由咖啡酸丁酯与内生no型壳聚糖介导的纳米静电纺丝食品保鲜膜及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 由咖啡酸丁酯与内生no型壳聚糖介导的纳米静电纺丝食品保鲜膜及其制备方法和应用 (Nano electrostatic spinning food preservative film mediated by butyl caffeate and endogenous NO type chitosan and preparation method and application thereof ) 是由 李栋辉 孔一鸣 石玉刚 吕梦蝶 林珊 王洁倩 于 2021-05-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种由咖啡酸丁酯与内生NO型壳聚糖介导的纳米静电纺丝食品保鲜膜及其制备方法和应用。公开了这一种制备咖啡酸丁酯(CAC4)与内生NO型壳聚糖(NO-CS)介导的超高效多功能纳米静电纺丝食品保鲜膜的方法。另外,还公开了该超高效纳米静电纺丝保鲜膜在在蓝莓鲜果保鲜中的应用,经过处理后的蓝莓鲜果不但能够长时间保持其功效,还有效降低了其贮藏成本。本发明作为新型高效保鲜材料,无味、无毒可食用,组分绿色安全环保,提升了咖啡酸丁酯的抑菌及抗氧化效果,有效地抑制了果蔬产品在贮藏、运输过程中致病菌的污染,能有效延长货架期,扩大了咖啡酸丁酯作为保鲜剂在食品领域的应用范围。(The invention discloses a butyl caffeate and endogenous NO type chitosan mediated nano electrostatic spinning food preservative film and a preparation method and application thereof. Discloses a method for preparing butyl caffeate (CAC4) and endogenous NO type chitosan (NO-CS) mediated ultra-efficient multifunctional nano electrostatic spinning food preservative film. In addition, the application of the ultra-high-efficiency nano electrostatic spinning preservative film in preservation of fresh blueberries is disclosed, and the treated fresh blueberries can keep the efficacy for a long time and effectively reduce the storage cost. The invention is used as a novel efficient fresh-keeping material, is tasteless, nontoxic and edible, has green, safe and environment-friendly components, improves the antibacterial and antioxidant effects of the butyl caffeate, effectively