阅读说明：本技术 溶酶体诱导的免疫原性细胞死亡的系统和方法 (Systems and methods for lysosome-induced immunogenic cell death ) 是由 埃里克·T·福塞尔 于 2018-11-15 设计创作，主要内容包括：本发明一般涉及使用免疫原性细胞死亡例如溶酶体诱导的免疫原性细胞死亡治疗癌症的系统和方法。本发明包括可以单独使用或一起使用的至少三个方面。第一方面涉及肿瘤的治疗准备,例如,通过停用和减少抗氧化剂,以及提供n-3至n-6和其他不饱和脂肪酸,和/或使用他汀类药物治疗受试者。第二个方面涉及通过包括CRISPR技术的基因操作恢复p53功能。第三个方面涉及抗体-酶复合物的构建,其中抗体识别肿瘤而酶是氧化酶。可以给药受试者该复合物。也可以给药受试者该酶的底物。这些和/或其他方面可以单独或一起使用,并且可以用于治疗和/或治愈癌症。在某些情况下,可以靶向溶酶体以诱导例如癌细胞中的细胞死亡。(The present invention relates generally to systems and methods for treating cancer using immunogenic cell death, such as lysosome-induced immunogenic cell death. The present invention includes at least three aspects that may be used separately or together. The first aspect relates to the therapeutic preparation of a tumor, for example, by disabling and reducing antioxidants, as well as providing n-3 to n-6 and other unsaturated fatty acids, and/or treating a subject with statins. A second aspect relates to the restoration of p53 function through genetic manipulation including CRISPR technology. A third aspect relates to the construction of an antibody-enzyme complex, wherein the antibody recognizes the tumor and the enzyme is an oxidase. The complex can be administered to a subject. The substrate for the enzyme may also be administered to the subject. These and/or other aspects may be used alone or together and may be used to treat and/or cure cancer. In certain cases, lysosomes can be targeted to induce cell death in, for example, cancer cells.)

溶酶体诱导的免疫原性细胞死亡的系统和方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2017年11月16日提交的发明人为E.Fossel、发明名称为“一种溶酶体引发细胞凋亡的癌症治疗方法”的美国临时专利申请号62/587,207、以及2018年10月3日提交的发明人为Fossel、发明名称为“用于引发细胞凋亡以治疗癌症的系统和方法”的美国临时专利申请号62/740,477的优先权，上述申请均通过引用全部并入本文。

技术领域

本发明一般涉及利用免疫原性细胞死亡治疗癌症的系统和方法。例如，本发明的某些实施方式的目的是通过靶向溶酶体，引发其溶酶体膜可渗透并漏出降解酶，导致细胞内部消化，导致细胞凋亡，从而导致溶酶体诱导的免疫原性细胞死亡，从而治疗和/或治愈癌症。

背景技术

癌症是一组与异常细胞生长有关的、可能会侵袭或扩散到身体其他部位的疾病。尽管癌症可以使用放射疗法、外科手术、化疗或靶向疗法等技术来治疗，但鉴于癌症患者的死亡率相对较高，仍需要新的技术。

发明内容

本发明一般涉及使用免疫原性细胞死亡例如溶酶体诱导的免疫原性细胞死亡来治疗癌症的系统和方法。在某些情况下，本发明的客体包括相关产品、特定问题的替代解决方案和/或一个或多个系统和/或制品的多种不同用途。

一方面，本发明一般涉及制品。在一组实施方式中，所述制品包含复合物，所述复合物包含识别肿瘤的抗体和能够增加溶酶体膜渗透性的酶。在另一组实施方式中，该制品包含复合物，该复合物包含识别肿瘤的抗体和能够产生活性氧(reactive oxygenspecies)的酶。

另一方面，本发明一般涉及方法。在一组实施方式中，该方法包括向受试者给药包含由识别肿瘤的抗体和能够增加溶酶体膜渗透性的酶构成的复合物的组合物。根据另一组实施方式，该方法包括向受试者给药包含由识别肿瘤的抗体和能够产生活性氧的酶构成的复合物的组合物。在又一组实施方式中，该方法包括向受试者给药包含由识别肿瘤的抗体和能够引起溶酶体渗漏的酶构成的复合物的组合物。

本文公开了几种向受试者给药用于预防或治疗特定病症的化合物的方法。应当理解，在本发明的每一个上述方面，本发明还具体地包括该所述用于治疗或预防该特定病症的化合物，以及所述化合物在制备用于治疗或预防该特定病症的药物中的用途。

在另一方面，本发明包括制备本文所述的例如包含识别肿瘤的抗体和能够产生活性氧的酶的复合物的一个或多个实施方式的方法。在又一方面，本发明包括使用本文所述的例如包含识别肿瘤的抗体和能够产生活性氧的酶的复合物的一个或多个实施方式的方法。

当结合附图考虑时，根据以下对本发明的各种非限制性实施方式的详细描述，本发明的其他优点和新颖特征将变得显而易见。

附图说明

将参考示意性且非按比例绘制的附图以示例的方式描述本发明的非限制性实施方式。在附图中，所示的每个相同或几乎相同的组件通常由相同附图标记表示。为清楚起见，并非每个组件都在每个附图中标注，并且对本领域普通技术人员理解本发明的实施方式并非必要的组件也未有示出。在图中:

图1A-1B示出了根据本发明的某些实施方式，在氧化态LDL通过胞吞作用摄入溶酶体之后在正常细胞和恶性细胞中的溶酶体功能；

图2A-2B示出了在本发明的另一实施方式中自溶酶体(autolysosome)内被降解并释放到细胞质中的细胞组分，以与自噬诱导的细胞凋亡(autophagic-induced apoptosis)相对照；和

图3示出了在本发明的又一实施方式中用于确定免疫原性细胞死亡的预测性试验。

具体实施方式

本发明一般涉及使用免疫原性细胞死亡例如溶酶体诱导的免疫原性细胞死亡治疗癌症的系统和方法。本发明包括可以单独使用或一起使用的至少三个方面。第一方面涉及肿瘤的治疗准备，例如，通过停用和减少抗氧化剂，以及提供n-3至n-6和其他不饱和脂肪酸，和/或使用他汀类药物(statin)治疗受试者。第二个方面涉及通过包括CRISPR技术的基因操作恢复p53功能。第三个方面涉及构建抗体-酶复合物，其中抗体识别肿瘤而酶是氧化酶。可以向受试者给药该复合物。也可以提供受试者该酶的底物。这些和/或其他方面可以单独或一起使用，并且可以用于治疗和/或治愈癌症。在某些情况下，可以靶向溶酶体以诱导例如癌细胞中的细胞死亡。

作为非限制性实施例，本发明的某些实施方式一般涉及识别肿瘤的抗体，该抗体可以例如通过键(诸如共价键)与酶复合。该肿瘤可以是例如在患有结肠直肠癌的受试者中发现的肿瘤。在一些情况下，结肠直肠癌可能特别难以治疗，例如，一些治疗方式如检查点抑制剂(checkpoint inhibitor)可能通常无效。因此，这些癌症可使用例如本文所述的组合物进行治疗。例如，在一个实施方式中，本文所述的组合物可以例如通过本文所述的增加溶酶体膜的渗透性和/或渗漏和/或通过产生活性氧等产生抗原。这样，受试者的免疫系统(例如T细胞)可以通过识别受试者肿瘤内产生的抗原来识别肿瘤。因此，作为非限制性实施例，在一个实施方式中，该组合物包含能够靶向肿瘤(例如，结肠直肠癌)的抗epCAM抗体。该组合物还可以包含例如如本文所述的能够产生抗原的合适的氧化酶。例如，在一个实施方式中，该组合物包含黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase)。在一些情况下，抗epCAM抗体和黄嘌呤氧化酶例如通过巯基-巯基键共价连接在一起。作为另一实施例，该连接可以是胺-巯基键。作为又一实施例，该连接可以是羟基-巯基键。其他可能的连接包括本文描述的任何连接。此外，在某些情况下，可以使用额外的治疗步骤。例如，在一个实施方式中，例如除上述组合物外，还使用诸如PD-1抑制剂的检查点抑制剂。

然而，应当理解，除上述组合物之外，其他组合物也可以例如治疗本文所述的各种癌症。例如，在某些实施方式中，本发明一般涉及用于靶向例如肿瘤内溶酶体的系统和方法。在不希望受任何理论约束的条件下，据信可诱导溶酶体从而可渗透并漏出降解酶，从而可产生可被免疫系统识别的抗原。因此，例如，在某些情况下，靶向溶酶体可导致产生可被免疫系统识别的抗原，从而免疫系统可以识别该溶酶体和/或包含该溶酶体的肿瘤。以这种方式，不易被免疫系统识别的“冷”肿瘤可以通过产生抗原变成更易被免疫系统识别的“热”肿瘤。因此，至少在本发明的某些实施方式中，可以通过在溶酶体中引起渗漏而产生抗原以***。

然而，应当理解，上述讨论是本发明的一个实施方式的非限制性实施例，其可用于治疗患有癌症的受试者。例如，一些方面一般涉及肿瘤治疗的准备。例如，对受试者的预治疗可以使受试者为成功攻击溶酶体膜做好准备，从而有助于***。因此，在一些实施方式中，可以通过向受试者提供脂肪酸、他汀类药物等和/或通过从受试者中去除或减少抗氧化剂为肿瘤作准备。在不希望受任何理论束缚的条件下，据信如下所述，氧化过程可用于***。因此，抗氧化剂可以减弱或抑制上述肿瘤治疗，因此在某些情况下可以通过降低患者体内抗氧化剂的浓度以例如促进治疗。然而，还应该理解，在所有实施方式中，受试者的预治疗不是必需的，并且在某些情况下，可以不使用预治疗。

可以使用多种方法用于肿瘤的预治疗，包括例如停用和减少抗氧化剂、提供n-3至n-6和其他不饱和脂肪酸、和/或使用他汀类药物治疗受试者。在不希望受任何理论束缚的条件下，据信受试者的预治疗为成功攻击溶酶体膜做准备。可以降低受试者的抗氧化状态。喂给受试者包括n-3和n-6脂肪酸的不饱和脂肪酸和/或给予受试者他汀类药物。这些处理可以更有效的攻击溶酶体膜。然而，应当理解，并非在所有实施方式中都需要对肿瘤实施例如本文所述的预治疗。

