阅读说明：本技术 L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的纯化方法 (Purification method of L-alanine-2-ethyl butyl ester hydrochloride ) 是由 李德勇 *** 董国润 汪有斌 张丽 于 2020-07-30 设计创作，主要内容包括：一种L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的纯化方法,属于制药领域。纯化方法包括：将L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品与溶剂形成的溶解液重结晶,获得L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品。其中,溶剂包括乙醇、乙酸乙酯、甲苯、甲基叔丁醚和二氯甲烷中的至少一种。上述实现过程中,通过特定的溶剂的选择结合重结晶的方式,有效提高L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品的相对纯度及手性纯度,使得其相对纯度及手性纯度均能够大于99.5％。(A purification method of L-alanine-2-ethyl butyl ester hydrochloride belongs to the field of pharmacy. The purification method comprises the following steps: and recrystallizing the crude product of the L-alanine-2-ethyl butyl ester hydrochloride and a dissolved solution formed by the solvent to obtain a finished product of the L-alanine-2-ethyl butyl ester hydrochloride. Wherein the solvent comprises at least one of ethanol, ethyl acetate, toluene, methyl tertiary butyl ether and dichloromethane. In the implementation process, the relative purity and the chiral purity of the finished product of the L-alanine-2-ethylbutyl ester hydrochloride are effectively improved by combining the selection of a specific solvent with a recrystallization mode, so that the relative purity and the chiral purity can be more than 99.5%.)

L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的纯化方法

技术领域

本申请涉及制药领域，具体而言，涉及一种L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的纯化方法。

背景技术

瑞德西韦是吉利德科学公司研发的一种小分子广谱抗病毒药物。

L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐作为瑞德西韦中间体，其手性纯度及相对纯度对于最后制得的瑞德西韦的疗效具有较大影响，现有的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的手性纯度及相对纯度一般均低于99.5％，比较难纯化除去的是结构相似，性质相同的杂质，即手性异构杂质，这些杂质不能有效除去，将严重影响L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的纯度。

同时，现有的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐多为混晶，混晶的结构具有强引湿性，长期保存易吸潮，发生酯基的脱落，导致产品发生变质。

有鉴于此，特此提出本申请。

发明内容

本申请提供了一种L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的纯化方法，以解决上述至少一个技术问题。

本申请的实施例是这样实现的：

本申请示例提供了一种L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的纯化方法，其包括：

将L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品与溶剂形成的溶解液重结晶，获得L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品。

其中，溶剂包括乙醇、乙酸乙酯、甲苯、甲基叔丁醚和二氯甲烷中的至少一种。

上述实现过程中，通过特定的溶剂的选择结合重结晶的方式，有效提高L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品的相对纯度及手性纯度，使得其相对纯度及手性纯度均能够大于99.5％。

在本申请的一些可能的示例中，溶剂为乙酸乙酯。

在本申请的一些可能的示例中，溶剂为乙酸乙酯且重结晶的方式为梯度降温结晶时，L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品包括具有规则外形的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的单一结晶体。

上述实现过程中，通过特定的溶剂乙酸乙酯的选择结合特定的重结晶的方式，不仅显著的提高了L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品的相对纯度及手性纯度，使得其相对纯度及手性纯度均能够达到99.9％，同时能够获得单晶L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐，单晶L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐由于粒径大，减小了物质表面积，储存会更久，相比于混晶结构更为稳定且不易吸潮变质。

在本申请的一些可能的示例中，重结晶的方式包括减压浓缩结晶、梯度降温结晶以及缓慢降温结晶中的任一种。

在本申请的一些可能的示例中，梯度降温结晶包括：按照每15-25min降温1.5-3℃且每次降温后均保温至少15min的梯度进行降温，直至降温至25-35℃为止。

可选地，按照每20min降温1.5-2.5℃且每次降温后均保温15-25min的梯度进行降温，直至降温至25-35℃为止。

可选地，梯度降温结晶包括：按照每20min降温2℃且每次降温后均保温15-25min的梯度进行降温，直至降温至25-35℃为止。

上述实现过程中，通过上述梯度降温结晶的各参数的配合、及其与溶剂合理配合，有效对粗品进行纯化，提高L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品的相对纯度及手性纯度。

在本申请的一种可能的示例中，重结晶前，溶解液的温度为45-50℃。

上述温度下，粗品在乙酸乙酯中的溶解度佳。

在本申请的一种可能的示例中，L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品与溶剂的重量比为1:2-3。

上述比例下，保证粗品在溶剂中的溶解度佳。

在本申请的一种可能的示例中，粗品的手性纯度为90.0％-99.5％，粗品的相对纯度为90.0％-99.5％。

上述设置条件下，杂质干扰小，有效纯化粗品，使其相对纯度以及手性纯度提高至＞99.5％。

在本申请的一种可能的示例中，重结晶后，纯化方法还包括收集结晶并真空干燥，得到L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品。

本申请提供的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的纯化方法的有益效果包括：

通过上述特定的溶剂以及重结晶的纯化方式协同作用，大大提高了L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸成品的纯化纯度，且溶剂可回收再利用，适用工业化生产，具有无毒无害、环保安全、生产成本低廉的优点。