inhibits the pollution of pathogenic bacteria in the storage and transportation processes of fruit and vegetable products, can effectively prolong the shelf life, and expands the application range of the butyl caffeate as a fresh-keeping agent in the field of foods.)
技术领域
本发明涉及食品防腐保鲜膜领域，具体涉及由咖啡酸丁酯(CAC4)与内生NO型壳聚糖(NO-CS)介导的超高效多功能纳米静电纺丝食品保鲜膜，特别适合应用于果蔬保鲜。
背景技术
近年来，随着抗生素被滥用导致细菌的耐药性增强，因此开发新型的非抗生素类杀死或者抑菌剂的任务迫在眉睫。一氧化氮(Nitric oxide,NO)是血管内皮释放的重要信号和功能分子，广泛参与调节各种生理过程。此外，NO还是一种有效的抗菌和抗病毒剂。NO诱导亚硝化和氧化应激直接修饰膜蛋白，被认为在抗菌方面起着至关重要的作用。这种活性物质可能包括NO自由基(NO·)、二氧化氮(NO2·)、三氧化二氮(N2O3)和过氧亚硝酸盐(ONOO·)。这些氧化剂通过自由基诱导DNA链断裂，促进脂质过氧化，这种现象能够杀死癌细胞和细菌。在抗菌应用中，NO不仅能够有效的杀死单一菌株，而且能够杀死混合微生物菌株。因此，NO被认为是抗癌和抗微生物的潜在治疗剂。然而，目前研究的NO供体还存在诸多不足，如生物相容性差、NO负载量低、控释缓释效果不佳等。为了实现NO的可控释放，充分发挥其优异的长效控菌优势，人们开始尝试制备各种NO供体，一个理想的NO释放的大分子载体将是多功能的，并由多个NO供体组成，以实现一个理想的NO有效载荷。
壳聚糖是由甲壳素经脱乙酰化后得到的天然碳水化合物共聚物。壳聚糖的基本组成单位是N-乙酰氨基葡萄糖，而其基本结构单元是甲壳二糖。壳聚糖分为三种不同形式：高分子量壳聚糖、中分子量壳聚糖和低分子量壳聚糖。壳聚糖具有优越的可降解性、在弱酸中的溶解度、pH敏感性、成膜性、生物相容性、非抗原性、无毒性、低成本等特性。此外，壳聚糖还具备天然来源和多种可能的应用，如制备可生物降解的薄膜、共混物、涂层、复合材料、纳米复合材料等。在化学修饰后，由此产生的壳聚糖衍生物可以被赋予新的特性，它们作为多功能纳米载体的潜在用途一直备受关注。S-亚硝基硫醇-壳聚糖(SNO-CS)将是多重生物功效的大分子支架，既可以结合NO释放的能力，产生超强的抗菌和抗生物被膜特性，同时又能被制备成多种形态的纳米材料。
环糊精(CDs)是由某种细菌(如工业上用软化芽孢杆菌Bacillus macerans)转化淀粉而产生的环状葡萄糖低聚物。环糊精的结构整体呈现锥形圆柱体，它们是具有亲水性外表面和亲脂中心腔的甜甜圈状分子，最常见的环糊精为α-环糊精，β-环糊精和γ-环糊精，是常见的食品添加剂。空腔由氢原子和糖苷氧桥排列，糖苷氧桥的非成键电子对定向于腔内，产生较高的电子密度，并具有一定的Lewis碱特性。在水溶液中，环糊精可以通过把一些脂溶性药物的部分溶于中心腔内，改善其水溶性。
