多重特异性抗体构建体
阅读说明：本技术 多重特异性抗体构建体 (Multispecific antibody constructs ) 是由 杰·M·少特 格那德·弗雷 华·文·昌 于 2019-06-11 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种多重特异性抗体,其含有细胞特异性抗原的至少一个结合位点和肿瘤反应性淋巴细胞抗原的至少一个结合位点,并且多重特异性抗体包括结合到第一抗原的IgG抗体或其片段；和至少一种scFv抗体,其结合到不同于所述第一抗原的第二抗原并且连接到所述IgG抗体或片段的至少一个轻链或重链的C端。所述多重特异性抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力可逆地结合到所述细胞特异性抗原和所述肿瘤反应性淋巴细胞抗原的至少一种或所述第一抗原和所述第二抗原的至少一种。还提供所述多重特异性抗体的共轭物和用于产生所述多重特异性抗体的方法。(The present invention relates to a multispecific antibody comprising at least one binding site for a cell-specific antigen and at least one binding site for a tumor-reactive lymphocyte antigen, and comprising an IgG antibody or fragment thereof that binds to a first antigen; and at least one scFv antibody that binds to a second antigen different from the first antigen and is linked to the C-terminus of at least one light or heavy chain of the IgG antibody or fragment. The multispecific antibody reversibly binds to at least one of the cell-specific antigen and the tumor-reactive lymphocyte antigen or at least one of the first antigen and the second antigen with a higher affinity under abnormal conditions than under normal physiological conditions. Conjugates of the multispecific antibodies and methods for producing the multispecific antibodies are also provided.)
技术领域
本公开涉及多重特异性抗体的领域。确切地说，本公开涉及一种具有至少一种条件性活性的多重特异性抗体和用于产生所述多重特异性抗体的方法。
背景技术
蛋白可经工程化以具有多种特征，如具有供在不同条件下操作的较高活性或改进稳定性。例如，酶已经演化成在较高温度下具有稳定性，伴有不同活性水平。在存在较高温度下的活性改进的情况下，改进的主要部分可归因于通常由Q10规则(其中据估算，在酶的情况下，温度每增加10摄氏度，转换率翻倍)所描述的较高动力活性。在改进蛋白中引入的突变通常降低正常操作条件下的蛋白质活性。供在较高温度下操作而设计的突变酶可在正常操作温度下具有活性，但相较于野生型酶，其通常处于降低水平。
抗体已成为一类主要治疗蛋白质。传统抗体通常结合到抗原上的单一表位。已研发出用于结合到超过一个抗原或结合到相同抗原上的超过一个表位的新抗体构建体，将其称为多重特异性抗体。多重特异性抗体可为例如双特异性、三特异性或四特异性抗体。多重特异性抗体已展示出在临床和诊断应用的广泛范围内的潜能。存在两种由欧盟和美国批准用于治疗致癌疾病的双特异性抗体(卡妥索单抗TM(CatumaxomabTM)和博纳吐单抗TM(BlinatumabTM))。由于其独特特征，多重特异性抗体对次世代抗体治疗来说变得具有吸引力。
US 2013/0017200公开了一种合成多重特异性抗体的方法。由具有第一单特异性的第一亲本抗体获得第一抗体片段，其具有可与硫反应性交联剂反应的游离硫氢基以产生抗体片段-交联剂部分。使抗体片段-交联剂部分与由具有不同于第一抗体片段的单特异性的其它亲本抗体(各自具有游离硫氢基)获得的两个或更多个其它抗体片段中的每一个成对反应，以产生多重特异性抗体。所述多重特异性抗体可适合作为新型治疗和诊断试剂。
布林克曼(Brinkmann)和康特曼(Kontermann)(“双特异性抗体的制造(Themaking of bispecific antibodies)”MABS,2017,第9卷,第182页到第212页,2017)评述了双特异性抗体形式，其包括仅由两种抗体的抗原结合位点构成的小分子、具有IgG结构的分子和由通常组合有二聚模组的不同抗原结合部分构成的大复合分子。双特异性抗体的结合模块的尺寸、排列、价数、柔性和几何结构以及其分布和药物动力学特性可视不同应用而变化。双特异性形式总体上增加了可应用于研发针对各种适应症的治疗剂的抗体的多样性。
还期望产生具有条件性活性的适用抗体。举例来说，在正常生理条件下几乎无活性并且在除正常生理条件以外的条件下(例如异常条件)活性显著更高的抗体，在某些微环境中活化或非活化(例如在肿瘤微环境中活化)的抗体，或在随时间推移活化或非活化的抗体。除温度以外，针对其抗体可经演化或优化的其它触发条件包括pH、渗透压、重量摩尔渗透浓度、氧化应激、氧浓度和电解质浓度。除活性以外，可在演化期间优化的抗体其它所需特性包括稳定性、半衰期、化学抗性和蛋白水解抗性。
已公开了许多用于将亲本抗体演化或工程化成具有所需特性的突变抗体的策略。然而，将亲本抗体工程化或演化成在正常生理条件下无活性或几乎无活性(活性低于10％并且尤其低于5％)而在异常条件下具有与正常生理条件下的亲本抗体的初始活性等效或比其更好的活性，需要使去稳定突变与活性增加突变共存而不抵消去稳定作用。预期去稳定突变将使抗体的活性降低超过由标准规则(如Q10规则)预测的量。因此，演化在特异性异常条件下(例如较低温度或pH)比在正常生理条件下(或甚至在正常生理条件下大体上无活性)的演化蛋白更有效作用(更具活性)的蛋白的能力产生了出人意料的一类新型抗体，其称为条件性活性蛋白。例如，条件性活性蛋白在异常条件下的活性与在正常生理条件下的活性的比率超过亲本蛋白的相同比率。在一些情况下，条件性活性蛋白的比率可为至少约2:1、或至少约4:1、或至少约6:1、或至少约10:1、或至少约20:1、或至少约50:1、或至少约80:1、或至少约100:1。
本发明提供了一种对至少一种表位或抗原具有条件性活性的新型多重特异性抗体。这一新型多重特异性抗体可利用传统多重特异性抗体的柔性和变通性，并且同时将多重特异性抗体的活性、亲和力和/或亲合力导引到需要活性的受试者的部位、组织或器官。
发明内容
在一个方面，本公开提供了一种多重特异性抗体，其包含细胞抗原的至少一个结合位点；和肿瘤反应性淋巴细胞抗原的至少一个结合位点。多重特异性抗体在第一生理条件下以比在第二生理条件下要高的活性、亲和力和/或亲合力结合到细胞抗原和肿瘤反应性淋巴细胞抗原的至少一种。
在先前实施例中，细胞抗原可为癌细胞相关抗原，或癌细胞相关抗原可为新抗原。
在先前实施例中的任一个中，细胞抗原可为衰老细胞相关抗原。
在先前实施例中的任一个中，第一生理条件可为异常条件并且第二生理条件可为正常生理条件。
在先前实施例中，异常条件可为肿瘤微环境中的条件或衰老细胞微环境中的条件。
在先前实施例中的任一个中，多重特异性抗体与细胞抗原和肿瘤反应性淋巴细胞抗原中的至少一种的结合可为可逆的。
在先前实施例中的任一个中，多重特异性抗体可以选自以下的形式配置：(1)双特异性抗体共轭物；(2)杂交双特异性IgG2；(3)仅可变域双特异性抗体分子；(4)CH1/CL融合蛋白；(5)Fab融合蛋白；(6)非免疫球蛋白融合蛋白；(7)经Fc修饰的IgG；(8)附接和经Fc修饰的IgG；(9)经修饰的Fc和CH3融合蛋白；(10)附接IgG-HC融合物；(11)附接IgG-LC融合物；(12)附接IgG-HC&LC融合物；(13)Fc融合物；(14)CH3融合物；(15)IgE/IgM CH2融合物；(16)F(ab')2融合物；(17)CH1/CL融合蛋白；(18)经修饰的IgG；和(19)非免疫球蛋白融合物。
在先前实施例中的任一个中，多重特异性抗体可与大分子共轭。大分子可选自蛋白质、脂肪酸和聚合物中的至少一种，或大分子可为白蛋白或聚乙二醇。
在先前实施例中的任一个中，细胞抗原的至少一个结合位点可为IgG抗体或其片段并且细胞抗原可为肿瘤细胞抗原。
在先前实施例中的任一个中，肿瘤反应性淋巴细胞抗原的至少一个结合位点可为单链抗体。单链抗体可为scFv抗体。scFv抗体可经由连接子连接到所述IgG抗体或其片段的至少一个轻链的C端。在其中抗体为scFv抗体的先前实施例中的任一个中，scFv抗体可包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区选自具有SEQ ID NO:1至10的氨基酸序列的轻链可变区并且重链可变区选自具有SEQ ID NO:11至15的氨基酸序列的重链可变区。在先前实施例中的任一个中，scFv抗体可具有选自SEQ ID NO:26至71的氨基酸序列的氨基酸序列。
在先前实施例中的任一个中，IgG抗体可包含：轻链可变区，其选自结合到选自Axl、Her2、B7-H3和EpCAM的抗原，具有SEQ ID NO:16至17、20、22和88至95的氨基酸序列的轻链可变区；和重链可变区，其选自结合到相同抗原，具有SEQ ID NO:18至19、21、23至25和80至87的氨基酸序列的重链可变区。
在先前实施例中的任一个中，肿瘤反应性淋巴细胞抗原可为CD3抗原。
在先前实施例中的任一个中，肿瘤反应性淋巴细胞抗原可在选自以下的淋巴细胞上：T细胞、巨噬细胞、杰卡特细胞(Jurkat cell)、单核细胞、NK细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴因子活化杀手细胞。
在先前实施例中的任一个中，细胞抗原可选自Axl、EpCAM、Ror2、Her2和B7-H3。
在先前实施例中的任一个中，多重特异性抗体可在第一生理条件下以比在第二生理条件下要高的亲和力结合到细胞抗原。
在先前实施例中的任一个中，多重特异性抗体可在第一生理条件下以比在第二生理条件下要高的亲和力结合到肿瘤反应性淋巴细胞抗原。
在先前实施例中的任一个中，多重特异性抗体可在第一生理条件下以比在第二生理条件下要高的亲和力结合到细胞抗原和肿瘤反应性淋巴细胞抗原两者。
在先前实施例中的任一个中，多重特异性抗体可在第一生理条件下以比在第二生理条件下要高的亲合力结合到细胞抗原与肿瘤反应性淋巴细胞抗原的组合。
在另一方面，本公开提供多重特异性抗体的第二实施例，其包含结合到第一抗原的IgG抗体或其片段；和结合到不同于第一抗原的第二抗原的至少一种scFv抗体并且至少一种scFv抗体连接到所述IgG抗体或片段的至少一个轻链的C端，并且所述多重特异性抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力和/或亲合力可逆地结合到第一抗原和第二抗原中的至少一种。
在第二实施例中，第二抗原可为CD3抗原。
在先前第二实施例中的任一个中，scFv抗体可包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区选自具有SEQ ID NO:1至10的氨基酸序列的轻链可变区并且重链可变区选自具有SEQ ID NO:11至15的氨基酸序列的重链可变区。在先前实施例中的任一个中，scFv抗体可具有选自SEQ ID NO:26至71的氨基酸序列的氨基酸序列。
在先前第二实施例中的任一个中，IgG抗体或片段可包含轻链可变区，其选自结合到选自Axl、Her2、B7-H3和EpCAM的抗原，具有SEQ ID NO:16至17、20、22和88至95的氨基酸序列的轻链可变区；和重链可变区，其选自结合到相同抗原，具有SEQ ID NO:18至19、21、23至25和80至87的氨基酸序列的重链可变区。
在先前第二实施例中的任一个中，多重特异性抗体可在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到第一抗原。
在先前第二实施例中的任一个中，多重特异性抗体可在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到第二抗原。
在先前第二实施例中的任一个中，多重特异性抗体可在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到第一抗原和第二抗原两者。
在先前第二实施例中的任一个中，多重特异性抗体可在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲合力结合到第一抗原与第二抗原的组合
在先前第二实施例中的任一个中，第一抗原可为细胞表面抗原并且此类细胞表面抗原可为癌细胞表面抗原。在先前第二实施例中的任一个中，第一抗原可为新抗原。在先前第二实施例中的任一个中，第一抗原可选自Axl、EpCAM、Ror2、Her2和B7-H3。
在又一方面，本公开提供一种用于制造多重特异性抗体的方法，其包含：a)获得结合到第一抗原的IgG抗体或其片段；b)将结合到第二抗原的至少一种scFv抗体连接到所述IgG抗体或片段的至少一个轻链的C端以产生一个或多个构建体；c)针对在异常条件和正常生理条件下结合到第一抗原和第二抗原中的至少一种对b)的一个或多个构建体进行筛选；和d)从一个或多个构建体选择多重特异性抗体，所述多重特异性抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力可逆地结合到第一抗原和第二抗原中的至少一种。
在先前方法中，第一抗原可为选自Axl、EpCAM、Ror2、Her2和B7-H3或新抗原的肿瘤细胞抗原。
在先前方法中的任一种中，第二抗原可为如CD3的肿瘤反应性淋巴细胞抗原。肿瘤反应性淋巴细胞抗原可在选自以下的淋巴细胞上：T细胞、巨噬细胞、杰卡特细胞、单核细胞、NK细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴因子活化杀手细胞。
在先前方法中的任一种中，scFv抗体可包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区选自具有SEQ ID NO:1至10的氨基酸序列的轻链可变区并且重链可变区选自具有SEQ IDNO:11至15的氨基酸序列的重链可变区。在先前实施例中的任一个中，scFv抗体可具有选自SEQ ID NO:26至71的氨基酸序列的氨基酸序列。
在先前方法中的任一种中，IgG抗体可包含轻链可变区，其选自结合到选自Axl、Her2、B7-H3和EpCAM的抗原，具有SEQ ID NO:16至17、20、22和88至95的氨基酸序列的轻链可变区；和重链可变区，其选自结合到相同抗原，具有SEQ ID NO:18至19、21、23至25和80至87的氨基酸序列的重链可变区。
在先前方法中的任一种中，多重特异性抗体可在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到第一抗原。
在先前方法中的任一种中，多重特异性抗体可在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到第二抗原。
在先前方法中的任一种中，多重特异性抗体可在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到第一抗原和第二抗原两者。
在先前方法中的任一种中，多重特异性抗体可在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲合力结合到第一抗原与第二抗原的组合。
在又一方面，本公开提供一种治疗受试者中的肿瘤的方法，其包含投予先前实施例中的任一个的多重特异性抗体。
在治疗方法中，多重特异性抗体可与癌症新抗原疫苗结合投予，或多重特异性抗体可在投予癌症新抗原疫苗之后投予。
在又一方面，本公开提供一种用于制造多重特异性抗体的方法，其包含以下步骤：a)获得结合到第一抗原的IgG抗体或其片段；b)获得结合到第二抗原的scFv抗体；c)演化a)和b)的抗体中的一种或两种以产生一种或多种演化抗体；d)筛选c)的一种或多种演化抗体，以选择在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到其各别抗原的抗体；e)将结合到第二抗原的scFv抗体连接到结合到第一抗原的IgG抗体或片段的至少一个轻链的C末端以产生一个或多个构建体，其中在d)中选择scFv抗体和IgG抗体中的至少一种，并且如果存在，在d)中未选择的scFv抗体或IgG抗体来自步骤a)或b)；f)在异常条件和正常生理条件下针对结合到第一抗原和第二抗原中的至少一种对步骤e)的一个或多个构建体进行筛选；和g)从一个或多个所述构建体选择在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到第一抗原和第二抗原中的至少一种的多重特异性抗体。
在又一方面，本公开提供一种制备多重特异性抗体的方法，其包含以下步骤：a)获得结合到第一抗原的IgG抗体或其片段；b)将结合到第二抗原的至少一种scFv抗体连接到所述IgG或其片段的至少一个轻链的C端，以产生一个或多个构建体，其中所述至少一个scFv抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到所述第二抗原；c)在正常生理条件下和在异常条件下针对结合所述第一抗原和所述第二抗原对一个或多个构建体进行筛选；和d)选择在所述异常条件下以比在所述正常生理条件下要高的亲和力结合所述第一抗原并且可逆地结合所述第二抗原的多重特异性抗体。
在又一方面，本公开提供一种多重特异性抗体，其包含：结合到细胞特异性抗原的IgG抗体或其片段和结合到T淋巴细胞抗原的至少一种scFv抗体，所述至少一种scFv抗体连接到所述IgG抗体或其片段的至少一个轻链或至少一个重链的C端，其中至少一个所述scFv抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到所述T淋巴细胞抗原。
附图说明
图1为二价多重特异性抗体的示意性结构，二价多重特异性抗体为一条臂结合到抗原(Ag)并且另一条臂结合到CD3的杂二聚体。
图2为四价多重特异性抗体的示意性结构，四价多重特异性抗体为每条臂具有与抗原(Ag)的结合位点和与CD3的结合位点的均二聚体。
图3A展示了用于测量图2的四价多重特异性抗体同时与抗原和CD3结合的通用方法的图示。
图3B展示了通过CD3/Axl的多重特异性抗体在6.0和7.4的pH下与CD3的非条件性结合活性。将抗体添加到涂布有CD3的ELISA板中并且使用标记有HRP的抗IgG抗体(图3A的二级抗体1)检测结合。
图3C展示了通过多重特异性抗体在6.0和7.4的pH下与Axl的条件性结合活性。将抗体添加到涂布有CD3的ELISA板中并且使用AXL蛋白(图3A中的抗原)和标记有HRP的抗AXL抗体(图3A中的二级抗体2)检测结合。
图4A展示了通过CD3/Axl的多重特异性抗体在6.0和7.4的pH下与固定CD3的条件性和非条件性结合活性。
图4B展示了通过图4A的一些多重特异性抗体在6.0和7.4的pH下当Axl固定时其与CD3的条件性和非条件性结合活性。
图5A展示了通过CD3/Her2的多重特异性抗体在6.0和7.4的pH下与固定CD3的条件性和非条件性结合活性。
图5B展示了通过图5A的多重特异性抗体在6.0和7.4的pH下当Her2固定时与CD3的条件性和非条件性结合活性。
图6展示了通过CD3/B7-H3的多重特异性抗体在6.0和7.4的pH下与固定CD3的条件性结合活性。
图7展示了用于将本发明的多重特异性抗体结合到经工程化的杰卡特效应细胞上的CD3和肿瘤目标细胞上的抗原两者的工作模型示意图。
图8A展示了通过具有与CD3和Axl两者的非条件性结合活性的双特异性抗体对杰卡特效应细胞进行刺激的活性。
图8B展示了通过具有与Axl的非条件性结合活性和与CD3的条件性结合活性的双特异性抗体对杰卡特效应细胞进行刺激的活性。
图9展示了如ELISA所测量，对本发明的多重特异性抗体在6.0至7.4的pH值下与CD3的条件性结合活性。这些多重特异性抗体结合到CD3和EpCAM两者。
图10展示了作为用本发明的双特异性抗体(EpCAM×CAB-CD3)治疗肿瘤异种移植小鼠的结果的平均肿瘤体积。
图11展示了相较于媒剂、同型对照组和非条件性活性基准抗体，本发明的双特异性抗体(EpCAM×CAB-CD3)在周边循环系统中对T细胞活化的减少。
具体实施方式
定义
为了促进对本文所提供的实例的理解，本文将对某些频繁出现的方法和/或术语加以定义。
以下术语的定义：“约”、“活性”、“试剂”、“不明确基础要求”、“氨基酸”、“扩增”、“嵌合特性”、“同源”、“比较窗口”、“保守性氨基酸取代”、“对应于”、“降解有效”、“界定序列框架”、“消化”、“定向连接”、“DNA改组”、“药物”或“药物分子”、“有效量”、“电解质”、“表位”、“酶”、“演化(evolution/evolving)”、“片段”、“衍生物”、“类似物”、“单一氨基酸取代的全范围”、“基因”、“基因不稳定性”、“异源性”、“同源性”或“同源性”、“工业应用”、“一致性(identical/identity)”、“一致性区域”、“经分离的”、“经分离的核酸”、“配体”、“连接作用”、“连接子”或“间隔基”、“微环境”、“待演化的分子特性”、“突变”、“天然存在”、“正常生理条件”或“野生型操作条件”、“核酸分子”、“核酸分子”、“编码……的核酸序列”或“……的DNA编码序列”或“编码……的核苷酸序列”、“启动子序列”、“编码酶(蛋白)的核酸”或“编码酶(蛋白)的DNA”或“编码酶(蛋白)的聚核苷酸”、“特异性核酸分子物种”，“将工作核酸样品组装成核酸库”、“核酸库”、“核酸构建体”或“核苷酸构建体”或“DNA构建体”、“构建体”、“寡核苷酸”或“寡”、“同源性”、“操作性连接”、“操作性连接到”、“亲本聚核苷酸集合”、“患者”或“受试者”、“生理条件”、“群体”、“原形式(pro-form)”、“前原形式(pre-pro-form)”、“伪随机”、“准重复单元”、“随机肽库”、“随机肽序列”、“受体”、“重组”、“合成”、“相关聚核苷酸”、“还原重排”、“参考序列”、“比较窗口”、“序列一致性”、“序列一致性百分比”、“大体一致性”、“参考序列”、“重复指数(RI)”、“限制位点”、“可选聚核苷酸”、“序列一致性”、“相似性”、“特异性结合”、“特异性杂交”、“特异性聚核苷酸”、“严格杂交条件”、“大体上一致”、“大体上纯酶”、“大体上纯的”、“治疗”、“可变片段”、“变异体”、“工作”、“条件性活性抗体”、“抗体依赖性细胞介导细胞毒性”或“ADCC”、“癌症”和“癌性”、“多重特异性抗体”、“全长抗体”、“库”、“重组抗体”和“个体(individual)”或受试者(subject)，与在WO 2016/138071中相同并且因此以全文引用的方式并入本文中。
如本文所使用的术语“异常条件”是指偏离对彼条件的受试者中正常可接受范围的条件。如本文所使用的术语“正常生理条件”是指视为处于在受试者中部位(如在受试者中给药位点处，或在作用位点的组织或器官处)处的正常范围内的条件。在这一定义的情况下，未将衰老细胞和肿瘤细胞视为正常细胞并且因此将由衰老细胞和肿瘤细胞产生、在其范围内或附近的条件视为异常条件。
如本文所使用的术语“抗体”是指能够结合到抗原的表位的完整免疫球蛋白分子，以及免疫球蛋白分子的片段，如Fab、Fab'、(Fab')2、Fv，和单链抗体(SCA)片段。可使用所属领域中熟知的方法(参见例如Harlow和Lane，同上)制得这些抗体片段，其保留一定选择性结合到其所源自抗体的抗原(例如多肽抗原)的能力，并且如下进一步描述这些抗体片段。适用于实施所要求的本发明的抗体可为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、sIgA、IgD或IgE。可使用抗体通过免疫亲和色谱法分离制备量的抗原。此类抗体的各种其它用途为诊断和/或分级疾病(例如瘤形成)进行和用于治疗疾病的治疗性应用，所述疾病为如：瘤形成、自体免疫性疾病、AIDS、心血管疾病、感染和其类似疾病。嵌合抗体、类人类抗体、人类化抗体或全人类抗体尤其适用于向人类患者投予。
Fab片段由抗体分子的单价抗原结合片段组成，并且可由用番木瓜蛋白酶消化整个抗体分子，产生由完整轻链和一部分重链组成的片段制造。
抗体分子的Fab'片段可由用胃蛋白酶处理整个抗体分子接着还原以产生由完整轻链和一部分重链组成的分子获得。每个以这一方式处理的抗体分子获得两个Fab'片段。
抗体的(Fab')2片段可由用胃蛋白酶处理整个抗体分子，不进行后续还原获得。(Fab')2片段为两个Fab'片段的二聚体，其由两个二硫键结合在一起。
将Fv片段定义为含有轻链可变区和重链可变区(表达为两条链)的基因工程化片段。
单链抗体(“SCA”)为含有轻链可变区和重链可变区(通过适合的柔性多肽接头连接)的基因工程化单链分子，并且其可包括位于氨基端和/或羧基端的其它氨基酸序列。作为一实例，scFv抗体为单链抗体。举例来说，单链抗体可包括用于连接到编码聚核苷酸的系链片段。功能性单链抗体一般含有轻链可变区的足够部分和重链可变区的足够区域，以便保留用于结合到特异性目标分子或表位的全长抗体的特性。单链抗体一般为大体上由免疫球蛋白超家族的基因编码的至少10个邻接氨基的一个或多个多肽片段组成的蛋白(例如，参见免疫球蛋白基因超家族(The Immunoglobulin Gene Superfamily),A.F.威廉姆斯(A.F.Williams)和A.N.巴克莱(A.N.Barclay)，在免疫球蛋白基因(ImmunoglobulinGenes)中，T.庶佑(T.Honjo)、F.W.埃尔特(F.W.Alt)，和THE.瑞比特(THE.Rabbits)编,(1989)学术出版书:加利福尼亚圣地亚哥(Academic press:San Diego,Calif.)，第361页到第368页)，最常见为由啮齿动物、非人类灵长类动物、禽类、猪牛、绵羊、山羊或人类重链或轻链基因序列编码。功能性单链抗体一般含有免疫球蛋白超家族基因产物的足够部分，以便保留结合到特异性目标分子的特性，特异性目标分子通常为受体或抗原(表位)。