在一组实施方式中，例如，向受试者给药不饱和脂肪酸，例如，喂给受试者不饱和脂肪酸。例如可以同时和/或依次向受试者给药一种或多种脂肪酸。典型地，不饱和脂肪酸可以在脂肪酸链中包含一个或多个双键和/或三键。在某些情况下，脂肪酸可以是相对短链脂肪酸。这种不饱和脂肪酸的非限制性示例包括C₃、C₄、C₅、C₆、C₇和C₈脂肪酸。这些脂肪酸可以包括单不饱和和/或多不饱和脂肪酸。具体的例子包括但不限于，CH₂＝CHCOOH，CH₃CH＝CHCOOH，CH₃CH₂CH＝CHCOOH，CH₃CH₂CH₂CH＝CHCOOH，CH₂＝CHCH₂COOH，CH₂＝CHCH₂CH₂COOH，CH₂＝CHCH₂CH₂CH₂COOH，CH₂＝CHCH₂CH＝CHCOOH，CH₂＝CHCH＝CHCOOH，等等。此外，在某些情况下，脂肪酸可以来自天然来源，如磷虾油、鱼油、红花油、大豆油、亚麻籽油、菜籽油、海藻油等。

脂肪酸可以多种剂量使用。在一些实施方式中，给予受试者(例如人)的脂肪酸剂量可以为至少0.1克、至少0.2克、至少0.3克、至少0.4克、至少0.5克、至少0.6克、至少0.7克、至少0.8克、至少0.9克、至少1克、至少2克、至少3克、至少4克、至少5克、至少6克，至少7克、至少8克、至少9克、至少10克、至少11克、至少12克、至少13克、至少14克或至少15克。在一些实施方式中，给予脂肪酸的剂量不超过15克、不超过14克、不超过13克、不超过12克、不超过11克、不超过10克，不超过9克，不超过8克，不超过7克，不超过6克，不超过5克，不超过4克，不超过3克，不超过2克，不超过1克，不超过0.9克，不超过0.8克，不超过0.7克，不超过0.6克，不超过0.5克，不超过0.4克，不超过0.3克，不超过0.2克，或不超过0.1克。在一些实施方式中，上述剂量的任何组合也是可以的，例如，剂量可以在1至15克之间，在1至10克之间，在5至10克之间，在0.5至1克之间，等等。

在一些实施方式中，可按以下剂量给予受试者(例如人)脂肪酸：至少1毫克/千克、至少2毫克/千克、至少3毫克/千克、至少5毫克/千克、至少10毫克/千克、至少20毫克/千克、至少30毫克/千克、至少50毫克/千克、至少100毫克/千克、至少200毫克/千克、至少300毫克/千克、至少500毫克/千克、至少1克/千克，或至少2毫克/千克。在某些情况下，给予脂肪酸的剂量可以为不超过2克/千克、不超过1克/千克、不超过500毫克/千克、不超过300毫克/千克、不超过200毫克/千克、不超过100毫克/千克、不超过50毫克/千克、不超过30毫克/千克、不超过20毫克/千克、不超过10毫克/千克、不超过5毫克/千克、不超过3毫克/千克、不超过2毫克/千克，或不超过1毫克/千克。在一些实施方式中，上述剂量的任何组合也是可以的，例如，剂量可以是1至2克/千克、500毫克/千克至1克/千克、400至800毫克/千克等。

在另一组实施方式中，可以通过向受试者给药例如除脂肪酸之外或代替脂肪酸的他汀类药物来为肿瘤作准备。他汀类药物，又称为HMG-CoA还原酶抑制剂，是一类降脂药物。他汀类药物的非限制性示例包括阿托伐他汀(atorvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)、普伐他汀(pravastatin)、瑞舒伐他汀(rosuvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)、美伐他汀(mevastatin)和辛伐他汀(simvastatin)。例如，可以对受试者同时和/或依次给药一种或多种他汀类药物。

可以使用广泛剂量范围的他汀类药物。例如，可按以下剂量给予受试者(例如人)他汀类药物：至少1毫克、至少2毫克、至少3毫克、至少5毫克、至少10毫克、至少20毫克、至少30毫克、至少40毫克、至少50毫克、至少60毫克、至少70毫克、至少80毫克、至少90毫克或至少100毫克。在某些情况下，给予他汀类药物的剂量可以不超过100毫克、不超过90毫克、不超过80毫克、不超过70毫克、不超过60毫克、不超过50毫克、不超过40毫克、不超过30毫克、不超过20毫克、不超过10毫克、不超过5毫克、不超过3毫克、不超过2毫克或不超过1毫克。在一些实施例中，上述剂量的任何组合也是可以的，例如，剂量可以是10至20毫克、20至40毫克、40至80毫克、5至10毫克等。

此外，在一些实施方式中，可按以下剂量给予受试者(例如人)他汀类药物：至少1毫克/千克、至少2毫克/千克、至少3毫克/千克、至少4毫克/千克、至少5毫克/千克、至少6毫克/千克、至少7毫克/千克、至少8毫克/千克、至少9毫克/千克、至少10毫克/千克、至少11毫克/千克、至少12毫克/千克、至少13毫克/千克、至少14毫克/千克，或至少15毫克/千克。在一些实施方式中，给予他汀类药物的剂量可以不超过15毫克/千克、不超过14毫克/千克、不超过13毫克/千克、不超过12毫克/千克、不超过11毫克/千克、不超过10毫克/千克、不超过9毫克/千克、不超过8毫克/千克、不超过7毫克/千克、不超过6毫克/千克、不超过5毫克/千克、不超过4毫克/千克、不超过3毫克/千克、不超过2毫克/千克，或不超过1毫克/千克。在一些实施例中，上述剂量的任何组合也是可以的，例如，剂量可以在1至15毫克/千克之间、1至10毫克/千克之间、5至10毫克/千克之间等。

根据某些实施方式，如果受试者正在服用抗氧化剂，可以从受试者中去除或减少抗氧化剂。例如，作为肿瘤治疗准备的一部分，可以完全拒给抗氧化剂，或者可以减少(例如在量和/或频次上)抗氧化剂剂量。抗氧化剂的非限制性示例包括β胡萝卜素、维生素A和维生素E。其他示例包括维生素C、谷胱甘肽(glutathione)、硫辛酸(lipoic acid)、尿酸和泛醇(ubiquinol)。

应当理解，在某些实施例中，可以独立使用，分开使用或一起使用上述药物中的任何一种或多种。例如，可以向受试者给药他汀类药物、脂肪酸或两者。如果两者都有，可以分别和/或一起给药。如果分开给药，这些药物可按任何合适的顺序同时和/或依次给药。可以使用任何合适的给药方法和给药方案，包括本文讨论的那些。另外，他汀类药物或脂肪酸或二者可以存在于合适的药学上可接受的载体中。此外，在一些实施方式中，无论是否给药他汀类药物和脂肪酸中的一者或两者，均可以从受试者中去除或减少抗氧化剂。

在一些方面，所述系统和方法可以与检查点抑制剂(如PD-1抑制剂和/或PD-L1抑制剂)组合以***。例如，在一些情况下，诸如本文所述的系统和方法可以导致溶酶体的渗漏和/或产生抗原从而可以被免疫系统识别。在不希望受任何理论束缚的情况下，据信抗原的产生，例如由溶酶体渗漏引起的抗原的产生，可以帮助免疫系统识别肿瘤，从而更有效地攻击肿瘤。在某些情况下，据信这种反应可以在检查点抑制剂(如PD-1抑制剂)的存在下增强，从而允许免疫系统更有效地攻击肿瘤。PD-1或PD-L1抑制剂的非限制性示例包括纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)、匹地利珠单抗(pidilizumab)、西米普利单抗(cemiplimab)等。可以使用的检查点抑制剂的其他示例包括但不限于伊匹单抗(ipilimumab)、奥法木单抗(ofatumumab)和利妥昔单抗(rituximab)。各种检查点抑制剂在市场上均有售。然而，还应该理解，在一些实施方式中，不使用检查点抑制剂。

可以按任何合适的量或浓度提供抑制剂(若存在)，并且可以与其他组合物(如本文所述的组合物)同时和/或依次给予。剂量的示例包括但不限于至少1毫克/千克、至少2毫克/千克、至少3毫克/千克、至少4毫克/千克、至少5毫克/千克、至少6毫克/千克、至少7毫克/千克、至少8毫克/千克、至少9毫克/千克、至少10毫克/千克等。在一些实施方式中，剂量可以不超过10毫克/千克、不超过9毫克/千克、不超过8毫克/千克、不超过7毫克/千克、不超过6毫克/千克、不超过5毫克/千克、不超过4毫克/千克、不超过3毫克/千克、不超过2毫克/千克或不超过1毫克/千克。在一些实施例中，上述剂量的任何组合也是可以的，例如，剂量可以在1至15毫克/千克之间、1至10毫克/千克之间、5至10毫克/千克之间等。

例如除抑制剂之外或替代抑制剂(例如检查点抑制剂)，也可以使用其他癌症免疫疗法。非限制性示例包括非特异性免疫疗法、适应性免疫疗法、单克隆抗体、CAR-T细胞疗法、癌症疫苗等。在一些情况下，癌症免疫疗法治疗可以使用和/或激活T细胞、NK细胞和/或巨噬细胞。上述疗法可以例如与这里描述的系统和方法结合使用。本领域普通技术人员熟悉用于产生单克隆抗体、鉴定T细胞等的系统和方法。

例如，在CAR-T疗法中，准备了由抗原结合和T细胞活化功能组成的受体。CAR-T细胞的一般前提是人工产生靶向癌细胞标记的T细胞。从受试者体内取出T细胞，对其进行基因改造以靶向癌细胞，然后将其放回受试者体内。CAR-T细胞在细胞外配体识别结构域和细胞内信号分子之间建立联系，进而激活T细胞。细胞外配体识别结构域可以是单链可变片段(scFv)。CAR-T细胞可以被编程为靶向存在于肿瘤表面的抗原。当与肿瘤上的抗原接触时，CAR-T细胞通过与肿瘤抗原结合而被激活。CAR-T细胞通过多种机制破坏癌细胞，例如广泛刺激细胞增殖，增加细胞对其他活细胞的毒性(即细胞毒性)，以及增加产生引起免疫系统中影响生物体中其他细胞的细胞分泌因子。该等因子包括细胞因子(cytokine)、白介素(interleukin)、干扰素(interferon)、生长因子等。

本发明的另一方面涉及通过基因操作(包括与CRISPR相关的技术)恢复p53功能，该基因操作可以独立实施，或者与肿瘤治疗准备结合实施，并且如上所述，在结合实施的情况下，基因操作与肿瘤治疗准备可以按任何合适的顺序同时和/或依次实施。在不希望受任何理论束缚的情况下，据信在许多癌症中，p53要么是无功能的，要么是功能减弱的。这在溶酶体膜的攻击机制中可能是重要的。通过基因方法(如CRISPR)恢复其功能可以提高攻击溶酶体膜的治疗能力。然而，如上所述，这并非在所有实施方式中都是必需的。