酚酸类化合物具有广泛的生理活性和广谱抑菌特性，如抑菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、抗自由基和抗血小板聚集作用等，还可以有效防止氧化损伤，有助于预防心脑血管疾病、神经疾病和癌症等疾病，在食品、医药等领域具有巨大的应用潜力。本课题组长期致力于多酚的改性与功能开发研究，我们的研究表明，酚酸与烷基醇共价接枝后产生的酚脂，具有较对应酚酸更强的生物活性，如更强的抗氧与抑菌效果，可被用于提升食品安全与品质，优化食品加工过程。其中，咖啡酸丁酯(CAC4)，为天然酚酸类物质咖啡酸的烷基衍生物，兼具良好的抗氧化与抑菌效果。
静电纺丝是一种操作简单，可以连续制备聚合物纳米纤维的技术，因其制备的纳米纤维膜有孔隙率高、比表面积大和易于回收的优点，被广泛应用于多个研究领域，近年来，其在功能性食品包装中的应用也备受关注。
根据现有研究已发现，利用纳米静电纺丝技术制成的的咖啡酸丁酯介导的多功能性食品保鲜纳米包装材料不仅抑菌、抗氧化性能良好，且具有可食用性，能够作为营养物质、功能性成分的载体，安全稳定高效，应用范围广。例如，作为多功能食品保鲜材料，本发明在保障优异的食品保鲜功能基础上，被人食用吸收后不仅不会对人体产生毒害作用，还能够为人体提供一定的营养价值；在医学制药领域，使用本发明制作胶囊等包装材料，可以使内容药剂在人体中缓慢释放，从而提高安全性、延长药物作用时间，从而起到更佳的治疗效果；在环保方面，本产品属于纳米材料，原料天然，经纳米静电纺丝技术处理后可降解，对环境、生物友好，绿色环保。
蓝莓，又名蓝梅、笃斯、笃柿、嘟嗜、都柿、甸果、笃斯越桔，是一种小浆果，颗粒小，果实呈蓝色，并被一层白色果粉包裹，果肉细腻，甜酸适口，且具有香爽宜人的香气。蓝莓营养丰富，不仅富含常规营养成分，而且还含有极为丰富的黄酮类和多糖类化合物，它不仅具有良好的营养保健作用，还具有防止脑神经老化、强心、抗癌软化血管、增强人机体免疫等功能，深受消费者喜爱。然而，蓝莓在运输和贮藏过程中容易收到机械损伤和微生物污染致其腐烂变质，所以其货架期很短。因此，开发一种用于蓝莓包装的保鲜膜延长蓝莓货架期尤为必要。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术中的不足之处，本发明的目的是提供一种由咖啡酸丁酯(CAC4)与内生NO型壳聚糖(NO-CS)介导的超高效多功能纳米静电纺丝食品保鲜膜的制备方法和其在果蔬保鲜中的应用。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案在于：
一种由咖啡酸丁酯与内生NO型壳聚糖介导的纳米静电纺丝食品保鲜膜的制备方法，包括以下步骤：
S1.将环糊精与咖啡酸丁酯进行混合，得到咖啡酸丁酯/环糊精超分子包合物；
S2.通过共价修饰天然壳聚糖的方法制备内生NO型壳聚糖；
S3.将咖啡酸丁酯/环糊精超分子包合物和内生NO型壳聚糖混合，得到均相溶液，将均相溶液通过静电纺丝技术加工成超高效多功能纳米静电纺丝膜(即纳米静电纺丝食品保鲜膜)，并应用于蓝莓鲜果的贮藏与保鲜。
步骤S1中，将环糊精与咖啡酸丁酯进行混合，得到咖啡酸丁酯/环糊精超分子包合物，具体包括：
将环糊精溶解于水中，磁力搅拌至完全溶解，得到环糊精水溶液；再将含咖啡酸丁酯的无水乙醇溶液滴加至上述环糊精水溶液中，滴加结束后，在55～65℃下持续搅拌36～60h；在-2至-8℃冰箱放置36～60h，至白色固形物析出，过滤并收集滤液，在-15至-25℃冰箱冷藏过夜，在-40至-50℃冷冻干燥18～30h后获得咖啡酸丁酯-环糊精超分子包合物。
进一步优选，室温下，将环糊精溶解于去离子水中，磁力搅拌至完全溶解；再将含咖啡酸丁酯的无水乙醇溶液缓慢滴加至上述环糊精水溶液中，滴加结束后，在60℃下持续搅拌48h；在-4℃冰箱放置48h，至白色固形物析出，过滤并收集滤液，在-20℃冰箱冷藏过夜，在-45℃冷冻干燥24h后获得所述的咖啡酸丁酯-环糊精超分子包合物。