将本文中所使用的术语“抗原”或“Ag”定义为引起免疫反应的分子。这一免疫反应可涉及抗体产生或具备特异性免疫能力的细胞的活化或两者。所属领域的技术人员将了解，任何大分子(包括几乎所有蛋白或肽)和多糖、核酸或脂质均可充当抗原。此外，抗原可由重组或基因组DNA衍生。所属领域的技术人员将理解，包括编码引发免疫反应的蛋白的核苷酸序列或部分核苷酸序列的任何DNA由此对如本文所使用的术语的“抗原”进行编码。此外，所属领域的技术人员将了解抗原不必仅由基因的全长核苷酸序列编码。显而易见的是，本发明包括(但不限于)多于一种基因的部分核苷酸序列的用途和这些核苷酸序列以各种组合排列以引发所需免疫反应。此外，所属领域的技术人员应理解，抗原完全不必由“基因”编码。显而易见的是，抗原可由生物样品产生、合成或由其衍生。此类生物样品可包括(但不限于)组织样品、肿瘤样品、细胞或生物流体。
如本文所使用的术语“亲合力”是指两个分子之间的多个结合位点(如同时与两个目标相互作用的多重特异性抗体的多个抗原结合位点之间)的组合强度。当存在多于一个结合相互作用时，两个分子将仅在所有结合位点解离时解离，并且因此解离速率将比个别结合位点慢，由此提供比个别结合位点的结合强度(亲和力)要高的有效总结合强度(亲合力)。因此，亲合力与个别结合位点与特异性表位的亲和力以及多重特异性抗体和抗原的价数两者相关。举例来说，双特异性抗体与具有重复表位结构的抗原(如聚合物)之间的相互作用将为具有高亲合力的一种，这是因为可结合到抗原上的多个表位。
如本文所使用的术语“癌症”和“癌性”是指在哺乳动物中通常表征为不受调控的细胞生长的生理条件。癌症的实例包括(但不限于)B细胞淋巴瘤(霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)和/或非霍奇金氏淋巴瘤)、脑瘤、乳癌、结肠癌、肺癌、肝细胞癌、胃癌、胰腺癌、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、泌尿道癌症、甲状腺癌、肾癌、癌瘤、黑素瘤、头颈癌、脑癌和前列腺癌，包括(但不限于)雄激素依赖性前列腺癌和雄激素非依赖性前列腺癌。
如本文所使用的术语“细胞抗原”或“细胞相关抗原”是指能够引发免疫反应的任何衍生自细胞或由其表达的蛋白质、碳水化合物或其它组分。举例来说，细胞可为受试者中的任何细胞，确切地说为癌细胞和衰老细胞。细胞抗原可为细胞表面上或细胞内部的抗原。所述定义意指包括(但不限于)从细胞的细胞表面或细胞膜纯化的蛋白，或与细胞的细胞表面相关的特有碳水化合物部分。所述定义还包括那些来自细胞表面的抗原，其需要对待由本发明的抗体接近的细胞进行特定处理。
术语“条件性活性(conditional activity/conditionally active)”是指相较于在正常生理条件下，在一个或多个异常条件下要更高的多重特异性抗体的亲和力或亲合力。这一条件性活性多重特异性抗体可在身体的所选区域中展现出活性和/或在异常(或容许)生理条件下展现出增加或降低的活性。在一个方面，条件性活性多重特异性抗体在正常生理条件下几乎无活性，但在异常条件下具有活性。举例来说，在一个方面，条件性活性多重特异性抗体在正常生理pH下几乎无活性，但在大脑痴呆或肿瘤微环境中的较低pH下具有活性。在另一方面，条件性活性多重特异性抗体在正常生理pH下可为可逆或不可逆非活化。在另一方面，条件性活性多重特异性抗体由治疗蛋白衍生。在另一方面，将条件性活性多重特异性抗体用作药物或治疗剂。
如本文所使用的术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗体结合到的抗原上的位点。细胞表位可由邻接氨基酸形成(线性表位)或由蛋白的三级折叠并列的非邻接氨基酸形成(构形表位)。由邻接氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂后保留，而由三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理后消失。表位可包含3个或更多个氨基酸。表位通常由以下组成：至少5至7个氨基酸(如表位中有5、6或7个氨基酸)，或至少8至11个氨基酸(如表位中有8、9、10或11个氨基酸)，或超过11个氨基酸(如表位中有12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)，或超过20个氨基酸(如表位中有21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸)，较不常见地甚至31至40个氨基酸。测定表位的空间构形的方法包括例如x射线晶体学和2维核磁共振。参见例如，分子生物学方法中的表位映射方案(Epitope Mapping Protocols inMethods in Molecular Biology),第66卷,格伦E.莫里斯(Glenn E.Morris)编(1996)。用于对抗原上的表位映射的优选方法为表面等离子共振。
术语“全长抗体”是指包含抗原结合可变区(VH或VL)以及轻链恒定域(CL)和重链恒定域CH1、CH2和CH3的抗体。恒定域可为天然序列恒定域(例如人类天然序列恒定域)或其氨基酸序列变异体。全长抗体可视其重链的恒定域的氨基酸序列而归属于不同“类别”。存在五类全长抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的数种可进一步分成“子类”(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。分别将对应于不同类别抗体的重链恒定域称为α、δ、ε、γ和μ。
“个体(individual)”、“患者”或“受试者(subject)”为人类或动物。举例来说，受试者可为选自以下的哺乳动物：家养动物(例如牛、羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如人类和非人类灵长类动物，如猴)、兔和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。
如本文所使用的术语“库”是指单个池中的核酸或蛋白的集合。可使用DNA重组技术来产生库。举例来说，cDNA或任何其它蛋白编码DNA的集合可插入表达载体中以产生蛋白库。cDNA或蛋白编码DNA的集合还可插入于噬菌体基因组中以产生野生型蛋白的噬菌体呈现库。cDNA的集合可由所选细胞群或组织样品产生，如通过萨布鲁克(Sambrook)等人(分子克隆(Molecular Cloning),冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor LaboratoryPress),1989)所公开的方法。来自所选细胞类型的cDNA集合还可购自供应商，如如本文所使用的野生型蛋白的库并非生物样品的集合。
如本文所使用的术语“多重特异性抗体”为全长抗体、抗体片段或包含一个或多个全长抗体和抗体片段的构建体，其具有各自能够结合到相同或不同抗原上的表位的至少两个不同结合位点。可为具有两个、三个或更多个(例如四个、五个、六个或七个)功能性抗原结合位点的经工程化的抗体的构建体还涵盖在多重特异性抗体的范围内(参见例如，US2002/0004587A1和布林克曼和康特曼,MAbs,第9卷,第182页到第212页,2017)。
如本文所使用的术语“药学上可接受的盐”是指本发明的条件性活性多重特异性抗体的盐形式。盐形式可为酸加成盐(例如用游离氨基形成)并且其由无机酸(如盐酸或磷酸)或此类有机酸(如乙酸、草酸、酒石酸和顺丁烯二酸)形成。用游离羧基形成的盐还可由无机碱衍生，如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁；并且由有机碱衍生，如异丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸和普鲁卡因(procaine)。
如本文所使用的术语“预防有效量”意指相较于尚未接受此类量的对应受试者，任何致使(但不限于)预防或改善疾病、病症或副作用，或降低疾病或病症的进展速率的量。所述术语在其范围内还包括在有效增强正常生理功能的量，以及有效地在患者中引起增强或援助第二药剂的治疗或预防作用的生理功能的量。
如本文所使用的术语“预防”是指防止或避免条件发生。在一些实施例中，预防是针对使用本发明的多重特异性抗体来改善与条件(如肿瘤或衰老相关的条件)相关的损害。
如本文所使用的术语“小分子”是指分子量低于900Da，或低于500Da或低于200Da或低于100Da的分子或离子。在本发明的测定和环境中，小分子通常可以分子与分子的去质子化离子的混合物形式存在，其主要视测定或环境的pH而定。
如本文所使用的术语“治疗有效量”意指相较于尚未接受此类量的对应受试者，任何致使(但不限于)治愈、预防或改善疾病、病症或副作用，或降低疾病或病症的进展速率的本发明的多重特异性抗体的量。所述术语在其范围内还包括可有效增强正常生理功能的量，以及可有效在患者中引起增强或有助于第二药剂的治疗作用的生理功能的量。
术语“治疗(treating/treatment)”包括在受试者中减少症状数目或降低疾病或病症(例如癌症)的一种或多种症状的严重性、持续时间或频率。术语治疗还可意指在受试者中延缓症状的发作或进展、症状严重性的进展、病症或其它病症，或延长患有所述病症或其它病症的受试者的寿命。
如本文所使用的术语“肿瘤”是指所有赘生性细胞生长和增殖(无论恶性或良性)，和所有癌前和癌细胞和组织。术语“肿瘤微环境”是指肿瘤环境的任何和所有元素，包括产生用于恶性进程存活和/或扩展和/或扩散的结构性和/或功能性环境的元素。
如本文所用的术语“单位剂型”是指适合作为用于受试者的单一剂量的与药学上可接受的稀释剂、载体或媒剂结合的物理性离散单元，每单元含有以足以产生所需治疗作用的以本发明的多重特异性抗体的量计算的本发明的条件性活性多重特异性抗体的预定量。
必须注意，除非上下文另外明确说明，否则如本文和所附权利要求书所用的单数形式“一(a/an)”和“所述”包括多个参考物。此外，术语“一(a或an)”、“一个或多个”和“至少一个”可在本文中互换使用。术语“包含”、“包括”、“具有”和“由……构建”还可互换使用。
除非另外指明，否则本说明书和权利要求书中所使用的表示成分、特性(如分子量、百分比、比率、反应条件等)的量的所有数字应理解为在所有情况下均由术语“约”修饰，无论存在或不存在术语“约”。因此，除非有相反指示，否则说明书和权利要求书中所阐述的数值参数为近似值，其可视本公开设法获得的所需特性而变化。最低限度地，并且不试图限制等效物的原则的应用于权利要求书的范围，每一数值参数至少应根据所报告的有效数字的数目并且通过应用一般舍入技术来解释。尽管阐述本公开的广泛范围的数值范围和参数为近似值，但尽可能精确地报告特定实例中所阐述的数值。然而，任何数值均固有地含有其各别测试测量值中发现的标准差所必然引起的某些误差。
应理解，本文所公开的每一组分、化合物、取代基或参数应解释为单独或与本文所公开的每一种其它组分、化合物、取代基或参数中的一或多种组合使用来进行公开。
还应理解，本文所公开的每一组分、化合物、取代基或参数的每一量/值或量/值的范围应解释为还与针对本文公开的任何其它组分、化合物、取代基或参数所公开的每一量/值或量/值的范围组合进行公开，并且因此，任何两种或更多种本文所公开的组分、化合物、取代基或参数的量/值或量/值的范围的组合也出于本说明书的目的彼此组合进行公开。
应进一步理解，本文中所公开的每一范围应解释为公开具有相同数目的有效数字的所公开范围内的每一特定值。因此，1至4的范围应解释为表示值1、2、3和4的公开内容。应进一步理解，本文所公开的每一范围的每一下限应解释为与在本文所公开的相同组分、化合物、取代基或参数的各范围内的各上限和各范围的各特定值组合进行公开。因此，本公开应解释为公开由将每一范围的每一下限与每一范围的每一上限或与每一范围内的每一特定值组合或通过将每一范围的每一上限与每一范围内的每一特定值组合导出的所有范围。
此外，说明书或实例中所公开的组分、化合物、取代基或参数的特定量/值应解释为公开范围的下限或上限，并且因此可与本申请中其它地方所公开的相同组分、化合物、取代基或参数的范围的任何其它下限或上限或特定量/值组合，以形成彼组分、化合物、取代基或参数的范围。
在一个方面，本发明提供一种多重特异性抗体，其包含细胞抗原的至少一个结合位点和肿瘤反应性淋巴细胞抗原的至少一个结合位点。多重特异性抗体在第一生理条件下以比在第二生理条件下要高的亲和力结合到至少一种细胞抗原和肿瘤反应性淋巴细胞抗原。在一些实施例中，第一生理条件为异常条件并且第二生理条件为正常生理条件。举例来说，异常条件可为肿瘤微环境中的条件。本发明的多重特异性抗体可称为条件性活性多重特异性抗体。作为另一实例，异常条件可为衰老细胞微环境中的条件。在这一情形下，衰老细胞表征为异常，这是因为其与衰老发生之前在相同部位处先前存在的正常细胞不同。衰老细胞微环境中的异常条件可为酸性pH、较低氧浓度和/或衰老相关分泌表型(SASP)。
在一些实施例中，条件性活性多重特异性抗体在正常生理条件下几乎无活性，但在异常条件下具有活性，其活性水平任选地高于条件性活性多重特异性抗体在正常生理条件下的活性或其所源自的亲本抗体在正常生理条件下的活性。在另一实施例中，条件性活性多重特异性抗体在7.2至7.4的pH下几乎无活性，但在6.0至6.8的更低pH下具有活性。在一些情况下，条件性活性多重特异性抗体在正常生理条件下可逆或不可逆非活化。在另一实例中，在高度氧化血液中，如在穿过肺之后或在肿瘤微环境中所发现的较低pH环境中，条件性活性多重特异性抗体可具有更多或更少活性。条件性活性多重特异性抗体可用作药物、治疗剂或诊断剂。
在一些实施例中，多重特异性抗体与细胞抗原和/或肿瘤反应性淋巴细胞抗原的结合为可逆的。意指多重特异性抗体可结合到细胞抗原和/或肿瘤反应性淋巴细胞抗原，随后二者分离。分离的多重特异性抗体能够再次结合到细胞抗原和/或肿瘤反应性淋巴细胞抗原。
在一些实施例中，细胞抗原可为细胞表面抗原或细胞内部抗原。细胞可由肿瘤反应性淋巴细胞标靶以抑制、损害、破坏或杀死。细胞可被称作目标细胞。因此，细胞可在用本发明的多重特异性抗体的治疗中被标靶。确切地说，为了治疗一些疾病或病状，可标靶细胞以去除。举例来说，可标靶癌细胞和衰老细胞以加以去除。在这些情况下，细胞抗原可为癌细胞抗原或衰老细胞抗原。
在一些实施例中，细胞抗原为优先与目标细胞相关但与其它类型细胞较不普遍存在的抗原。以这一方式，本发明的多重特异性抗体可优先与目标细胞相互作用。目标细胞可为癌细胞。癌细胞特异性抗原的实例包括4-IBB、5T4、腺癌抗原、α-胎蛋白、BAFF、B淋巴瘤细胞、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9(CA-IX)、C-MET、CCR4、CD152、CD19、CD20、CD200、CD22、CD221、CD23(IgE受体)、CD28、CD30(TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44 v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纤连蛋白其它域B、叶酸受体1、GD2、GD3神经节苷脂、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、B7-H3、Axl、Ror2、HGF、人类分散因子受体激酶，IGF-1受体、IGF-I、IgGl、LI-CAM、IL-13、IL-6、胰岛素样生长因子I受体、整合素α5β1、整合素αvβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、粘蛋白CanAg、N-羟乙酰基神经氨酸、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂酰丝氨酸、前列腺癌细胞，RANKL、RON、ROR1、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C、TGFβ2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、肿瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2和波形蛋白。
在一个实施例中，癌细胞特异性抗原选自CD3、Axl、EpCAM、Her2、Ror2和B7-H3。
在一个实施例中，所标靶的癌细胞为乳癌细胞，在这一情况下乳癌细胞特异性抗原可为以下中的一种：EpCAM(上皮细胞粘着分子)、Her2/neu(人类表皮生长因子受体2)、MUC-1、EGFR(表皮生长因子受体)、TAG-12(肿瘤相关醣蛋白12)、IGF1 R(胰岛素样生长因子1受体)、TACSTD2(肿瘤相关钙信号转导子2)、CD318、CD340、CD 104和N-粘附蛋白。
在另一个实施例中，癌细胞为前列腺癌细胞，在这一情况下前列腺癌细胞特异性抗原可为以下中的一种：EpCAM、MUC-1、EGFR、PSMA(前列腺特异性膜抗原)、PSA(前列腺特异性抗原)、TACSTD2、PSCA(前列腺干细胞抗原)、PCSA(前列腺细胞表面抗原)、CD318、CD104和N-粘附蛋白。
在又一实施例中，癌细胞为结直肠癌细胞，在这一情况下结直肠癌细胞特异性抗原可为以下中的一种：EpCAM、CD66c、CD66e、CEA(癌胚抗原)、TACSTD2、CK20(细胞角蛋白20)、CD104、MUC-1、CD318和N-粘附蛋白。
在另一实施例中，癌细胞为肺癌细胞，在这一情况下肺癌细胞特异性抗原可为CK18、CK19、CEA、EGFR、TACSTD2、CD318、CD1 04和EpCAM中的一种。
在另一个实施例中，癌细胞为胰腺癌细胞，在这一情况下胰腺癌细胞特异性抗原可为HSP70、mHSP70、MUC-1、TACSTD2、CEA、CD104、CD318、N-粘附蛋白和EpCAM中的一种。
在另一实施例中，癌细胞为卵巢癌细胞，在这一情况下卵巢癌细胞特异性抗原可为MUC-1、TACSTD2、CD318、CD 104、N-粘附蛋白和EpCAM中的一种。
在又一实施例中，癌细胞为膀胱癌细胞，在这一情况下膀胱癌细胞特异性抗原可为以下中的一种：CD34、CD146、CD62、CD105、CD106、VEGF受体(血管内皮生长因子受体)、MUC-1、TACSTD2、EpCAM、CD318、EGFR、6B5和叶酸盐结合受体。
在一些情况下，癌细胞为癌症干细胞，在这一情况下癌症干细胞特异性抗原可为CD133、CD135、CD117和CD34中的一种。
在另一情况下，癌细胞为黑素瘤癌细胞，在这一情况下黑素瘤癌细胞特异性抗原可为黑素细胞分化抗原、癌胚抗原、SEREX抗原中的一种。黑素细胞分化抗原的实例包括(但不限于)酪氨酸酶、gp75、gplOO、MART 1或TRP-2。癌胚抗原的实例包括MAGE家族(MAGE-Al、MAGE-A4)、BAGE家族、GAGE家族和NY-ESOl中的抗原。SEREX抗原的实例包括D-l和SSX-2。肿瘤特异性抗原的更多实例包括CDK4和13-连环蛋白。
在一些实施例中，癌细胞抗原为新抗原。实例给出于表1中。
表1.新抗原
表1(续)-新抗原
在一些实施例中，细胞特异性抗原选自衰老细胞特异性抗原，其可包括APC、ARHGAP1、ARMCX-3、AXL、B2MG、BCL2L1、CAPNS2、CD261、CD39、CD54、CD73、CD95、CDC42、CDKN2C、CLYBL、COPG1、CRKL、DCR1、DCR2、DCR3、DEP1、DGKA、EBP、EBP50、FASL、FGF1、GBA3、GIT2、ICAM1、ICAM3、IGF1、ISG20、ITGAV、KITLG、LaminB1、LANCL1、LCMT2、LPHN1、MADCAM1、MAG、MAP3K14、MAPK、MEF2C、miR22、MMP3、MTHFD2、NAIP、NAPG、NCKAP1、Nectin4、NNMT、NOTCH3、NTAL、OPG、OSBPL3、p16、p16INK4a、p19、p21、p53、PAI1、PARK2、PFN1、PGM、PLD3、PMS2、POU5F1、PPP1A、PPP1CB、PRKRA、PRPF19、PRTG、RAC1、RAPGEF1、RET、Smurf2、STX4、VAMP3、VIT、VPS26A、WEE1、YAP1、YH2AX和YWHAE。
由本发明的多重特异性抗体结合的另一抗原可为肿瘤反应性淋巴细胞抗原，其为标靶肿瘤细胞的淋巴细胞的抗原。确切地说，当淋巴细胞可攻击、抑制或破坏肿瘤细胞时，淋巴细胞为肿瘤反应性的。肿瘤反应性淋巴细胞可选自T细胞、巨噬细胞、杰卡特细胞、单核细胞、NK细胞、活化NK细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、B细胞和淋巴因子活化杀手(LAK)细胞。T细胞可为初始T细胞、辅助T细胞、效应T细胞、记忆T细胞、细胞毒性T细胞、抗原特异性T细胞和CD28-CD27-CD4阳性T细胞。
肿瘤反应性淋巴细胞的抗原通常包括T细胞上的标记物，如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD27、CD45RA、CD45RO、CD62L、CD95、CD127、CD137、α/βTCR、γ/δTCR、CCR7、PD-1和Lag3。巨噬细胞上的抗原的一些实例包括CCR2、CD14、CD68、CD163、CSFIR和MSRl。
在不希望受理论限制的情况下，本发明的多重特异性抗体结合到目标细胞和肿瘤反应性淋巴细胞两者，借此使目标细胞极为接近于肿瘤反应性淋巴细胞。认为这将促进肿瘤反应性淋巴细胞攻击目标细胞，借此抑制、损害或破坏目标细胞。抑制或去除肿瘤细胞和/或衰老细胞的治疗作用可由使用本发明的多重特异性抗体将反应性淋巴细胞带至肿瘤细胞和/或衰老细胞以供抑制、破坏肿瘤细胞和/或衰老细胞和从受试者去除肿瘤细胞和/或衰老细胞来实现。
第一生理条件和第二生理条件为相同条件的不同数值，其可选自温度、pH、渗透压、重量摩尔渗透浓度、氧化应激、氧浓度和电解质浓度。举例来说，第一生理条件可为肿瘤微环境中的酸性pH，其在5.2至7.0或5.8至7.0或6.0至6.8范围内。第二生理条件可为受试者血液中的正常生理pH，其在7.0至7.8或7.2至7.6范围内。
在一些实施例中，第一生理条件为肿瘤微环境中的较低氧浓度并且第二生理条件为受试者血液中的正常生理氧浓度。在一些其它实施例中，第一生理条件为衰老细胞周围环境(衰老细胞微环境)中的异常条件，如酸性pH和/或较低氧浓度。另外，衰老细胞微环境中的异常条件还包括衰老相关分泌表型(SASP)。衰老细胞微环境中的衰老细胞具有代谢活性并且将分泌出形成用于产生衰老相关分泌表型衰老细胞微环境的标签的蛋白(科珀(Coppé)等人，病理学年鉴(Annu Rev Pathol.)，第5卷，第99页到第118页，2010)。
SASP(也称为衰老信息分泌蛋白质组)可包括以下生物活性因子的表达/分泌(帕夫利科夫斯基(Pawlikowski)等人,细胞科学杂志(J Cell Sci),第126卷,第4061页到第4067页,2013)：
i.白细胞介素，如IL-lα、IL-1β、IL-6、IL-7、IL-13、IL-15；
ii.趋化因子，如IL-8、MCP2、MCP4、GROα、GROβ、GROγ；
iii.生长因子，如EGF、HGF、VEGF；
iv.受体和配体，如ICAM1、ICAM3、TRAIL-R3、Fas、uPAR、sTNFRI、sTNFRIII；
v.蛋白酶和调节因子，如MMP1、MMP3、MMP10、MMP12、TIMP1、TIMP2、PAI1、PAI2；和
vi.胞外不溶性分子，如胶原蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白。可将任何这些因子中的一或多种用作产生本发明的条件性活性的条件。
另外，SASP可另外表征为以下特点(帕夫利科夫斯基等人,细胞科学杂志,第126卷,第4061页到第4067页,2013)：
a.放大的扁平式形态，
b.p16INK4a表达，
c.溶酶体活性升高(衰老相关的b-半乳糖苷酶，SA b-gal)，
d.DNA-损害反应，
e.染色质重塑，和
f.自噬。
在一些实施例中，SASP含有以下因子中的一或多种：IL-lα、IL-1β、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-13、IL-15、IL-18、MCP1、MCP2、MCP4、MIF、MIP-la、MIP-3a、HCC-4、嗜酸细胞活化趋化因子-3、TECK、ENA-78、I-309、I-TAC、GROα、GROβ、GROγ、VEGF、EGF、HGF、FGF、bFGF、KGF、双调蛋白、表皮调节素、调蛋白、SCF、SDF-1α、PIGF、IGFBP-2、IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-6、IGFBP-7、GM-CSF、PDGF-BB、TGF-α、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、ICAM1、ICAM3、TRAIL-R3、Fas、OPG、SGP130、EGF-R uPAR、sTNFRI、sTNFRIII、MMP1、MMP3、MMP7、MMP9、MMP10、MMP12、MMP13、MMP14、TIMP1、TIMP2、PAI1、PAI2、SLPI、内皮素、胶原蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白。在一些实施例中，SASP包含以下的一或多种：IL-8、GROα、VEGF、内皮素、MMP7、MMP9、MMP10、MMP12、MMP13、TIMP1、TIMP2、TGF-β1。在一些其它实施例中，SASP包含至少IL-8、GROα、VEGF、内皮素、MMP7、MMP9、MMP10、MMP12、MMP13、TIMP1、TIMP2和TGF-β1。可将任何这些因子中的一或多种用作产生本发明的条件性活性的条件。
