阅读说明：本技术 人羊膜上皮细胞在制备预防或治疗老年衰弱症药物中的用途 (Application of human amniotic epithelial cells in preparation of medicine for preventing or treating senile asthenia ) 是由 姬广超 王晓明 刘倩 于 2020-08-31 设计创作，主要内容包括：本发明公开了人羊膜上皮细胞在制备预防或治疗老年衰弱症药物中的用途,属于生物技术领域。老年衰弱症包括老年衰弱症或老年衰弱症前期,使用有效剂量的人羊膜上皮细胞或其细胞制剂单独或者与其他药物联合使用进行预防或治疗老年衰弱症,人羊膜上皮细胞为未经任何处理收集的细胞、部分纯化的细胞或者纯化后经人工培养增殖的细胞,单次有效剂量为1×10<Sup>6</Sup>-1×10<Sup>10</Sup>个细胞。本发明使用的人羊膜上皮细胞分离方法简便、无伦理学问题和无致瘤性,且具有多向分化和免疫调节能力,用于预防和治疗老年衰弱症具有较好的安全性和有效性,改善老年衰弱症人群的生活状态的同时,提高老年衰弱症人群的生活质量。(The invention discloses an application of human amniotic epithelial cells in preparation of a medicine for preventing or treating senile asthenia, and belongs to the technical field of biology. The senile asthenia disease comprises senile asthenia disease or early stage senile asthenia disease, and can be used for preventing or treating senile asthenia disease by using effective dose of human amniotic epithelial cells or cell preparation thereof alone or in combination with other medicines, wherein the human amniotic epithelial cells are cells collected without any treatment, partially purified cells or cells artificially cultured and proliferated after purification, and the single effective dose is 1 × 10 6 ‑1×10 10 And (4) cells. The method for separating the human amniotic epithelial cells used by the invention is simple and convenient, has no ethical problems and no tumorigenicity, andhas multidirectional differentiation and immunoregulation capabilities, has good safety and effectiveness when being used for preventing and treating senile asthenia, and improves the life state of senile asthenia people and the life quality of senile asthenia people.)

人羊膜上皮细胞在制备预防或治疗老年衰弱症药物中的用途

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及人羊膜上皮细胞在制备预防或治疗老年衰弱症药物中的用途。

背景技术

一般认为衰弱症是一种常见的老年综合征，主要表现为机体的脆弱性增加、维持稳态的能力下降、发病和病死风险增加等，其核心特点是多个生理系统的储备功能下降。衰弱症不仅表现为躯体功能障碍，也可以是心理障碍，与失能、疾(共)病相关，但不等同于失能、疾病，老年衰弱症患者可能不存在失能或共病，仅表现为疲劳、消瘦、沮丧等，其致残率、病死率均明显高于非衰弱症老年人。

慢性炎症和免疫功能失调在衰弱症的发病机制起着重要作用，免疫系统的老化以慢性低水平的系统性炎症为特征，与老化相关的炎症状态被称为“炎性衰老”，以炎症细胞因子升高为标志，研究发现炎症细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)及肿瘤坏死因子(TNF)-α升高与老人患病率和死亡率增加相关，衰弱症老人体内的炎症反应标志物升高。基于衰弱的免疫学说，Walston等通过改变小鼠的基因来模拟人体衰弱的病理生理变化，提出IL-10基因敲除的纯合子(IL-10^tm/tm)可以作为衰弱的模型，IL-10^tm/tm小鼠不产生抗炎因子IL-10，导致机体炎症水平升高。具体来说，IL-10^tm/tm小鼠比正常野生型小鼠的炎性因子(IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和干扰素(IFN)-γ)的水平升高，并较早地出现肌力下降、心血管功能异常、血管硬化、内皮功能失调，导致其全因死亡率升高，上述现象均与人类的衰弱表现类似，表现出多器官功能异常。

人羊膜上皮细胞(Human Amniotic Epithelial Cells)具有表达多种胚胎干细胞标记物的特点和具有向三胚层分化的潜能，还表现出独特的免疫豁免和免疫调节功能，其在免疫相关疾病的治疗方面具有潜在的应用价值。而且，人羊膜上皮细胞的分离方法简便、无伦理学问题和无致瘤性，以及具有多向分化和免疫调节能力，也可广泛用于细胞治疗、组织再生等领域，目前未见有关将其用于预防或治疗老年衰弱症的应用报道。

发明内容

本发明的第一目的是，提供人羊膜上皮细胞在制备预防或治疗老年衰弱症药物中的用途。

本发明的第二目的是，提供一种用于预防或治疗老年衰弱症的药物组合物。

为了实现上述第一目的，本发明采用的技术方案是：

人羊膜上皮细胞或其细胞制剂在制备预防或治疗老年衰弱症药物中的用途。

根据本发明所述用途的一些实施方案，使用有效剂量的人羊膜上皮细胞或其细胞制剂单独或者与其他药物联合使用进行预防或治疗老年衰弱症。

进一步，所述人羊膜上皮细胞的单次有效剂量为1×10⁶-1×10¹⁰个细胞。

根据本发明所述用途的一些实施方案，所述老年衰弱症包括老年衰弱症或老年衰弱症前期。

根据本发明所述用途的一些实施方案，所述人羊膜上皮细胞的合适状态为未经任何处理收集的细胞、部分纯化的细胞或者纯化后经人工培养增殖的细胞。需要说明的是，本发明的人羊膜上皮细胞来源于合法途径，且细胞供体无传染病以及其他可能对细胞使用造成风险的情况。

