即可。
较佳的，所述水蛭中间物通过下列步骤制备：
S1:将水蛭浆液装入第一滤袋，再将第一滤袋置入纯化水中，加热至90～ 120℃，并持续保温0.6～1.5h，趁热整体过滤得到第一滤液；
S2:再次将第一滤袋置入纯化水中，加热至90～120℃，并持续保温0.3～ 1h，趁热整体过滤得到第二滤液；
S3:合并第一滤液和第二滤液，装入第二滤袋，进行离心，直至离心母液中未见大颗粒杂质，收集离心母液，得水蛭中间物。
较佳的，所述水蛭中间物为水蛭干粉加入其3～6倍重量的纯化水。
较佳的，所述步骤S4中，真空加热浓缩的真空度小于-0.08Mpa，加热温度为50～70℃。
较佳的，所述步骤S6中，真空加热浓缩的真空度小于-0.08Mpa，加热温度为30～50℃。
较佳的，所述步骤S1中纯化水的用量为水蛭浆液重量的2～6倍。
较佳的，所述步骤S2中纯化水的用量为水蛭浆液重量的1～5倍。
较佳的，所述第一滤袋为双层200目尼龙纱布滤袋；所述第二滤袋为2000 目滤袋。
本发明的有益效果是：本发明所得的水蛭提取液抗凝血酶含量高，收率高，酒精浓度低，固含量低，提取工艺经济、稳定、可行。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1至3
用水蛭浆液制备水蛭提取液：
包括以下步骤：
S1:将水蛭浆液装入第一滤袋，再将滤袋置入纯化水中，加热至90～120℃，并持续保温0.6～1.5h，趁热整体过滤得到第一滤液。本步骤中过滤是将包含纯化水、第一滤袋、纯化水在内的所有加热物一起过滤。第一滤袋为双层200目尼龙纱布滤袋，其也可直接用双层200目尼龙纱布包裹水蛭浆液，用扎带扎紧减去多余纱布制成。本步骤中纯化水的用量为水蛭浆液重量的2～6倍。
S2:再次将第一滤袋置入纯化水中，加热至90～120℃，并持续保温0.3～ 1h，趁热整体过滤得到第二滤液。本次过滤也是将包括第一滤袋、纯化水在内的所有加热物一起过滤。本步骤中纯化水的用量为水蛭浆液重量的1～5倍。
S3:合并第一滤液和第二滤液，装入第二滤袋，进行离心，直至离心母液中未见大颗粒杂质，收集离心母液，得水蛭中间物。离心母液中未见大颗粒杂质是指肉眼目视无颗粒、无固体杂质。本步骤采用平板式离心机2000目滤袋(即第二滤袋)进行离心。
S4:将水蛭中间物减压抽滤后得抽滤液，真空加热浓缩至原体积的1/8～ 1/3；本步骤中，真空加热浓缩的真空度小于-0.08Mpa，加热温度为50～70℃。
S5:加入乙醇，本步骤中，加入乙醇的浓度为体积分数95％以上的乙醇，使乙醇浓度达到70％～92％，密封，静置20～30h；
S6:再次进行减压抽滤，得滤液，浓缩至原体积的1/8～1/3，即可，得水蛭提取液。本步骤中真空加热浓缩的真空度小于-0.08Mpa，加热温度为30～50℃。
制备过程中，实施例1至3中水蛭浆液用量及其他制备参数如表1：
表1实施例1至3参数表
实施例1
实施例2
实施例3
水蛭浆液质量(kg)
5
5
5
步骤S1中纯化水用量(kg)
10
20
30
步骤S1中加热温度(℃)
90
100
120
步骤S2中纯化水用量(kg)
5
10
25
步骤S2中加热温度(℃)
90
100
120
步骤S4中加热温度(℃)
50
60
70
步骤S5中乙醇浓度
75％
80％
92％
步骤S6中加热温度(℃)
30
40
50
实施例4至6
用水蛭干粉制备水蛭提取液。
包括以下步骤：将水蛭干粉加入其3～8倍重量的纯化水，得水蛭中间物。
再进行以下步骤：
S4:将水蛭中间物减压抽滤后得抽滤液，真空加热浓缩至原体积的1/8～ 1/3；
S5:加入乙醇，使乙醇浓度达到75％～92％，密封，静置20～30h；
S6:再次进行减压抽滤，得滤液，浓缩至原体积的1/8～1/3，即可。
实施例4至6中水蛭干粉及其他制备参数如表2：
表2：实施例4至6参数表
将实施例1至实施例6所得水蛭提取液进行下列项目的检测，检测结果如表3所示。
表3实施例1至6检测结果表
以上检测项目中，抗凝血酶含量的检测依据《中国药典》(2015版)一部水蛭抗凝血酶活性测定中裁定方法检测，检测三次，求其平均值；酒精浓度的测定采用市售酒精计直接测定；固含量的测定依据《中国药典》(2015版)四部 3101固体总量测定法测定，测定三次取平均值；PH值依据《中国药典》(2015 版)四部0631pH值测定法测定；电导率依据《中国药典》(2015版)四部0681 制药用水电导率测定法测定。
通过以上实施例可知，采用本发明方法制得的水蛭提取液，抗凝血酶含量高，且杂质少。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。
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