在一些其它实施例中，第一生理条件为疾病位点、组织或器官的异常条件。第二生理条件通常为受试者血液中的正常生理条件，如正常生理pH。
多重特异性抗体在第一生理条件下以比在第二生理条件下要高的亲和力结合到至少一种细胞特异性抗原和反应性淋巴细胞抗原。在一些实施例中，多重特异性抗体在第一生理条件下以比在第二生理条件下要高的亲和力结合到细胞特异性抗原和反应性淋巴细胞抗原中的至少一种。举例来说，多重特异性抗体在第一生理条件下以比在第二生理条件下的亲和力要高的亲和力结合细胞特异性抗原，而仍以非条件性活性结合到反应性淋巴细胞抗原。在另一实例中，多重特异性抗体在第一生理条件下以比在第二生理条件下的亲和力要高的亲和力结合到反应性淋巴细胞抗原，而仍以非条件性活性结合到细胞特异性抗原。在一些实施例中，多重特异性抗体在第一生理条件下以比在第二生理条件下的亲合力要高的亲合力结合到细胞特异性抗原和反应性淋巴细胞抗原两者。
多重特异性抗体的结构/形式可为布林克曼和康特曼,“双特异性抗体的制造”MABs,第9卷,第182页到第212页,2017中所述的结构/形式中的任一种。具体地说，布林克曼和康特曼的图2描述了双特异性抗体的19种不同结构/形式。这些结构/形式包括：(1)双特异性抗体共轭物；(2)杂交双特异性IgG2；(3)“仅可变域”双特异性抗体分子；(4)CH1/CL融合蛋白；(5)Fab融合蛋白；(6)非免疫球蛋白融合蛋白；(7)经Fc修饰的IgG；(8)附接和经Fc修饰的IgG；(9)经修饰的Fc和CH3融合蛋白；(10)附接IgG-HC融合物；(11)附接IgG-LC融合物；(12)附接IgG-HC&LC融合物；(13)Fc融合物；(14)CH3融合物；(15)IgE/IgM CH2融合物；(16)F(ab')2融合物；(17)CH1/CL融合蛋白；(18)经修饰的IgG；和(19)非免疫球蛋白融合物。
在特定实施例中，多重特异性抗体可为如图1中所示的二价scFv-Fc杂二聚体或如图2中所示的四价“蝶形”均二聚体。在这些两种结构中，反应性淋巴细胞抗原不限于CD3，其仅描绘为代表性肿瘤反应性淋巴细胞抗原。图1的多重特异性抗体具有连接到第一重链恒定区(例如IgG)的细胞抗原(Ag)的第一结合位点和连接到第二重链恒定区(例如IgG)的反应性淋巴细胞抗原(例如CD3)的第二结合位点。两个重链经工程化使得其仅可例如通过使用杵臼技术形成杂二聚体。第一结合位点和第二结合位点分别为结合到细胞抗原和反应性淋巴细胞抗原的scFv抗体。第一结合位点和第二结合位点中的一种或两种具有与各别抗原的条件性活性结合活性。
图2的多重特异性抗体可具有结合到细胞特异性抗原(Ag)的全长IgG抗体和结合到反应性淋巴细胞抗原(例如CD3)的scFv抗体。scFv抗体经由连接子连接到IgG抗体的轻链的C端。连接子可为短丙氨酸连接子(Ala)n、丝氨酸连接子(Ser)n、亲水性连接子或富含甘氨酸-丝氨酸的连接子。IgG抗体的重链与已连接到scFv抗体的IgG抗体的轻链配对，由此形成一半均二聚体。这一多重特异性抗体具有“蝶形”配置。
在一些实施例中，多重特异性抗体包含结合到肿瘤反应性淋巴细胞抗原的IgG抗体或其片段和结合到肿瘤细胞抗原的单链抗体，也形成如图2中所示的“蝶形”配置。单链抗体可为scFv抗体。scFv抗体可经由如本文所描述的连接子连接到IgG抗体的C端。
本发明的多重特异性抗体的结合位点各自包含轻链可变区和重链可变区。轻链可变区和重链可变区可为单链抗体形式或可为如由轻链与重链配对形成的双链形式(图1-2)。在具有条件性活性的结合位点中，轻链可变区和重链可变区中的一个具有条件性活性或其两者可具有条件性活性。结合到CD3的示范性轻链可变区包括具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的非条件性活性轻链可变区和具有选自SEQ ID NO:2至10的氨基酸序列的条件性活性轻链可变区。结合到CD3的示范性重链可变区包括具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的非条件性活性重链可变区和具有选自SEQ ID NO:12至15的氨基酸序列的条件性活性重链可变区。
结合到Axl的示范性轻链可变区包括具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的非条件性活性轻链可变区和具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的条件性活性轻链可变区。结合到Axl的示范性重链可变区包括具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的非条件性活性重链可变区和具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的条件性活性重链可变区。
结合到Her2的示范性轻链可变区为具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的非条件性活性轻链可变区。结合到Her2的示范性重链可变区为具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的非条件性活性重链可变区。
结合到B7-H3的示范性轻链可变区为具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的非条件性活性轻链可变区。结合到B7-H3的示范性重链可变区包括具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的非条件性活性重链可变区和具有选自SEQ ID NO:24至25的氨基酸序列的条件性活性重链可变区。
结合到EpCAM的示范性轻链可变区为具有SEQ ID NO:88至95的氨基酸序列的非条件性活性轻链可变区。结合到EpCAM的示范性重链可变区包括具有SEQ ID NO:80至87的氨基酸序列的非条件性活性重链可变区。轻链可变区中的一个与重链可变区中的一个组合以形成EpCAM的结合位点。EpCAM的结合位点与具有选自SEQ ID NO:26至71的氨基酸序列的氨基酸序列的单链抗CD3抗体连接以形成结合到EpCAM和CD3两者的多重特异性抗体。
结合到EpCAM和CD3的多重特异性抗体的一些实例展示于以下表2中。
表2.结合到EpCAM和CD3的多重特异性抗体
在一些其它实施例中，多重特异性抗体可如图1中所示构建，具有两个形成细胞特异性抗原的结合位点的可变区和其它两个形成反应性淋巴细胞抗原的结合位点的可变区。这些可变区可选自具有SEQ ID NO:1至25和80至95的氨基酸序列的轻链可变区和重链可变区。结合位点中的一个或两个必须对其各别抗原具有条件性活性。在具有条件性活性的每一结合位点处，轻链可变区和重链可变区中的至少一个在第一生理条件(例如异常条件)下比在第二生理条件(例如正常生理条件)下的亲和力对其抗原的亲和力更高。因此，所属领域的技术人员可从具有SEQ ID NO:1至25和80至95的氨基酸序列的轻链可变区和重链可变区选择合适区以构建如图1中所示的多重特异性抗体。图1中的重链片段选自IgG抗体(包括IgG的任何子类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)的恒定区。
在一些其它实施例中，多重特异性抗体可如图2中所示构建。类似地，scFv抗体中的轻链可变区和重链可变区和全长IgG抗体中的轻链可变区和重链可变区还可选自具有SEQ ID NO:1至25和80至95的氨基酸序列的轻链可变区和重链可变区。在具有条件性活性的每一结合位点处，轻链可变区和重链可变区中的至少一个在第一生理条件(例如异常条件)下比在第二生理条件(例如正常生理条件)下的亲和力对其抗原的亲和力增加。因此，所属领域的技术人员可从具有SEQ ID NO:1至25和80至95的氨基酸序列的轻链可变区和重链可变区选择合适区以构建如图2中所示的多重特异性抗体。图2中的恒定区选自IgG抗体(包括IgG的任何子类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)的恒定区。
在一些实施例中，多重特异性抗体结合到作为肿瘤反应性淋巴细胞抗原的CD3和作为细胞特异性抗原的另一肿瘤相关抗原(TAA)。多重特异性抗体具有与CD3的结合位点，所述结合位点包含轻链可变区和重链可变区，其选自具有SEQ ID NO:1至10的氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQ ID NO:11至15的氨基酸序列的重链可变区。或者，与CD3的结合位点包含具有选自SEQ ID NO:26至71的氨基酸序列的氨基酸序列的抗CD3单链抗体。多重特异性抗体具有与TAA的结合位点，所述结合位点包含轻链可变区和重链可变区，其选自具有SEQ ID NO:16至17、20和22的氨基酸序列的结合到Axl、Her2和B7-H3中的一个的轻链可变区和具有SEQ ID NO:18至19、21和23至25的氨基酸序列的结合到Axl、Her2和B7-H3中的一个的重链可变区。与EpCAM的结合位点包含具有选自SEQ ID NO:88至95的氨基酸序列的轻链可变区，和具有选自SEQ ID NO:80至87的氨基酸序列的重链可变区。与CD3的结合位点和与Axl、EpCAM、Her2或B7-H3的结合位点中的至少一个具有条件性活性。
多重特异性抗体的一些实例展示于表3中。这些实例具有各自与TAA和CD3的结合位点。“WT”指示结合位点的亲和力为非条件性的，即多重特异性抗体与抗原的亲和力在第一条件(例如异常条件)与第二条件(例如正常生理条件)之间并非显著不同。CAB指示结合位点的亲和力为条件性的，即多重特异性抗体与抗原的亲和力在第一条件(例如异常条件)下比在第二条件(例如正常生理条件)下要高。
表3.结合到TAA和CD3的多重特异性抗体的实例
实例类型
与TAA的结合活性
连接子
与CD3的结合活性
比较
Axl WT
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 WT
本发明
Axl WT
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 CAB1
本发明
Axl WT
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 CAB3
本发明
Axl WT
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 CAB4
本发明
Axl CAB
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 CAB1
本发明
Axl CAB
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 CAB3
本发明
Axl CAB
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 CAB4
比较
B7-H3 WT
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 WT
本发明
B7-H3 CAB
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 CAB1
本发明
B7-H3 CAB
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 CAB3
本发明
B7-H3 CAB
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 CAB4
本发明
Her2 WT
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 CAB1
本发明
Her2 WT
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 CAB3
本发明
Her2 WT
(Ala)<sub>n</sub>
CD3 CAB4
比较
EpCAM WT
(GlyGlySer)<sub>n</sub>
CD3-WT
本发明
EpCAM WT
(GlyGlySer)<sub>n</sub>
CD3-BF2
本发明
EpCAM WT
(GlyGlySer)<sub>n</sub>
CD3-BF3
本发明
EpCAM WT
(GlyGlySer)<sub>n</sub>
CD3-BF4
本发明
EpCAM WT
(GlyGlySer)<sub>n</sub>
CD3-BF5
本发明
EpCAM WT
(GlyGlySer)<sub>n</sub>
CD3-BF6
本发明
EpCAM WT
(GlyGlySer)<sub>n</sub>
CD3-BF7
本发明
EpCAM WT
(GlyGlySer)<sub>n</sub>
CD3-BF8
本发明
EpCAM WT
(GlyGlySer)<sub>n</sub>
CD3-BF8
在一些实施例中，IgG抗体和单链抗体中的一种或两种为用于向受试者投予用于治疗或预防疾病或病状或改进受试者健康的治疗性或预防性抗体。治疗性或预防性抗体可经如美国食品药物管理局(U.S.Food and Drug Administration)和欧洲药物管理局(European Medicines Agency)的国家或区域中的监管机构批准用于人类或动物的治疗性或预防性用途。
在一些其它实施例中，IgG抗体和单链抗体中的一种或两种为生物类似物，其为认为在质量、安全性和功效方面与由创新医药公司出售的参考生物产品相当的生物药剂(如美国公共健康服务法(Public Health Service Act)的章节351(i)(42U.S.C.262(i)中所定义)。生物类似物与参考生物产品之间可在临床性无活性组分方面存在微小差异。
在一个实施例中，多重特异性抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到癌细胞特异性抗原。在另一实施例中，多重特异性抗体在异常生理条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到反应性淋巴细胞抗原。在另一实施例中，多重特异性抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到癌细胞特异性抗原和反应性淋巴细胞抗原两者。在另一实施例中，多重特异性抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲合力结合到癌细胞特异性抗原与反应性淋巴细胞抗原的组合。异常条件和正常生理条件可选自pH、氧浓度或将肿瘤微环境与受试者血液区分的任何其它条件。
在一个实施例中，多重特异性抗体在衰老细胞微环境中的异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到衰老细胞特异性抗原。在另一实施例中，多重特异性抗体在衰老细胞微环境中的异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到反应性淋巴细胞抗原。在另一实施例中，多重特异性抗体在衰老细胞微环境中的异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到癌细胞特异性抗原和反应性淋巴细胞抗原两者。在另一实施例中，多重特异性抗体在衰老细胞微环境中的异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲合力结合到癌细胞特异性抗原和反应性淋巴细胞抗原的组合。异常条件和正常生理条件可选自pH、氧浓度或将衰老细胞微环境与受试者血液或正常组织区分的任何其它条件。
在另一方面，本发明提供一种多重特异性抗体，其包含结合到第一抗原(例如细胞特异性抗原)的IgG抗体和结合到不同于第一抗原的第二抗原(例如反应性淋巴细胞抗原)的至少一种scFv抗体。scFv抗体可经由如本文所描述的连接子连接到IgG抗体的C端。多重特异性抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力可逆地结合到第一抗原和第二抗原中的至少一种。
第一抗原和第二抗原不限于特异性抗原，而实际上可为具有促进实现所需结果的一些关系的任何抗原对。在一个实施例中，第一抗原为细胞表面抗原。第一抗原可为癌细胞特异性抗原，如Axl、Ror2、Her2、EpCAM或B7-H3。在另一实施例中，第二抗原为肿瘤反应性淋巴细胞的抗原，如CD3。适合的癌细胞抗原和反应性淋巴细胞的抗原的更多实例描述于本申请其它地方。
在一些实施例中，多重特异性抗体呈如图2中所示的形式，其中scFv抗体结合到CD3并且包含轻链可变区和重链可变区，其选自具有SEQ ID NO:1至10的氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQ ID NO:11至15的氨基酸序列的重链可变区。或者，与CD3的结合位点包含具有选自SEQ ID NO:26至71的氨基酸序列的氨基酸序列的抗CD3单链抗体。IgG抗体结合到TAA并且包含轻链可变区和重链可变区，其选自具有SEQ ID NO:16至17、20和22的氨基酸序列结合到Axl、Her2和B7-H3中的一个的轻链可变区和具有SEQ ID NO:18至19、21和23至25的氨基酸序列结合到Axl、Her2和B7-H3中的一个的重链可变区。与EpCAM的结合位点包含具有选自SEQ ID NO:88至95的氨基酸序列的轻链可变区，和具有选自SEQ ID NO:80至87的氨基酸序列的重链可变区。IgG抗体的轻链和重链的恒定区可选自IgG抗体(包括IgG的任何子类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)的恒定区。在这些多重特异性抗体中，只要与CD3的结合位点和与Axl、EpCAM、Her2、B7-H3的结合位点中的至少一个具有条件性活性，那么将多重特异性抗体视为具有条件性活性并且在本发明的范围内。
本发明提供一种产生多重特异性抗体的平台，其可显著减少研发时间。这一平台可称为“即插即用”，其中单一条件性活性抗肿瘤反应性淋巴细胞抗原抗体或抗体片段(例如抗CD3抗体)可共价连接到针对另一抗原(例如癌细胞表面抗原)的另一抗体或抗体片段以产生条件性活性多重特异性抗体。针对另一抗原的抗体或抗体片段可具有或不具有条件性活性。
这一“即插即用”平台的优势为例如一旦可获得条件性活性抗肿瘤反应性淋巴细胞抗原抗体或抗体片段(例如抗CD3抗体)，即通过将其连接到另一抗体或抗体片段产生条件性活性多重特异性抗体。条件性活性抗肿瘤反应性淋巴细胞抗体或抗体片段可为全长抗体、包括VH和VL区域的抗体片段或单链抗体。合理地期望在极少发展时间下成功产生条件性活性多重特异性抗体或抗体片段，这是因为已知所产生的条件性活性多重特异性抗体的两种组分分别具有条件性结合活性并且结合到其各别抗原。如本发明所证明，这一平台已成功应用于产生结合到CD3和抗原AXL、EpCAM、HER2和B7-H3中的每一种的多重特异性抗体。
在一些实施例中，异常条件为在以下范围内的酸性pH：约5.0至约7.0、或约5.2至约6.8、或约5.4至约6.8、或约5.6至约6.8、或约5.8至约6.8、或约6.0至约6.8、或约6.2至约6.8、或约6.4至约6.8、或约6.6至约6.8。在一些实施例中，酸性pH可在约6.4至约7.0，或约6.6至约7.0，或约6.8至约7.0范围内。正常生理条件可为血液中的正常生理pH，其为所属领域中公认的。在一些实施例中，血液中的正常生理pH可在约7.0至约7.8，或约7.1至约7.7，或约7.2至约7.6，或约7.2至约7.5，或约7.2至约7.4的范围内。
在某些实施例中，本发明的多重特异性抗体在异常条件下对细胞抗原和/或肿瘤反应性淋巴细胞抗原的亲和力或亲合力与在正常生理条件下的相同亲和力或亲合力的比率为至少约1.3:1、或至少约2:1、或至少约3:1、或至少约4:1、或至少约5:1、或至少约6:1、或至少约7:1、或至少约8:1、或至少约9:1、或至少约10:1、或至少约11:1、或至少约12:1、或至少约13:1、或至少约14:1、或至少约15:1、或至少约16:1、或至少约17:1、或至少约18:1、或至少约19:1、或至少约20:1、或至少约30:1、或至少约40:1、或至少约50:1、或至少约60:1、或至少约70:1、或至少约80:1、或至少约90:1、或至少约100:1。
在一个实施例中，多重特异性抗体仅由天然存在的氨基酸组成。存在二十种天然存在的氨基酸，其称为：丙氨酸(ala或A)、精氨酸(arg或R)、天冬酰胺(asn或N)、天冬氨酸(asp或D)、半胱氨酸(cys或C)、谷氨酸(glu或E)、谷酰氨酸(gin或Q)、甘氨酸(gly或G)、组氨酸(his或H)、异亮氨酸(ile或I)、亮氨酸(leu或L)、赖氨酸(lys或K)、甲硫氨酸(met或M)、苯丙氨酸(phe或F)、脯氨酸(pro或P)、丝氨酸(ser或S)、苏氨酸(thr或T)、色氨酸(tip或W)、酪氨酸(tyr或Y)和缬氨酸(val或V)。
在一些实施例中，多重特异性抗体包含一种或多种非天然存在的氨基酸。举例来说，非天然存在的氨基酸包含羰基、乙酰基、氨氧基、肼基、酰肼基、氨基脲基、叠氮基或炔基。参见例如美国专利第7,632,924号中对于适合的非天然存在的氨基酸。术语“非天然存在的氨基酸”还包括由对天然存在的氨基酸进行修饰(例如转译后修饰)产生，但并非通过活有机体的转译复合物自身天然地并入到生长的多肽链中的氨基酸。此类非天然存在的氨基酸的实例包括(但不限于)N-乙酰葡糖氨基-L-丝氨酸、N-乙酰葡糖氨基-L-苏氨酸和O-磷酸酪氨酸。
在一些实施例中，多重特异性抗体呈“模拟物”或“肽模拟物”形式，其含有完全由氨基酸的合成非天然类似物构成，或为部分天然存在的氨基酸与部分非天然的氨基酸的类似物的嵌合分子。模拟物还可并入任何量的天然存在氨基酸保守性取代，只要此类取代也不会大体上改变抗体的结构和/或活性。
模拟物形式可含有非天然结构组分的任何组合。在一个方面，本公开的模拟物包括以下三个结构基团中的一个或全部：a)除天然酰胺键(“肽键”)键以外的残基键联基团；b)代替天然存在的氨基酸残基的非天然残基；或c)诱发二级结构拟态的残基，诱发二级结构拟态即诱发或稳定二级结构，例如β转角、γ转角、β折叠、α螺旋构形和其类似物。举例来说，当所有或一些多重特异性抗体残基由除天然肽键以外的化学手段连接时，所述多重特异性抗体可表征为模拟物。个别肽模拟物残基可通过肽键、其它化学键或偶联手段连接，如戊二醛、N-羟基丁二酰亚胺酯、双官能顺丁烯二酰亚胺、N,N'-二环己基碳化二亚胺(DCC)或N,N'-二异丙基碳化二亚胺(DIC)。可替代传统酰胺键(“肽键”)键的连接基团包括例如酮亚甲基(例如，～C(＝O)～CH2～用于C(＝O)～NH-)、胺亚甲基(CH2-NH)、乙烯、烯烃(CH＝CH)、醚(CH2～O)、硫醚(CH2～S)、四唑、噻唑、逆酰胺、硫代酰胺或酯(参见例如斯帕特拉(Spatola)(1983)于氨基酸、肽和蛋白质的化学性质和生物化学性质(Chemistry andBiochemistry of Amino Acids,Peptides,and Proteins),第7卷,第267页到第357页,“肽主链修饰(Peptide Backbone Modifications)”,氨基酸、肽和蛋白质的化学性质和生物化学性质,第7卷,B.温斯坦(Weistein)编,纽约:马塞尔·德克尔公司(Marcell Dekker),第257页到第267页)。
非天然存在的氨基酸残基的更多实例包括D-或L-萘基丙氨酸、D-或L-苯基甘氨酸、D-或L-2噻吩基丙氨酸、D-或L-1、-2、3-或4-芘基丙氨酸、D-或L-3噻吩基丙氨酸、D-或L-(2-吡啶基)-丙氨酸、D-或L-(3-吡啶基)-丙氨酸、D-或L-(2-吡嗪基)-丙氨酸、D-或L-(4-异丙基)-苯基甘氨酸、D-(三氟甲基)-苯基甘氨酸、D-(三氟甲基)-苯基丙氨酸、D-对-氟-苯基丙氨酸、D-或L-对-联苯基苯基丙氨酸、D-或L-对-甲氧基-联苯基苯基丙氨酸、D-或L-2-吲哚(烷基)丙氨酸和D-或L-烷基丙氨酸，其中烷基可为经取代或未经取代的甲基、乙基、丙基、己基、丁基、戊基、异丙基、异丁基、第二异丁基、异戊基或非酸性氨基酸。非天然氨基酸的芳环包括例如噻唑基、硫苯基、吡唑基、苯并咪唑基、萘基、呋喃基、吡咯基和吡啶基芳环。
酸性非天然氨基酸可由例如非羧酸盐氨基酸取代，同时维持负电荷来产生，如(膦酰基)丙氨酸、硫酸化苏氨酸。还可通过与碳化二亚胺(R'～N—C--N--R')(如1-环己基-3(2-吗啉基-(4-乙基)碳化二亚胺或l-乙基-3(4-氮鎓-4,4-二甲醇戊基)碳化二亚胺)反应选择性地修饰羧基侧基(例如天冬氨酰基或谷氨酰基)。天冬氨酰基或谷氨酰基还可通过与铵离子反应而转化为天冬酰氨酰基和谷酰氨酰基。
基本非天然氨基酸可由用例如(除赖氨酸和精氨酸以外)鸟氨酸、瓜氨酸或(胍基)-乙酸或(胍基)烷基-乙酸(其中烷基为上文所定义)取代来产生。对于天冬酰胺或谷酰氨酸，可取代腈衍生物(例如含有代替COOH的CN部分)。天冬酰氨酰基残基和谷酰氨酰基残基可脱氨为相应天冬氨酰基残基或谷氨酰基残基。精氨酸残基模拟物可在碱性条件下可通过将精氨酰基与例如一种或多种常规试剂(包括例如苯基乙二醛、2,3-丁二酮、1,2-环-己二酮或茚三酮)反应产生。酪氨酸残基模拟物可由将酪氨酰基与例如芳香族重氮化合物或四硝甲烷反应产生。N-乙酰基咪唑和四硝甲烷可分别用于形成O-乙酰基酪氨酰基物种和3-硝基衍生物。半胱氨酸残基模拟物可由将半胱氨酰基残基与例如α-卤基乙酸酯(如2-氯乙酸或氯乙酰胺)与相应胺反应，以得到羧基甲基或羧酰氨基甲基衍生物来产生。半胱氨酸残基模拟物还可由将半胱氨酰基残基与例如以下反应来产生：溴-三氟丙酮、α-溴-β-(5-咪唑基)丙酸、磷酸氯乙酰酯、N-烷基顺丁烯二酰亚胺、3-硝基-2-二硫吡啶、甲基2-二硫吡啶、对氯汞基苯甲酸酯、2-氯汞基-4硝基苯酚或氯-7-硝基苯甲-氧杂-l,3-二唑。赖氨酸模拟物可由将离氨酰基与例如丁二酸或其它羧酸酐反应来产生(并且可改变氨基末端残基)。赖氨酸和其它含α-氨基的残基模拟物还可由与亚氨酸酯(如吡啶甲酰亚胺酸甲酯)、吡哆醛磷酸酯、吡哆醛、氯硼氢化物、三硝基-苯磺酸、O-甲基异脲、2,4,戊二酮反应和与乙醛酸酯的转酰胺酶催化反应产生。甲硫氨酸模拟物可由与例如甲硫氨酸亚砜反应产生。脯氨酸模拟物包括例如哌啶甲酸、噻唑啶羧酸、3-或4-羟基脯氨酸、脱氢脯氨酸、3-或4-甲基脯氨酸或3,3-二甲基脯氨酸。组氨酸残基模拟物可由将组氨酰基与例如焦碳酸二乙酯或对溴苯甲酰甲基溴化物反应产生。其它模拟物包括例如由以下产生的模拟物：脯氨酸和赖氨酸的羟基化；丝氨酰基或苏氨酰基残基的羟基的磷酸化；赖氨酸、精氨酸和组氨酸的α-氨基的甲基化；N端胺的乙酰化；主链酰胺残基的甲基化或用N-甲基氨基酸取代；或C端羧基的酰胺化。
