一种西红花组培芽增殖成苗的培养基及培养方法
阅读说明：本技术 一种西红花组培芽增殖成苗的培养基及培养方法 (Culture medium and culture method for tissue culture bud proliferation seedling of saffron ) 是由 查萍 郑娜娜 巫扬文 于 2021-07-09 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种西红花组培芽增殖成苗的培养基及培养方法,所述培养基为：MS+琼脂7g/L+蔗糖30g/L+萘乙酸0.2-1.0mg/L+激动素3.0-6.0mg/L+水杨酸0-5.0mg/L+水解酪蛋白400mg/L。通过采用本发明的培养基及方法进行西红花芽增殖培养,可以提高芽的增殖系数和成活率,培育出带有绿叶、外层有膜质鞘状叶包裹的苗,为后期微球茎的诱导提供优质苗,从而提高微球茎的产量。(The invention discloses a culture medium and a culture method for tissue culture bud multiplication seedling formation of saffron, wherein the culture medium comprises the following components: MS + agar 7g/L + sucrose 30g/L + naphthylacetic acid 0.2-1.0mg/L + kinetin 3.0-6.0mg/L + salicylic acid 0-5.0mg/L + hydrolyzed casein 400 mg/L. By adopting the culture medium and the method for multiplication culture of saffron buds, the multiplication coefficient and the survival rate of the buds can be improved, seedlings with green leaves and coated by membranous sheathed leaves on the outer layer are cultured, high-quality seedlings are provided for later stage induction of the microsphere stems, and the yield of the microsphere stems is improved.)
技术领域
本发明属于植物组织培养
技术领域
，具体涉及一种西红花组培芽增殖成苗的培养基及培养方法。背景技术
植物组织培养又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。植物组织培养在离体繁殖诱变、种质资源保存、无毒苗生产、快速繁殖、周年生产等方面具有十分突出的作用。
西红花(Crocus sativus L.)又称藏红花、番红花，是一种鸢尾科番红花属的多年生花卉。球茎扁圆球形，外有黄褐色的膜质包被，叶丛基部包有多片膜质的鞘状叶，花呈淡蓝色、红紫色或白色，有香味，花柱橙红色。西红花在染料、香料、功能性食品及保健品开发、妇科用药及抗癌抗肿瘤制药方面具有广泛应用。但西红花种质资源严重缺乏，价格昂贵，一直被誉为“红色黄金”。由于西红花染色体是三倍体，花粉败育高，开花后不能结实，要靠球茎繁殖，而在栽培过程中球茎会逐渐退化。随着组织培养技术在药用植物上的广泛应用，通过植物组培技术能够在较短时间内获得大量的微球茎，解决西红花资源短缺、品质下降的问题。
国内外30多年以来对西红花组培快繁技术进行研究，利用不同外植体诱导出微球茎或完整植株，但因西红花愈伤组织出芽率低、微球茎诱导率不高，培养周期长；西红花组培芽培养过程中易出现畸形和玻璃化，影响芽的正常生长和增殖，限制了微球茎的大量产出，现今也仍未有大规模产业化的报道。所以，将西红花组培芽进行增殖成苗培养，通过提高芽的增殖系数和品质，显著提高微球茎的诱导率，最终提高微球茎的产量。因此急需采取一些措施来解决西红花芽分化率低和诱导率不高的问题，提高西红花组培芽的数量和品质，最终提高微球茎的产量。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是提供一种西红花组培芽增殖成苗的培养基及培养方法，通过采用本发明的培养基及方法进行西红花芽增殖培养，可以提高芽的增殖系数和成活率，培育出带有绿叶、外层有膜质鞘状叶包裹的苗，为后期微球茎的诱导提供优质苗，从而提高微球茎的产量。
本发明采取的具体技术方案是：
一种西红花组培芽增殖成苗的培养基，所述培养基为：MS+琼脂7g/L+蔗糖30g/L+萘乙酸0.2-1.0mg/L+激动素3.0-6.0mg/L+水杨酸0-5.0mg/L+水解酪蛋白400mg/L。