所述的咖啡酸丁酯与环糊精的摩尔比为0.25～1.5：1。
环糊精(CD)的络合作用为提高化合物的水溶性、溶出率、生物利用率和稳定性提供了一条简便、安全的途径。环糊精是一种环状低聚糖，具有疏水内部和亲水外部的截锥结构。环糊精的疏水腔可以含有非极性客体分子，而它的亲水性外部可以使客体分子在水中溶解。母体环糊精包括α-环糊精(α-CD)、β-环糊精(β-CD)和γ-环糊精(γ-CD)，分别由6个、7个、8个α-(1,4)糖苷键连接葡萄糖亚基组成。
作为优选，β-CD或羟丙基-β-CD，作为最容易获得和最便宜的CDs，由于其合适的腔径和体积在食品、医药、化妆品等领域得到了广泛的应用。
所述的环糊精可以是α-环糊精(α-CD)、β-环糊精(β-CD)、γ-环糊精(γ-CD)和羟丙基β-环糊精(HP-β-CD)。
步骤S2中，通过共价修饰天然壳聚糖的方法制备内生NO型壳聚糖具体包括：
S2.1将壳聚糖和氯化锂溶解于N,N-二甲基苯胺(DMA)中，向体系中加入三乙胺和对甲苯磺酰氯，搅拌反应，丙酮沉淀，过滤并洗涤沉淀，真空除残留溶剂；
S2.2将步骤S2.1产物与氯化锂加入N,N-二甲基苯胺(DMA)中，继续加入三乙胺和乙二硫醇(即1,2-乙二硫醇)，氮气保护下，50～70℃搅拌过夜，丙酮沉淀，过滤并洗涤沉淀，然后将其重悬在含有二硫苏糖醇和三乙胺的N,N-二甲基苯胺(DMA)中，搅拌，过滤并洗涤沉淀，真空除溶剂；
S2.3将步骤S2.2产物洗后重悬在N,N-二甲基苯胺(DMA)/甲醇中，加入亚硝酸叔丁酯，搅拌反应，反应结束后，使用甲醇沉淀，过滤并洗涤沉淀，真空除溶剂，制得内生NO型壳聚糖(NO-CS)，储存在-20℃备用。
进一步优选，将壳聚糖和氯化锂溶解于DMA中，向体系中加入三乙胺和对甲苯磺酰氯，搅拌过夜，丙酮沉淀，过滤并洗涤沉淀，真空除残留溶剂。将上述产物与氯化锂加入DMA中，继续加入三乙胺和乙二硫醇，氮气保护下，60℃搅拌过夜，丙酮沉淀，过滤并洗涤沉淀；然后将其重悬在含有二硫苏糖醇的DMA中，室温下搅拌；过滤并洗涤沉淀，真空除溶剂。重悬在DMA/甲醇中，加入亚硝酸叔丁酯，室温下搅拌15小时，反应结束后，使用甲醇沉淀，过滤并洗涤沉淀，真空除溶剂，制得内生NO型壳聚糖(NO-CS)，储存在-20℃备用。
壳聚糖(CS)具有优秀的生物降解性、生物相容性、抗微生物活性、无毒和通用的化学和物理特性，作为新的包装材料，可以显著提高新鲜食品的货架期。壳聚糖基薄膜和涂层有效的延长了食品的质量和贮藏性，特别是跟一些天然抗氧化剂、抗菌剂的复合膜效果更佳。
壳聚糖与氯化锂的质量比在0.25～1：1；对甲苯磺酰氯与壳聚糖的质量比在1～10：1；1,2-乙二硫醇与壳聚糖的质量比在1～3：1；亚硝酸叔丁酯与壳聚糖的质量比在0.3～6：1。洗涤沉淀时使用的溶解为：甲醇、丙酮或乙醚。
壳聚糖与对甲苯磺酰氯在0～5℃反应20～24h，即步骤S2.1中，搅拌反应的条件为：在0～5℃反应20～24h。
与亚硝酸叔丁酯在20～25℃反应10～20h。即步骤S2.3中，搅拌反应的条件为：20～25℃反应10～20h。
步骤S3中，将咖啡酸丁酯/环糊精超分子包合物和内生NO型壳聚糖混合，得到均相溶液，具体包括：
将内生NO型壳聚糖加入到六氟异丙醇中，得到壳聚糖溶液，搅拌1～5h，之后将咖啡酸丁酯/环糊精超分子包合物加入，再搅拌8～16小时(优选为12小时)得到均相溶液。
所述的咖啡酸丁酯/环糊精超分子包合物与壳聚糖溶液的用量比为3～10g：100mL，最优选为6.8g：100mL。
