阅读说明：本技术 茯苓水煎液在制备抗焦虑药物中的应用 (Application of poria cocos water decoction in preparation of anxiolytic drugs ) 是由 崔瑛 李瑞洁 崔璨 李玲玲 史银玥 楚玉玺 于 2020-07-29 设计创作，主要内容包括：本发明涉及茯苓水煎液在制备抗焦虑药物中的应用,可有效解决制备抗焦虑药物,开拓茯苓药物新用途的问题,其解决的技术方案是,所述的茯苓水煎液是,取茯苓饮片,每次加10倍重量体积的蒸馏水100℃加热回流2次,每次1h,合并两次滤液,4000r·min<Sup>-1</Sup>离心5min,浓缩成相当于含生药0.5-1.5g/mL的茯苓水煎液。本发明原料丰富,易生产制备,所制备的水煎液具有抗焦虑之功效,有效用于制备抗焦虑药物,开拓了茯苓的新药用价值,是抗焦虑药物上的创新,有显著的经济和社会效益。(The invention relates to application of a poria cocos water decoction in preparation of an anxiolytic drug, which can effectively solve the problems of preparation of the anxiolytic drug and development of new application of the poria cocos drug and solves the technical scheme that the poria cocos water decoction is prepared by adding 10 times of distilled water by weight and volume at 100 ℃ into poria cocos decoction pieces, heating and refluxing for 2 times and 1 hour each time, combining two filtrates, and mixing the filtrates at 4000 r.min ‑1 Centrifuging for 5min, and concentrating to obtain Poria water decoction containing crude drug 0.5-1.5 g/mL. The invention has rich raw materials and easy production and preparation, and the prepared water decoction has the effect of antianxiety, is effectively used for preparing the antianxiety medicament, develops the new medicinal value of the tuckahoe, is innovation on the antianxiety medicament and has obvious economic and social benefits.)

茯苓水煎液在制备抗焦虑药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种茯苓水煎液在制备抗焦虑药物中的应用。

背景技术

茯苓为多孔菌科真菌茯苓Wolfiporia cocos (Schw.)Wolf的干燥菌核，始载于《神农本草经》，被列为上品。

茯苓历来被认为具有较好的宁心安神作用，如《神农本草经》云：“茯苓……主胸胁逆气，忧恚，惊邪，恐悸，心下结痛……久服安魂养神”。《名医别录》言其“长阴，益气力，保神守中”。《药性论》言其“善安心神”。《本草备要》指出茯苓可以“宁心益气，调营理卫，定魄安魂”。《本草崇原》认为茯苓“久服安肝脏之魂，以养心脏之神”。《得配本草》言其“能利心惊之热，故可治惊”。《本草分经》曰：“茯苓甘、淡，平。白者入气分，益脾宁心。”《医学衷中参西录》中指出茯苓可以“安魂定魄”。

药理实验表明，茯苓水煎液具有协同戊巴比妥钠的中枢抑制作用，能明显延长小鼠的睡眠时间，表明茯苓具有镇静催眠作用。羧甲基茯苓多糖注射液能增强硫喷妥钠对小鼠中枢的抑制，使小鼠翻正反射消失持续的时间显著延长。然而尚未见有关茯苓水煎液抗焦虑的报道。

焦虑症可见于多种中医证型，如肝郁脾虚型、心脾两虚型、阴虚火旺型等，而茯苓具有较好的健脾作用，概括上述情况，本发明对茯苓的抗焦虑作用进行药效学研究，不仅要证实茯苓对动物焦虑的抗焦虑作用，同时以脾阳虚焦虑、脾阴虚焦虑为模型，进一步研究茯苓对脾虚型焦虑的抗焦虑作用，并探讨其抗焦虑作用机制，以进一步开发茯苓的药效，扩大其临床应用。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种茯苓水煎液在制备抗焦虑药物中的应用，可有效解决制备抗焦虑药物，开拓茯苓药物新用途的问题。

本发明解决的技术方案是，一种茯苓水煎液在制备抗焦虑药物中的应用，所述的茯苓水煎液是，取茯苓饮片，每次加10倍重量体积的蒸馏水100℃加热回流2次，每次1h，第一次提取前先浸泡1h，合并两次滤液，4000r·min^-1离心5min，浓缩成相当于含生药0.5-1.5g/mL的茯苓水煎液，所述的重量体积是指固体物以g计，液体物以mL计。