本发明的另一方面涉及诸如抗体-酶复合物的复合物。这种复合物可以与一个或多个上述方面结合使用，或者独立于这些方面使用。抗体可以是识别肿瘤的抗体。酶可以是氧化酶，或其他能够产生活性氧的酶。该复合物可以例如通过输液或(如本文所述的)其他给药技术向受试者给药。在某些情况下，也可以提供受试者酶的底物。在不希望受任何理论束缚的条件下，据信抗体有助于将复合物定位在肿瘤内或肿瘤附近。一旦被定位，可向受试者给药(例如输液)酶的底物，从而可引发一系列事件导致针对溶酶体膜的攻击、将溶酶体内含物释放到细胞中、以及通过细胞凋亡致使细胞死亡。因此，本发明的某些实施方式涉及溶酶体诱导的免疫原性细胞死亡。

此外，还应该理解，除了酶之外，可以使用其他治疗部分(therapeuticmoieties)。例如，可以使用抗体和药物的复合物，或者另一种靶向部分(moiety)和药物的复合物。在一组实施方式中，复合物可以是抗体-药物缀合物(或ADC)。

本领域普通技术人员了解抗体，包括那些能够靶向肿瘤的抗体。例如，在一组实施方式中，抗体可以是针对肿瘤抗原的抗体。肿瘤特异性抗原的例子包括ras和p53、CTAG1B或MAGEA1的产物。其他示例包括组织分化抗原、突变蛋白抗原、致癌病毒抗原、癌-睾丸抗原和血管或基质特异性抗原。其他示例包括癌胚抗原(oncofetal antigen)，如甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)。其他进一步示例包括针对CA-125、MUC-1、上皮肿瘤抗原(epithelialtumor antigen)、酪氨酸酶(tyrosinase)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)、上皮细胞粘附分子(epCAM)等的抗体。

抗体通常是基本上由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段编码的一种或多种多肽的蛋白质或糖蛋白。公知的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因，以及各种免疫球蛋白可变区基因。轻链分为κ或λ。重链分为γ、μ、α、δ或ε，它们又分别定义了免疫球蛋白的类别，即IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。已知典型的免疫球蛋白(抗体)结构单元包含四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链组成，每对具有一条“轻”链(约25kD)和一条“重”链(约50-70kD)。每条链的N-末端限定了主要负责抗原识别的约100至110个或更多氨基酸的可变区。术语可变轻链(VL)和可变重链(VH)分别指上述轻链和重链。抗体以完整的免疫球蛋白或以各种肽酶消化产生的许多特征明确的片段的形式存在。因此，例如，胃蛋白酶在铰链区中二硫键下方(即朝向Fc结构域)消化抗体以产生F(ab)’2，即Fab的二聚体，其本身是由二硫键连接到VH-CH1的轻链。可以在温和的条件下还原F(ab)’2以破坏铰链区中的二硫键，从而将(Fab’)2二聚体转化为Fab’单体。Fab’单体基本上是一个带有部分铰链区的Fab。尽管各种抗体片段是根据完整抗体的消化来定义的，但是这些片段也可以重新合成，例如，通过重组DNA方法、通过“噬菌体展示”方法等化学合成。抗体的示例包括单链抗体，例如其中可变重链和可变轻链连接在一起(直接或通过肽接头)形成连续多肽的单链Fv(scFv)抗体。在一个实施方式中，抗体是单克隆抗体。

抗体和酶可以(例如以共价的方式)连接或结合在一起。它们可以相互直接结合，或者通过一种或多种交联剂结合。非限制性示例包括戊二醛(glutaraldehyde)、NHS-酯(N-羟基琥珀酰亚胺)(NHS-esters(N-hydroxysuccinimide))(例如，二硫代双(琥珀酰亚胺基丙酸酯)(dithiobis(succinimidylpropionate))、二硫代双(磺基琥珀酰亚胺基丙酸酯)(dithiobis(sulfosuccinimidylpropionate))等)、PEG(聚乙二醇)基团、亚胺酸酯(imidoesters)(例如，二甲基己二亚胺酸酯(dimethyl adipimidate)、二甲基辛二亚胺酸酯(dimethyl suberimidate)、二甲基庚二亚胺酸酯(dimethyl pimelimidate)等)、马来酰亚胺(maleimides)、吡啶基(pyridyls)、碳二亚胺(carbodiimide)、异氰酸酯(isocyanate)等。抗体和酶可以通过任何合适的系统偶联，例如胺-胺、巯基-巯基、胺-巯基、羧基-胺、巯基-碳水化合物、羟基-巯基等。本领域普通技术人员熟悉蛋白质相互交联或结合的方法。

如上所述，抗体可以与酶连接。在一组实施方式中，酶可以是氧化酶或过氧化物酶。氧化酶通常是对氧化还原反应进行催化的酶，包括以氧(O₂)为电子受体的酶。氧气可以被还原成水(H₂O)、过氧化氢(H₂O₂)。氧化酶的非限制性示例包括葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase)、单胺氧化酶(monoamine oxidase)、细胞色素P450氧化酶(cytochrome P450oxidase)、NADPH氧化酶(NADPH oxidase)、黄嘌呤氧化酶、L-古洛糖酸内酯氧化酶(L-gulonolactone oxidase)、漆酶(laccase)、赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase)等。类似地，过氧化物酶是可以作用于底物如过氧化氢或脂质过氧化物的酶。过氧化物酶的非限制性示例包括辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase)、细胞色素c过氧化物酶(cytochrome cperoxidase)、抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidase)、氯过氧化物酶(chlorideperoxidase)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase)、卤素过氧化物酶(haloperoxidase)、乳过氧化物酶(lactorperoxidase)、锰过氧化物酶(manganeseperoxidase)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase)、甲状腺过氧化物酶(thyroidperoxidase)、钒溴过氧化物酶(vanadium boromoperoxidase)等。

在某些情况下，也可以向受试者给药酶的底物。底物和酶可以按任何合适的顺序给药，例如依次和/或同时给药。底物的非限制性示例包括用于黄嘌呤氧化酶的次黄嘌呤(hypoxanthine)或黄嘌呤，或用于葡萄糖氧化酶的葡萄糖。作为另外的示例，单胺氧化酶可以作用于针对单胺氧化酶的血清素(serotonin)、褪黑激素(melatonin)、去甲肾上腺素(norepinephrine)、肾上腺素(epinerphrine)、苯乙胺(phenethylamine)、苄胺(benzylamine)、多巴胺(dopamine)、酪胺(tyramine)、色胺(tryptamine)等；针对NADPH过氧化物酶的NADPH；针对抗坏血酸过氧化物酶的抗坏血酸；诸如此类。

在不希望受任何理论的束缚的条件下，据信氧化酶或过氧化物酶通过氧化其底物以产生活性氧(如超氧化物、过氧化物、羟基自由基等)起作用。因此，在一些实施方式中，可选地添加底物以促进这种反应。活性氧可以与肿瘤细胞的溶酶体相互作用，诱导溶酶体膜使其更具渗透性并渗漏出降解酶，从而可以导致细胞内的消化或其他反应。例如，活性氧如超氧化物可导致细胞组分如不饱和脂质的氧化，其可被胞吞并使溶酶体膜不稳定，并将溶酶体酶分散到整个细胞中，然后产生可被免疫系统识别的肿瘤特异性新抗原，和/或其可触发细胞凋亡或细胞死亡。因此，在一些实施方式中，这种活性氧可用于导致溶酶体诱导的免疫原性细胞死亡。因此，据信可靶向肿瘤细胞(例如，使用抗体)以递送能够产生活性氧的酶，从而导致溶酶体渗漏并最终导致肿瘤细胞死亡。另请参见下面的实施例一。

在一些情况下，通过准备肿瘤治疗，例如使用脂肪酸和/或他汀类药物，和/或通过从受试者中去除或减少抗氧化剂，可以促进上述酶。此外，在某些情况下，可以通过基因操作恢复p53功能。

此外，应当理解，在一些情况下，代替和/或除了产生活性氧的酶之外，还可以在复合物中使用药物。

可以使用任何合适的技术，包括本文所述的技术，将复合物给药给受试者，例如人。此外，可以使用多种剂量。例如，可按以下剂量给药复合物：至少10毫克、至少15毫克、至少20毫克、至少25毫克、至少30毫克、至少40毫克、至少50毫克、至少60毫克、至少70毫克、至少80毫克、至少90毫克、至少100毫克、至少200毫克、至少300毫克、至少500毫克、至少1000毫克、至少1500毫克、至少2000毫克、至少2500毫克、至少3000毫克、至少5000毫克等。在一些实施方式中，可按以下剂量给药复合物：不超过5000毫克、不超过3000毫克、不超过2500毫克、不超过2000毫克、不超过1500毫克、不超过1000毫克、不超过500毫克、不超过300毫克、不超过200毫克、不超过100毫克、不超过90毫克、不超过80毫克、不超过70毫克、不超过60毫克、不超过50毫克、不超过40毫克、不超过30毫克、不超过25毫克、不超过20毫克、不超过15毫克、不超过10毫克等。在一些实施方式中，上述剂量的任何组合也是可以的，例如，剂量可以是10至20毫克、50至100毫克、100至200毫克等。

此外，在一些实施方式中，可按以下剂量向受试者(例如人)给予复合物：至少1毫克/千克、至少2毫克/千克、至少3毫克/千克、至少4毫克/千克、至少5毫克/千克、至少6毫克/千克、至少7毫克/千克、至少8毫克/千克、至少9毫克/千克、至少10毫克/千克、至少11毫克/千克、至少12毫克/千克、至少13毫克/千克、至少14毫克/千克，或至少15毫克/千克。在一些实施方式中，可按以下剂量给予他汀类药物：不超过15毫克/千克、不超过14毫克/千克、不超过13毫克/千克、不超过12毫克/千克、不超过11毫克/千克、不超过10毫克/千克、不超过9毫克/千克、不超过8毫克/千克、不超过7毫克/千克、不超过6毫克/千克、不超过5毫克/千克、不超过4毫克/千克、不超过3毫克/千克、不超过2毫克/千克，或不超过1毫克/千克。在一些实施方式中，上述剂量的任何组合也是可以的，例如，剂量可以在1至15毫克/千克之间、1至10毫克/千克之间、5至10毫克/千克之间等。

在另一方面，本文所述的组合物可以单独和/或与辅因子、其他治疗剂等联合向受试者给药。例如，抗体-酶复合物(例如，包含氧化酶或其他能够产生活性氧的酶)可以单独给药，或者与底物(例如，本文所述的底物)如次黄嘌呤、黄嘌呤、葡萄糖等结合给药，和/或与脂肪酸、他汀类药物等结合给药。当给药时，组合物可按治疗有效的、药学上可接受的量作为药学上可接受的配方给药，例如(如下文所描述的)那些药学上可接受的载体。术语组合物(如本文所述的复合物)的“有效量”是指实现所需生物效果所必需或足够的量。例如，***的复合物的有效量可以是足以减小肿瘤大小的量。结合本文提供的教导，通过在各种活性组合物和权衡因素如效力、相对生物利用度、患者体重、不良副作用的严重程度和给药方式中进行选择，可以规划一种有效的预防或治疗方案，该方案不会引起显著的毒性，但对治疗特定受试者完全有效。任何特定应用的有效量可以根据诸如所治疗的疾病或病症、给药的特定组合物、受试者的个体大小、或疾病或病症的严重程度等因素而变化。本领域普通技术人员可以凭经验确定组合物的有效量，而不需要过多的实验。