经试验，通过本申请的纯化方法，当溶剂为乙酸乙酯且采用梯度降温结晶的方式时，可以获得单晶结构的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐，并且其相对纯度＞99.5％，手性纯度＞99.5％，产品性能非常优越，具有预料不到的有益效果。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品的相对纯度图谱；

图2为L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品的手性纯度图谱；

图3为实施例1中L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐产品的电镜扫描图；

图4为实施例1中L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐产品的相对纯度图谱；

图5为实施例1中L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐产品的手性纯度图谱；

图6为实施例5中L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐产品的电镜扫描图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本申请的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本申请，而不应视为限制本申请的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

申请人发现当溶剂为乙醇、乙酸乙酯、甲苯、甲基叔丁醚和二氯甲烷中的至少一种时，采用重结晶的方式能够使L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品的相对纯度及手性纯度得到了明显的提升，尤其是当溶剂为乙酸乙酯且梯度减压的条件下，能够获得单晶L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品。

以下针对本申请实施例的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的纯化方法进行具体说明：

一种L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的纯化方法，其包括：

S1.获得L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品与溶剂形成的溶解液。

其中，溶剂包括乙醇、乙酸乙酯、甲苯、甲基叔丁醚和二氯甲烷中的至少一种。具体地，溶剂可以为乙醇、乙酸乙酯、甲苯、甲基叔丁醚或二氯甲烷，也可以为乙醇和乙酸乙酯的混合物，或者为乙醇和甲基叔丁醚的混合物，在此不做限定。

其中，溶解液的温度为45-50℃，例如溶解液的温度为45℃、47℃、48℃、49℃或50℃等。

获得L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品与溶剂形成的溶解液的方式包括：将L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品与乙酸乙酯混合后，搅拌加热，获得45-50℃的溶解液。

除了上述方式以外，还可以采用将L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品溶解于45-50℃的溶剂中，得到上述45-50℃的溶解液。

可选地，L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品与溶剂的重量比为1:2-3。例如L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品与溶剂的重量比为1:2、1:2.2、1:2.5、1:2.7或1:3等。

需要说明的是，L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品的手性纯度以及相对纯度≤99.5％，例如为80％-99.5％，可选地，L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品为混晶，且粗品的手性纯度为90.0％-99.5％，可选地，粗品的相对纯度为90.0％-99.5％，上述纯度条件下，便于通过本申请的方法进行纯化且纯化后的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品的相对纯度及手性纯度高。

S2.将45-50℃的溶解液重结晶。

其中，重结晶的方式包括减压浓缩结晶、梯度降温结晶以及缓慢降温结晶中的任一种。

具体例如，缓慢降温结晶包括：在2-3h内缓慢降温至25-30℃。

可选地，梯度降温结晶包括：按照每15-25min降温1.5-3℃且每次降温后均保温至少15min的梯度进行降温，直至降温至25-35℃为止。例如按照每15min、17min、18min、20min、22min、24min或25min降温1.5℃、1.7℃、1.9℃、2℃、2.1℃、2.4℃、2.6℃或3℃并且每次降温后均保温至少15min，直至降温至25℃、26℃、27℃、28℃、30℃、33℃或35℃为止。

进一步地，梯度降温结晶包括：按照每20min降温1.5-2.5℃且每次降温后均保温15-25min的梯度进行降温，直至降温至25-35℃为止。

进一步地，梯度降温结晶包括：按照每20min降温2℃且每次降温后均保温15-25min的梯度进行降温，直至降温至25-35℃为止。

可选地，当溶剂为乙酸乙酯且重结晶的方式为上述梯度降温结晶时，L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品包括具有规则外形的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的单一结晶体；也即是上述方式能够获得单晶L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐，其中，单晶L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐的晶体粒度＞800μm。

需要说明的是，溶剂的选择以及重结晶的具体方式的选择对于L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品的晶相及手性纯度、相对纯度具有显著的影响，本申请实施例中，除了上述溶剂为乙酸乙酯-梯度降温结晶方式能够获得单晶L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品以外，上述其余溶剂和/或不同的重结晶方式结合，获得的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品均为混晶，混晶的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的晶体粒度低于50μm。

S3.收集固体，真空干燥，获得L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品。

可选地，真空干燥的温度为30-50℃。

以下结合实施例对本申请的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的纯化方法作进一步的详细描述。

需要说明的是，以下实施例中，根据高效液相色谱法测定L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品及成品中化合物L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的相对纯度及手性纯度，其中，HPLC：表示化合物相对纯度；EE值表示化合物手性纯度。L值表示L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的晶体的粒径。

高效液相色谱法检测产物的相对纯度：Agilent 1200液相色谱仪，色谱柱：安捷伦SB-C18(4.6×150mm，5μm)，检测波长265nm，柱温25℃，流速1.0ml/min，流动相：0.1％磷酸水溶液-乙腈(体积比为70:30)，进样量5μl。