本发明原料丰富，易生产制备，所制备的水煎液具有抗焦虑之功效，有效用于制备抗焦虑药物，开拓了茯苓的新药用价值，是抗焦虑药物上的创新，有显著的经济和社会效益。

具体实施方式

以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。

本发明在具体实施中，一种茯苓水煎液在制备抗焦虑药物中的应用，选取河南中医药大学第三附属医院购得的安徽安庆产茯苓饮片，经河南中医药大学陈随清教授鉴定为多孔菌科真菌茯苓Wolfiporia cocos (Schw.)Wolf的干燥菌核，将茯苓饮片加10倍重量体积的蒸馏水，先浸泡1h，然后100℃加热回流1h，过滤，得第一次滤液；药渣再加原药物10倍重量体积的蒸馏水，再加热回流1h，过滤，得第二次滤液；合并两次滤液，混匀，4000r·min^-1离心5min，再浓缩成相当于含生药0.5-1.5g/mL的茯苓水煎液，服用时，可制成服用剂量为5g·kg^-1、10g·kg^-1、15g·kg^-1的茯苓水煎液。

本发明原料丰富，易生产制备，服用方便，效果好，茯苓水煎液具有抗焦虑之功效，有效用于制备抗焦虑药物，开拓了茯苓的新药用价值，并经实验取得了非常好的有益技术效果，有关实验资料如下：

一、茯苓水煎液对小鼠焦虑模型的影响

1实验材料

1.1实验动物

SPF级健康雄性昆明种小鼠，体重在18~22 g，购自河南省实验动物中心，许可证号：SCXK（豫）2017-0001，批号：NO.DW2019060015。小鼠饲养于河南中医药大学动物实验中心IVC-Ⅱ小鼠独立送风隔离笼具内，实验室温度控制在22±2℃，实验单位使用许可证编号SYXK（豫）2015-0005。

1.2实验药物

本发明茯苓水煎液。

***，购自河南中医药大学三附院，生产厂家：天津力生制药股份有限公司，规格：2.5mg/片×100片，批准文号：国药准字H12020119，生产批号：1806008。

小鼠GABA、GLU、5-HT、DA试剂盒（上海艾莱萨生物科技有限公司），批号：E20190801A。

1.3实验仪器设备

大鼠IVC独立送风隔离笼具（型号：IVC-Ⅱ，苏州冯氏实验动物设备有限公司）；

PM-200高架十字迷宫装置：成都泰盟科技有限公司；

小鼠明暗箱装置购自上海欣软信息科技有限公司；

酶标仪（型号：Epoch）购自BioTeK Instruments,Inc公司。

2 实验方案

2.1药物的制备

2.1.1茯苓水煎液 将本发明制备的茯苓水煎液，配置成浓度为0.5g·mL^-1、1.0g·mL^-1、1.5g·mL^-1的药液，备用。

2.1.2***混悬液的制备 取***片研碎，用蒸馏水溶解，超声，配制成0.25mg·mL^-1的***混悬液，备用，用前充分摇匀。

2.2分组与给药

SPF级健康雄性昆明种小鼠72只，体重在18~22 g，适应性饲养3天后标记称重，随机分为6组，即空白对照组（不进行行为学实验）、焦虑模型组、阳性对照组、茯苓水煎液高、中、低剂量组，每组10只。于给药前1天进行敞箱实验对小鼠进行筛选分组，以确保各组小鼠行为能力无显著差异。每天上午灌胃给药，连续5天，给药体积为0.1mL·10g^-1。空白对照组、焦虑模型组每天灌胃给予蒸馏水，阳性对照组每天灌胃给予0.0025g·kg^-1***混悬液，茯苓高、中、低剂量组分别灌胃给予5g·kg^-1、10g·kg^-1、15g·kg^-1的茯苓水煎液。末次灌胃给药1h后进行行为学测试。

2.3行为学测试

2.3.1高架十字迷宫实验 实验开始前先将每只小鼠置于一个单独鼠笼中自由活动5min，接着将小鼠置于高架十字迷宫中央的开放平台，使头部正对开放臂，任其自由探索。计算机进行跟踪记录，收集5min内小鼠在高架十字迷宫上的运动数据。以OE%，即小鼠开臂进入次数/（开臂进入次数＋闭臂进入次数），和OT%，即开臂滞留时间/（开臂滞留时间＋闭臂滞留时间）作为评价茯苓水煎液抗焦虑作用的指标。每只小鼠测试结束后及时清除粪便等***物，必要时用低浓度酒精喷洒并擦拭迷宫以除去异味，然后再进行下一次测试。在整个实验过程中，要保持实验环境安静，以及实验装置清洁，尽量避免外界环境对实验结果产生不良影响。