术语“治疗”(“treat”,“treated”,“treating”)等在本文中使用时，是指向受试者给药可增加受试者对肿瘤恶化或进一步恶化的抵抗力的组合物，在受试者患上肿瘤后给药组合物以消除或至少控制肿瘤的恶化、和/或减缓肿瘤引起的症状的恶化或减轻该症状的严重性。当向受试者给药时，有效量可能取决于所治疗的特定肿瘤以及期望的结果。治疗有效剂量可以由本领域的普通技术人员例如使用诸如下文进一步描述的那些因素并且仅使用常规实验来确定。

当用于治疗时，可以通过任何递送组合物至肿瘤的方式(例如粘膜递送、全身递送等)向受试者给药有效量的组合物。本发明药物组合物的给药可以通过本领域技术人员已知的任何方式来完成。给药途径的例子包括但不限于口服、肠胃外、肌肉内、鼻内、舌下、气管内、吸入、眼部、***、静脉内、经皮和直肠。在某些情况下，使用肌肉内给药。在一组实施方式中，使用静脉内给药。

在向受试者给药组合物时，可以选择剂量、给药方案、给药途径等以影响这些组合物的已知活性。剂量可以基于实验模型的结果来估计，可选地与本文所述的组合物的试验结果相结合。根据给药方式，可适当调整剂量以达到所需的局部或全身药物水平。剂量可以为一天一次或多次给药。在某些情况下，也考虑每天多次给药以在受试者体内或肿瘤内达到合适的组合物全身水平。

向受试者给药组合物的剂量可以为使得治疗有效量的组合物到达受试者体内的肿瘤。在某些情况下，可以最大剂量给药，同时避免或最小化在受试者体内产生的任何潜在的有害副作用。组合物的实际给药剂量可取决于多种因素，例如肿瘤部位所需的最终浓度、向受试者给药的方法、组合物的功效、组合物在受试者体内的寿命、给药的时间、同时治疗的效果(例如在鸡尾酒疗法中)等。递送的剂量也可取决于受试者的相关状况，并且在某些情况下可以因受试者而异。例如，受试者的年龄、性别、体重、大小、环境、身体状况或当前健康状况也可以影响所需剂量和/或活性部位的组合物浓度。不同个体之间甚至同一个体在不同的日期可能会出现剂量差异。在某些情况下，使用最大剂量，即根据合理的医学判断的最高安全剂量。在某些情况下，剂型基本不会对受试者产生有害影响。

本文所述的向受试者递送的化合物的剂量可在每次给药约0.1微克至10毫克的范围内；这取决于应用，可每天、每周或每月以及其间的任何其他时间量给药。在一些情况下，每次给药的剂量范围为约10微克至5毫克，例如，约100微克至1毫克，间隔数天或数周给药2至4次。在一些实施方式中，剂量范围为每次给药1微克至10毫克，最典型的是每天或每周给药10微克至1毫克。其他合适的剂量已在上文详细描述。

该组合物可以在延长的时间内以多种剂量给药。对于本文所述的任何化合物，治疗有效量最初可以从动物模型中确定。可以根据所给药化合物的相对生物利用度和效力来调节给药剂量。普通技术人员完全有能力基于上述方法和本领域公知的其他方法调节剂量以获得最大功效。

本文公开的治疗方案可以施用于任何受试者，例如人或非人类动物，例如狗、猫、马、兔、牛、猪、羊、山羊、大鼠(例如褐家鼠(Rattus norvegicus))、小鼠(例如小家鼠(Musmusculus))、豚鼠、非人灵长类动物(例如猴子、黑猩猩、狒狒、猿、大猩猩等)，诸如此类。

在某些实施方式中，所述组合物可以给药于具有癌症家族史的受试者，或具有癌症遗传易感性的受试者。在其他实施方式中，组合物可以给药于已达到特定年龄的受试者，或更易得肿瘤的受试者。在其他实施方式中，将组合物给药于表现出癌症症状(例如，早期或晚期)的受试者。在其他实施方式中，组合物可以作为预防措施给药于受试者。在一些实施方式中，可以基于人口统计学或流行病学研究向受试者给药组合物，或者向特定领域或职业中的受试者给药组合物。可治的癌症的非限制性示例包括脑癌、胰腺癌、血液癌、黑色素瘤、多发性黑色素瘤、肺癌、乳腺癌、***癌、卵巢癌、结肠癌、结肠直肠癌、胶质母细胞瘤、胰腺癌和其他癌症。

本发明组合物的给药可以通过任何医学上可接受的使组合物到达其靶点(例如肿瘤)的方法来进行。当然，所选择的特定模式可以取决于诸如前面所述的因素，例如特定的组合物、受治对象状态的严重程度、治疗效果所需的剂量等。如本文所用，“医学上可接受的”治疗模式是指能够在受试者体内产生有效水平的组合物而不引起临床上不可接受的副作用的模式。

可以使用任何医学上可接受的方法向受试者给药组合物。根据待治疗的病症，可以局部(即，到特定区域、生理系统、组织、器官或细胞类型)或全身给药。例如，所述组合物可以通过口服、***、直肠、口腔、肺部、局部、鼻内、透皮、肠胃外注射或植入、通过外科手术给药或任何其他可进入肿瘤的给药方法给药。在一些情况下，例如，如果给药两种或多种组合物，可以使用一种以上的给药方法。

可以使用的肠胃外治疗方式的示例包括静脉内、皮内、皮下、腔内、肌肉内、腹膜内、硬膜外或鞘内。植入式治疗的示例包括任何可植入或可注射的药物递送系统。为便利受试者以及给药方案，在一些实施方式中可以使用口服给药。适于口服给药的组合物可以离散单位存在，例如硬胶囊或软胶囊、丸剂、扁囊剂、片剂、糖锭或锭剂。其他适用的口服组合物包括在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液，例如糖浆、酏剂或乳剂。在另一组实施例中，组合物可用于强化食物或饮料。

当需要全身给药时，可将组合物配制成通过注射实施肠胃外给药，例如通过推注(bolus injection)或连续输液。注射用配方可以单位剂型存在，例如安瓿或多剂量容器，并添加有防腐剂。该组合物可以采用在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳剂的形式，并且可以包含配方剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。

肠胃外给药的药物配方包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外，活性化合物的悬浮液在某些情况下可以制备成合适的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或载体包括但不限于脂肪油(如芝麻油)，或合成脂肪酸酯(如油酸乙酯(ethyl oleate)或甘油三酯(triglycerides))，或脂质体(liposomes)。水溶性注射悬浮液可以含有增加悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠(sodiumcarboxymethyl cellulose)、山梨醇(sorbitol)或葡聚糖(dextran)。可选地，悬浮液还可以包含合适的稳定剂或试剂从而提升化合物的溶解度以允许制备高浓度溶液。

除上文描述的配方之外，在一些实施方式中，组合物还可以配制成贮库制剂。在某些情况下，这种长效配方可以用合适的聚合物或疏水材料(例如，在可接受的油中的乳剂)或离子交换树脂配制，或者配制成微溶衍生物，例如微溶盐。

合适的液体药物制剂形式包括，例如，用于吸入的水溶液或盐水溶液形式、微胶囊化形式、包囊于脂质卷内的形式(encochleated)、涂在显微金颗粒上的形式、包含在脂质体中的形式、雾化形式、气雾剂形式、用于植入皮肤的小丸形式，或干燥到划入皮肤的尖锐物体上的形式。药物组合物还可以包括颗粒、粉末、片剂、包衣片剂、(微)胶囊、栓剂、糖浆剂、乳剂、悬浮液、乳膏剂、滴剂或活性化合物缓释制剂，在这些制剂中通常按上文所描述的方式使用赋形剂和添加剂和/或助剂，诸如崩解剂、粘合剂、包衣剂、溶胀剂、润滑剂、调味剂、甜味剂或增溶剂。

在本发明的某些实施方式中，如本文所述的组合物的给药方式可以设计成导致组合物在特定时间段内的连续暴露，例如数小时、数天、数周、数月或数年。这可以通过例如本文所述的方法之一重复给药组合物来实现，或者通过持续或控制释放递送系统来实现，其中组合物在延长的时间内递送而不重复给药。使用这种递送系统的组合物的给药方式可以是，例如，通过口服剂型、推注、透皮贴剂、皮下植入物或其他方法(例如本文所述的那些方法)。在某些情况下，可以需要保持组合物的浓度基本恒定。

适用于某些实施方式的其他递送系统包括时间释放、延迟释放、持续释放或控制释放递送系统。上述系统在许多情况下可以避免重复给药，为受试者提供更大的便利性。许多类型的释放递送系统是可用的并为本领域普通技术人员所熟知。它们包括，例如，基于聚合物的系统，例如聚乳酸和/或聚乙醇酸(polylactic and/or polyglycolic acids)、聚酐(polyanhydrides)、聚己内酯(polycaprolactones)和/或它们的组合；基于脂质的非聚合物系统，包括甾醇如胆固醇、胆固醇酯和脂肪酸或中性脂肪如甘油一酯、甘油二酯和甘油三酯；水凝胶释放系统；基于脂质体的系统；基于磷脂的系统；硅橡胶(silastic)系统；基于肽的系统；蜡涂层；使用常规粘合剂和赋形剂的压制片剂；或者部分融合的植入物。具体示例包括但不限于侵蚀系统，其中组合物包含在一种在基质中的形式，或扩散系统，其中活性成分控制释放速率。该配方可以例如微球、水凝胶、聚合物贮库、胆固醇基质或聚合物系统等形式存在。在一些实施方式中，该系统可允许组合物发生持续或受控释放，例如，通过控制配方的扩散或侵蚀/降解速率。此外，在一些实施方式中可以使用基于泵的硬件递送系统。

长期释放植入物可能特别适合在一些实施方式中使用。本文所述的“长期释放”是指构建和放置含有本文所述组合物的植入物，以提供治疗有效水平至少30或45天，或至少60或90天，或在某些情况下甚至更长。长期释放植入物是本领域普通技术人员众所周知的，并且包括本文所述的一些释放系统。