通过静电纺丝技术加工成超高效多功能纳米静电纺丝膜(即纳米静电纺丝食品保鲜膜)，并应用于蓝莓鲜果的贮藏与保鲜。
本发明也提供了一种咖啡酸丁酯(CAC4)与内生NO型壳聚糖(NO-CS)介导的超高效多功能纳米静电纺丝制备方法，具体步骤如下：
将上述均相溶液倒入20.0mL聚丙烯注射器中，采用注射针头，控制流速。纤维聚集在铝箔上，在高压电源外加电压环境下，喷射出纳米静电纺丝，并堆积成膜。
静电纺丝技术的条件为：流速调节为0.6～1.2mL/h，附加电压为12～18kV，针头尖端到导电收集装置的垂直距离为10～20cm，采用铝箔作为导电收集装置。纤维聚集在铝箔上，在高压电源外加电压环境下，喷射出纳米静电纺丝，并堆积成膜。
作为优选，采用内径为0.4mm的注射针头，流速调节为0.9mL h-1。纤维聚集在铝箔上，铝箔与针尖的垂直距离为15cm。高压电源外加15kV电压(22℃/45±1％或25℃/50％)。
本发明还提供了上述由咖啡酸丁酯(CAC4)与内生NO型壳聚糖(NO-CS)介导的纳米静电纺丝食品保鲜膜在蓝莓鲜果的贮藏与保鲜中的应用。
作为优选，所述的超高效抑菌纳米静电纺丝多功能食品保鲜膜作为蓝莓鲜果加工过程的包装材料，用于蓝莓鲜果的保鲜贮藏。本发明将该纳米静电纺丝多功能食品保鲜膜附于蓝莓鲜果外包装的内表面，有效的解决了蓝莓鲜果易被氧化、易腐的难点。保证了蓝莓鲜果成品的货架期，所得产品色泽优良且无不良风味。
进一步优选，所述的加工过程包括：
(1)选料：选适合的蓝莓果丛采摘成熟且挺实的蓝莓鲜果，果实直径不小于0.7cm，且无过熟和异味。
(2)清洗：清水反复清洗直至搅动蓝莓后水清时止。
(3)挑选：沥干水份，剔除枯萎干瘪部分。
(4)保鲜剂处理：将蓝莓鲜果按等级分类，将新鲜的蓝莓贮藏于消毒的、且内表面附有所述的超高效多功能纳米静电纺丝食品保鲜膜的包装中，冷藏保存的温度为1～3℃。能够有效防止蓝莓鲜果在后续加工过程中发生破碎或脱水萎缩而影响成品价值。
(5)上述方法所得产品贮藏期达到1～2月。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明采用内生NO型壳聚糖(NO-CS)作为NO自由基的载体，不仅可以提供长效缓释NO自由基，使其表现出卓越的抑菌和抗生物被膜的特性。该物质将有望被广泛应用于食品、医院和环境等领域。
(2)本发明采用环糊精(CD)对咖啡酸丁酯进行包封形成包合物，此包合物具有更好的抗氧化能力、水溶性以及超强抑菌和抗生物被膜活性，通过静电纺丝技术制备得到纳米静电纺丝多功能食品保鲜膜。由环糊精作为非聚合物载体制成的纳米纺丝纤维膜除了具有更高的孔隙率与比表面积之外，还具有生物相容性，在生物医学、制药、过滤和食品包装中具有很高的应用价值。
(3)本发明利用一种由多功能食品添加剂—咖啡酸丁酯(CAC4)与内生NO型壳聚糖(NO-CS)介导的超高效抑菌纳米静电纺丝多功能食品保鲜膜，作为蓝莓鲜果包装的内表面活性膜，防止其中的营养物质发生氧化腐败。加工、贮藏工艺简单，原料均为天然成分，生产成本低，有效的解决了蓝莓鲜果易被氧化、易腐的难点；在有效延长产品货架期的同时，还不影响蓝莓鲜果自身的风味和口感，食用后还具有一定的营养保健功能，符合现代健康环保、营养食品生产观念。
(4)本发明将纳米静电纺丝多功能食品保鲜膜应用于蓝莓鲜果外包装的内表面后，有效延长了蓝莓鲜果的货架期，保藏期内品质优良，色泽风味保持良好，迎合现代消费者的消费观念，进一步提高了蓝莓鲜果的商业价值，符合市场的需求；易于运输，扩大了蓝莓鲜果的销售范围，尤其是远离沿海的一些内陆大城市，很好地弥补了市场需求与实际供应量之间的空缺。