2.3.2明暗箱实验 高架十字迷宫实验结束后，立即进行明暗箱实验，将小鼠以背对暗箱的姿态放入明箱中央，观察小鼠10min内在明箱与暗箱之间的穿梭次数，以此作为评价茯苓水煎液抗焦虑作用的指标。每只小鼠测试结束后及时清除粪便等***物，必要时用低浓度酒精喷洒并擦拭箱底以除去异味，然后再进行下一次测试。在整个实验过程中，要保持实验环境安静，以及实验装置清洁，尽量避免外界环境对实验结果产生不良影响。

2.4相关指标检测

行为学实验结束后立即将小鼠进行脱颈椎处死，快速剪取头部并迅速于冰台上剥离全脑，万分之一天平精密称重，以脑组织（g）:生理盐水（mL）=1:4 的比例加入生理盐水，制备匀浆，匀浆液在4℃，3500r·min^-1下进行离心20min，取上清液，即得小鼠脑组织匀浆液，置于-80℃冰箱中保存，备用。严格按照试剂盒说明书用酶联免疫吸附法测定小鼠脑组织中GABA、GLU、5-HT、DA的含量。

2.5统计学处理

实验数据采用SPSS23.0软件进行单因素方差分析，各组数据以平均值±标准差（

±s）表示，以P<0.05表示有显著性差异，P<0.01表示有极显著性差异。

3 结果

3.1茯苓水煎液对小鼠焦虑行为的影响

给药后，与焦虑模型组相比较，阳性对照组、茯苓水煎液低、中剂量组小鼠在EPM装置中的OE%、OT%以及明暗箱中的穿梭次数均显著增加（P＜0.05，P＜0.01），茯苓水煎液高剂量组小鼠在EPM装置中的OT%显著增加（P＜0.01）。上述实验结果表明，5 g·kg^-1~15 g·kg^-1的茯苓水煎液对小鼠在EPM及明暗箱装置中的焦虑行为具有一定的干预作用，提示茯苓水煎液对焦虑小鼠具有一定的抗焦虑药效。见表1。

表1 茯苓水煎液对小鼠焦虑行为的影响（ ±s，n=10）

组别	剂量（g·kg<sup>-1</sup>）	OE%（%）	OT%（%）	穿梭次数（次）
					焦虑模型组	—	47.60±2.95	44.45±5.56	25.80±5.03
阳性对照组	2.5×10<sup>-3</sup>	56.70±5.23**	57.03±5.57**	42.90±8.27**
					茯苓水煎液低剂量组	5.0	52.40±2.50*	54.88±5.11**	32.30±6.41*
茯苓水煎液中剂量组	10.0	55.00±4.00**	50.14±3.45*	32.60±7.06*
					茯苓水煎液高剂量组	15.0	50.70±3.06	51.03±4.09**	29.00±3.68

注：与焦虑模型组比较，^* P＜0.05，^** P＜0.01

3.2茯苓水煎液对小鼠焦虑模型脑组织中GABA、GLU、5-HT、DA含量的影响

与空白对照组相比，焦虑模型组小鼠脑组织中GABA含量显著降低（P<0.01），GLU与5-HT的含量显著升高（P<0.05，P<0.01），DA含量有升高趋势；给药后，与焦虑模型组相比较，阳性对照组、茯苓水煎液低、中、高剂量组小鼠脑组织中GABA的含量显著升高（P<0.01），GLU、5-HT与DA的含量均显著降低（P<0.05，P<0.01）。上述实验结果显示，5 g·kg^-1~15 g·kg^-1茯苓水煎液可以有效地改善焦虑小鼠脑组织GABA、GLU、5-HT及DA含量的异常变化趋势，这也与行为学的实验结果相吻合，可能是其发挥抗焦虑作用的机制。