本文所述的组合物可以单独给药，或与其他治疗剂和/或组合物联合给药。例如，可与本文所述的各种组合物结合使用的抗癌剂和药物的非限制性示例包括但不限于以下抗癌剂和药物的任一种或多种：20-表-1，25二羟基维生素D3(20-epi-1,25dihydroxyvitamin D3)、4-依泊绵醇(4-ipomeanol)、5-乙炔基尿嘧啶(5-ethynyluracil)、9-二氢紫杉醇(9-dihydrotaxol)、阿比特龙(abiraterone)、阿西维辛(acivicin)、阿柔比星(aclarubicin)、阿可达佐盐酸盐(acodazole hydrochloride)、阿克罗宁(acronine)、酰基富烯(acylfulvene)、腺环戊醇(adecypenol)、阿多来新(adozelesin)、阿地白介素(aldesleukin)、全tk拮抗剂(all-tk antagonists)、六甲蜜胺(altretamine)、安莫司汀(ambamustine)、安波霉素(ambomycin)、阿美蒽醌醋酸盐(ametantrone acetate)、阿米达斯(amidox)、氨磷汀(amifostine)、氨鲁米特(aminoglutethimide)、氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那格雷(anagrelide)、阿那曲唑(anastrozole)、穿心莲内酯(andrographolide)、血管生成抑制剂、拮抗物D(antagonist D)、拮抗物G、安雷利克斯(antarelix)、氨茴霉素(anthramycin)、抗背部化形态形成蛋白-1(anti-dorsalizingmorphogenetic protein-1)、抗***、抗瘤酮(antineoplaston)、反义(antisense)寡核苷酸、阿非迪霉素甘氨酸盐(aphidicolin glycinate)、细胞凋亡基因调节剂(apoptosisgene modulators)、细胞凋亡调节因子(apoptosis regulators)、脱嘌呤酸(apurinicacid)、ARA-CDP-DL-PTBA、精氨酸脱胺酶(arginine deaminase)、天冬酰胺酶(asparaginase)、曲林菌素(asperlin)、阿苏拉科林(asulacrine)、阿他美坦(atamestane)、阿莫司汀(atrimustine)、阿新司他汀1(axinastatin 1)、阿新司他汀2、阿新司他汀3、阿扎胞苷(azacitidine)、阿扎司琼(azasetron)、阿扎托新(azatoxin)、重氮酪氨酸(azatyrosine)、阿扎替派(azetepa)、含氮霉素(azotomycin)、浆果赤霉素III衍生物(baccatin III derivatives)、巴览醇(balanol)、巴马司他(batimastat)、苯并二氢卟吩(benzochlorins)、苯佐替派(benzodepa)、苯甲酰星孢素(benzoylstaurosporine)、β内酰胺衍生物(beta lactam derivatives)、β-阿立辛(beta-alethine)、贝他霉素B(betaclamycin B)、桦木酸(betulinic acid)、BFGF抑制剂、比卡米特(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、比生群盐酸盐(bisantrene hydrochloride)、双氮丙啶基精胺(bisaziridinylspermine)、双奈法德(bisnafide)、双奈法德二甲磺酸盐(bisnafidedimesylate)、比司垂汀A(bistratene A)、比折来新(bizelesin)、博来霉素(bleomycin)、硫酸博来霉素(bleomycin sulfate)、BRC/ABL拮抗剂、布瑞福特(breflate)、布喹那钠(brequinar sodium)、溴匹立明(bropirimine)、布朵替坦(budotitane)、白消安(busulfan)、丁硫氨酸磺酰亚胺(buthionine sulfoximine)、放线菌素(cactinomycin)、卡泊三醇(calcipotriol)、卡弗他汀C(calphostin C)、卡普睾酮(calusterone)、喜树碱衍生物(camptothecin derivatives)、金丝雀痘IL-2(canarypox IL-2)、卡培他滨(capecitabine)、卡醋胺(caracemide)、卡贝替姆(carbetimer)、卡铂(carboplatin)、甲酰胺-氨基-***(carboxamide-amino-triazole)、羧基酰胺基***(carboxyamidotriazole)、carest M3、卡莫司汀(carmustine)、carn700、软骨源性抑制剂、卡米诺霉素盐酸盐(carubicin hydrochloride)、卡折来新(carzelesin)、酪蛋白激酶抑制剂、栗精胺(castanospermine)、天蚕素B(cecropin B)、西地芬戈(cedefingol)、西曲瑞克(cetrorelix)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、双氢叶吩(chlorins)、氯喹喔啉磺酰胺(chloroquinoxaline sulfonamide)、西卡前列素(cicaprost)、西罗霉素(cirolemycin)、顺铂(cisplatin)、顺-卟啉(cis-porphyrin)、克拉屈滨(cladribine)、克罗米芬类似物(clomifene analogs)、克霉唑(clotrimazole)、考里斯霉素A(collismycin A)、考里斯霉素B、考布他汀A4(combretastatin A4)、考布他汀类似物、考恩杰宁(conagenin)、克拉姆贝斯辛定816(crambescidin 816)、克立那托(crisnatol)、克立那托甲磺酸盐(crisnatolmesylate)、克拉特非辛8(cryptophycin8)、克拉特非辛A衍生物、库拉素A(curacin A)、环戊蒽醌(cyclopentanthraquinones)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、环普拉坦(cycloplatam)、塞培霉素(cypemycin)、阿糖胞苷(cytarabine)、阿糖胞苷烷磷酯(cytarabine ocfosfate)、溶细胞因子(cytolytic factor)、磷酸己烷雌酚(cytostatin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、达昔单抗(dacliximab)、更生霉素(dactinomycin)、柔红霉素盐酸盐(daunorubicin hydrochloride)、地西他滨(decitabine)、脱氢膜海鞘素B(dehydrodidemnin B)、德舍瑞林(deslorelin)、右异环磷酰胺(dexifosfamide)、右奥马铂(dexormaplatin)、右雷佐生(dexrazoxane)、右维拉帕米(dexverapamil)、地扎胍宁(dezaguanine)、地扎胍宁甲磺酸盐(dezaguanine mesylate)、亚丝醌(diaziquone)、膜海鞘素B(didemnin B)、地多西(didox)、二乙基去甲精胺(diethylnorspermine)、二氢-5-氮杂胞苷(dihydro-5-azacytidine)、二噁霉素(dioxamycin)、二苯基螺莫司汀(diphenylspiromustine)、多西他赛(docetaxel)、二十二烷醇(docosanol)、多拉司琼(dolasetron)、脱氧氟尿苷(doxifluridine)、阿霉素(doxorubicin)、阿霉素盐酸盐(doxorubicinhydrochloride)、屈洛昔芬(droloxifene)、屈洛昔芬枸橼酸(droloxifene citrate)、屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone propionate)、卓那比醇(dronabinol)、达佐霉素(duazomycin)、多卡霉素SA(duocarmycin SA)、依布硒(ebselen)、依考莫司汀(ecomustine)、依达曲沙(edatrexate)、依地福新(edelfosine)、依决洛单抗(edrecolomab)、依氟鸟氨酸(eflornithine)、盐酸依氟鸟氨酸(eflornithinehydrochloride)、榄香烯(elemene)、依沙芦星(elsamitrucin)、乙嘧替氟(emitefur)、恩洛铂(enloplatin)、恩普氨酯(enpromate)、依匹哌啶(epipropidine)、表柔比星(epirubicin)、表柔比星盐酸盐(epirubicin 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7)、洛铂(lobaplatin)、蚯蚓磷脂(lombricine)、洛美曲索(lometrexol)、洛美曲索钠(lometrexol sodium)、洛莫司汀(lomustine)、氯尼达明(lonidamine)、洛索蒽醌(losoxantrone)、洛索蒽醌盐酸盐(losoxantrone hydrochloride)、洛伐他汀、洛索立宾(loxoribine)、勒托替康(lurtotecan)、德卟啉镥(lutetium texaphyrin)、利斯菲林(lysofylline)、溶解肽(lyticpeptides)、美坦辛(maitansine)、甘露他汀A(mannostatin A)、马马司他(marimastat)、马索罗酚(masoprocol)、马斯平(maspin)、基质溶素抑制剂(matrilysin inhibitors)、基质金属蛋白酶抑制剂(matrix metalloproteinase inhibitors)、美登素(maytansine)、氮芥盐酸盐(mechlorethamine hydrochloride)、甲地孕酮醋酸盐(megestrol acetate)、美仑孕酮醋酸盐(melengestrol acetate)、米尔法兰(melphalan)、美诺立尔(menogaril)、麦尔巴隆(merbarone)、巯嘌呤(mercaptopurine)、美替瑞林(meterelin)、蛋氨酸酶(methioninase)、甲氨蝶呤(methotrexate)、甲氨蝶呤钠(methotrexate sodium)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、氯苯氨啶(metoprine)、美妥替哌(meturedepa)、微藻蛋白激酶C抑制剂、MIF抑制剂、米非司酮(mifepristone)、米替福新(miltefosine)、米立司亭(mirimostim)、失配(mismatched)双链核糖核酸、米汀多酰胺(mitindomide)、米托克星(mitocarcin)、丝裂红素(mitocromin)、米托洁林(mitogillin)、米托胍腙(mitoguazone)、二溴卫矛醇(mitolactol)、米托马星(mitomalcin)、丝裂霉素(mitomycin)、丝裂霉素类似物、米托萘胺(mitonafide)、米托司培(mitosper)、米托坦(mitotane)、迈托毒素成纤维细胞生长因子-肥皂草素(mitotoxin fibroblast growth factor-saporin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、米托蒽醌盐酸盐(mitoxantrone hydrochloride)、莫法罗汀(mofarotene)、莫拉司亭(molgramostim)、单克隆抗体、人绒毛膜***(humanchorionic gonadotrophin)、单磷酰基脂质A(monophosphoryl lipid a)/分支杆菌细胞壁sk(myobacterium cell wall SK)、莫哌达醇(mopidamol)、多重耐药基因抑制剂、基于多肿瘤抑制基因1的治疗、芥类抗癌剂(mustard anticancer agent)、美卡普罗B(mycaperoxideB)、分枝杆菌细胞壁提取物(mycobacterial cell wall extract)、霉酚酸(mycophenolicacid)、米亚普龙(myriaporone)、N-乙酰基地那林(n-acetyldinaline)、那法瑞林(nafarelin)、那瑞替喷(nagrestip)、纳洛酮/戊唑星(naloxone/pentazocine)、那帕维恩(napavin)、萘特非(naphterpin)、那托司亭(nartograstim)、奈达铂(nedaplatin)、奈莫柔比星(nemorubicin)、奈立膦酸(neridronic 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hydrochloride)、哌泊溴烷(pipobroman)、哌泊舒凡(piposulfan)、吡柔比星(pirarubicin)、吡曲克辛(piritrexim)、吡罗蒽醌盐酸盐(piroxantrone hydrochloride)、普来司汀A(placetinA)、普来司汀B、纤维蛋白溶酶原活化剂抑制剂(plasminogen activator inhibitor)、铂络合物(platinum complex)、铂化合物、铂-三胺络合物(platinum-triamine complex)、普卡霉素(plicamycin)、普洛美坦(plomestane)、卟吩姆钠(porfimer sodium)、泊非霉素(porfiromycin)、泼尼莫司汀(prednimustine)、普鲁苄肼盐酸盐(procarbazinehydrochloride)、丙基双-吖啶酮(propyl bis-acridone)、***素J2(prostaglandinJ2)、***癌抗雄激素、蛋白酶体抑制剂(proteasome inhibitors)、基于蛋白质A的免疫调节剂、蛋白质激酶C抑制剂、蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂(protein tyrosinephosphatase inhibitors)、嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂(purine nucleosidephosphorylase inhibitors)、嘌呤霉素(puromycin)、嘌呤霉素盐酸盐(puromycinhydrochloride)、红紫素类(purpurins)、吡唑呋喃菌素(pyrazofurin)、吡唑并吖啶(pyrazoloacridine)、吡哆醛化血红蛋白聚氧乙烯缀合物(pyridoxylated hemoglobinpolyoxyethylene conjugate)、RAF拮抗剂、雷替曲塞(raltitrexed)、雷莫司琼(ramosetron)、RAS法呢基蛋白质转移酶抑制剂(RAS farnesyl protein transferaseinhibitors)、RAS抑制剂、RAS-GAP抑制剂、脱甲基瑞替立汀(retelliptinedemethylated)、依替膦酸铼Re 186(rhenium RE 186etidronate)、根瘤菌素(rhizoxin)、利波腺苷(riboprine)、核糖酶(ribozymes)、RII视黄酰胺(RII retinamide)、RNA干扰、罗谷亚胺(rogletimide)、罗希吐碱(rohitukine)、罗莫肽(romurtide)、罗喹美克(roquinimex)、鲁滨吉隆B1(rubiginone B1)、鲁泊塞(ruboxyl)、沙芬戈(safingol)、沙芬戈盐酸盐(safingol hydrochloride)、圣特平(saintopin)、肌氨酸亚硝脲(sarcnu)、沙卡弗托A(sarcophytol A)、沙格司亭(sargramostim)、SDI 1模拟物(SDI 1mimetics)、司莫司汀(semustine)、衰老源性抑制剂1、有义(sense)寡核苷酸、信号转导抑制剂、信号转导调节剂、辛曲秦(simtrazene)、单链抗原结合蛋白、西佐喃(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、硼卡钠(sodium borocaptate)、苯基乙酸钠(sodium phenylacetate)、索佛罗(solverol)、生长调节素(somatomedin)结合蛋白、索纳明(sonermin)、斯帕磷酸钠(sparfosate sodium)、斯帕磷酸(sparfosic acid)、司帕霉素(sparsomycin)、斯皮卡霉素D(spicamycin D)、锗螺胺盐酸盐(spirogermanium hydrochloride)、螺莫司汀(spiromustine)、螺铂(spiroplatin)、斯兰罗皮汀(splenopentin)、海绵他汀1(spongistatin 1)、角鲨胺(squalamine)、干细胞抑制剂、干细胞***抑制剂、斯蒂匹酰胺(stipiamide)、链霉黑素(streptonigrin)、链脲菌素(streptozocin)、基质溶素抑制剂(stromelysin inhibitors)、索非罗新(sulfinosine)、磺氯苯脲(sulofenur)、超活性血管活性肠肽拮抗剂、素拉迪塔(suradista)、苏拉明(suramin)、苦马豆素(swainsonine)、合成糖胺聚糖、他利霉素(talisomycin)、他莫司汀(tallimustine)、他莫昔芬甲碘化物(tamoxifen methiodide)、牛磺莫司汀(tauromustine)、他扎罗汀(tazarotene)、替康兰钠(tecogalan sodium)、替加氟(tegafur)、碲哌喃鎓(tellurapyrylium)、端粒酶(telomerase)抑制剂、替洛蒽醌盐酸盐(teloxantrone hydrochloride)、替莫泊芬(temoporfin)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、替罗昔隆(teroxirone)、睾内酯(testolactone)、四氯十氧化物(tetrachlorodecaoxide)、替唑明(tetrazomine)、噻立拉斯汀(thaliblastine)、萨力多胺(thalidomide)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、噻可拉林(thiocoraline)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、噻替派(thiotepa)、促血小板生成素(thrombopoietin)、促血小板生成素模拟物、胸腺法新(thymalfasin)、促胸腺生成素受体激动剂(thymopoietin receptor agonist)、胸腺曲南(thymotrinan)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone)、噻唑羧胺核苷(tiazofurin)、乙基初卟啉锡(tin ethyl etiopurpurin)、替拉扎明(tirapazamine)、二氯二茂钛(titanocenedichloride)、拓扑替康盐酸盐(topotecan hydrochloride)、托普升替(topsentin)、托瑞米芬(toremifene)、枸橼酸托瑞米芬(toremifene citrate)、全能干细胞因子、转译抑制剂、曲托龙乙酸盐(trestolone acetate)、维甲酸(tretinoin)、三乙酰尿苷(triacetyluridine)、曲西立滨(triciribine)、曲西立滨磷酸盐(triciribinephosphate)、三甲曲沙(trimetrexate)、三甲曲沙葡糖醛酸盐(trimetrexateglucuronate)、曲普瑞林(triptorelin)、托烷司琼(tropisetron)、妥布氯唑盐酸盐(tubulozole hydrochloride)、妥罗雄脲(turosteride)、酪氨酸激酶(tyrosine kinase)抑制剂、替伏汀(tyrphostins)、UBC抑制剂、乌苯美司(ubenimex)、乌拉莫司汀(uracilmustard)、乌瑞替派(uredepa)、泌尿生殖窦源性(urogenital sinus-derived)生长抑制因子、尿激酶受体拮抗剂(urokinase receptor antagonists)、伐普肽(vapreotide)、凡瑞林B(variolin B)、维拉雷琐(velaresol)、凡拉明(veramine)、瓦尔丁(verdins)、维替泊芬(verteporfin)、长春碱硫酸盐(vinblastine sulfate)、长春新碱硫酸盐(vincristinesulfate)、长春地辛(vindesine)、长春地辛硫酸盐(vindesine sulfate)、长春匹定硫酸盐(vinepidine sulfate)、长春甘酯硫酸盐(vinglycinate sulfate)、长春罗新硫酸盐(vinleurosine sulfate)、长春瑞滨(vinorelbine)、长春瑞滨酒石酸盐(vinorelbinetartrate)、长春罗定硫酸盐(vinrosidine sulfate)、维萨汀(vinxaltine)、长春利定硫酸盐(vinzolidine sulfate)、维他辛(vitaxin)、伏罗唑(vorozole)、扎诺特隆(zanoterone)、折尼铂(zeniplatin)、亚苄维C(zilascorb)、净司他丁(zinostatin)、净司他丁斯酯(zinostatin stimalamer)、以及佐柔比星盐酸盐(zorubicin hydrochloride)，及其盐类、同系物、类似物、多晶型物、衍生物、对映异构体和/或功能等同的组合物。