附图说明
图1为本发明实施案例2与3得到的一种由咖啡酸丁酯(CAC4)与内生NO型壳聚糖(NO-CS)介导的超高效多功能纳米静电纺丝食品保鲜膜的SEM图。
图2为本发明实施例2～3和对照组1～2得到的蓝莓鲜果的菌落数变化曲线。
图3为本发明实施例2～3和对照组1～2得到的蓝莓鲜果的感官评价得到的雷达图。
图4为本发明实施例4～5和对照组3得到的蓝莓鲜果冷藏期间失重率的变化折线图。
图5为本发明实施例3和对照组1得到的蓝莓鲜果冷藏期间(2个月)的样本照片。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步的描述。
实施例1
将1g壳聚糖和2g氯化锂溶解在30mL DMA中搅拌过夜。冰水浴中向体系中加入7mL三乙胺和9.4g对甲苯磺酰氯，继续搅拌过夜22h。200mL丙酮沉淀产物，过滤，用200mL甲醇和丙酮清洗，真空除残留溶剂。取0.4g上述反应中间体与0.8g氯化锂加入20mL的DMA中，继续加入0.8mL三乙胺和0.5mL乙二硫醇，氮气保护下，60℃搅拌过夜；反应结束后，利用200mL丙酮沉淀，过滤后，用200mL甲醇与丙酮清洗；然后将其重悬在含有10mL二硫苏糖醇和10mM三乙胺的DMA中，室温25℃下搅拌1小时；过滤后，用200mL甲醇和200mL丙酮清洗，真空除溶剂。重悬在DMA/甲醇中，加入0.5mL亚硝酸叔丁酯(0.4g)，室温25℃下搅拌15小时；反应结束后，使用100mL甲醇沉淀，过滤后，用100mL丙酮和乙醚洗涤，真空除溶剂，制得内生NO型壳聚糖(NO-CS)，储存在-20℃备用。
实施例2
一种由咖啡酸丁酯(CAC4)与内生NO型壳聚糖(NO-CS)介导的超高效多功能纳米静电纺丝食品保鲜膜的制备，具体步骤如下：
在10mL六氟异丙醇中分别加入0.9g内生NO型壳聚糖，室温下搅拌3h，得到壳聚糖溶液。室温25℃下，将β-环糊精(CD)溶解在适量水中，再将咖啡酸丁酯(CAC4)按照合适的比例，磁力搅拌至完全溶解；再将含咖啡酸丁酯的无水乙醇溶液缓慢滴加至上述环糊精水溶液中(0.5:1，CAC4:CD，mol:mol)，滴加结束后，在60℃下持续搅拌48h；在-4℃冰箱放置48h，至白色固形物析出，过滤并收集滤液，在-20℃冰箱冷藏过夜，在-45℃冷冻干燥24h后获得咖啡酸丁酯-环糊精超分子包合物(CAC4/CD-IC)。将包合物按照一定比例加入壳聚糖溶液中(6.8％，w/v)，室温下搅拌12小时。将上述均相溶液倒入20.0mL聚丙烯注射器中，采用内径为0.4mm的注射针头，流速调节为0.9mL h-1。纤维聚集在铝箔上，铝箔与针尖的垂直距离为15cm。高压电源外加15kV电压(22℃/45±1％或25℃/50％)。
制得的纳米静电纺丝膜的SEM图见图1(a)。
一种由咖啡酸丁酯(CAC4)与内生NO型壳聚糖(NO-CS)介导的纳米静电纺丝多功能食品保鲜膜作用于蓝莓鲜果包装内表面以延长蓝莓鲜果贮藏期的加工方法，包括以下步骤：
(1)选料：选适合的蓝莓果丛采摘成熟且挺实的蓝莓鲜果，果实直径不小于0.7cm，且无过熟和异味。
(2)清洗：清水反复清洗直至搅动蓝莓后水清时止。
(3)挑选：沥干水份，剔除枯萎干瘪部分。
(4)保鲜剂处理：将蓝莓鲜果按等级分类，将新鲜的蓝莓贮藏于消毒的、且内表面附有所述的超高效多功能纳米静电纺丝食品保鲜膜的包装中，冷藏保存的温度为1～3℃。能够有效防止蓝莓鲜果在后续加工过程中发生破碎或脱水萎缩而影响成品价值。