优选地，所述培养基pH为5.6-6.2。
优选地，所述培养基为：MS+琼脂7g/L+蔗糖30g/L+萘乙酸0.5mg/L+激动素4mg/L+水杨酸0.5mg/L+水解酪蛋白400mg/L。
相应地，本发明还提供了一种西红花组培芽增殖成苗的培养方法，包括如下步骤：
(1)配制西红花芽增殖成苗培养基：以MS为基础培养基，补充琼脂7g/L，蔗糖30g/L，萘乙酸0.2-1.0mg/L，激动素3.0-6.0mg/L，水杨酸0-5.0mg/L，水解酪蛋白400mg/L，用酸碱将pH调至5.6-6.2；
(2)增殖培养：挑选生长健壮、不玻璃化、不畸形的西红花组培芽，切除基部褐化部分，接种至所述的增殖成苗培养基中进行培养。
优选地，增殖培养条件为：温度18±1℃-24±1℃，光强20-60μmol·m-2·s-1，每天光照10h。
优选地，增殖培养时间为50-60d。
优选地，配制西红花芽增殖成苗培养基的方法为：以MS为基础培养基，补充琼脂7g/L，蔗糖30g/L，萘乙酸0.5mg/L，激动素4mg/L，水杨酸0.5mg/L，水解酪蛋白400mg/L，用酸碱将pH调至5.6-6.2。
本发明的西红花组培芽增殖成苗培养基以MS为基础培养基，其无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。
水杨酸(SA)是植物体内普遍存在的一种酚酸类化合物，对植物代谢具有重要调控功能，在植物防卫反应中是关键信号分子，被认为是一种新的植物激素。已证实外源施用水杨酸具有延缓离体叶片衰老，影响根系对离子的吸收，促进新梢侧芽萌发等生理、生化作用；还有学者认为水杨酸能够改善光合机构的性能，修复变形的叶绿体和基粒片层结构，提高植物的光合能力。
萘乙酸(1-Naphthaleneacetic acid)，简称NAA，是一种有机化合物，是一种易溶于有机溶剂的无色固体，是一种植物激素生长素，常用于商用的发根粉或发根剂中。
激动素，简称6-BA，白色结晶粉末，难溶于水，微溶于乙醇，在酸、碱中稳定。6-BA是第一个人工合成的细胞分裂素，属广谱性植物生长调节剂，可促进植物细胞生长，抑制植物叶绿素的降解，提高氨基酸的含量，延缓叶片衰老等。
本发明的有益效果是：本发明通过对培养基中不同组分合理的选取、科学的配比，能够以西红花组培芽作为外植体，各组分协同增效，成功诱导成苗，且具有较高的诱导率和增殖倍数。解决了现有西红花芽分化率低和诱导率不高的问题，提高西红花组培芽的数量和品质，最终提高微球茎的产量。
附图说明
图1显示为实施例1-10西红花芽增殖成苗培养结果；
图2显示为对比例1-5西红花芽增殖成苗培养结果。
具体实施方式
下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例提供了一种西红花组培芽增殖成苗的培养方法，包括如下步骤：
(1)配制西红花芽增殖成苗培养基：以MS为基础培养基，补充琼脂7g/L，蔗糖30g/L，萘乙酸0.2-1.0mg/L，激动素3.0-6.0mg/L，水杨酸0-5.0mg/L，水解酪蛋白400mg/L，用酸碱将pH调至5.8；
(2)增殖培养：挑选生长健壮、不玻璃化、不畸形的西红花组培芽，切除基部褐化部分，接种至所述的增殖成苗培养基中进行培养，培养条件具体为：温度18±1℃-24±1℃，光强0-60μmol·m-2·s-1，每天光照10h或黑暗处理。
为了有助于更清楚的理解本发明，现结合具体实施例详细介绍如下：
如未明确指出，实施例中所用到的方法为常规方法，所用到的试剂购自于市场。
实施例1
(1)配制培养基
每升西红花组培芽增殖成苗培养基由以下成分组成：MS+琼脂7g+蔗糖30g+萘乙酸0.2mg+激动素6.0mg+水解酪蛋白400mg/L，pH＝5.8。
(2)选取生长健壮的西红花组培芽，接种至芽增殖成苗的培养基中，在18±1℃、光强48μmol·m-2·s-1，分别光照10h，培养60d。
实施例2
(1)配制培养基
每升西红花组培芽增殖成苗培养基由以下成分组成：MS+琼脂7g+蔗糖30g+萘乙酸0.5mg+激动素4.0mg+水解酪蛋白400mg/L，pH＝5.8。
(2)选取生长健壮的西红花组培芽，接种至芽增殖成苗的培养基中，在18±1℃、光强48μmol·m-2·s-1，分别光照10h，培养60d。
实施例3
(1)配制培养基
每升西红花组培芽增殖成苗培养基由以下成分组成：MS+琼脂7g+蔗糖30g+萘乙酸0.5mg+激动素3.0mg+水解酪蛋白400mg/L，pH＝5.8。
(2)选取生长健壮的西红花组培芽，接种至芽增殖成苗的培养基中，在18±1℃、光强48μmol·m-2·s-1，分别光照10h，培养60d。
实施例4
(1)配制培养基
每升西红花组培芽增殖成苗培养基由以下成分组成：MS+琼脂7g+蔗糖30g+萘乙酸0.5mg+激动素4.0mg+水解酪蛋白400mg/L，pH＝5.8。