在本发明的某些实施方式中，组合物可以与合适的药学上可接受的载体组合，例如，掺合到脂质体中，掺合到聚合物释放系统中，或例如以溶解形式或胶体形式悬浮在液体中，或以如本文所述的其他方法组合。一般而言，适合使用的药学上可接受的载体是本领域普通技术人员熟知的。如本文所用，“药学上可接受的载体”是指对待给药的活性化合物的生物活性的有效性不会构成严重干扰的无毒物质，但作为制剂成分使用以例如在使用前稳定或保护组合物内的活性化合物。该载体可以包括一种或多种相容的固体或液体填充剂、稀释剂或适于对人或其他脊椎动物给药的用胶囊包埋的物质。术语“载体”表示可以是天然的或合成的有机或无机成分，本发明的一种或多种活性化合物与该成分结合以促进应用。载体可以与本文所述的一种或多种组合物共混或以其他方式混合，和/或彼此混合，混合方式为其间的相互作用不会显著损害所需的药物功效。根据应用，载体可以是可溶的或不可溶的。众所周知的载体的示例包括但不限于玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、葡聚糖、尼龙、淀粉酶、天然和改性纤维素、聚丙烯酰胺、琼脂糖和磁铁矿。载体的性质可以是可溶的或不可溶的。

在一些实施方式中，本文所述的配方可在药学上可接受的溶液中给药，所述配方通常可以含有药学上可接受浓度的并可与活性化合物一起使用的盐、缓冲剂、防腐剂、相容载体、佐剂、乳化剂、稀释剂、赋形剂、螯合剂、填充剂(fillers)、干燥剂、抗氧化剂、抗菌剂、防腐剂、粘合剂、填充剂(bulking agents)、二氧化硅、增溶剂、稳定剂和任选的其他治疗成分。例如，如果配方是液体，载体可以是溶剂、部分溶剂或非溶剂，并且可以是水基或有机基的。合适的配方成分的非限制性示例包括稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、高岭土、磷酸钙或磷酸钠；造粒和崩解剂，如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，如淀粉、明胶或***胶；润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石；延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯；悬浮剂如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮；分散剂或湿润剂，如卵磷脂或其他天然磷脂；增稠剂，如十六醇或蜂蜡；缓冲剂，例如乙酸及其盐、柠檬酸及其盐、硼酸及其盐或磷酸及其盐；或防腐剂，如苯扎氯铵、氯丁醇、对羟基苯甲酸酯或硫柳汞。本发明的组合物可以配制成固体、半固体、液体或气体形式的制剂，例如片剂、胶囊、酏剂、粉末、颗粒、软膏、溶液、贮库、吸入剂或注射剂等。

合适的缓冲剂包括但不限于:乙酸和盐(1-2％w/v)；柠檬酸和盐(1-3％w/v)；硼酸和盐(0.5-2.5％w/v)；和磷酸以及盐(0.8-2％w/v)。合适的防腐剂包括但不限于苯扎氯铵(0.003-0.03％w/v)；氯丁醇(0.3-0.9％w/v)；对羟基苯甲酸酯(0.01-0.25％w/v)和硫柳汞(0.004-0.02％w/v)。

制剂包括无菌水溶液或非水溶液、悬浮液和乳剂，在某些实施方式中，它们可以与受试者的血液等渗。非水溶剂的非限制性示例是聚丙二醇、聚乙二醇、诸如橄榄油、芝麻油、椰子油、花生油(arachis oil)、花生油(peanut oil)的植物油、矿物油、可注射的有机酯如油酸乙酯，或包括合成单或双甘油酯的固定油。水性载体包括但不限于水、醇/水溶液、乳剂或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。肠胃外载体包括氯化钠溶液、1，3-丁二醇、林格氏葡萄糖(Ringer's dextrose)、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏或固定油。静脉载体包括液体和营养补充剂、电解质补充剂(例如基于林格氏葡萄糖的电解质补充剂)等。防腐剂和其他添加剂也可以存在于一些实施方式中，例如抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。