(5)上述方法所得产品贮藏期达到1～2月。
得到的产品的菌落数变化曲线见图2；所得的产品的品质变化见图3。
实施例3
该实施例与实施例2的不同之处，在于提高了体系中CAC4的占比，以期提升纳米静电纺丝膜的抑菌及抗氧化效果。
一种由咖啡酸丁酯(CAC4)与内生NO型壳聚糖(NO-CS)介导的超高效多功能纳米静电纺丝食品保鲜膜的制备，具体步骤如下：
在10mL六氟异丙醇中分别加入0.9g内生NO型壳聚糖，室温下搅拌3h。室温25℃下，将β-环糊精(CD)溶解在适量水中，再将咖啡酸丁酯(CAC4)按照合适的比例，磁力搅拌至完全溶解；再将含咖啡酸丁酯的无水乙醇溶液缓慢滴加至上述环糊精水溶液中(1:1，CAC4:CD，mol:mol)，滴加结束后，在60℃下持续搅拌48h；在-4℃冰箱放置48h，至白色固形物析出，过滤并收集滤液，在-20℃冰箱冷藏过夜，在-45℃冷冻干燥24h后获得咖啡酸丁酯-环糊精超分子包合物(CAC4/CD-IC)。将包合物按照一定比例加入壳聚糖溶液中(6.8％，w/v)，室温下搅拌12小时。将上述均相溶液倒入20.0mL聚丙烯注射器中，采用内径为0.4mm的注射针头，流速调节为0.9mL h-1。纤维聚集在铝箔上，铝箔与针尖的垂直距离为15cm。高压电源外加15kV电压(22℃/45±1％或25℃/50％)。
制得的纳米静电纺丝膜的SEM图见图1(b)。
一种由咖啡酸丁酯(CAC4)与内生NO型壳聚糖(NO-CS)介导的纳米静电纺丝多功能食品保鲜膜作用于蓝莓鲜果包装内表面以延长蓝莓鲜果贮藏期的加工方法，包括以下步骤：
(1)选料：选适合的蓝莓果丛采摘成熟且挺实的蓝莓鲜果，果实直径不小于0.7cm，且无过熟和异味。
(2)清洗：清水反复清洗直至搅动蓝莓后水清时止。
(3)挑选：沥干水份，剔除枯萎干瘪部分。
(4)保鲜剂处理：将蓝莓鲜果按等级分类，将新鲜的蓝莓贮藏于消毒的、且内表面附有所述的超高效多功能纳米静电纺丝食品保鲜膜的包装中，冷藏保存的温度为1～3℃。能够有效防止蓝莓鲜果在后续加工过程中发生破碎或脱水萎缩而影响成品价值。
(5)上述方法所得产品贮藏期达到1～2个月。
得到的产品的菌落数变化曲线见图2；所得的产品的品质变化见图3。
对照例1
参照实施例2的制备方法，但是不进行步骤(4)中纳米保鲜膜的处理步骤，直接进行普通包装和贮藏，得到的产品的菌落数变化曲线见图2；所得的产品的品质变化见图3。
对照例2
参照实施例2的制备方法，但是使用的壳聚糖为天然壳聚糖，得到的产品的菌落数变化曲线见图2；所得的产品的品质变化见图3。
实施例4
将实施例2中制得的咖啡酸丁酯(CAC4)与内生NO型壳聚糖(NO-CS)介导的超高效多功能纳米静电纺丝食品保鲜膜应用于蓝莓鲜果中(0.2mg/g)，在0℃冷藏条件下，对蓝莓鲜果进行冷藏期间失重率的跟踪测定，测定2个月。得到的蓝莓鲜果冷藏期间失重率的变化结果见图4。
实施例5
将实施例3中制得的咖啡酸丁酯(CAC4)与内生NO型壳聚糖(NO-CS)介导的超高效多功能纳米静电纺丝食品保鲜膜应用于蓝莓鲜果中(0.2mg/g)，在0℃冷藏条件下，对蓝莓鲜果进行冷藏期间失重率的跟踪测定，测定2个月。得到的蓝莓鲜果冷藏期间失重率的变化结果见图4。
对照例3
参照实施例4中的方法，但是不使用任何保鲜剂及保鲜膜，得到的蓝莓鲜果0℃冷藏期间失重率的变化结果见图4。
对照例4
参照实施例4中的方法，仅使用茶多酚作为保鲜剂，得到的蓝莓鲜果0℃冷藏期间失重率的变化结果见图4。
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