表2 茯苓水煎液对小鼠脑组织中GABA、GLU、5-HT、DA含量的影响（

±s，n=10）

组别	剂量(g·kg<sup>-1</sup>)	GABA(μmol·L<sup>-1</sup>)	GLU(mg·L<sup>-1</sup>)	5-HT(ng·mL<sup>-1</sup>)	DA(pg·mL<sup>-1</sup>)
						空白对照组	—	33.25±3.24	214.45±20.50	777.22±38.13	386.35±17.86
焦虑模型组	—	28.09±1.91<sup>##</sup>	245.01±13.44<sup>##</sup>	817.09±57.38<sup>#</sup>	397.56±12.30
						阳性对照组	2.5×10<sup>-3</sup>	31.26±1.71<sup>**</sup>	210.25±11.34<sup>**</sup>	775.63±43.40<sup>*</sup>	359.77±15.56<sup>**</sup>
茯苓水煎液低剂量组	5.0	32.40±2.07<sup>**</sup>	233.01±9.26<sup>*</sup>	771.20±41.50<sup>*</sup>	371.41±21.44<sup>**</sup>
						茯苓水煎液中剂量组	10.0	32.54±3.10<sup>**</sup>	233.64±6.84<sup>*</sup>	738.61±25.75<sup>**</sup>	373.99±14.94<sup>**</sup>
茯苓水煎液高剂量组	15.0	31.75±2.43<sup>**</sup>	216.99±7.03<sup>**</sup>	748.73±36.37<sup>**</sup>	378.74±12.06<sup>*</sup>

注：与焦虑模型组比较，^# P＜0.05，^## P＜0.01。

4.小结

本实验观察到，连续给药茯苓水煎液5 d后，可以显著提高小鼠在EPM装置中的OE%、OT%值，显著增加在明暗箱中的穿梭次数，表明茯苓水煎液对于装置焦虑小鼠有抗焦虑作用。其抗焦虑作用的机制可能是通过改善中枢氨基酸神经递质水平，如升高GABA含量和降低GLU含量，以及改善单胺类神经递质水平，如抑制5-HT、DA水平升高实现的。该结果与***所产生的效果类似，初步证实了其作为抗焦虑用药的可能性。

二、茯苓水煎液对脾虚焦虑大鼠的影响

1 实验材料

1.1实验动物

S雄性SD大鼠，SPF级，体重180~220 g，购买于山东省济南朋悦实验动物繁育有限公司，许可证号：SCXK（鲁）2019-0003，分笼饲养于河南中医药大学动物房大鼠IVC独立送风隔离系统内，恒温恒湿饲养。大鼠饲料购买于河南省实验动物中心，批号：41003100006603。

1.2实验药物

本发明茯苓水煎液。

番泻叶、附子、肉桂、吴茱萸饮片，均购于河南中医药大学第三附属医院，经河南中医药大学陈随清教授鉴定分别为豆科植物狭叶番泻Cassia angustifolia Vahl的干燥小叶、毛茛科植物乌头Aconitum carmichaelii Debx的子根加工品、樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥树皮、芸香科植物吴茱萸Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth的干燥近成熟果实。

***，购自河南中医药大学三附院，生产厂家：天津力生制药股份有限公司，规格：2.5mg/片×100片，批准文号：国药准字H12020119，生产批号：1806008。

大鼠GABA、GLU、GABA-T、GAD、GS试剂盒（上海艾莱萨生物科技有限公司），批号E20191101A

1.3实验仪器

大鼠IVC独立送风隔离笼：苏州冯氏实验动物设备有限公司）；

PM-200高架十字迷宫装置：成都泰盟科技有限公司；

小鼠明暗箱装置：上海欣软信息科技有限公司；

酶标仪（型号：Epoch）购自BioTeK Instruments,Inc公司。

2 实验方案

2.1药物的制备

2.1.1茯苓水煎液的制备 将本发明制备的茯苓水煎液，配置成浓度为0.4g·mL^-1、0.8g·mL^-1、1.2g·mL^-1的药液，备用。

2.1.2番泻叶水煎液的制备 取番泻叶饮片，加10倍量蒸馏水浸泡1 h，加热回流2次，每次1 h，合并两次滤液，4000 r·min^-1离心5 min，浓缩，配制成1 g·mL^-1的番泻叶水煎液。

2.1.3附子、肉桂、吴茱萸混合水煎液的制备 取附子、肉桂、吴茱萸饮片（1:1:1均匀混合），加10倍量蒸馏水浸泡1 h，加热回流2次，每次1 h，合并两次滤液，4000 r·min^-1离心5 min，浓缩，配置成1 g·mL^-1的水煎液。