在一些实施方式中，本文所述的组合物可以与合适的可以构成一种或多种辅助成分的载体结合或接触。最终的组合物可以通过任何合适的技术来制备，例如，通过将组合物与液体载体、细碎的固体载体或两者均匀且紧密地结合，可选地与一种或多种如前所述的制剂成分结合，然后(如果需要)使产品成型。

本文所讨论的组合物以及可选的其他治疗剂可以本身(纯的)或以药学上可接受的盐的形式给药。当用于药物时，盐应该是药学上可接受的，但是非药学上可接受的盐也可以方便地用于制备其药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”包括本文所述的组合物的盐，其与例如酸或碱结合制备。药学上可接受的盐可以制成碱金属盐，如锂盐、钠盐或钾盐；或碱土金属盐，如铍盐、镁盐或钙盐。可用于形成盐的合适的碱的例子包括铵或矿物碱，例如氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁等。可用于形成盐的合适的酸的例子包括无机酸或矿物酸，例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、氢氟酸、硝酸、碳酸、单羟基碳酸、磷酸、单羟基磷酸、二氢磷酸、硫酸、单羟基硫酸、亚磷酸等。其他合适的酸包括有机酸，例如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、水杨酸、甲酸、萘-2-磺酸等。其他合适的酸还包括氨基酸，如精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等。此外，该盐可以制备成碱金属盐或碱土金属盐，如羧酸基团的钠盐、钾盐或钙盐。

另一方面，本发明还在试剂盒中提供上述任一组合物，可选地包括该组合物用于***的使用说明。在某些情况下，试剂盒可包括本文所述组合物使用的描述。该试剂盒还可以包括两种或多种组合物的组合的使用说明。还可以提供通过如前所述的任何合适的技术给药组合物的说明，例如，口服、静脉内给药、泵或可植入递送装置，或通过另一种已知的药物递送途径。

本文所述的试剂盒也可包含一个或多个容器，其可包含如前所述的组合物和其他成分。在某些情况下，试剂盒还可以包含用于混合、稀释和/或给药本发明组合物的说明。试剂盒还可以包括含有一种或多种溶剂、表面活性剂、防腐剂和/或稀释剂(例如，生理盐水(0.9％氯化钠)或5％葡萄糖)的其他容器，以及用于混合、稀释样品中的组分或用于将样品中的组分给药于需要该治疗的受试者的容器。

试剂盒的组合物可以以任何合适的形式提供，例如液体溶液或干燥粉末。当提供的组合物是干粉时，可以通过添加合适的溶剂来重构该组合物，在某些情况下也可以提供该合适的溶剂。在使用液体形式的组合物的实施方式中，液体形式可以是浓缩的或配好备用的。溶剂将取决于组合物和使用或给药方式。用于药物组合物的合适溶剂是众所周知的，例如如前所述，并且可以在文献中获得。溶剂将取决于组合物和使用或给药方式。

在又一方面，本发明包括一种或多种上述实施方式的宣传，例如，对通过体内或体外向受试者给药如本文所述的组合物进行肿瘤治疗或预防的宣传。如本文所用，“宣传”包括所有经营方法，包括教育方法、科学探究、学术研究、行业活动(包括制药行业活动)以及任何广告或其他促销活动(包括任何形式的书面、口头和电子通信)。

2017年11月16日提交的发明人为Fossel、发明名称为“一种溶酶体引发细胞凋亡的癌症治疗方法”的美国临时专利申请号62/587,207、以及2018年10月3日提交的发明人为Fossel、发明名称为“用于引发细胞凋亡以治疗癌症的系统和方法”的美国临时专利申请号62/740,477各自通过引用全部并入本文。

以下实施例旨在说明本发明的某些实施方式，但并非举例说明本发明的全部范围。

实施例一

产生新抗原是免疫原性细胞死亡(ICD)发展的一步。溶酶体含有各种降解酶，包括蛋白酶、糖苷酶和磷酸酶。如果释放到细胞质中，这些酶会降解胞内物质，并在此过程中可能产生新抗原。然后这些新抗原会被树突细胞和巨噬细胞吸收。这些树突细胞和巨噬细胞转移到***，新抗原在那里激活T细胞和B细胞，然后通过激活适应性免疫系统导致细胞死亡。

实施例二

在该预测性实施例中，提供了针对患有肿瘤的人类受试者的包含复合物和酶的组合物，其中该复合物包含识别肿瘤的抗体。在一些情况下，抗体是商业可获得的抗体，例如肿瘤识别抗体或单克隆抗体。

该酶是导致溶酶体渗漏的酶，其可以导致抗原的产生。在该实施例中，酶是产生活性氧的氧化酶，该氧化酶使溶酶体损伤或破裂，并导致其渗漏。氧化酶能够产生活性氧，如超氧化物。在该实施例中，氧化酶是黄嘌呤氧化酶。

黄嘌呤氧化酶通过共价键与抗体复合，并通过静脉或肌肉内向受试者给药。当抗体靶向肿瘤时，酶与溶酶体发生反应，造成损伤或破裂，从而产生抗原，增强受试者的免疫反应。通过这种方式，受试者的免疫系统能够更有效地靶向受试者的肿瘤。

实施例三

在该预测性实施例中，如实施例2中那样治疗人类受试者，但除此之外，该受试者还接受一种停用和/或减少抗氧化剂的方案，所述抗氧化剂可能会干扰复合物的作用。在一个实例中，向受试者提供不饱和脂肪酸，例如CH₂＝CHCOOH。脂肪酸可以抑制抗氧化剂的作用，导致复合物产生更大反应。

实施例四

在该预测性实施例中，像实施例2中那样治疗人类受试者，但除此之外，该受试者还接受他汀类药物，例如阿托伐他汀，其可以抑制抗氧化剂的作用，导致复合物产生更大反应。

实施例五

在该预测性实施例中，使用氨基-氨基交联剂制备epCAM识别抗体和黄嘌呤氧化酶之间的缀合物。MC26恶性细胞被抗epCAM识别，在96孔板中培养，并以10微克/毫升至100微克/毫升的合适浓度用缀合物处理。次黄嘌呤以1mM的浓度提供给细胞培养基。ICD有公认的特征。这些特征包括钙网蛋白(calreticulin)暴露、细胞外三磷酸腺苷(ATP)形成和HMGB1形成。在1小时、2小时、4小时、6小时、12小时和24小时测定这些特征。结果图如图3所示。钙网蛋白适当地早期形成，然后是三磷酸腺苷形成，再然后是HMGB1形成。上述实验表明这些细胞产生ICD标记，并有望在死亡过程中形成新抗原，激活T细胞并将T细胞导向肿瘤。

实施例六

一旦肿瘤在诱导ICD的过程中被杀死，携带肿瘤的动物就对该肿瘤“免疫”。因此，ICD保护动物免受将来肿瘤的侵害。

为证明这一点，在该实施例中，收集实施例2中杀死的肿瘤细胞片段，并注射到BALB/c小鼠的左侧。注射后8天，将活MC26细胞注射到每只小鼠的右侧。在120天内监测小鼠右侧的肿瘤生长。将用ICD死细胞处理的小鼠与注射盐水的小鼠进行比较。在120天时，92％的ICD死细胞处理小鼠是无瘤的，而只有7％的注射盐水的小鼠是无瘤的。

实施例七

已经表明，活性氧(ROS)可以引发导致溶酶体膜透化(LMP)的过程，从而导致溶酶体酶的释放和细胞凋亡引起的细胞死亡。活性氧的来源，特别是超氧化物，可以是细胞外的(包括在肿瘤微环境中)和/或细胞内。在溶酶体和由此产生的细胞凋亡方面，两者结果相同但机制有所不同。本实施例讨论了这两种机制及其相同结果，即原代细胞死亡(PCD)，其产生ICD所需的新抗原。

安慰剂对照研究已经表明，在高危人群中使用抗氧化剂，而非像预测的那样保护受试者免受癌症的影响，会显著提高癌症发病率。这是暗示活性氧与癌细胞死亡的重要线索。

恶性细胞会自发性发展，从而在毫无察觉的情况下发展成临床可检测的肿瘤。在肿瘤发展的早期，恶性细胞生长和杀死这些细胞的免疫监视能力之间存在平衡。添加抗氧化剂可能抑制免疫防御的一线，并使这种平衡向恶性细胞生长倾斜。抗氧化剂如维生素E、β-胡萝卜素和维生素A与自由基如活性氧相互作用并使其失活。这表明，活性氧(如免疫细胞产生的超氧化物)可以在肿瘤发展的自然防御中发挥重要作用。

诸如超氧化物的活性氧与各种物质反应，但重要的是它容易氧化多不饱和脂肪酸，包括低密度脂蛋白中所含的脂肪酸，生成氧化态低密度脂蛋白(oxLDL)。在患有乳腺癌、***癌、卵巢癌、结肠癌和其他癌症的受试者的血浆中发现oxLDL的水平显著高于对照组，这是由自由基(如超氧化物)氧化所致。这种oxLDL可以是免疫系统试图对抗肿瘤的结果。脂质(包括低密度脂蛋白的脂质)氧化的抑制可能是抗氧化剂治疗增加癌症发病率的主要原因。

最近观察到，用于直接杀死癌细胞的绝大多数药剂(电离辐射、大多数化疗剂和一些靶向疗法)通过产生活性氧直接或间接起作用。然而，从开始使用这些药剂治疗到细胞死亡(通常是通过细胞凋亡)的过程大都是不透明的。自发现以来一直在癌症治疗中默默发挥作用的溶酶体可以在这一途径中发挥作用。

胞吞作用介导的细胞凋亡。氧化态低密度脂蛋白(oxLDL)在受试者的血浆中循环，这些受试者患有各种癌症包括乳腺癌、卵巢癌、***癌和结肠直肠癌，以及诸如本文所述的其他癌症。该oxLDL可以是细胞外活性氧与循环LDL反应的结果。oxLDL可能是阻止抗氧化剂形成的原因。血浆中LDL的氧化可能与抵御恶性肿瘤的机体宿主反应有关。

oxLDL对恶性细胞具有细胞毒性，这种细胞毒性可能更偏向恶性细胞，而非非恶性细胞。已经表明，oxLDL被与LDL受体相关的胞吞作用所吸收。恶性细胞显示出比良性细胞具有更强的LDL受体活性，这可能是因为它们对脂质的需求更大。此外，已经表明他汀类药物增加了细胞对LDL的摄取，并且在某些情况下增加了细胞膜中LDL受体的活性，导致恶性细胞中oxLDL的细胞毒性增加。有临床报告显示他汀类药物治疗可改善各种癌症疗法的疗效。