高效液相色谱法检测产物手性纯度：检测条件为：岛津LC-20A/UV；色谱柱：CHIRALCEL OD-H(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：正己烷-乙醇-二乙胺(体积比为40:60:0.2)，流速：1mL/min，柱温：25℃，检测波长：210nm，进样量5μl。

以下实施例中，采用同一L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品，其中，图1以及图2分别为L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品相对纯度以及手性纯度，其中，表1为对应图1的检测结果，表2为对应图2中的检测结果，其中，表1中峰号5表示L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐，表2中峰号2表示L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐。

表1相对纯度检测结果

表2相对纯度检测结果

也即是，粗品中HPLC：99.262％，EE：92.78％。

实施例1

将25g L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品溶于50g乙酸乙酯中，加热至45℃溶解澄清，按照每20min降温2℃并且每次降温后保温15min的方式进行梯度降温，直到降温至25℃停止降温并析晶完全，过滤收集固体，40℃真空干燥，得到L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品。

其中，L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品的电镜扫描图如图3所示，根据图3，可以看出本申请中L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品为单晶，且单晶的粒径L：802.121μm。

同时对L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品的纯度、手性纯度进行，结果如图4以及图5所示。

其中，表3为对应图4的检测结果，表4为对应图5中的检测结果，其中，表3中峰号2表示L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐，表4中峰号2表示L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐。

表3相对纯度检测结果

表4手性纯度检测结果

根据表3以及表4，本实施例中L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品中，HPLC：99.87％，EE：99.98％。

实施例2

将25g L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品溶于75g乙酸乙酯中，加热至45℃溶解澄清，按照每20min降温2℃并且每次降温后保温15min的方式进行梯度降温，直到降温至25℃停止降温并析晶完全，过滤收集固体，40℃真空干燥，得到L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品。L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品中，HPLC:99.3％，EE：98.9％，L：73.251μm。

实施例3

将25g L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品溶于60g乙酸乙酯中，加热至45℃溶解澄清，按照每20min降温2℃并且每次降温后保温15min的方式进行梯度降温，直到降温至25℃停止降温并析晶完全，过滤收集固体，40℃真空干燥，得到L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品。

L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品中，HPLC:99.2％，EE：98.7％，L：83.281μm。

实施例4

将25g L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品溶于50g乙酸乙酯中，加热至45℃溶解澄清，按照每19min降温2℃并且每次降温后保温17min的方式进行梯度降温，直到降温至25℃停止降温并析晶完全，过滤收集固体，40℃真空干燥，得到L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品。L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品中，HPLC:99.4％，EE：98.7％，L：123.651μm。

实施例5

将25g L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品溶于50g的含6％(质量百分比)的叔丁醇的甲基叔丁醚中，加热至45℃溶解澄清。按照每20min降温2℃并且每次降温后保温15min的方式进行梯度降温，直到降温至25℃停止降温并析晶完全，过滤收集固体，40℃真空干燥，得到L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品。

获得的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品的电镜扫描图如图5所示，根据图6，可以看出本申请中L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品为没有规则外形的混晶，其粒径L为35.545μm。

同时进行测量，L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品中，HPLC：98.6％，EE:98.3％。

实施例6

将25g的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品溶于50g含6％(质量百分比)乙醇的甲基叔丁醚中，加热至45℃溶解澄清。按照每20min降温2℃并且每次降温后保温15min，直到降温25℃停止降温并析晶完全，过滤收集固体，40℃真空干燥，得到L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品。

L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品中，HPLC:97.3％，EE：98.7％，L：23.251μm。

实施例7

将25g的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品溶于无水乙醇中，加热至45℃溶解澄清，40℃减压浓缩至结晶，过滤收集固体，40℃真空干燥，得到L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品的粉末状固体。

L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品中，HPLC:96.3％，EE：96.7％，L：22.251μm。

实施例8

将25g L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品溶于50g二氯甲烷中，加热至45℃溶解澄清，缓慢降温至25℃，得到粉末状固体L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品。

L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品中，HPLC:98.3％，EE：98.9％，L：24.251μm。

实施例9

将25g L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的粗品溶于50g甲苯中，加热至45℃溶解澄清，缓慢降温至25℃，得到细粉末状固体L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品。

L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品中，HPLC:95.3％，EE：95.9％，L：21.251μm。

根据上述实施例1-9，可以看出，不同的溶剂的选择对于最后L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐成品的相对纯度、手性纯度以及粒径及晶型具有显著的影响，但无论采用上述哪个实施例提供的纯化方法，均有效提高相对纯度、手性纯度。

综上，本申请提供的L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐的纯化方法，通过特定的溶剂以及重结晶的纯化方式协同作用，大大提高了L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸成品的手性纯度及相对纯度，且溶剂可回收再利用，适用工业化生产，具有无毒无害、环保安全、生产成本低廉的优点。当溶剂为乙酸乙酯且采用梯度降温结晶的方式时，通过本申请的纯化方法，可以制得单晶L-丙氨酸-2-乙基丁酯盐酸盐，并且其相对纯度＞99.5％，手性纯度＞99.5％，产品性能非常优越，具有预料不到的有益效果。

以上仅为本申请的具体实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。