2.1.4***混悬液的制备 取***片研碎，用蒸馏水溶解，超声，配制成0.25mg·mL^-1的***混悬液，备用，用前充分摇匀。

2.2分组与给药

脾阳虚、脾阴虚模型的制备分为两个阶段，第一阶段通过饮食不节结合劳倦过度的方法，造脾气虚证模型,第二阶段再通过使用苦寒药或伤阴药分别造脾阳虚、脾阴虚证模型。实验中除空白对照组和焦虑模型组外，其余各组大鼠每日上午进行负重游泳实验（使用高度为70 cm，直径为15 cm的透明桶，一次放入一只大鼠进行游泳，并负重占体重5%的重物，以大鼠鼻子10 s后不能上浮为力竭标准，约10 min至力竭后捞出，用毛巾将水擦干）连续进行22 d。从第16天开始，在负重游泳的基础上，脾阳虚焦虑模型组及高、中、低剂量给药组每日下午灌服10 g·kg^-1的番泻叶水煎液；脾阴虚焦虑模型组及高、中、低剂量给药组每日下午灌胃10 g·kg^-1的附子、肉桂、吴茱萸水煎液连续7 d。造模期间大鼠饱食1 d，禁食2 d，循环进行，各组饮水保持正常。实验第23d，阳性组灌胃***，茯苓各给药组灌胃相应剂量的茯苓水煎液，空白对照组、焦虑模型组、脾阳虚焦虑模型组和脾阴虚焦虑模型组灌胃蒸馏水，连续7d。实验第29 d，除空白对照组外，其余各组大鼠均在焦虑装置上制造焦虑模型并同步进行焦虑行为观察。

2.3行为学测试

高架十字迷宫实验及明暗箱实验，同上一部分“2.3行为学测试”项下方法。

2.4相关指标检测

同上一部分“2.4相关指标检测”项下方法进行检测。

2.5统计学处理

实验数据采用SPSS23.0软件进行单因素方差分析，各组数据以平均值±标准差（±s）表示，以P<0.05表示有显著性差异，P<0.01表示有极显著性差异。

3 结果

3.1茯苓水煎液对脾阳虚焦虑大鼠的影响

3.1.1茯苓水煎液对脾阳虚焦虑大鼠一般状态的影响

造模后的大鼠与空白对照组相比较，普遍出现体重减轻、拱背、毛发干枯、不易抓取、肛周及臀部污秽、便溏、游泳耐力明显减小等现象，此现象与脾阳虚证的临床表现相一致。造模结束开始给药后，茯苓水煎液各剂量组大鼠体重明显增长、毛发光泽，便溏等症状也得到不同程度的改善。

造模第10d开始，与焦虑模型组相比较，各造模组大鼠肛温逐渐降低；造模第19 d开始，与焦虑模型组比较，各造模组大鼠肛温显著降低（P<0.01），该降低趋势一直持续到造模第22 d以及造模后的给药过程中。大鼠肛温的降低符合中医证候脾阳虚证的特点。造模结束开始给药后，茯苓水煎液各剂量组大鼠肛温开始逐渐回升，与脾阳虚焦虑模型组相比较，高剂量组显著升高（P<0.05），表明茯苓水煎液对脾阳虚大鼠肛温的降低有一定的改善作用。

3.1.2茯苓水煎液对脾阳虚大鼠焦虑行为的影响

与焦虑模型组相比，脾阳虚焦虑模型组大鼠在EPM装置中OE%显著降低（P<0.05），OT%及明暗箱中的穿梭次数均有降低趋势，说明脾阳虚会一定程度地加重大鼠的焦虑行为。给药治疗后，与脾阳虚焦虑模型组比较，阳性对照组、茯苓水煎液中、高剂量组大鼠在EPM装置中的OE% 显著增加（P<0.05，P<0.01）；阳性对照组大鼠EPM装置中的OT% 显著增加（P<0.01），茯苓水煎液低、中、高剂量组大鼠OT%明显增加；阳性对照组、茯苓水煎液高剂量组大鼠明暗箱中穿梭次数显著增加（P<0.05，P<0.01）。上述实验结果表明，4 g·kg^-1~12 g·kg^-1的茯苓水煎液能够改善脾阳虚焦虑大鼠在EPM装置及明暗箱中的焦虑行为。见表3。