(2)选取生长健壮的西红花组培芽，接种至芽增殖成苗的培养基中，在24±1℃、光强35μmol·m-2·s-1，分别光照10h，培养60d。
实施例5
(1)配制培养基
每升西红花组培芽增殖成苗培养基由以下成分组成：MS+琼脂7g+蔗糖30g+萘乙酸0.5mg+激动素4.0mg+水解酪蛋白400mg/L，pH＝5.8。
(2)选取生长健壮的西红花组培芽，接种至芽增殖成苗的培养基中，在18±1℃、暗处理，培养60d。
实施例6
(1)配制培养基
每升西红花组培芽增殖成苗培养基由以下成分组成：MS+琼脂7g+蔗糖30g+萘乙酸0.5mg+激动素4.0mg+水解酪蛋白400mg/L，pH＝5.8。
(2)选取生长健壮的西红花组培芽，接种至芽增殖成苗的培养基中，在18±1℃、35μmol·m-2·s-1，分别光照10h，培养60d。
实施例7
(1)配制培养基
每升西红花组培芽增殖成苗培养基由以下成分组成：MS+琼脂7g+蔗糖30g+萘乙酸0.5mg+激动素4.0mg+水杨酸0.5mg+水解酪蛋白400mg/L，pH＝5.8。
(2)选取生长健壮的西红花组培芽，接种至芽增殖成苗的培养基中，在18±1℃、48μmol·m-2·s-1，分别光照10h，培养60d。
实施例8
(1)配制培养基
每升西红花组培芽增殖成苗培养基由以下成分组成：MS+琼脂7g+蔗糖30g+萘乙酸0.5mg+激动素4.0mg+水杨酸1.0mg+水解酪蛋白400mg/L，pH＝5.8。
(2)选取生长健壮的西红花组培芽，接种至芽增殖成苗的培养基中，在18±1℃、48μmol·m-2·s-1，分别光照10h，培养60d。
实施例9
(1)配制培养基
每升西红花组培芽增殖成苗培养基由以下成分组成：MS+琼脂7g+蔗糖30g+萘乙酸0.5mg+激动素4.0mg+水杨酸2.0mg+水解酪蛋白400mg/L，pH＝5.8。
(2)选取生长健壮的西红花组培芽，接种至芽增殖成苗的培养基中，在18±1℃、48μmol·m-2·s-1，分别光照10h，培养60d。
实施例10
(1)配制培养基
每升西红花组培芽增殖成苗培养基由以下成分组成：MS+琼脂7g+蔗糖30g+萘乙酸0.5mg+激动素4.0mg+水杨酸5.0mg+水解酪蛋白400mg/L，pH＝5.8。
(2)选取生长健壮的西红花组培芽，接种至芽增殖成苗的培养基中，在18±1℃、48μmol·m-2·s-1，分别光照10h，培养60d。
对比例1
对比例1是在实施例1基础上的改变，实施例1中提到的内容，在本实施例中不再详述。
对比例1与实施例1的不同之处在于，对比例1中的培养基为：MS+琼脂7g+蔗糖30g。其余步骤与实施例1相同。
对比例2
对比例2是在实施例1基础上的改变，实施例1中提到的内容，在本实施例中不再详述。
对比例2与实施例1的不同之处在于，对比例2中的培养基为：MS+琼脂7g+蔗糖30g+萘乙酸0.2mg。其余步骤与实施例1相同。
对比例3
对比例3是在实施例1基础上的改变，实施例1中提到的内容，在本实施例中不再详述。
对比例3与实施例1的不同之处在于，对比例3中的培养基为：MS+琼脂7g+蔗糖30g+激动素6.0mg。其余步骤与实施例1相同。
对比例4
对比例4是在实施例1基础上的改变，实施例1中提到的内容，在本实施例中不再详述。
对比例4与实施例1的不同之处在于，对比例4中的培养基为：MS+琼脂7g+蔗糖30g+萘乙酸2.0mg+激动素1.0mg。其余步骤与实施例1相同。
对比例5
对比例5是在实施例8基础上的改变，实施例8中提到的内容，在本实施例中不再详述。
对比例5与实施例8的不同之处在于，对比例5中的培养基为：MS+琼脂7g+蔗糖30g+萘乙酸0.5mg+激动素4.0mg+水杨酸10.0mg。其余步骤与实施例8相同。
实施例1-10及对比例1-5的西红花组培芽增殖培养芽成活率及芽增殖倍数结果如下表所示：
发明人，通过科学、合理的筛选，经过大量实验的验证，确定了本发明中培养基的组分和配比，由上表可知，本发明所提供的培养基及培养方法能够有效的诱导成苗，具有较高的诱导率，且芽增殖倍数高。具体为水杨酸浓度在0.5-5.0mg/L能够促进西红花组培芽增殖成苗，提高芽的增殖系数和成活率，培育出带有绿叶、外层有膜质鞘状叶包裹的苗；在温度18±1℃下培养，能够促进西红花组培芽冒绿；培养基中添加萘乙酸0.2-1.0mg+激动素2.0-6.0mg，有利于芽的生长和增殖；光照强度在35-60μmol·m-2·s-1下，有利于西红花芽的生长。
尽管已经对上述各实施例进行了描述，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改，所以以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利保护范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围之内。
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