多重特异性抗体的模拟物形式还可含有一个或多个相反手性的氨基酸。因此，任何以L-配置天然存在的氨基酸(其视化学实体结构还可称为R或S)可用相同化学结构类型的氨基酸或肽模拟物但具有相反手性的氨基酸(称为D-氨基酸)置换，但还可称为R-或S-形式。
多重特异性抗体的模拟物形式可使用任何蛋白化学合成技术来合成。在典型活体外蛋白合成过程中，肽经由在肽与氨基酸之间形成肽键而在长度上延伸一个氨基酸。使用连接反应形成肽键，连接反应可使用天然氨基酸或非天然氨基酸。因此，以这一方式可将非天然氨基酸引入本发明的多重特异性抗体中来制造模拟物。
在一些实施例中，多重特异性抗体中的非天然存在的氨基酸可提供到大分子(如聚合物、蛋白或脂肪酸等)的键。在一些实施例中，多重特异性抗体连接(例如共价连接)至聚合物(例如除多肽以外的聚合物)。适合的聚合物包括例如生物相容性聚合物和水溶性生物相容性聚合物。适合的聚合物包括合成聚合物和天然存在的聚合物。聚合物的实例包括经取代或未经取代的直链或支链聚亚烷基、聚亚烯基或聚氧亚烷基聚合物或支链或非支链多醣，例如均多醣或杂多醣。聚合物的更多实例包括乙烯乙烯醇共聚物(通常通过通用名称EVOH或通过商标名EVAL已知)；聚甲基丙烯酸丁酯；聚(羟基戊酸酯)；聚(L-乳酸)；聚己内酯；聚(丙交酯-共-乙交酯)；聚(羟基丁酸酯)；聚(羟基丁酸酯-共-戊酸酯)；聚二氧环己酮；聚原酸酯；聚酸酐；聚(乙醇酸)；聚(D,L-乳酸)；聚(乙醇酸-共-碳酸三亚甲酯)；聚磷酸酯；聚磷酸酯氨基甲酸酯；聚(氨基酸)；氰基丙烯酸酯；聚(碳酸三亚甲酯)；聚(亚氨基碳酸酯)；共聚(醚-酯)(例如聚(环氧乙烷)-聚(乳酸)(PEO/PLA)共聚物)；聚草酸亚烷酯；聚磷氮烯；生物分子，如纤维蛋白、血纤维蛋白原、纤维素、淀粉、胶原蛋白和玻尿酸；聚氨基甲酸酯；聚矽氧；聚酯；聚烯烃；聚异丁烯和乙烯-α烯烃共聚物；丙烯酸聚合物和共聚物；乙烯卤化物聚合物和共聚物，如聚氯乙烯；聚乙烯醚，如聚乙烯甲醚；聚偏二乙烯卤化物，如聚偏二氟乙烯和聚二氯亚乙烯；聚丙烯腈；聚乙烯酮；聚乙烯芳香族物，如聚苯乙烯；聚乙烯酯，如聚乙酸乙烯酯；乙烯基单体与彼此和烯烃的共聚物，如甲基丙烯酸亚乙基-甲酯共聚物、丙烯腈-苯乙烯共聚物、ABS树脂和乙酸亚乙基-乙烯酯共聚物；聚酰胺，如尼龙66和聚己内酰胺；醇酸树脂；聚碳酸酯；聚甲醛；聚酰亚胺；聚醚；环氧树脂；聚氨基甲酸酯；嫘萦；嫘萦-三乙酸酯；纤维素；乙酸纤维素；丁酸纤维素；乙酸丁酸纤维素；塞璐玢(cellophane)；硝酸纤维素；丙酸纤维素；纤维素醚；非晶形特富龙(Teflon)；聚(乙二醇)和羧甲基纤维素。
合成聚合物的实例包括未经取代和经取代的直链或支链聚(乙二醇)、聚(丙二醇)、聚(乙烯醇)和其衍生物，例如经取代聚(乙二醇)，如甲氧基聚(乙二醇)和其衍生物。适合的天然存在的聚合物包括例如白蛋白、直链淀粉、聚葡萄糖、肝糖和其衍生物。
经连接聚合物的平均分子量可在500Da至50000Da，例如5000Da至40000Da或25000Da至40000Da范围内。举例来说，在一些实施例中，其中多重特异性抗体包含聚(乙二醇)(PEG)或甲氧基聚(乙二醇)聚合物，PEG或甲氧基聚(乙二醇)聚合物的分子量可在约0.5千道尔顿(kDa)至1kDa、约1kDa至5kDa、5kDa至10kDa、10kDa至25kDa、25kDa至40kDa或40kDa至60kDa范围内。
举例来说，水溶性聚合物(例如PEG)可由将包含羰基的水溶性聚合物与具有包含氨氧基、肼、酰肼或氨基脲基团的非天然存在的氨基酸的多重特异性抗体反应来连接到多重特异性抗体。作为另一实例，多重特异性抗体可由将包含含炔基的氨基酸的多重特异性抗体与包含叠氮部分的水溶性聚合物反应来连接到水溶性聚合物。在一些情况下，叠氮基或炔基经由酰胺键连接到PEG分子。
在一些实施例中，连接到多重特异性抗体的大分子为白蛋白。白蛋白可为例如接收多重特异性抗体的受试者的白蛋白。举例来说，如果意图将多重特异性抗体用于人类中，则人类白蛋白连接到多重特异性抗体。如果意图将多重特异性抗体用于犬中，则犬白蛋白连接到多重特异性抗体。一般来说，如果意图将多重特异性抗体用于某物种中，则来自所述物种的白蛋白连接到多重特异性抗体。
用于经由其氨基部分将大分子与多重特异性抗体共轭的连接子的实例包括戊二醛、同型双官能交联剂或异型双官能交联剂戊二醛交联多肽。同型双官能交联剂(例如同型双官能亚氨酸酯、同型双官能N-羟基丁二酰亚胺基(NHS)酯或同型双官能硫氢基反应性交联剂)含有两个或更多个相同反应性部分并且可用于一步反应程序中，其中将交联剂添加到含有待连接的大分子与多重特异性抗体混合物的溶液中。在温和碱性pH下，亚氨酸酯仅与伯胺反应以形成亚胺基酰胺，并且不影响交联大分子与多重特异性抗体的总电荷。同型双官能硫氢基反应性交联剂包括双顺丁烯二酰亚胺己烷(BMH)、1,5-二氟-2,4-二硝基苯(DFDNB)和l,4-二-(3',2'-吡啶基二硫)丙酰氨基丁烷(DPDPB)。
异型双官能交联剂具有两个或更多个不同反应性部分(例如胺反应性部分和硫氢基反应性部分)并且经由胺或硫氢基反应性部分与大分子和多重特异性抗体中的一种交联，随后经由非反应性部分与大分子和多重特异性抗体中的另一种反应。多个异型双官能性卤乙酰基交联剂为可用的，二硫吡啶交联剂同样如此。碳化二亚胺为用于将羧基与胺偶联产生酰胺键的异型双官能交联试剂的典型实例。
多重特异性抗体可经糖基化，例如共价连接到碳水化合物或多醣部分。多重特异性抗体的糖基化通常经由N-连接或O-连接。N-连接的糖基化是指碳水化合物部分连接到多重特异性抗体的天冬酰胺残基的侧链。三肽序列“天冬酰胺-X-丝氨酸”或“天冬酰胺-X-苏氨酸”为用于将碳水化合物部分酶促连接到天冬酰胺侧链的识别序列，其中X为任何除脯氨酸外的氨基酸。因此，这些在多重特异性抗体中的三肽序列中的任一个的存在产生了潜在糖基化位点。O-连接的糖基化是指将糖N-乙酰半乳胺糖、半乳糖或木糖中的一种连接到羟氨基酸，最常见为丝氨酸或苏氨酸(尽管还可使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸)。
向多重特异性抗体添加糖基化位点可由改变其氨基酸序列使得其含有上述三肽序列(对于N-连接的糖基化位点)中的一或多个实现。还可由向原始抗体的序列(对于O-连接的糖基化位点)添加一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基或用所述残基取代原始抗体的序列作出改变。相反，去除糖基化位点可由改变多重特异性抗体的天然糖基化位点内的氨基酸实现。
多重特异性抗体可使用选自戊二醛、同型双官能交联剂或异型双官能交联剂的连接子共价连接到另一大分子(例如脂质、多肽、合成聚合物、碳水化合物和其类似物)。戊二醛经由其氨基部分交联多重特异性抗体。同型双官能交联剂和异型双官能交联剂描述于本申请中。
WO 2017/078839中所述的条件性活性抗体或其片段可用于构建多重特异性抗体。这些条件性活性抗体(全长抗体、片段或单链抗体)对其抗原的亲和力在异常条件下要比在正常生理条件下高。多重特异性抗体可通过将条件性活性抗体(全长抗体、片段或单链抗体)与可具有或可不具有条件性活性的一种或多种抗体(全长抗体、片段或单链抗体)连接来构建。
用于构建多重特异性抗体的连接子可为柔性肽，其确保多重特异性抗体的适当折叠。示范性连接子包括(Ser)n、(Ser-Ala)n和(Ala)n。
在一些实施例中，可将多用途条件性活性抗体(全长抗体、片段或单链抗体)制成结合到反应性淋巴细胞上的抗原并且与各种抗体连接到不同目标细胞(例如不同肿瘤)的抗原。这些多重特异性抗体可将相同反应性淋巴细胞引入到这些不同目标细胞(例如不同类型肿瘤)中的每一种。因此，例如当受试者具有多种不同肿瘤或甚至单个未识别肿瘤时，此类多重特异性抗体能够用于标靶多种不同类型的肿瘤细胞。这可特别适用于当肿瘤存在于难以活检的部位的情况。
在一些实施例中，结合到癌细胞(例如乳癌细胞)上的抗原的多用途条件性活性抗体(全长或单链抗体)可与结合到不同反应性淋巴细胞的抗原的各种抗体连接，以产生将不同反应性淋巴细胞带至相同目标癌细胞的多重特异性抗体。这些多用途多重特异性抗体对癌细胞抗原具有条件性亲和力，其中在肿瘤微环境中的条件下亲和力更高。因此，此类多重特异性抗体能够将不同反应性淋巴细胞(例如T细胞、巨噬细胞、NK细胞)带至相同肿瘤(乳房肿瘤)以提高治疗有效性。
为了产生在异常条件下比在正常生理条件下对抗原(第一或第二抗原)具有较高亲和力的针对第一抗原(例如细胞抗原)或第二抗原(例如肿瘤反应性淋巴细胞抗原)的条件性活性抗体，可使用如WO 2016/138071中所描述的方法，其以结合到第一和第二抗原中的任一种或两种的亲本抗体为起始物质。可使用条件性活性抗体来构建本发明的多重特异性抗体。
亲本抗体可为由用抗原对动物进行免疫而产生的单克隆抗体或多株抗体。免疫、产生和分离抗体(多株和单克隆)的方法为所属领域的技术人员已知的并且描述于科学和专利文献中，参见例如科利根(Coligan),免疫学最新方案(Current Protocols InImmunology),威利/格林(Wiley/Greene),NY(1991)；斯蒂茨(Stites)(编)基础和临床免疫学(Basic And Clinical Immunology)(第7版)兰格医学出版公司(Lange MedicalPublications),加利福尼亚州洛思阿图斯(Los Altos,Calif.)((“斯蒂茨”)；戈丁(Goding),单克隆抗体：原理和实践(Monoclonal Antibodies:Principles And Practice)(第2版)学术出版社(Academic Press),纽约,N.Y.(1986)；科勒(Kohler)(1975)“分泌具有预定特异性的抗体的融合细胞的持续培养(Continuous cultures of fused cellssecreting antibody of predefined specificity)”,自然256:495；哈洛(Harlow)(1988)抗体，实验室手册(Antibodies,A Laboratory Manual),冷泉港实验室出版公司,纽约。除使用动物的传统活体内方法外，抗体还可例如使用表达噬菌体呈现库的重组抗体结合位点活体外产生。参见例如，霍根布姆(Hoogenboom)(1997)"用于产生高亲和力抗体的设计和优化库选择策略(Designing and optimizing library selection strategies forgenerating high-affinity antibodies)",生物技术趋势(Trends Biotechnol.)15:62-70；和卡茨(Katz)(1997)“经噬菌体展示发现或工程化的配体的亲和力和特异性的结构性和机理性决定簇(Structural and mechanistic determinants of affinity andspecificity of ligands discovered or engineered by phage display)”,生物物理和生物分子结构年鉴(Annu.Rev.Biophys.Biomol.Struct.)26:27-45。
用于第一和第二测定的测定溶液可包括选自以下的缓冲液：柠檬酸盐缓冲液(如柠檬酸钠)、磷酸盐缓冲液、碳酸氢盐缓冲液(如克雷布斯(Krebs)缓冲液)、磷酸盐缓冲盐水(PBS)缓冲液、汉氏(Hank)缓冲液、Tris缓冲液、赫佩斯(HEPES)缓冲液等。还可使用适合于测定的所属领域的技术人员已知的其它缓冲剂。
用于第一和第二测定的测定溶液可含有选自无机化合物、离子和有机分子或通常在哺乳动物(如人类或动物)体液中发现的分子中的至少一种分子。这些无机化合物、离子和有机分子详细描述于WO 2016/138071中。
条件性活性抗体可与选自无机化合物、离子和有机分子的分子或离子相互作用。条件性活性抗体与分子或离子之间的相互作用可包括氢键结合、疏水相互作用和凡得瓦尔(Van der Waals)相互作用。
举例来说，如碳酸氢盐的分子或离子可通过在条件性活性抗体中形成盐桥来降低条件性活性抗体与其抗原的结合活性。举例来说，在pH低于碳酸氢盐的6.4的pKa下，碳酸氢盐经质子化并且因此不带电荷。不带电的碳酸氢盐无法形成盐桥，因此对条件性活性抗体与其抗原的结合具有极小作用。因此，条件性活性抗体在低pH下具有与其抗原的高结合活性。另一方面，在超过碳酸氢盐的pKa的高pH下，通过失去质子使碳酸氢盐离子化，由此变成带负电。带负电的碳酸氢盐将在条件性活性抗体上的带正电部分或极化部分之间形成盐桥来稳定条件性活性抗体的结构。这将阻断或减少条件性活性抗体与其抗原的结合。因此，条件性活性抗体在高pH下具有低活性。因此，在碳酸氢盐存在下条件性活性抗体具有pH依赖性活性，其中在低pH下比在高pH下结合活性更高。
当测定溶液中不存在如碳酸氢盐的分子或离子时，条件性活性抗体可失去其条件性活性。这可能归因于在缺乏条件性活性抗体上的盐桥来稳定(固定)蛋白的结构。因此，搭配物将在任何pH下类似地接近条件性活性抗体上的结合位点，产生在第一pH和第二pH下的类似活性。
应理解，尽管盐桥(离子键)为分子或离子影响条件性活性抗体的活性的最强效并且最常见方式，但此类分子或离子与上文所提和的条件性活性抗体之间的其它相互作用还可有助于稳定(固定)条件性活性抗体的结构。
示范性分子和离子选自二硫化物、硫化氢、组氨酸、组织胺、柠檬酸盐、碳酸氢盐、乙酸盐和乳酸盐。这些小分子中的每一种的pKa在6.2与7.0之间。其它适合的小分子可见于使用本申请的原理的教科书中，如化学和物理CRC手册(CRC Handbook of Chemistry andPhysics),第96版,CRC出版社,2015；化学特性手册(Chemical Properties Handbook),麦格劳-希尔教育(McGraw-Hill Education),1998。
分子或离子可具有低分子量和/或相对较小构形以通过最小化位阻降来确保最大化接近条件性活性蛋白上的小囊。出于这一原因，通常采用分子量通常低于900Da，或低于500Da或低于200Da或低于100Da的小分子或离子。举例来说，硫化氢、碳酸氢盐均具有低分子量和较小结构，其提供接近条件性活性蛋白上的囊的途径。
在一个实施例中，可向用于大体上处于相同浓度的正常生理条件和异常条件的两种测定溶液中添加人类血清。因为人类血清具有大量无机化合物、离子、有机分子(包括蛋白)，所以测定溶液将具有多种和大量选自无机化合物、离子、有机分子的组分，其在两种测定溶液之间以大体上相同的浓度存在。
在一些实施例中，可将血清的某些组分有目的地降到最少或自测定溶液省略。举例来说，当筛选抗体时，与蛋白结合或吸附蛋白的血清组分可在测定溶液中降到最少或由其省略。此类结合蛋白可产生假阳性，从而包括结合突变蛋白，其不具有条件性活性而仅在多种不同条件下结合到存在于血清中的组分。因此，谨慎选择测定组分以使此类可潜在地与测定中的突变蛋白结合的分子降到最低或省略，其可降低由于在测定中结合到除所需结合搭配物以外的分子而无意地鉴别为条件性活性阳性的假阳性突变蛋白数目。举例来说，在一些实施例中，其中对具有与人类血清中的组分结合的倾向的突变蛋白进行筛选，牛血清白蛋白可用于测定溶液中以便降低或消除由结合到人类血清的组分的突变蛋白引起的假阳性的可能性。在特定情况下还可进行其它类似置换来实现相同目标，其为所属领域的技术人员所熟知。
在另一方面，本发明提供一种制造多重特异性抗体的方法。所述方法包含以下步骤：
a)获得结合到第一抗原的IgG抗体；和
b)将结合到第二抗原的至少一个单链抗体经由连接子连接到IgG抗体的至少一个轻链的C端，以形成一个或多个构建体；
c)针对在异常条件下和正常生理条件下结合到第一或第二抗原中的至少一种，对b)的一个或多个构建体进行筛选；和
d)从构建体选择多重特异性抗体，所述多重特异性抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力可逆地结合到第一或第二抗原中的至少一种。
在一些实施例中，第一抗原可为细胞特异性抗原，确切地说为如本文所描述的癌细胞特异性抗原或衰老细胞特异性抗原。在一个实施例中，第一抗原选自Axl、EpCAM、Ror2、Her2和B7-H3。第二抗原可为肿瘤反应性淋巴细胞抗原，如CD3。本文还描述了适合的反应性淋巴细胞抗原的更多实例。
在一些其它实施例中，第二抗原为如本文所描述的新抗原。
在一些实施例中，多重特异性抗体结合到作为肿瘤反应性淋巴细胞抗原的CD3和作为细胞特异性抗原的另一肿瘤相关抗原(TAA)。多重特异性抗体具有与CD3的结合位点，所述结合位点包含轻链可变区和重链可变区，其选自具有SEQ ID NO:1至10的氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQ ID NO:11至15的氨基酸序列的重链可变区。或者，与CD3的结合位点包含具有选自SEQ ID NO:26至71的氨基酸序列的氨基酸序列的抗CD3单链抗体。多重特异性抗体具有与TAA的结合位点，所述结合位点包含轻链可变区和重链可变区，其选自具有SEQ ID NO:16至17、20和22的氨基酸序列的结合到Axl、Her2和B7-H3中的一个的轻链可变区和具有SEQ ID NO:18至19、21和23至25的氨基酸序列的结合到Axl、Her2和B7-H3中的一个的重链可变区。与EpCAM的结合位点包含具有选自SEQ ID NO:88至95的氨基酸序列的轻链可变区，和具有选自SEQ ID NO:80至87的氨基酸序列的重链可变区。在这些多重特异性抗体中，只要与CD3的结合位点和与Axl、EpCAM、Her2、B7-H3的结合位点中的至少一个具有条件性活性，则将所述多重特异性抗体视为具有条件性活性并且将其视为本发明范围内。
在一个实施例中，多重特异性抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到第一抗原。在另一实施例中，多重特异性抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到第二抗原。在另一实施例中，多重特异性抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到第一抗原和第二抗原两者。在另一实例中，多重特异性抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲合力结合到第一抗原与第二抗原的组合。
在一些实施例中，异常条件为在以下范围内的酸性pH：约5.0至约7.0、或约5.2至约6.8、或约5.4至约6.8、或约5.6至约6.8、或约5.8至约6.8、或约6.0至约6.8、或约6.2至约6.8、或约6.4至约6.8、或约6.6至约6.8。在一些实施例中，酸性pH可在约6.4至约7.0，或约6.6至约7.0，或约6.8至约7.0范围内。正常生理条件可为血液中的正常生理pH，其为所属领域中公认的。在一些实施例中，血液中的正常生理pH可在约7.0至约7.8，或约7.1至约7.7，或约7.2至约7.6，或约7.2至约7.5，或约7.2至约7.4的范围内。
产生多重特异性抗体
在另一方面，提供一种产生多重特异性抗体的方法。所述方法由两种起始物质产生多重特异性抗体：结合到第一抗原的IgG抗体或其片段和结合到第二抗原的scFv抗体。演化这些两种抗体中的一种或两种以产生演化抗体，针对在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到其各别第一抗原或第二抗原的IgG抗体和/或scFv抗体来筛选所述抗体。将结合到第二抗原的至少一种scFv抗体连接到IgG抗体或片段的至少一个轻链的C端以产生一个或多个构建体。在从起始IgG抗体和scFv抗体中的一种或两种演化的抗体筛选的抗体中有scFv抗体和IgG抗体中的至少一种。如果起始抗体经演化，则可将起始抗体称为“亲本抗体”并且可将由其演化的一种或多种抗体称为“突变抗体”或“演化抗体”。
在异常条件和正常生理条件下针对结合到第一抗原和第二抗原中的至少一种对构建体进行进一步筛选，以选择在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到第一抗原和第二抗原中的至少一种的多重特异性抗体。多重特异性抗体与第一抗原或第二抗原的结合可为可逆的。
例如在WO 2012/009026中描述了对起始物质IgG抗体和scFv抗体进行演化的适合方法。例如在WO 2017/078839中描述了对演化抗体或构建体进行筛选的适合方法。
在另一方面，提供一种产生多重特异性抗体的方法。这一方法始于在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力结合到第一抗原的IgG抗体或其片段和结合到第二抗原的scFv抗体。所述方法包含以下步骤：将结合到第二抗原的scFv抗体连接到IgG抗体或其片段的至少一个轻链的C端以产生一个或多个构建体，在正常生理条件和在异常条件下针对与第一抗原和第二抗原的结合活性对一个或多个构建体进行筛选，和选择在异常条件下以比在所述正常生理条件下要高的亲和力结合到第一抗原并且可逆地结合到第二抗原的多重特异性抗体。
还提供由上述方法产生的多重特异性抗体。此类多重特异性抗体包含结合到细胞特异性抗原的IgG抗体或其片段和至少一种scFv抗体，所述scFv抗体结合到连接到IgG抗体或其片段的至少一个轻链或至少一个重链的C端的T-淋巴细胞抗原。至少一种scFv抗体在异常条件下以比在正常生理条件下要高的亲和力可逆地结合到T淋巴细胞抗原。
用于制造多重特异性抗体的起始物质包括结合到第一抗原的IgG抗体或其片段和结合到本文所述的第二抗原的scFv抗体。这些多重特异性抗体的其它特征还描述于本文其它地方。
与试剂共轭
在一些实施例中，多重特异性抗体可与试剂共轭，其可为治疗剂、预防剂、诊断剂、可检测标记、螯合剂或造影剂。在一些实施例中，在多重特异性抗体到达作用位点(例如肿瘤)后，多重特异性抗体上的共轭试剂可任选地由多重特异性抗体释放。在这些实施例中，多重特异性抗体可充当递送媒剂用于将所共轭试剂(如治疗剂、预防剂或诊断剂)输送至受试者中的作用位点。
多重特异性抗体可经由共价共轭或非共价共轭与试剂共轭。共价共轭可为直接共轭或经由连接子共轭。在某些实施例中，直接共轭係通过构建试剂与多重特异性抗体的融合蛋白(即，通过编码多重特异性抗体与试剂的两个基因的基因融合并且表达为单一蛋白)。在某些实施例中，直接共轭通过在多重特异性抗体上的反应性基团与试剂上的对应基团之间形成共价键。在某些实施例中，直接共轭通过对多重特异性抗体进行修饰(即基因修饰)以包括在适当条件下形成共价连接到试剂的反应性基团(作为非限制性实例，硫氢基或羧基)，或反之亦然。举例来说，可将具有所需反应性基团(即半胱氨酸残基)的氨基酸引入到多重特异性抗体中，以形成与试剂一起形成的二硫键。用于将试剂与多重特异性抗体共价共轭的方法在所属领域中也为已知的(即光交联，参见例如扎采宾(Zatsepin)等人俄罗斯化学评论(Russ.Chem.Rev.),74:77-95(2005))。
非共价共轭可通过任何非共价连接方式，包括疏水性键、离子键、静电相互作用和其类似物而达成，如所属领域的一般技术人员易于理解的。
共轭还可使用多个连接子进行。举例来说，多重特异性抗体与试剂可使用多种双功能蛋白偶联剂来共轭，双功能蛋白偶联剂如N-丁二酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(SPDP)、丁二酰亚胺基-4-(N-顺丁烯二酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)、亚氨基硫杂环戊烷(IT)、亚氨酸酯的双官能衍生物(如二亚胺代己二酸二甲酯HCl)、活性酯(如辛二酸二丁二酰亚胺酯)、醛(如戊二醛)、双叠氮基化合物(如双(对-叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双-重氮衍生物(如双-(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双-活性氟化合物(如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。还可使用由一至二十个氨基酸(通过肽键连接)构成的肽连接子。在某些此类实施例中，氨基酸选自二十种天然存在的氨基酸。在某些其它此类实施例中，氨基酸中的一或多种选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷酰氨酸和赖氨酸。
连接子可为在递送到作用位点时促进试剂释放的“可裂解连接子”。举例来说，可使用酸不稳定性连接子、肽酶敏感性连接子、光不稳定性连接子、二甲基连接子或含二硫化物的连接子(沙里(Chari)等人,癌症研究(Cancer Res.),52:127-131(1992)；美国专利第5,208,020号)。
共轭治疗剂或预防剂可对身体具有毒性，如放射性粒子、化学疗法药物或细胞的毒素(即细胞毒素)。使用本发明的多重特异性抗体将共轭治疗剂递送到作用位点将显著降低这些治疗剂在不需要活性的身体区域中的毒性作用。使放射性粒子与抗体共轭的技术为所属领域中已知的。替伊莫单抗(tiuxetan)和托西莫单抗(tositumomab)为放射性粒子共轭单克隆抗体的实例。两者均为针对与不同放射性粒子共轭的CD20抗原的抗体。类似地，用于将化学疗法药物与抗体共轭的技术为所属领域中已知的。存在至少两种与化学疗法药物共轭的市售抗体：本妥昔单抗(brentuximab)和曲妥珠单抗-美坦新偶联物(ado-trastuzumabemtansine)(卡德克拉TM(KadcylaTM))。用于将细胞毒素与抗体共轭的技术在所属领域中也为已知的。举例来说，地尼白介素(denileukin diftitox)(癌症药物)由连接到引起白喉症的来自胚的毒素的称为白细胞介素-2(IL-2)的免疫系统蛋白组成。
预期任何种类的放射性粒子、化学疗法药物和细胞毒素可与本发明的多重特异性抗体共轭以便在将这些试剂递送到作用或疾病位点期间降低这些试剂的副作用。