表3 茯苓水提液对脾阳虚大鼠焦虑行为的影响（±s，n=10）

组别	剂量（g·kg<sup>-1</sup>）	OE%（%）	OT%(%)	穿梭次数（次）
					焦虑模型组	—	27.99±13.29	12.65±10.70	4.40±3.66
脾阳虚焦虑模型组	—	17.60±11.42<sup>#</sup>	5.60±4.14	4.00±2.40
					阳性对照组	2.0×10<sup>-3</sup>	63.06±5.42<sup>**</sup>	31.01±18.34<sup>**</sup>	8.50±3.24<sup>**</sup>
茯苓水煎液低剂量组	4.0	29.32±8.02<sup>*</sup>	11.16±13.22	6.10±3.90
					茯苓水煎液中剂量组	8.0	33.17±10.09<sup>**</sup>	16.26±8.78	6.30±3.23
茯苓水煎液高剂量组	12.0	37.81±14.17<sup>**</sup>	12.14±11.74	7.60±4.06<sup>*</sup>

注：与焦虑模型组比较，^# P＜0.05，^## P＜0.01，与脾阳虚焦虑模型组比较，^* P＜0.05，^** P＜0.01

3.1.3茯苓水煎液对脾阳虚焦虑大鼠海马组织中递质含量的影响

与空白组对照相比较，焦虑模型组、脾阳虚焦虑模型组大鼠海马组织中GABA含量显著降低（P＜0.05），GAD、GS的活性显著降低（P＜0.05），GABA-T的活性显著升高（P＜0.05）。给药治疗后，与脾阳虚焦虑模型组相比较，阳性对照组、茯苓水煎液低、中、高剂量组均能显著降低大鼠海马组织中GLU含量与GABA-T的活性（P<0.05，P<0.01）；阳性对照组、茯苓水煎液中、高剂量组能显著升高海马组织中GABA的含量（P<0.05）；阳性对照组、茯苓水煎液低剂量组能显著增强大鼠海马组织中GAD的活性（P<0.01）；茯苓水煎液高剂量组能显著增强大鼠海马组织中GS的活性（P<0.01）。上述实验结果表明，4 g·kg^-1~12 g·kg^-1的茯苓水煎液对脾阳虚焦虑大鼠GABA含量以及GAD、GS活性的降低、GLU含量以及GABA-T活性的升高有一定的逆转作用。提示茯苓抗焦虑的作用机制可能与调节脾阳虚焦虑大鼠海马组织中GAD、GABA-T与GS的酶活性，从而调节GLU与GABA含量的动态平衡有关。见表4-5。

表4 茯苓水煎液对脾阳虚焦虑大鼠海马组织中GABA、GLU含量的影响（±s，n=10）

组别	剂量（g·kg<sup>-1</sup>）	GABA(μmol·L<sup>-1</sup>)	GLU(mg·L<sup>-1</sup>)
				空白对照组	—	42.66±3.77	205.24±16.66
焦虑模型组	—	38.66±4.34<sup>△</sup>	224.52±21.18<sup>△</sup>
				脾阳虚焦虑模型组	—	36.63±3.25<sup>△</sup>	222.31±15.00<sup>△</sup>
阳性对照组	2.0×10<sup>-3</sup>	41.38±4.26<sup>*</sup>	201.31±14.66<sup>*</sup>
				茯苓水煎液低剂量组	4.0	36.27±5.05	209.74±18.94
茯苓水煎液中剂量组	8.0	40.82±4.58<sup>*</sup>	191.27±19.72<sup>**</sup>
				茯苓水煎液高剂量组	12.0	40.63±2.96<sup>*</sup>	202.99±31.11<sup>*</sup>

注：与空白对照组相比，^△ P＜0.01，^△△ P＜0.05；与脾阳虚焦虑模型组相比较，^* P＜0.05，^** P＜0.01

表5 茯苓水煎液对脾阳虚焦虑大鼠海马组织中GABA-T、GAD、GS含量的影响（

±s，n=10）

组别	剂量（g·kg<sup>-1</sup>）	GAD（U·L<sup>-1</sup>）	GABA-T（U·L<sup>-1</sup>）	GS（U·L<sup>-1</sup>）
					空白对照组	—	238.37±29.83	192.00±9.92	472.41±16.81
焦虑模型组	—	204.77±25.18<sup>△</sup>	208.76±10.94<sup>△</sup>	431.20±31.30<sup>△△</sup>
					脾阳虚焦虑模型组	—	195.83±21.97<sup>△</sup>	204.49±9.64	404.38±67.58<sup>△△</sup>
阳性对照组	2.0×10<sup>-3</sup>	237.87±44.82<sup>**</sup>	185.6±14.87<sup>**</sup>	411.13±36.11
					茯苓水煎液低剂量组	4.0	214.71±26.11	191.67±9.96<sup>*</sup>	388.32±13.47
茯苓水煎液中剂量组	8.0	225.61±12.84	188.13±20.24<sup>**</sup>	409.67±43.30
					茯苓水煎液中剂量组	8.0	234.83±27.95<sup>*</sup>	185.68±12.7<sup>**</sup>	430.88±42.82