通过使用荧光标记，已经证明了oxLDL定位在溶酶体中，并且在溶酶体定位之后，溶酶体膜变得可渗透并且释放溶酶体内含物以消化细胞内含物，从而导致细胞凋亡。这表现在图1的图示中，其就正常细胞功能中的溶酶体功能(图1A)和通过胞吞作用将oxLDL摄入溶酶体后的恶性细胞中的溶酶体功能(图1B)进行了比较。在图1A中，包括LDL在内的物质被摄入胞内体，然后胞内体与溶酶体融合，胞吞的内含物在溶酶体中降解，并作为废弃片段***到细胞质中。这里，溶酶体膜保持完整。

在恶性细胞中，已经证明oxLDL被LDL受体吸收并结合到溶酶体中。oxLDL及其伴随的脂质过氧化产物的掺合可能损害溶酶体膜的完整性，并且溶酶体的内含物在溶酶体膜透化(LMP)过程中在短时间内渗漏到细胞中。这些渗漏的内含物包括降解酶，该降解酶一旦在细胞质中释放，会消化细胞从而通过溶酶体介导的细胞凋亡导致细胞死亡。在该过程中，将形成各种组成的新的新抗原。该过程如图1B所示。这些细胞的电子显微照片显示了由其他途径导致的细胞凋亡的典型特征。

图1A示出了正常的溶酶体功能为通过胞吞作用降解诸如LDL的物质，降解物质并将降解物***到细胞质中。已经表明，氧化态LDL(oxLDL)通过位于溶酶体中的LDL受体被胞吞作用吸收(图1B)。用路西法黄(Lucifer Yellow)预先标记的溶酶体以及随时间推移的荧光跟踪显示溶酶体膜变得渗漏。电子显微镜显示，包含降解酶的溶酶体内含物被释放到细胞质中从而降解细胞内含物并诱导细胞凋亡。

自噬介导的细胞凋亡。包括蒽环类药物(anthracyclines)在内的许多化疗药物会引发细胞凋亡。据信p53通过三个步骤导致细胞凋亡:(1)氧化还原相关基因的转录诱导；(2)活性氧的形成；和(3)线粒体组分的氧化降解，最终导致细胞死亡。氧化降解可以不限于线粒体组分。具有不同作用模式的各种化疗药物(包括顺铂、阿霉素、多柔比星(adriamycin)、5-氟尿嘧啶、长春新碱和其他药物)可能需要功能性p53才能发挥活性。p53感知包括DNA在内的细胞组分的损伤，并激活上述导致活性氧产生和细胞凋亡的一系列事件。该等化疗药剂的疗效受损常常是由p53缺失或缺陷造成的。

在胞吞oxLDL诱导的细胞死亡中，oxLDL的组分破坏溶酶体膜的稳定性(LMP)，从而导致细胞凋亡(见图1B)。该等发现的原理可以更广泛地应用于开发用于解释各种疗法导致细胞凋亡的途径的机制。

吞噬体收集受损或衰竭的细胞组分，这些细胞组分被掺入到自噬体中。这些物质随后被掺入自噬溶酶体。在正常情况下，在自噬溶酶体中收集的这些组分已经降解且无害，其通常被释放到细胞质中。参见图2A。如果是化疗剂疗法、放射疗法及可能的其他疗法，据信吞噬体聚集的组分包括ROS反应与细胞组分(包括细胞膜和细胞器膜)的产物。然后，类似于LDL的氧化组分的这些ROS反应产物破坏自噬溶酶体膜的稳定性(LMP)，导致降解酶从溶酶体释放到细胞质中，从而导致自噬性溶酶体细胞凋亡。参见图2B。

图2A显示自噬体的正常功能。细胞内含物被带入溶酶体，溶酶体降解并循环利用这些物质。图2B显示了自噬诱导的细胞凋亡的机制。放疗和化疗均诱导ROS，该ROS与包括细胞器膜在内的细胞内含物发生反应。被氧化物质在溶酶体中的内化可以导致溶酶体膜破裂以及溶酶体降解酶渗漏到细胞质中，从而以类似于图1B所示的方式导致细胞凋亡。

关于多不饱和脂肪酸和他汀类药物对各种癌症治疗效果的临床前和临床报告进一步揭示了氧化态脂质的作用。增加循环脂蛋白和细胞膜中多不饱和脂质的含量可以有助于这些机制的有效运作。已经表明，接受各种癌症治疗的受试者的饮食中含有该等脂质会影响治疗的结果。在治疗前和治疗过程中，将这种脂质纳入饮食或作为补充剂是一件相对简单的事情。它们可以口服给药，从而增强它们在循环脂蛋白、细胞膜和细胞器膜中的存在。在细胞培养中，已表明用n-3脂肪酸处理细胞可增强多种化疗剂的活性。这些化疗剂包括5-氟尿嘧啶、阿霉素、多西他赛和顺铂。临床试验表明，在化疗期间口服补充n-3多不饱和脂肪酸提高了乳腺癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌和胰腺癌的化疗效果。例如，在环磷酰胺、5-氟尿嘧啶和表柔比星治疗期间大量掺合了n-3脂肪酸的乳腺癌患者疾病恶化更为缓慢，存活期也更长。

已证明，使用他汀类药物的预治疗或并行治疗能改善多种疗法的结果。例如，在接受5-氟尿嘧啶治疗的晚期肝细胞癌患者中，也接受普伐他汀治疗的患者的中位生存期为18个月，而对照组为9个月。

着眼于ROS诱导的细胞凋亡机制，细胞外(诸如胞吞摄取oxLDL)和细胞内(诸如假设的氧化碎片和受损亚细胞成分的自噬体集合)二者均导致细胞凋亡的细胞死亡，该细胞凋亡的细胞死亡可能会转化为推进癌症治疗的框架。对肿瘤细胞外微环境的关注产生的疗法可以增强在该微环境中活性氧的局部产生，从而导致胞吞作用引发的细胞凋亡。着眼于细胞内活性氧的产生(包括p53介导的活性氧的产生)，可以导致新的促进自噬细胞凋亡的疗法。通过上述途径，可以导致激活ICD的新抗原的潜在大量产生。

虽然本文已经描述和说明了本发明的几个实施例，但是本领域的普通技术人员将容易想到用于执行功能和/或获得本文描述的结果和/或一个或多个优点的各种其他装置和/或结构，并且这些变化和/或修改中的每一个都被认为在本发明的范围内。更一般地，本领域技术人员将容易理解，本文描述的所有参数、尺寸、材料和配置都是示例性的，并且实际的参数、尺寸、材料和/或配置将取决于使用本发明教导的具体应用。本领域的技术人员将认识到，或者仅使用常规实验就能够确定本文描述的本发明的具体实施例的许多等同物。因此，应当理解，前述实施例仅通过示例的方式呈现，并且在所附权利要求及其等同物的范围内，本发明可以以不同于具体描述和要求的方式实施。本发明针对本文描述的每个单独的特征、系统、制品、材料、套件和/或方法。此外，两个或多个这样的特征、系统、制品、材料、套件和/或方法的任何组合，如果这样的特征、系统、制品、材料、套件和/或方法不是相互不一致的，都包括在本发明的范围内。

在本说明书和通过引用并入的文件包含冲突和/或不一致的公开内容的情况下，应以本说明书为准。如果两个或多个通过引用并入的文件包含相互冲突和/或不一致的披露，则以较晚生效日期的文件为准。

在此定义和使用的所有定义应理解为以字典定义、通过引用并入的文件中的定义和/或定义术语的普通含义为准。

说明书和权利要求书中使用的不定冠词“一”和“一个”，除非明确指出相反的意思，否则应理解为“至少一个”。

说明书和权利要求书中使用的短语“和/或”应理解为表示如此结合的元件中的“一个或两个”，即在某些情况下结合存在而在其他情况下分离存在的元件。用“和/或”列出的多个元件应该以相同的方式解释，即这样结合的元件中的“一个或多个”。除了由“和/或”子句具体标识的元素之外，其他元素可以可选地存在，无论与那些具体标识的元素相关还是不相关。因此，作为非限制性示例，当结合诸如“包括”的开放式语言使用时，对“A和/或B”的引用在一个实施例中可以仅指A(可选地包括除了B之外的元素)；在另一实施例中，仅指B(可选地包括除了A之外的元素)；在又一个实施例中，指A和B两者(可选地包括其他元件)；等等。

如本说明书和权利要求书中所使用的，“或”应理解为具有与上述定义的“和/或”相同的含义。例如，当将列表中的项目隔开时，“或”或“和/或”应被解释为包含性的，即包括至少一个，但也包括多于一个的元素的数量或列表，以及可选地，附加的未列出的项目。只有明确表示相反的术语，例如“仅一个”或“恰好一个”，或者当在权利要求中使用时，“包括”将指包括多个或一系列元件中的恰好一个元件。一般来说，本文使用的术语“或”仅应被解释为表示排他性的替代物(即，“一个或另一，但不是两个”)，当前面有排他性的术语时，例如“任一”、“一个”、“仅一个”或“恰好一个”。

如在说明书和权利要求书中所使用的，参照一个或多个元素的列表的短语“至少一个”应该被理解为表示从元素列表中的任何一个或多个元素中选择的至少一个元素，但是不一定包括元素列表中具体列出的每个元素中的至少一个，并且不排除元素列表中的元素的任何组合。该定义还允许除了在短语“至少一个”所指的元素列表中具体标识的元素之外，元素可以可选地存在，无论与那些具体标识的元素相关还是不相关。因此，作为非限制性示例，在一个实施例中，“A和B中的至少一个”(或者等效地，“A或B中的至少一个”，或者等效地，“A和/或B中的至少一个”)可以指至少一个，可选地包括多于一个的A，不存在B(并且可选地包括除B之外的元素)；在另一实施方式中，指至少一个，可选地包括多于一个的B，不存在A(并且可选地包括除了A之外的元素)；在又一个实施方式中，至少一个，可选地包括多于一个的A，和至少一个，可选地包括多于一个的B(和可选地包括其他元素)；等等。

当词语“大约”在本文中用于指代一个数字时，应该理解，本发明的又一个实施例包括没有被词语“大约”的存在所修饰的数字。

还应当理解，除非明确指出相反的情况，否则在本文要求保护的包括多于一个步骤或动作的任何方法中，该方法的步骤或动作的顺序不必限于叙述该方法的步骤或动作的顺序。

在权利要求以及以上说明书中，所有过渡短语，例如“包括”、“包含”、“携带”、“具有”、“包含”、“涉及”、“持有”、“由”等，都应理解为开放式的，即意味着包括但不限于。根据美国专利局《专利审查程序手册》第2111.03节的规定，只有过渡短语“由……组成”和“基本上由……组成”应分别是封闭或半封闭的过渡短语。