在一些实施例中，与多重特异性抗体共轭的放射性粒子包含浸渍有一个或多个放射性同位素的粒子，并且具有用于细胞的局部消融的足够放射性。粒子可包含玻璃、金属、树脂、白蛋白或聚合物。放射性粒子中的金属可选自铁、钆和钙。放射性粒子中的一个或多个放射性同位素的实例选自镓-67(67Ga)、钇-90(90Y)、镓-68(68Ga)、铊-201(201T1)、锶-89(89Sr)、铟-III(111In)、碘-131(131I)、钐-153(153Sm)、鎝-99m(99mTc)、铼-186(186Re)、铼-188(188Re)、铜-62(62Cu)和铜-64(64Cu)。组合物中的放射性同位素可发射β辐射、γ辐射和/或正电子。
在一些实施例中，与多重特异性抗体共轭的化学疗法药物选自蒽环霉素、拓扑异构酶I和/或II抑制剂、纺锤体毒素植物碱、烷基化剂、抗代谢物、玫瑰树碱和野芸香碱。
蒽环霉素(或蒽环霉素抗生素)由链霉菌属(Streptomyce)细菌衍生。这些化合物用于治疗大范围的癌症，包括肝细胞癌、白血病、淋巴瘤和乳癌、子宫癌、卵巢癌和肺癌。蒽环霉素包括(但不限于)阿霉素、道诺霉素、表柔比星(epirubicin)、艾达霉素、戊柔比星(valrubicin)、比柔比星(pirarubicin)、佐柔比星(zorubicin)、阿柔比星(aclarubicin)、地托比星(detorubicin)、洋红霉素、吗啉基阿霉素、吗啉基道诺霉素、甲氧基吗啉基阿霉素和其药学上可接受的盐。
拓扑异构酶为维持DNA的拓扑的必需酶。通过扰乱恰当的DNA超螺旋化，I型或II型拓扑异构酶的抑制对DNA的转录和复制两者进行干扰。一些I型拓扑异构酶抑制剂包含喜树碱衍生物。喜树碱衍生物是指喜树碱类似物，如伊立替康(irinotecan)、拓朴替康(topotecan)、十六烷、硅烷基喜树碱、鲁特替康(lutortecan)、卡伦特星(karenitecin)(BNP1350)、吉马替康(gimatecan)(ST1481)、贝洛替康(belotecan)(CKD602)或其药学上可接受的盐。II型拓扑异构酶抑制剂的实例包括(但不限于)安吖啶、依托泊苷(etoposide)、磷酸依托泊苷和替尼泊甙(teniposide)。这些为表鬼臼毒素的半合成衍生物，其为美国鬼臼(American Mayapple)(美洲鬼臼(Podophyllum peltatum))根中天然存在的植物碱。
纺锤体毒素植物碱由植物衍生并且通过防止细胞分裂所必需的微管功能来阻断细胞分裂。这些植物碱包括(但不限于)长春花植物碱(如长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞宾和长春西汀)和紫杉烷。紫杉烷包括(但不限于)太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、拉洛他赛(larotaxel)、卡巴他索(cabazitaxel)、沃塔紫杉醇(ortataxel)、替司他赛(tesetaxel)和其药学上可接受的盐。
烷基化试剂包括(但不限于)甲基二(氯乙基)胺、环磷酰胺、氯芥苯丁酸、依弗酰胺和铂化合物(如奥沙利铂(oxaliplatin)、顺铂(cisplatin)或卡铂(carboplatin))。
抗代谢物为抑制代谢物(其为正常代谢的一部分)的使用的化学品。抗代谢物的存在改变了细胞生长和细胞分裂。嘌呤或嘧啶类似物防止将核苷酸并入到DNA，阻止DNA合成并且因此阻止细胞分裂。其也影响RNA合成。嘌呤类似物的实例包括硫唑嘌呤、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、氟达拉滨(fludarabine)、喷司他丁(pentostatin)和克拉屈滨(cladribine)。嘧啶类似物的实例包括5-氟尿嘧啶(5FU)(其抑制胸苷酸合成酶)、氟尿苷(FUDR)和胞嘧啶阿拉伯糖苷(阿糖胞苷)。
抗叶酸剂为削弱叶酸功能的化学疗法药物。熟知实例为甲氨喋呤，其为抑制二氢叶酸还原酶(DHFR)并且因此防止四氢叶酸形成的叶酸类似物。这导致DNA、RNA和蛋白的产生受到抑制(因为四氢叶酸还涉及氨基酸丝氨酸与甲硫氨酸的合成)。其它抗叶酸剂包括(但不限于)甲氧苄啶、雷替曲塞、乙胺嘧啶和培美曲塞(pemetrexed)。
其它化学疗法药物还可与多重特异性抗体共轭，如玫瑰树碱和野芸香碱。玫瑰树碱和其衍生物，如9-羟基玫瑰树碱、N2-甲基-9-羟基玫瑰树碱、2-(二异丙氨基-2-乙基)9-乙酸羟基玫瑰树碱、2-(二异丙氨基-乙基)9-羟基-乙酸玫瑰树碱和2-(β哌啶基-2-乙基)9-羟基玫瑰树碱皆为有效的化学疗法药物。
野芸香碱为从骆驼蓬(Peganum harmala)种子分离的天然植物碱产物。基于野芸香碱的化学疗法药物包括野芸香碱、骆驼蓬碱、哈尔酚(harmol)、哈尔马酚(harmalol)和哈尔满(harman)和喹唑啉衍生物：鸭嘴花碱(vasicine)和鸭嘴花碱酮(vasicinone)。
在一些实施例中，与多重特异性抗体共轭的细胞毒素包括紫杉醇、细胞迟缓素B、短桿菌素D、溴化乙锭、吐根素(emetine)、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊甙(tenoposide)、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、阿霉素、道诺霉素、二羟基蒽醌、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素D、1-脱氢睪固酮、糖皮质激素、普鲁卡因、四卡因、利多卡因、普萘洛尔和嘌呤霉素其类似物或同源物。其它毒素包括例如蓖麻毒素、CC-1065和类似物、倍癌霉素。其它毒素包括白喉毒素和蛇毒(例如眼镜蛇毒)。
在一些实施例中，多重特异性抗体可与诊断剂共轭。用于本发明中的诊断剂可包括所属领域中已知的任何诊断剂，如例如以下参考文献中所提供：阿姆斯特朗(Armstrong)等人,诊断成像(Diagnostic Imaging),第5版,布莱克威尔出版公司(BlackwellPublishing)(2004)；托尔钦林V.P.(Torchilin,V.P.),编,成像剂的标靶递送(TargetedDelivery of Imaging Agents),CRC出版社(CRC Press)(1995)；瓦拉哈苏拉,S.(Vallabhajosula,S.),分子成像：针对PET和SPECT的放射性药物(Molecular Imaging:Radiopharmaceuticals for PET and SPECT),斯普林格出版社(Springer)(2009)。诊断剂可通过多种方法检测，包括使用试剂以提供和/或增强可检测信号，所述信号包括(但不限于)γ发射信号、放射性信号、回声信号、光学信号、荧光信号、吸收性信号、磁性信号或断层扫描信号。用于使诊断剂成像的技术可包括(但不限于)单光子发射断层摄影术(SPECT)、磁共振成像(MRI)、光学成像、荧光成像、正电子发射断层摄影术(PET)、计算机断层摄影术(CT)、x射线成像、γ射线成像和其类似技术。
在一些实施例中，多重特异性抗体可与结合(例如)到待用于多种诊断成像技术的金属离子的螯合剂共轭。示范性螯合剂包括(但不限于)乙二胺四乙酸(EDTA)、[4-(1,4,8,11-四氮杂环戊烷-1-基)甲基苯甲酸(CPTA)、环己酮四乙酸(CDTA)、亚乙基双(氧基亚乙基氮基)四乙酸(EGTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、柠檬酸、羟基乙基亚乙基二胺三乙酸(HEDTA)、亚胺二乙酸(IDA)、三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)、1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四(亚甲基膦酸)(DOTP)、1,4,8,11-四氮杂环十二烷-1,4,8,11-四乙酸(TETA)、1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)和其衍生物。
多重特异性抗体可与可检测标记共轭。适合的可检测标记可包括可通过光谱学、光化学、生物化学、免疫化学、电学、光学或化学方式检测的任何组合物。适合的可检测标记包括(但不限于)磁珠(例如丹彼得TM(DynabeadTM)、荧光染料(例如异硫氰酸荧光素、(TEXAS)、若丹明、绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白、黄色荧光蛋白和其类似物)、放射性标记(例如3H、125I、35S、14C或32P)、酶(例如辣根过氧化酶、碱性磷酸酶、荧光素酶和常用于以下的其它物：酶联免疫吸附测定(ELISA))和色度标记，如胶态金或有色玻璃或塑料珠粒(例如多重苯乙烯、多重丙烯、乳胶等)。
在其它实施例中，可检测标识选自光学试剂，如荧光剂、磷光剂、化学发光剂和其类似物。许多试剂(例如染料、探针、标记或指示剂)为所属领域中已知的并且可用于本发明中。(参见例如，英杰(Invitrogen),手册：荧光探针与标记技术指南(The Handbook:AGuide to Fluorescent Probes and Labeling Technologies),第十版(2005))。荧光剂可包括多种有机和/或无机小分子或多种荧光蛋白和其衍生物。举例来说，荧光剂可包括(但不限于)：花青、酞菁、卟啉、吲哚花青、若丹明、苯恶嗪、苯基黃嘌呤、啡噻嗪、吩硒嗪、荧光素、苯并卟啉、方酸、二吡咯并嘧啶酮、并四苯、喹啉、吡嗪、卟啉、丁烯、吖啶、啡啶、若丹明、吖啶、蒽醌、硫族吡喃鎓盐类似物、二氫卟酚、萘酞花青、次甲基染料、吲哚啉染料、偶氮化合物、甘菊蓝、氮杂薁、三苯基甲烷染料、吲哚、苯并吲哚、吲哚碳花青、苯并吲哚碳花青和氟硼荧TM(BODIPYTM)衍生物，其具有4,4-二氟-4-硼-3a,4a-二氮杂-s-二环戊二烯并苯和/或这些中的任一中的共轭物和/或衍生物的一般结构。
其它可检测试剂包括荧光素、荧光素-聚天冬氨酸共轭物、荧光素-聚谷氨酸共轭物、荧光素-聚精氨酸共轭物、吲哚花青绿、吲哚花青-十二天冬氨酸共轭物、吲哚花青(NIRD)-聚天冬氨酸共轭物、异硫蓝、吲哚二磺酸酯、苯并吲哚二磺酸酯、双(乙基羧基甲基)吲哚花青、双(戊基羧基甲基)吲哚花青、聚羟基吲哚磺酸酯、聚羟基苯并吲哚磺酸酯、硬质杂原子吲哚磺酸酯、吲哚花青双丙酸、吲哚花青双己酸、3,6-二氰基-2,5-[(N,N,N',N'-四(羧基甲基)氨基]吡嗪、3,6-[(N,N,N',N'-四(2-羟基乙基)氨基]吡嗪-2,5-二甲酸、3,6-双(N-氮磷基)吡嗪-2,5-二甲酸、3.6-双(N-吗啉基)吡嗪-2,5-二甲酸、3,6-双(N-哌嗪基)吡嗪-2,5-二甲酸、3.6-双(N-硫吗啉基)吡嗪-2,5-二甲酸、3,6-双(N-硫吗啉基)吡嗪-2,5-二甲酸S-氧化物、2,5-二氰基-3,6-双(N-硫吗啉基)吡嗪S,S-二氧化物、吲哚碳花青四磺酸酯、氯吲哚碳花青和3,6-二氨基吡唑-2,5-二甲酸。
在一些实施例中，多重特异性抗体可与造影剂共轭，其中造影剂为适用于成像(例如，在人类上进行的成像程序)的造影剂。造影剂的非限制性实例包括钆(Gd)、镝和铁。多重特异性抗体可使用标准技术与造影剂共轭。举例来说，可使用氯胺T或1,3,4,6-四氯-3α,6α-二苯基甘脲对多重特异性抗体进行碘化。对于氟化，在合成期间通过氟离子置换反应将氟与多重特异性抗体共轭。关于具有此类放射性同位素的蛋白合成的评述，参见穆勒-加特纳,H.(Muller-Gartner,H.),TIB技术(TIB Tech.),16:122-130(1998)和沙慈,H.(Saji,H.),治疗药物载体系统锐评(Crit.Rev.Ther.Drug Carrier Syst.),16(2):209-244(1999)。举例来说，多重特异性抗体可由将如Gd二亚乙基三胺五乙酸(GdDTPA)或Gd四氮杂环十二基四乙酸(GdDOTA)的低分子Gd螯合剂与抗体共轭来与Gd共轭。参见卡洛凡(Caravan)等人,化学评论(Chem.Rev.)99:2293-2352(1999)和劳佛(Lauffer)等人,磁共振成像杂志(J.Magn.Reson.Imaging),3:11-16(1985)。多重特异性抗体还可通过例如将聚赖氨酸-Gd螯合剂与抗体共轭来与Gd共轭。参见例如库泰特(Curtet)等人,放射学调查研究(Invest.Radiol.),33(10):752-761(1998)。或者，多重特异性抗体可由将包括Gd螯合剂脂质的顺磁性聚合脂质体与抗生物素蛋白和生物素标记抗体一起培育来与Gd共轭。参见例如，辛普金斯(Sipkins)等人,自然-医学(Nature Med.),4:623-626(1998)。
在另外其它实施例中，造影剂可为如以下参考文献中所述的x射线造影剂：H.S汤姆森(H.S Thomsen)、R.N.穆勒(R.N.Muller)和R.F.麦特瑞(R.F.Mattrey)编,造影介质趋势(Trends in Contrast Media),(柏林:施普林格出版社(Springer-Verlag),1999)；P.道森(P.Dawson)、D.科斯格罗夫(D.Cosgrove)和R.格兰杰(R.Grainger)编,造影介质教科书(Textbook of Contrast Media)(ISIS医药介质(ISIS Medical Media))1999；托尔钦林V.P.(Torchilin,V.P.),当代药学生物技术(Curr.Pharm.Biotech.),第1卷,第183页到第215页(2000)；波察罗夫A.A.(Bogdanov,A.A.)等人,先进药物递送评论(Adv.DrugDel.Rev.),第37卷,第279页到第293页(1999)；萨克斯A.(Sachse,A.)等人放射学调查研究,第32卷,第40页到第55页(1997)。x射线造影剂的实例包括(但不限于)碘帕醇(iopamidol)、碘美普尔(iomeprol)、碘海醇(iohexol)、碘喷托(iopentol)、碘普罗胺(iopromide)、碘西胺(iosimide)、碘佛醇(ioversol)、碘曲仑(iotrolan)、碘酞硫(iotasul)、碘克沙醇(iodixanol)、碘西醇(iodecimol)、碘葡胺(ioglucamide)、碘葡苯胺(ioglunide)、碘古酰胺(iogulamide)、碘沙考(iosarcol)、碘昔兰(ioxilan)、碘必乐(iopamiron)、甲泛葡胺(metrizamide)、碘比醇(iobitridol)和碘美醇(iosimenol)。在某些实施例中，x射线造影剂可包括碘帕醇、碘美普尔、碘普罗胺、碘海醇、碘喷托、碘佛醇、碘比醇、碘克沙醇、碘曲仑和碘美醇。
多重特异性抗体在一些实施例中可与“不透射线”标记物(例如易于使用例如x射线可视化的标记物)共轭。不透射线物质已为所属领域的技术人员所熟知的。最常见的不透射线物质包括碘化物、溴化物或钡盐。其它不透射线物质也为已知的并且包括(但不限于)有机铋衍生物(参见例如，美国专利第5,939,045号)、不透射线多重氨基甲酸酯(参见美国专利第5,346,981号)、有机铋复合物(参见例如，美国专利第5,256,334号)、不透射线钡集合体复合物(参见例如美国专利第4,866,132号)和其类似物质。
可与多重特异性抗体共轭的适合的荧光蛋白包括(但不限于)来自多管水母(Aequoria victoria)的绿色荧光蛋白(GFP)或其突变体或衍生物，例如在美国专利第6,066,476号、第6,020,192号、第5,985,577号、第5,976,796号、第5,968,750号、第5,968,738号、第5,958,713号、第5,919,445号、第5,874,304号中所描述。GFP的实例可购自例如克隆科技公司(Clontech,Inc.)；红色荧光蛋白；黄色荧光蛋白；如例如玛兹(Matz)等人在(1999)自然生物科技(Nature Biotechnol.)17:969-973中所描述的来自珊瑚虫物种的多种荧光和彩色蛋白中的任一种；和其类似物。
在一些实施例中，共轭在多重特异性抗体的Fc区域上。上文所述的共轭分子、化合物或药物可共轭到Fc区域，如美国专利第8,362,210中所述。举例来说，Fc区域可与治疗剂预防剂或诊断剂共轭，所述治疗剂预防剂或诊断剂待递送到具有异常条件的位点，其中多重特异性抗体优先地展示出活性。用于共轭到抗体的Fc区域的其它方法在所属领域中已知。参见例如美国专利第5,336,603号、第5,622,929号、第5,359,046号、第5,349,053号、第5,447,851号、第5,723,125号、第5,783,181号、第5,908,626号、第5,844,095号和第5,112,946号、欧洲专利第307,434号、欧洲专利第367,166号、欧洲专利第394,827号、专利合作条约公开WO 91/06570、WO 96/04388、WO 96/22024、WO 97/34631和WO 99/04813；阿什肯纳齐(Ashkenazi)等人,美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA),第88卷,第10535页到第10539页,1991；特劳内克(Traunecker)等人,自然(Nature),第331卷,第84页到第86页,1988；郑(Zheng)等人,免疫学杂志(J.Immunol.),第154卷,第5590页到第5600页,1995；和维(Vie)等人,美国国家科学院院刊,第89卷,第11337页到第11341页,1992。
组合物、调配物、试剂盒
本发明的多重特异性抗体可包括于医药组合物、医疗装置、试剂盒或制品中用于治疗性、预防性或诊断性用途。适合的医药组合物、医疗装置、试剂盒或制品详细地描述于WO 2016/138071中。
在一些实施例中，医药组合物可呈液体形式、冻干形式或由冻干形式复原的液体形式。冻干制剂通常在投予之前用无菌溶液复原。用于复原冻干组合物的标准程序为添加一定体积的纯水(通常等效于在冻干期间所去除的体积)。包含抗细菌剂的溶液还可用于产生用于肠胃外投予的医药组合物；还参见陈(Chen),药物开发和工业药剂学(Drug Dev IndPharm),第18卷,第1311页到第54页,1994。
组合物中可包括药学上可接受的张力剂以调节调配物的张力。示范性张力剂包括氯化钠、氯化钾、甘油和来自氨基酸、糖的群组的任何组分以及其组合。在一些实施例中，水性调配物为等张的，但高张溶液或低张溶液也可为适合的。术语“等张”表示溶液具有与其所比较的一些其它溶液(如生理盐溶液或血清)相同的张力。张力剂可以约5mM至约350mM的量，例如以100mM至350nM的量使用。
可向组合物中添加药学上可接受的表面活性剂来减少所调配的多重特异性抗体的聚集和/或使调配物中微粒的形成降到最低和/或减少吸附。示范性表面活性剂包括聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基醚、烷基苯基聚氧乙烯醚(特立通-XTM(Triton-XTM))、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(泊洛沙姆(Poloxamer)，普洛尼克TM(PluronicTM))和十二烷基硫酸钠(SDS)。适合的聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯的实例为聚山梨醇酯20(以商标吐温20TM(Tween 20TM)出售)和聚山梨醇酯80(以商标吐温80TM出售)。适合的聚乙烯-聚丙烯共聚物的实例为以名称F68或泊洛沙姆188TM出售的聚乙烯-聚丙烯共聚物。适合的聚氧乙烯烷基醚的实例为以商标布里杰TM(BrijTM)出售的聚氧乙烯烷基醚。组合物中表面活性剂的示范性浓度可在约0.001％至约1％w/v范围内。
可向组合物添加冻干保护剂以便在冻干过程期间针对去稳定条件保护不稳定活性成分(例如蛋白)。举例来说，已知的冻干保护剂包括糖(包括葡萄糖和蔗糖)、多元醇(包括甘露糖醇、山梨糖醇和丙三醇)和氨基酸(包括丙氨酸、甘氨酸和谷氨酸)。可以约10nM至500nM的量包括冻干保护剂。
在一些实施例中，含有表面活性剂、缓冲剂、稳定剂和张力剂中的一或多种的组合物基本上不含如以下的一种或多种防腐剂：乙醇、苯甲醇、苯酚、间甲酚、对-氯-间-甲酚、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、氯化苯甲烃铵和其组合。在其它实施例中，选自乙醇、苯甲醇、苯酚、甲酚、间甲酚、对-氯-间-甲酚、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、氯化苯甲烃铵和其组合的防腐剂可包括于调配物中，例如浓度在约0.001％至约2％(w/v)范围内。
可提供用于经口投予(如糖浆、酏剂和悬浮液)的单位剂型，其中例如一茶匙量、一大汤匙量、一片剂或一小瓶的每一剂量单位含有预定量的组合物。类似地，用于注射或静脉内投予的单位剂型可包含组合物中的多重特异性抗体作为于无菌水、标准生理盐水或另一药学上可接受的载剂中的溶液。
可将多重特异性抗体调配为可注射调配物。通常，可注射组合物制备为液体溶液或悬浮液，还可制备在注射之前的适合于在液体媒剂中的溶液或悬浮液的固体形式。制剂还可为囊封在脂质体媒剂中的乳化多重特异性抗体。
在一些实施例中，可将多重特异性抗体调配为雾剂和鼻内组合物。对于栓剂，组合物将包括传统粘合剂和载剂，如聚亚烷基二醇或甘油三酯。此类组合物可由含有约0.5％至约10％(w/w)，例如1％至约2％范围内的多重特异性抗体的混合物形成。
多重特异性抗体可调配为包括媒剂的鼻内调配物，所述媒剂既不对鼻粘膜造成刺激也不显著干扰纤毛功能。如水、生理盐水或其它已知物质的稀释剂可与本发明一起使用。经鼻调配物还可含有防腐剂，如(但不限于)氯丁醇和氯化苯甲烃铵。可存在表面活性剂来增强由鼻粘膜对多重特异性抗体的吸收。
在一些实施例中，将多重特异性抗体调配于控制释放调配物中。本发明范围内的控制释放意指多个缓释剂型中的一种。以下类型的控制释放可用于本发明的目的：连续释放、延迟释放、逐渐释放、长期释放、程控释放、延长释放、成比例释放、拖延释放、缓慢释放、间隔释放、持续释放、定时释放、延迟作用、延缓作用、分层时间作用、长效作用、延长作用、重复作用、持续作用和缓释。这些术语和制造其的方法的进一步论述可见于莱谢克·克罗辛斯基(Lesczek Krowczynski),缓释剂型(Extended-Release Dosage Forms)1987(CRC出版社公司)。
控制释放组合物可使用所属领域中已知的方法制备。控制释放制剂的实例包括含有多重特异性抗体的固体疏水性聚合物的半渗透基质，其中所述基质呈成形制品形式，例如膜或微胶囊。持续释放基质的实例包括聚酯、L-谷氨酸与乙基-L-谷氨酸的共聚物、不可降解乙烯-乙酸乙烯酯、水凝胶、聚乳酸交酯、可降解乳酸-乙醇酸共聚物和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。可由适当使用添加剂、控制水分含量和产生特异性聚合物基质组合物来减少或预防持续释放调配物中所包含的多重特异性抗体的生物活性的可能损失和免疫原性的可能变化。
控制释放技术包括物理系统和化学系统两者。物理系统包括具有控制透膜比例的储集系统，如微囊封、巨囊封和膜系统；不具有控制透膜比例的储集系统，如中空纤维、超微孔三乙酸纤维素和多孔聚合衬底和发泡体；单体系统，包括物理性溶解于无孔、聚合或弹性基质(例如不可侵蚀、可侵蚀、环境药剂侵入和可降解)中和物理性分散于无孔、聚合或弹性基质中的物质(例如不可侵蚀、可侵蚀、环境药剂侵入和可降解)的系统；层压结构，包括化学性类似或不同于外部控制层的储集层；和其它物理方法，如渗透泵，或吸附于离子交换树脂上。
化学系统包含对聚合物基质的化学侵蚀(例如，异质或均质侵蚀)或聚合物基质的生物侵蚀(例如，异质或均质侵蚀)。用于控制释放系统类别的其它论述可见于阿吉斯F.昆多尼斯(Agis F.Kydonieus),控制释放技术：方法、理论和应用(Controlled ReleaseTechnologies:Methods,Theory and Applications),1980(CRC出版社公司)。
存在多种用于经口投予的控制释放药物调配物可用于调配多重特异性抗体。这些控制释放调配物包括渗透压控制的胃肠递送系统；流体动力压控制的胃肠递送系统；膜渗透性控制的胃肠递送系统(其包括由微孔膜渗透控制的胃肠递送装置)；抗胃液标靶肠的控制释放胃肠递送装置；凝胶扩散控制的胃肠递送系统；和由包括阳离子与阴离子药物的离子交换控制的胃肠递送系统。关于控制释放药物递送系统的其它信息可见于伊W.池恩(YieW.Chien),新颖药物递送系统(Novel Drug Delivery Systems),1992(马塞尔·德克尔公司)。
多重特异性抗体可使用任何适用于药物递送的可用方法和途径，包括活体内和活体外方法以及全身性和局部投予途径，向患者/受试者投予。常规和药学上可接受的投予途径包括鼻内、肌内、气管内、皮下、皮内、局部施用、静脉内、动脉内、经直肠、经鼻、经口和其它经肠和肠胃外投予途径。可取决于多重特异性抗体和/或所需作用对投予途径进行组合(如果需要)或调整。多重特异性抗体可以单剂量或多剂量形式投予。在一些实施例中，多重特异性抗体经口投予。在一些实施例中，多重特异性抗体经由吸入途径投予。在一些实施例中，多重特异性抗体经鼻内投予。在一些实施例中，多重特异性抗体局部投予。在一些实施例中，多重特异性抗体颅内投予。在一些实施例中，多重特异性抗体经静脉内投予。
在另一方面，本发明提供一种使用本文所述的多重特异性抗体治疗来癌症(肿瘤)的方法。所述方法涉及向患有癌症或肿瘤的受试者投予多重特异性抗体。
在一些实施例中，多重特异性抗体与癌症新抗原疫苗结合投予，或在投予癌症新抗原疫苗之后投予。新抗原疫苗和其产生描述于US2017/0202939中。
以下实例出于对本公开的方法的说明性但非限制性目的。本领域中通常遇到和对于所属领域的技术人员显而易见的多种条件和参数的其它合适修改和改编均在本公开的范围内。
实例
用于制造条件性活性抗体的实例1-15描述于WO 2017/078839中。
实例16：结合到CD3和Axl的多重特异性抗体
构建两种多重特异性抗体。一种多重特异性抗体使用与CD3(WT-CD3)的非条件性活性结合位点(scFv抗体)，其与Axl(WT-Axl)的非条件性活性结合位点(IgG抗体)配对，以提供蝶形配置WT-CD3-WT-Axl(图2和3A-3C)。类似地，二级多重特异性抗体使用与CD3(WT-CD3)的非条件性活性结合位点(scFv抗体)，其与Axl(CAB-Axl)的条件性活性结合位点(IgG抗体)配对，以提供蝶形配置WT-CD3-CAB-Axl(图2和3A-3C)。