进一步，所述人羊膜上皮细胞的细胞活率为50％-100％，可以直接使用或冻存后复苏使用。

根据本发明所述用途的一些实施方案，可以采用任意适合的方法将所述人羊膜上皮细胞给予患者，包括但不限于静脉注射。

根据本发明所述用途的一些实施方案，所述人羊膜上皮细胞的制备方法包括：

(1)从人羊膜直接分离人羊膜上皮细胞，和/或

(2)人羊膜冻存后经纯化或培养处理分离人羊膜上皮细胞，和/或

(3)以上两种方式获得的人羊膜上皮细胞经人工培养增殖的细胞。

为了实现上述第二目的，本发明采用的技术方案是：

用于预防或治疗老年衰弱症的药物组合物，以人羊膜上皮细胞为活性成分，且单次有效剂量为1×10⁶-1×10¹⁰个细胞。

根据本发明所述药物组合物的一些实施方案，所述人羊膜上皮细胞的合适状态为未经任何处理收集的细胞、部分纯化的细胞或者纯化后经人工培养增殖的细胞。

进一步，还包括辅助性液体，所述辅助性液体包括但不限于人血白蛋白和生理盐水。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明使用的人羊膜上皮细胞分离方法简便、无伦理学问题和无致瘤性，且具有多向分化和免疫调节能力，将其用于预防和治疗老年衰弱症具有较好的安全性和有效性，改善老年衰弱症人群的生活状态的同时，提高老年衰弱症人群的生活质量。

附图说明

图1为置于培养皿中的羊膜。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

人羊膜是包裹羊水的那层透明薄膜，由上皮细胞层、基底膜和无血管基质组成，一张成熟的人羊膜面积可达2平方米，聚集约3亿个羊膜细胞，作为胚胎的保护层，不仅为胎儿发育提供营养，也是一道阻隔母体与胎儿两个异体组织互不排斥的奇妙屏障。人羊膜上皮细胞(HAEpiC)提取于人羊膜组织，其可表达多种胚胎干细胞标记物，具有向三胚层分化的潜能，还表现出独特的免疫豁免和免疫调节功能，且分离方法简便、无伦理学问题和无致瘤性。

以下实施例中使用的人羊膜上皮细胞来源于合法途径，且细胞供体无传染病以及其他可能对细胞使用造成风险的情况。

实施例1

本实施例中使用的人羊膜上皮细胞为人羊膜来源分离培养的P3代细胞，选取20只(雌雄各10只)8-10月龄体重相近、经观察无临床症状的健康小鼠，平均分为两组，实验组和对照组，每组小鼠各10只(雌鼠5只，雄鼠5只)，称量体重并记录。实验组给予治疗剂(成分：含1×10⁶人羊膜上皮细胞的0.5mL生理盐水)，对照组给予安慰剂(成分：0.5mL生理盐水)，尾静脉注射给药。2个月后进行临床症状观察(隔笼观察，观察内容包括是否死亡、濒死、活动状况、外观及被毛、有无外伤、粪便情况等)，并称量体重。然后解剖小鼠，取主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、睾丸(雄性)、卵巢(雌性))进行石蜡切片制作，观察是否有病理变化。

实验结果：2个月后，20只小鼠临床症状观察无异常，体重差异不显著(P>0.05)，主要脏器病理观察无异常，初步证明人羊膜上皮细胞的安全性。

表1：两月后体重单因素方差分析

两月后体重	平方和	自由度	均方	F	显著性
						组间	0.050	1	0.050	0.007	0.936
组内	134.500	18	7.472	-	-
						总计	134.550	19	-	-	-

实施例2

本实施例中使用的人羊膜上皮细胞为人羊膜来源分离培养的P3代细胞，购买饲养在SPF(Specific Pathogen Free，无特定病原体)条件下的8周龄IL-10缺陷小鼠40只(雌鼠20只，雄鼠20只)，平均分为两组，实验组和对照组，每组小鼠各20只(雌鼠10只，雄鼠10只)。实验前每只小鼠颌下静脉采血，使用MSD超敏电化学发光法测定血清中炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α和IFN-γ的水平，然后实验组给予治疗剂(成分：含1×10⁶人羊膜上皮细胞的0.5mL生理盐水)，对照组给予安慰剂(成分：0.5mL生理盐水)，尾静脉注射给药。8周后每只小鼠采血测定血清中炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α和IFN-γ的水平。

实验结果：使用SPSS20进行统计分析如表1和表2所示。8周后，实验组的血清中炎症因子IL-6(0.9885pg/mL)、IL-1β(10.39pg/mL)、TNF-α(3.814pg/mL)和IFN-γ(4.472pg/mL)的水平低于对照组IL-6(1.2195pg/mL，P<0.01)、IL-1β(14.614pg/mL，P<0.01)、TNF-α(5.547pg/mL，P<0.01)和IFN-γ(5.1725pg/mL，P>0.05)，除了IFN-γ差异不显著外，其他炎症因子水平差异极显著(P<0.01)，表明人羊膜上皮细胞能显著改善衰弱模型动物的炎症水平，具有治疗人类老年衰弱症的巨大潜力。

表2：8周后细胞因子水平均值对比

表3：8周后细胞因子水平单因素方差分析

上述对实施例的描述是为了便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用本发明。熟悉本领域技术人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中，而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例。本领域技术人员根据本发明的原理，不脱离本发明的范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。