注：与空白对照组相比，^△P＜0.01，^△△P＜0.05；与脾阳虚焦虑模型组相比较，*P＜0.05，**P＜0.01

3.2茯苓水煎液对脾阴虚焦虑大鼠的影响

3.2.1茯苓水煎液对脾阴虚焦虑大鼠一般状态的影响

造模后的大鼠与空白对照组相比较，普遍出现躁动不安、易激怒、大便干燥、体重减轻、游泳耐力下降、肛温升高等现象。各给药组给药后，大鼠体重增加、肛温有下降趋势，大便形态恢复正常，躁动不安等症状均有所缓解。

造模第3d开始，与焦虑模型组相比较，各造模组大鼠肛温逐渐升高；造模第19 d开始，与焦虑模型组比较，脾阴虚焦虑模型组大鼠肛温显著升高（P<0.05，P<0.01）；各造模组大鼠肛温升高现象一直持续到造模结束以及造模后的给药过程中。大鼠肛温的升高符合中医证候脾阴虚证的特点。开始给药后，茯苓水煎液各剂量组大鼠肛温的升高趋势有所缓解，其中D24天，与脾阴虚焦虑模型组相比较，高剂量组大鼠肛温显著降低（P<0.05）。上述结果表明，茯苓水煎液对脾阴虚焦虑大鼠肛温的升高有一定的改善作用。

3.2.2茯苓水煎液对脾阴虚大鼠焦虑行为的影响

与焦虑模型组相比，脾阴虚焦虑模型组大鼠EPM装置中OE%、OT%，明暗箱中的穿梭次数均有所降低，一定程度上加重了大鼠的焦虑行为；给药治疗后，与脾阴虚焦虑模型组比较，阳性对照组、茯苓水煎液低、中、高剂量组大鼠在EPM装置中的OE%均显著升高（P<0.05，P<0.01）；阳性对照组、茯苓水煎液高剂量组大鼠在EPM装置中的OT% 显著升高（P<0.05）；阳性对照组、茯苓水煎液低、高剂量组大鼠在明暗箱中的穿梭次数均显著增加（P<0.01）。上述实验结果表明，4 g·kg^-1~12 g·kg^-1的茯苓水煎液能够改善脾阴虚焦虑大鼠在EPM及明暗箱中的焦虑行为。如表6。

表6 茯苓水煎液对脾阴虚大鼠EPM、明暗箱实验的影响（

±s，n=10）

组别	剂量（g·kg<sup>-1</sup>）	OE%（%）	OT%(%)	穿梭次数（次）
					焦虑模型组	—	27.99±13.29	12.65±10.70	4.40±3.66
脾阴虚焦虑模型组	—	24.19±12.40	9.09±9.28	3.00±2.10
					阳性对照组	2.0×10<sup>-3</sup>	59.40±10.31<sup>**</sup>	30.97±25.40<sup>*</sup>	8.30±2.23<sup>**</sup>
茯苓水煎液低剂量组	4.0	42.39±12.40<sup>**</sup>	15.87±16.96	9.40±3.86<sup>**</sup>
					茯苓水煎液中剂量组	8.0	45.17±14.36<sup>**</sup>	18.32±14.50	5.50±1.72
茯苓水煎液高剂量组	12.0	55.46±12.96<sup>**</sup>	29.25±14.15<sup>*</sup>	7.90±2.24<sup>**</sup>