使用ELISA测定，分别对两种多重特异性抗体在pH为6.0和pH为7.4下对CD3和Axl的亲和力进行测定(图3B-3C)。本申请的ELISA测定使用以下方案：
1.在ELISA测定前一天，在4℃下于ELISA涂布缓冲液中将96孔板用100μl的0.5μg/ml重组CD3或Axl涂布隔夜。
2.在ELISA测定缓冲液中稀释样品。
3.从涂布有抗原的板拂去缓冲液，在纸巾上吸干。
4.在室温下用200μl的ELISA测定缓冲液封闭板持续1小时。
5.将100μl的稀释样品添加到每一孔中。
6.将所述板在室温下培育持续1小时。
7.根据板布局在筛选缓冲液中制备二级抗体。
8.从所述板拂去缓冲液，在纸巾上吸干。
9.用ELISA洗涤缓冲液洗涤所述板总共3次。
10.将100μl的稀释对应二级抗体于ELISA测定缓冲液中添加到孔中：
-对于用重组CD3涂布的孔，添加抗人类HRP二级抗体。
-对于用Axl涂布的孔，添加重组CD3随后用抗His抗体和抗小鼠HRP二级抗体检测。
12.将所述板在室温下培育持续1小时。
13.从所述板拂去缓冲液，在纸巾上吸干。
14.用ELISA洗涤缓冲液洗涤所述板总共3次。
15.从板拂去缓冲液，在纸巾上吸干。
16.根据板布局添加50μl的3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)底物。
17.用50μl的1N HCl停止培育。
18.使用板读取器在OD450 nm下读取。
阴性对照组(CD3的野生型IgG抗体、Axl的野生型IgG抗体和同型控制的阴性对照组)在6.0和7.4的两种不同pH下未展示出其在对CD3的亲和力方面的显著差异(图3B)。类似地，阴性对照组在6.0和7.4的两种不同pH下未展示出其在对Axl的亲和力方面的显著差异(图3C)。
对于两种多重特异性抗体，WT-CD3-WT-Axl和WT-CD3-CAB-Axl在6.0和7.4的两种不同pH下均未展示出其在对CD3的亲和力方面的显著差异，因为其CD3结合位点不具有条件性活性(图3B)。另外，WT-CD3-WT-Axl在6.0与7.4的两个不同pH下未展示出其在对Axl的亲和力方面的显著差异，因为其Axl结合位点不具有条件性活性(图3C)。然而，WT-CD3-CAB-Axl展示出在pH为6.0下对Axl的亲和力相较于其在pH为7.4下对Axl的亲和力显著增加(图3C)，这是由于在这一多重特异性抗体中包含与Axl的条件性活性结合位点。
实例17：结合到CD3和Axl的多重特异性抗体
在这一实例中，构建结合到CD3和Axl的其它多重特异性抗体。如实例16中所描述制备多重特异性抗体并且将其以与实例16相同的方式命名：
Axl-WT×CD3-CAB1：用于Axl的非条件性活性结合位点与CD3的条件性活性结合位点配对；
Axl-WT×CD3-CAB3：用于Axl的非条件性活性结合位点与CD3的条件性活性结合位点配对；
Axl-WT×CD3-CAB4：用于Axl的非条件性活性结合位点与CD3的条件性活性结合位点配对；
Axl-WT×CD3-WT：用于Axl的非条件性活性结合位点与CD3的非条件性活性结合位点配对；
Axl-CAB×CD3-CAB1：用于Axl的条件性活性结合位点与CD3的条件性活性结合位点配对；
Axl-CAB×CD3-CAB3：用于Axl的非条件性活性结合位点与CD3的条件性活性结合位点配对；和
Axl-CAB×CD3-CAB4：用于Axl的非条件性活性结合位点与CD3的条件性活性结合位点配对。
在ELISA测定中，对前述多重特异性抗体在pH为6.0和7.4下当固定CD3时其对CD3的亲和力进行测定(图4A)。观察到当多重特异性抗体包括具有CD3的结合位点的条件性活性可变区时，其展示出在pH为6.0下对CD3的亲和力相较于在pH为7.4下对CD3的亲和力增大。两个阴性对照组为不结合到CD3的同型控制的抗体和不添加抗体的缓冲液。
针对一些多重特异性抗体当固定Axl时测定其与CD3的结合。包括CD3抗体的条件性活性可变区的多重特异性抗体在pH为6.0下对CD3的亲和力相较于其在pH为7.4下对CD3的亲和力增加(图4B)。
实例18：结合到CD3和Her2的多重特异性抗体
在这一实例中，构建结合到CD3和Her2的多重特异性抗体。如实例16中所描述制备多重特异性抗体并且将其以与实例16相同的方式命名：
Her2-WT×CD3-CAB1：用于Her2的非条件性活性结合位点与CD3的条件性活性结合位点配对；
Her2-WT×CD3-CAB3：用于Her2的非条件性活性结合位点与CD3的条件性活性结合位点配对；和
Her2-WT×CD3-CAB4：用于Her2的非条件性活性结合位点与CD3的条件性活性结合位点配对；
Her2-WT×CD3-WT：用于Her2的非条件性活性结合位点与CD3的非条件性活性结合位点配对。
在ELISA测定中，对上文多重特异性抗体在pH为6.0和7.4下当CD3固定时测定其对CD3的亲和力。两个阴性对照组为不结合到CD3的抗体(B12和NC)。观察到在多重特异性抗体包括CD3抗体的条件性活性可变区的情况下，所述抗体展示出在pH为6.0下对CD3的亲和力相较于其在pH为7.4下对CD3的亲和力增加(图5A)。
另外，针对多重特异性抗体在测定中当Her2固定时测定其与CD3的结合。包括CD3抗体的条件性活性可变区的多重特异性抗体展示出在pH为6.0下对CD3的亲和力相较于在pH为7.4值下对CD3的亲和力增加(图5B)。
实例19∶结合到CD3和B7-H3的多重特异性抗体
在这一实例中，构建结合到CD3和B7-H3的多重特异性抗体。如实例16中所描述制备多重特异性抗体并且将其以与实例16相同的方式命名：
B7-H3-WT×CD3-WT：用于B7-H3的非条件性活性结合位点与CD3的非条件性活性结合位点配对；
B7-H3-WT×CD3-CAB3：用于B7-H3的非条件性活性结合位点与CD3的条件性活性结合位点配对；和
B7-H3-WT×CD3-CAB4：用于B7-H3的非条件性活性结合位点与CD3的条件性活性结合位点配对；
B7-H3-CAB1×CD3-CAB4：用于B7-H3的条件性活性结合位点与CD3的条件性活性结合位点配对；和
B7-H3-CAB2×CD3-CAB4：用于B7-H3的条件性活性结合位点与CD3的条件性活性结合位点配对。
在ELISA测定中，对上文多重特异性抗体在pH为6.0和7.4下当CD3固定时测定其对CD3的亲和力。两个阴性对照组为不结合到CD3的同型控制的抗体和不添加抗体的缓冲液。观察到在多重特异性抗体包括CD3抗体的条件性活性可变区的情况下，其展示出在pH为6.0下对CD3的亲和力相较于其在pH为7.4下对CD3的亲和力增加(图6)。
实例20：对结合到CD3和Axl的多重特异性抗体的功能性测定
在这一实例中，测定两种多重特异性抗体刺激肿瘤反应性淋巴细胞，杰卡特细胞的功能(图7)。所述测定使用经工程化的杰卡特细胞，其具有表达由IL-2启动子或NFAT调控元件(RE)驱动的荧光素酶的构建体。在多重特异性抗体结合到肿瘤细胞上的Axl和杰卡特细胞上的CD3后，对杰卡特细胞中的荧光素酶构建体进行活化并且表达荧光素酶。随后测量荧光素酶的量。在这一实例中，肿瘤细胞由目标CHO细胞表示，其经工程化以表达Axl。荧光素酶的测量量指示在结合到经工程化的目标CHO细胞之后，多重特异性抗体对杰卡特细胞的刺激水平。
功能性测定(普洛麦格CD3测定)使用以下方案：
1.将目标细胞添加到孔(5000个细胞/100μL培养基，科斯塔(Costar)#3917 96孔白板)并且在37℃下培育隔夜。
2.从孔去除培养基。
3.添加25μL/孔的2XAb稀释液于pH 10％RPMI培养基(根据板布局的最终浓度)中。
4.添加25μL/孔的NFAT-Luc2P杰卡特细胞(1.2mL的冷冻细胞＝>6mL pH 10％RPMI)。
5.在37℃下培育持续5小时。
6.添加50μL/孔的Bio-Glo，室温下5分钟。
7.通过普洛麦格Bio-Glo程序测量发光。
在图8A中，所测定的多重特异性抗体为实例17的Axl-WT×CD3-WT。多重特异性抗体展示出在pH为6.0和pH为7.4两者下提供杰卡特细胞刺激的类似水平，这是因为随目标细胞量增加，在两个pH下的荧光素酶的测量量(相对荧光素酶单位，RLU)类似(CHO-Axl细胞的浓度展示在X轴上)。因此，在pH为6.0和7.4下多重特异性抗体不具有条件性活性。
在图8B中，多重特异性抗体Axl-WT×CD3-CAB1展示出在pH为6.0下的杰卡特细胞的刺激相对于在pH为7.4下的刺激量显著增加。因此，如在pH为6.0下由受刺激的杰卡特细胞产生的荧光素酶的量相对于在pH为7.4下的由受刺激的杰卡特细胞产生的荧光素酶的量显著增加所指示，这一多重特异性抗体在刺激杰卡特细胞方面具有条件性活性。
针对不同浓度的CHO-Axl细胞在pH为6.0和7.4下所测量的荧光素酶量展示于表4中。
表4.功能性测定中的荧光素酶表达
在这一实例中，阴性对照组为不表达Axl的CHO细胞(即非目标细胞)。当存在非目标细胞时，多重特异性抗体不活化杰卡特细胞(图8A-8B)，其指示对杰卡特细胞的活化视目标细胞的存在而定。
实例21：结合到CD3和EpCAM的多重特异性抗体
在这一实例中，构建结合到CD3和EpCAM的多重特异性抗体。如实例16中所描述制备多重特异性抗体并且将其以与实例16相同的方式命名：
EpCAM-WT×CD3-BF1：用于EpCAM的非条件性活性结合位点与CD3(BAP150-07-BF1)的非条件性活性结合位点配对；
EpCAM-WT×CD3-BF3：用于EpCAM的非条件性活性结合位点与CD3(BAP150-07-BF3)的条件性活性结合位点配对；
EpCAM-WT×CD3-BF5：用于EpCAM的非条件性活性结合位点与CD3(BAP150-07-BF5)的条件性活性结合位点配对；
EpCAM-WT×CD3-BF11：用于EpCAM的非条件性活性结合位点与CD3(BAP150-07-BF11)的条件性活性结合位点配对；
EpCAM-WT×CD3-BF36：用于EpCAM的非条件性活性结合位点与CD3(BAP150-07-BF36)的条件性活性结合位点配对；
EpCAM-WT×CD3-BF37：用于EpCAM的非条件性活性结合位点与CD3(BAP150-07-BF37)的条件性活性结合位点配对；
EpCAM-WT×CD3-BF38：用于EpCAM的非条件性活性结合位点与CD3(BAP150-07-BF38)的条件性活性结合位点配对；
EpCAM-WT×CD3-BF39：用于EpCAM的非条件性活性结合位点与CD3(BAP150-07-BF39)的条件性活性结合位点配对；
EpCAM-WT×CD3-BF40：用于EpCAM的非条件性活性结合位点与CD3(BAP150-07-BF40)的条件性活性结合位点配对；和
EpCAM-WT×CD3-BF41：用于EpCAM的非条件性活性结合位点与CD3(BAP150-07-BF41)的条件性活性结合位点配对。
每一多重特异性抗体的EpCAM-WT部分相同并且具有抗EpCAM重链可变区(SEQ IDNO:85)和包含抗EpCAM轻链可变区(SEQ ID NO:93)的完整轻链。全长轻链的C端连接到CD3的结合位点。在CD3的结合位点中，CD3-BF1(SEQ ID NO:26)为非条件性活性单链抗CD3抗体，而CD3-BF3(SEQ ID NO:28)、CD3-BF5(SEQ ID NO:30)、CD3-BF11(SEQ ID NO:36)、CD3-BF36(SEQ ID NO:61)、CD3-BF37(SEQ ID NO:62)、CD3-BF38(SEQ ID NO:63)、CD3-BF39(SEQID NO:64)、CD3-BF40(SEQ ID NO:65)和CD3-BF41(SEQ ID NO:66)为条件性活性单链抗CD3抗体。
在ELISA测定中，对前述多重特异性抗体在pH值为6.0至7.4下当固定CD3时其对CD3的亲和力进行测定(图9)。观察到当多重特异性抗体包括条件性活性抗CD3单链抗体时，其展示出在pH为6.0下对CD3的亲和力相较于在pH为7.4值下对CD3的亲和力增加。其中CD3的结合位点不具有条件性活性的阴性对照组(BAP150-07-BF1)具有对CD3的结合亲和力，其在pH为6.0至7.4的范围中不具有pH依赖性。
实例22：CD3和EpCAM的多重特异性抗体用于处理肿瘤
在由冠科生物技术(Crown Bioscience)(圣地亚哥，加利福尼亚州)产生的米歇诺(MiXeno)小鼠模型中，使用包含EpCAM的非条件性活性结合位点和CD3的条件性活性结合位点的多重特异性抗体(EpCAM×CAB-CD3)处理肿瘤异种移植小鼠模型。确切地说，将结肠癌细胞系HCT116细胞(EpCAM阳性)植入三重免疫缺陷小鼠中(其植入有人类末梢血液单核细胞)以在小鼠模型中诱发肿瘤。当肿瘤体积达到约150mm3时，将携载肿瘤的动物随机分为4个处理组。四个处理组为：用媒剂处理组作为阴性对照组(第1组)、非CAB-CD3基准抗体作为阳性对照组(第2组)、多重特异性抗体EpCAM×CAB-CD3(第3组)或同型匹配抗体作为阴性对照组(第4组)。以每两周2.5mg/kg的剂量投予抗体持续4周。非CAB-CD3基准抗体包含EpCAM的非条件性活性结合位点和CD3的非条件性活性结合位点。
多重特异性抗体EpCAM×CAB-CD3与阳性对照组非CAB-CD3基准抗体在异种移植小鼠模型中引起完全肿瘤消退方面一样有效，而两个阴性对照组未能引起肿瘤消退，这是因为肿瘤的尺寸在这些阴性对照组小鼠中持续增加。参见图10。
抗CD3抗体在周边循环系统中具有引起T细胞活化的副作用，其可使用中尺度发现(Meso Scale Discovery；MSD)测定由血清INF-γ量来测量相较于阳性对照组的非CAB-CD3基准抗体，多重特异性抗体EpCAM×CAB-CD3引起T细胞活化显著减少。参见图11。因此，由于具有条件性活性抗CD3抗体组分，多重特异性抗体EpCAM×CAB-CD3与阳性对照组的非CAB-CD3基准抗体相比，其副作用显著降低但治疗作用相当。
本文中提和的所有文献均以全文引用的方式并入本文中并且至少提供其特定依赖或论述为引用的公开内容。本申请人并不意图将任何所公开的实施例贡献于公众，并且在任何所公开的修饰或变化可能字面上不属于权利要求书的范围内的程度上，其在等同原则下视为其一部分。
然而，应了解，尽管已于先前描述中连同本发明的结构和功能的细节一起阐述本发明的许多特征和优势，但本公开仅为说明性的，并且可详细地作出改变，尤其关于本发明的原理内的部分的形状、尺寸和排列，直到通过表达所附权利要求书的术语的广泛一般含义所指示的最大程度。
序列表
<110> 美商拜奥亚特拉公司
<120> 多重特异性抗体构建体
<130> BIAT-1025
<160> 95
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 1
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 2
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 2
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Pro Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 3
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 3
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Pro Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 4
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 4
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Leu Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 5
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 5
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Ser Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 6
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 6
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Phe Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Thr Gly
100 105 110
<210> 7
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 7
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gln Gly
100 105 110
<210> 8
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 8
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Asp Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 9
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 9
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Glu Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 10
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 10
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Lys Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 11
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 12
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 12
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Lys Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 13
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 14
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 14
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 15
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Glu His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 16
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ser Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu His Phe Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 17
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 17
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Val Ser Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Gln Asp Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu His Phe Ser Pro Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 18
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 18
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly His
20 25 30
Thr Met Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Lys Pro Ser Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala His Gly His Tyr Glu Ser Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 19
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Ser Phe Trp Gly Ala
20 25 30
Thr Met Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Lys Pro Ser Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala His Gly His Tyr Glu Ser Tyr Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 20
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 21
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 21
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 22
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 22
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp His Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ile His Ser
20 25 30
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 23
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 23
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Asn Tyr Gly Met Asn
20 25 30
Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile
35 40 45
Asn Pro Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys Gly Arg
50 55 60
Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile
65 70 75 80
Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp
85 90 95
Asp Gly Tyr Phe Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 24
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 24
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Asn Tyr Gly Asp Asn
20 25 30
Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile
35 40 45
Asn Pro Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys Gly Arg
50 55 60
Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile
65 70 75 80
Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp
85 90 95
Asp Gly Tyr Phe Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 25
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 25
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Asn Tyr Gly Met Asn
20 25 30
Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile
35 40 45
Asn Pro Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys Gly Arg
50 55 60
Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile
65 70 75 80
Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp
