阅读说明：本技术 用于改善肠屏障完整性的营养组合物、组合物的制备以及治疗方法 (Nutritional compositions for improving intestinal barrier integrity, methods of making compositions, and methods of treatment ) 是由 F·J·普利兹卡诺 C·T·克尼平 B·斯塔尔 于 2018-07-12 设计创作，主要内容包括：本发明涉及包含2’-岩藻糖基乳糖的组合物,其用于治疗病毒引起的肠屏障破坏。还描述了2’-岩藻糖基乳糖在用于制备组合物中的用途以及通过给予组合物的治疗方法。(The present invention relates to a composition comprising 2' -fucosyllactose for use in the treatment of virus-induced breakdown of the intestinal barrier. Also described is the use of 2' -fucosyllactose in the preparation of the composition and methods of treatment by administering the composition.)

具体实施方式

实施例1

将新生大鼠分为5组(每组24只动物)：参考(REF)组、轮状病毒感染(RV)组和3个分别补充有以下物质的轮状病毒感染组：a)scGOS和lcFOS的混合物(RV+GOS/FOS组)；b)2’-FL(RV+2’-FL组)；和c)scGOS/lcFOS和2’-FL(RV+GOS/FOS+2’-FL组)。

从生命的第二天至第十六天(对应严格的哺乳期)，每天一次给哺乳大鼠口服给予所有产品的相同归一化体积/体重(4.5μL/g/天)。RV+GOS/FOS组补充有0.8g scGOS/lcFOS/100g体重。RV+2’-FL组补充有0.2g 2’-FL/100g体重。RV+GOS/FOS+2’-FL组以与单独给予时相同的剂量接受两种产品，并保持给予体积(4.5μL/g/天)。给予REF组和RV组相同体积的水。

如前所述(Pérez-Cano等人，Pediatr Res 2007；62:658-63)，获得了RV(猿猴SA-11)，并在除REF组(其在相同的条件下接受了相同体积的磷酸盐缓冲溶液(PBS))以外的所有实验组中，在生命的第5天接种(4×10⁸组织培养感染剂量50[TCID50])/大鼠)。

在整个研究中每天记录体重以评估体重增加。每组动物的一半(n＝12)在第8天被处死，以分析与腹泻高峰期相关的变量，另一半(每组n＝12)在第16天被处死，以分析腹泻得到解决后补充剂的作用。此外，测量鼻-肛门和尾巴的长度以确定体/尾比、以体重/身长²(g/cm²)计算的体重指数(BMI)和以(体重^0.33/身长)×1000(g^0.33/cm)计算的Lee指数。

样品收集与处理

在第8天和第16天，将每窝幼崽的一半用氯胺酮(90mg/kg)(Merial LaboratoriesSA,Barcelona,Spain)和甲苯噻嗪(10mg/kg)(Bayer A.G.,Leverkusen,Germany)进行肌内麻醉，放血并获得它们的肠子。纵向打开肠子，切成5毫米的块，并在摇床中与2mL PBS一起孵育(10分钟，37℃)以获得肠道洗液(GW)。离心后，将上清液储存在-20℃和-80℃下，直到进行α-1抗胰蛋白酶(A1AT)分析为止。

按照制造商的说明，用大鼠SERPINA1/α1抗胰蛋白酶ELISA试剂盒(LifeSpanBiosciences Inc.,Seattle,WA,USA)进行肠洗液中A1AT(其作为肠通透性的标记物)的定量。标准浓度范围为100至1.563ng/mL。检测灵敏度为1.56ng/mL。

统计学分析

使用用于社会科学的统计学软件包(SPSS v22.0)(IBM,Chicago,IL,USA)进行统计学分析。分别通过Levene检验和Shapiro-Wilk检验对数据进行了方差的同质性和正态分布检验。当数据同质且行为正常时，进行常规的单向ANOVA检验，然后进行事后Bonferroni。否则，先进行非参数Kruskal-Wallis检验，然后进行事后Mann-Whitney U(MWU)检验。最后，采用卡方检验比较腹泻发生的频率。当p<0.05时，建立显著差异。

结果

生长

如体重、体/尾比、BMI和Lee指数的结果所显示的(表1)，无论是在腹泻高峰期(第8天)还是在研究结束时(第16天)，RV感染均未产生生长的任何显著变化。在研究结束时(第16天，p<0.05)，补充有scGOS/lcFOS的组具有略高的体重，尽管这些生长变化均未改变BMI，但在体/尾长度比和Lee指数中观察到一些差异。在一些时间点，与REF或RV相比，所有补充剂均增加了体/尾长度比。此外，与REF相比，Lee指数只在腹泻高峰期时下降。

表1.与生长相关的变量

结果表示为平均值±S.E.M.(n＝12)；与REF相比，*p<0.05(通过MWU检验)；与RV相比，#p<0.05(通过MWU检验)。

肠屏障功能

α-1抗胰蛋白酶(A1AT)属于丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)超家族，并被称为蛋白酶抑制剂。它对消化酶的降解具有抗性，是肠道中血液蛋白存在的内源性标记物。

通过ELISA确定肠洗液中的A1AT水平(参见图)以评估肠道通透性的变化。在炎症应答期间，血清A1AT的水平显著升高，并且由于肠上皮屏障的通透性增加，可以通过肠上皮层转运到肠腔中(Yang等人，Sci Rep 2015；5：15004)。RV组在肠道洗液中显示出较高水平的A1AT，但与REF组在统计学上没有差异。然而，与RV和REF相比，补充2’-FL和GOS/FOS+2’-FL降低了肠道洗液中A1AT的浓度(p<0.05)，这表明它们不仅能够治疗由RV引起的肠通透性破坏，而且它们也促进了肠屏障功能的增强，这由A1AT蛋白的外渗减少及其向肠腔的运输所证明。在腹泻期的第三天(其与在研究动物中所观察到的腹泻严重程度的高峰期相对应)研究了肠屏障破坏的治疗。

实施例2：用于治疗病毒引起的肠屏障破坏的婴儿配方物

根据本发明的婴儿配方物，每100ml(13.9干重)包含：

1.4g蛋白质(乳清和酪蛋白)

7.3g可消化的碳水化合物(包括乳糖)

3.6g脂肪(植物脂肪、鱼油)

0.6g非消化性低聚糖，其中60mg 2’-岩藻糖基乳糖和480mgβ-低聚半乳糖，以及60mg低聚果糖

根据指南，还包含胆碱、肌醇、牛磺酸、矿物质、微量元素和维生素。