注：与脾阴虚焦虑模型组相比：^* P＜0.05，^** P＜0.01

3.2.3茯苓水煎液对脾阴虚焦虑大鼠海马组织中递质含量的影响

与空白组对照相比较，焦虑模型组大鼠海马组织中GABA含量显著降低（P＜0.05），GAD以及GS的活性显著降低（P<0.01）；与焦虑模型组相比较，脾阴虚焦虑模型组大鼠海马组织中GABA的含量显著降低（P＜0.05）。给药治疗后，与脾阴虚焦虑模型组相比较，阳性对照组、茯苓水煎液中剂量组大鼠海马组织中GABA的含量显著升高（P<0.05，P<0.01）；阳性对照组、茯苓水煎液低、中、高剂量组大鼠海马组织中GABA的含量显著升高（P<0.05，P<0.01）；茯苓水煎液低剂量组、阳性对照组大鼠海马组织中GAD的活性显著升高（P<0.05，P<0.01）；茯苓水煎液低、中剂量组、阳性对照组大鼠海马组织中GABA-T的活性显著降低（P<0.05，P<0.01），茯苓水煎液中剂量组大鼠海马组织中GS的活性显著升高（P<0.01）。上述实验结果表明，4 g·kg^-1~12 g·kg^-1的茯苓水煎液对脾阴虚焦虑大鼠海马组织中GABA含量以及GAD、GS活性的降低、GLU含量以及GABA-T活性的升高有一定的逆转作用。煎示茯苓抗焦虑的作用机制可能与调节脾阴虚焦虑大鼠海马组织中GAD、GABA-T与GS的酶活性，从而调节GLU与GABA含量的动态平衡有关。见表7-8。

表7 茯苓水煎液对脾阴虚大鼠焦虑模型海马组织中GABA、GLU含量的影响（

±s，n=10）

组别	剂量（g·kg<sup>-1</sup>）	GABA(μmol·L<sup>-1</sup>)	GLU（mg·L<sup>-1</sup>）
				空白对照组	—	42.66±3.779	205.24±16.66
焦虑模型组	—	38.66±4.34<sup>△</sup>	224.52±21.18
				脾阴虚焦虑模型组	—	34.21±3.03<sup>#</sup>	203.54±10.97
阳性对照组	2.0×10<sup>-3</sup>	42.08±3.26<sup>**</sup>	191.10±23.09<sup>*</sup>
				茯苓水煎液低剂量组	4.0	42.56±4.14<sup>**</sup>	199.85±46.85
茯苓水煎液中剂量组	8.0	40.07±3.07<sup>*</sup>	180.13±10.08<sup>**</sup>
				茯苓水煎液高剂量组	12.0	39.72±3.29<sup>*</sup>	198.09±31.52

注：与空白对照组相比较：^△P＜0.05，^△△P＜0.01，与焦虑模型组相比：^#P＜0.05，^##P＜0.01；与脾阴虚焦虑模型组相比：*P＜0.05，**P＜0.01

表8 茯苓水煎液对脾阴虚大鼠焦虑模型海马组织中GABA-T、GAD、GS含量的影响（

± s，n=10）

组别	剂量（g·kg<sup>-1</sup>）	GAD（U·L<sup>-1</sup>）	GABA-T（U·L<sup>-1</sup>）	GS（U·L<sup>-1</sup>）
					空白对照组	—	238.37±29.83	192.00±9.92	472.48±16.81
焦虑模型组	—	204.77±25.18<sup>△△</sup>	208.76±10.94	419.71±26.94<sup>△△</sup>
					脾阴虚焦虑模型组	—	196.40±9.85	206.45±26.93	405.04±21.07
阳性对照组	2.0×10<sup>-3</sup>	227.80±34.28<sup>**</sup>	180.37±16.16<sup>**</sup>	421.13±46.10
					茯苓水煎液低剂量组	4.0	220.48±18.02<sup>*</sup>	186.89±15.75<sup>*</sup>	416.74±31.19
茯苓水煎液中剂量组	8.0	201.12±28.14	184.14±10.86<sup>**</sup>	443.33±37.04<sup>**</sup>
					茯苓水煎液高剂量组	12.0	200.55±8.50	190.42±5.90	416.16±22.35

注：与空白对照组相比较：^△P＜0.05，^△△P＜0.01，与焦虑模型组相比：^#P＜0.05，^##P＜0.01；与脾阴虚焦虑模型组相比：*P＜0.05，**P＜0.01

4.小结

茯苓水煎液对脾阳虚焦虑大鼠、脾阴虚焦虑大鼠均有较好的抗焦虑作用，表明其可用于脾虚型焦虑症，具有临床应用价值。作用机制可能与增强GABA的合成酶与GLU降解酶的活性，抑制GABA降解酶的活性，从而影响GABA与GLU含量的相对平衡有关，用于制备抗焦虑药物，开拓了茯苓的药用价值和商业价值，是治疗焦虑症药物上的创新，经济和社会效益显著。