85 90 95
Asp Gly Tyr Phe Tyr Asp Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 26
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 26
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 27
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 27
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 28
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 28
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 29
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Pro Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 30
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 30
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 31
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 31
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 32
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 33
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 34
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Tyr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 35
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Pro Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 36
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 36
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 37
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 38
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 38
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Pro Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 39
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 39
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Pro Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 40
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 40
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 41
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Pro Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 42
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 42
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Pro Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 43
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 43
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 44
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 44
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Pro Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 45
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 45
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Pro Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 46
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 46
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 47
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 47
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Pro Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 48
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 48
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 49
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 50
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 50
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Pro Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 51
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 51
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 52
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 52
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 53
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 53
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Pro Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 54
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 54
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Pro Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 55
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 55
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 56
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 56
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Pro Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 57
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 57
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Pro Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 58
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 58
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 59
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 59
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Pro Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 60
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 60
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Pro Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 61
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 61
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Ala Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 62
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 62
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Trp Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 63
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 63
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Tyr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 64
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 64
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ala Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 65
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> Synehtic sequence
<400> 65
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Pro Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 66
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 67
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 67
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Thr Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 68
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 68
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ala Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Ala Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 69
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 69
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Pro Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Ala Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 70
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 70
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Ala Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 71
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 71
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Thr Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
130 135 140
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Ala Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp
165 170 175
Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
180 185 190
Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
195 200 205
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 72
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 72
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
100 105 110
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
115 120 125
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
130 135 140
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
145 150 155 160
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
180 185 190
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
195 200 205
Arg Gly Glu Cys Ser Arg Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val
210 215 220
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
225 230 235 240
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val
245 250 255
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser
260 265 270
Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg
275 280 285
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
290 295 300
Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His
305 310 315 320
Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
325 330 335
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
340 345 350
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu
355 360 365
Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr
370 375 380
Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro
385 390 395 400
Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
405 410 415
Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
420 425 430
Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
435 440 445
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
450 455 460
Thr Val Leu Ser Arg
465
<210> 73
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 73
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
100 105 110
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
115 120 125
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
130 135 140
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
145 150 155 160
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
180 185 190
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
195 200 205
Arg Gly Glu Cys Ser Arg Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val
210 215 220
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
225 230 235 240
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val
245 250 255
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser
260 265 270
Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg
275 280 285
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
290 295 300
Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His
305 310 315 320
Ser Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
325 330 335
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
340 345 350
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu
355 360 365
Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr
370 375 380
Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro
385 390 395 400
Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
405 410 415
Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
420 425 430
Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
435 440 445
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
450 455 460
Thr Val Leu Ser Arg
465
<210> 74
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 74
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
100 105 110
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
115 120 125
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
130 135 140
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
145 150 155 160
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
180 185 190
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
195 200 205
Arg Gly Glu Cys Ser Arg Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val
210 215 220
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
225 230 235 240
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val
245 250 255
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser
260 265 270
Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg
275 280 285
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
290 295 300
Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His
305 310 315 320
Gly Asn Phe Pro Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
325 330 335
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
340 345 350
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu
355 360 365
Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr
370 375 380
Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro
385 390 395 400
Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
405 410 415
Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
420 425 430
Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
435 440 445
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
450 455 460
Thr Val Leu Ser Arg
465
<210> 75
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 75
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
100 105 110
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
115 120 125
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
130 135 140
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
145 150 155 160
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
180 185 190
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
195 200 205
Arg Gly Glu Cys Ser Arg Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val
210 215 220
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
225 230 235 240
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val
245 250 255
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser
260 265 270
Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg
275 280 285
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
290 295 300
Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His
305 310 315 320
Gly Asn Phe Gly Asn Ser Lys Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
325 330 335
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
340 345 350
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu
355 360 365
Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr
370 375 380
Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro
385 390 395 400
Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
405 410 415
Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
420 425 430
Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
435 440 445
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
450 455 460
Thr Val Leu Ser Arg
465
<210> 76
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 76
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
100 105 110
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
115 120 125
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
130 135 140
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
145 150 155 160
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
180 185 190
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
195 200 205
Arg Gly Glu Cys Ser Arg Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val
210 215 220
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
225 230 235 240
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val
245 250 255
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser
260 265 270
Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg
275 280 285
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
290 295 300
Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His
305 310 315 320
Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Gln Tyr Trp Gly Gln
325 330 335
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
340 345 350
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu
355 360 365
Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr
370 375 380
Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro
385 390 395 400
Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
405 410 415
Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
420 425 430
Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
435 440 445
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
450 455 460
Thr Val Leu Ser Arg
465
<210> 77
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 77
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
100 105 110
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
115 120 125
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
130 135 140
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
145 150 155 160
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
180 185 190
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
195 200 205
Arg Gly Glu Cys Ser Arg Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val
210 215 220
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
225 230 235 240
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val
245 250 255
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser
260 265 270
Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg
275 280 285
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
290 295 300
Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His
305 310 315 320
Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
325 330 335
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
340 345 350
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu
355 360 365
Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr
370 375 380
Gly Ala Val Thr Thr Lys Asn Tyr Asp Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro
385 390 395 400
Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
405 410 415
Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
420 425 430
Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
435 440 445
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
450 455 460
Thr Val Leu Ser Arg
465
<210> 78
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 78
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
100 105 110
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
115 120 125
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
130 135 140
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
145 150 155 160
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
180 185 190
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
195 200 205
Arg Gly Glu Cys Ser Arg Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val
210 215 220
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
225 230 235 240
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val
245 250 255
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser
260 265 270
Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg
275 280 285
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
290 295 300
Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His
305 310 315 320
Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
325 330 335
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
340 345 350
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu
355 360 365
Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr
370 375 380
Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro
385 390 395 400
Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
405 410 415
Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
420 425 430
Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
435 440 445
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
450 455 460
Thr Val Leu Ser Arg
465
<210> 79
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 79
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
100 105 110
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
115 120 125
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
130 135 140
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
145 150 155 160
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
180 185 190
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
195 200 205
Arg Gly Glu Cys Ser Arg Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val
210 215 220
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
225 230 235 240
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val
245 250 255
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser
260 265 270
Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg
275 280 285
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
290 295 300
Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His
305 310 315 320
Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
325 330 335
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
340 345 350
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu
355 360 365
Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr
370 375 380
Gly Ala Val Thr Tyr Ser Asn Tyr Asp Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro
385 390 395 400
Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
405 410 415
Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
420 425 430
Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
435 440 445
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
450 455 460
Thr Val Leu Ser Arg
465
<210> 80
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 80
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Arg Pro Ser Thr Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Asp Asn Trp Val Gly Phe Ala Asn Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 81
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 81
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Arg Pro Ser Thr Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Asp Asn Trp Val Gly Phe Ala Asn Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 82
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 82
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Arg Pro Ser Thr Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Asp Asn Trp Val Gly Phe Ala Asn Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 83
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 83
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Arg Pro Ser Thr Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Asp Asn Trp Val Gly Phe Ala Asn Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 84
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 84
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Arg Pro Ser Thr Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Asp Asn Trp Val Gly Phe Ala Asn Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 85
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 85
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Arg Pro Ser Thr Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Asp Asn Trp Val Gly Phe Ala Asn Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 86
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 86
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Arg Pro Ser Thr Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Asp Asn Trp Val Gly Phe Ala Asn Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 87
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 87
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Arg Pro Ser Thr Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Asp Asn Trp Val Gly Phe Ala Asn Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 88
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 88
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 89
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 89
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 90
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 90
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 91
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 91
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 92
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 92
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 93
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 93
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 94
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 94
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 95
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成序列
<400> 95
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Ala Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr His Thr Phe
85 90 95
Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：CD38抗体变体及其用途