阅读说明：本技术 一种芹菜黄精酵素压片糖果及其用途和制备方法 (Celery and sealwort enzyme tablet candy and application and preparation method thereof ) 是由 范代娣 张艳宜 段志广 马晓轩 于 2020-05-12 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种由芹菜黄精酵素压片糖果,其原料粉包括：芹菜粉、黄精提取物、菊粉、玉米淀粉,且它们的质量份数如下：相对于10重量份的玉米淀粉,使用芹菜粉50～80份,黄精提取物5～25份,菊粉10～15份；本发明还涉及该压片糖果用于降血压保健品的用途及其制备方法。(The invention relates to a celery and rhizoma polygonati enzyme tablet candy, which comprises the following raw material powder: celery powder, a sealwort extract, inulin and corn starch, and the mass parts of the components are as follows: 50-80 parts of celery powder, 5-25 parts of rhizoma polygonati extract and 10-15 parts of inulin are used relative to 10 parts of corn starch by weight; the invention also relates to application of the tabletting candy in health care products for reducing blood pressure and a preparation method thereof.)

一种芹菜黄精酵素压片糖果及其用途和制备方法

技术领域

本发明涉及食品工程领域，特别是保健品领域。具体地，本发明涉及一种用来辅助治疗高血压的芹菜黄精酵素压片糖果及其用途和制备方法。

背景技术

高血压是一种由遗传和环境等多种因素相互作用导致的、以体循环动脉血压持续升高为主要表征的疾病,其症状表现为头晕、头胀、头痛、眼睛胀痛、视物模糊、站立不稳等,在临床上一般的表现为收缩压(≥140mmHg)和(或)舒张压(≥90mmHg)增高，高血压是心脑血管、肾脏等多种疾病的危险因素,也是心脑血管病致死的主因，最常见的并发症是脑卒中、心脏病、肾脏病、外周血管病、眼底病等，其中70％的脑卒中和50％的心肌梗死与高血压有关。据2013年统计数据显示，全球每年由于高收缩压致死超过1000万人，致残人数达到了2亿，我国慢性病监测调查数据显示，2010年中国成年人高血压患病率高达33.5％，估计患病人数已达3.3亿。

黄精，味甘性平，中医研究表明黄精具有补气养阴、润肺、益肾的功效，黄精含有黄精多糖、甾体皂苷、黄酮类等活性成分。现代药理学研究表明，黄精提取物具有防治心血管疾病、抗衰老、抗肿瘤、降血糖等多种功效，对于高血压引起的头痛及头晕等症状有明显疗效，同时对于高血压病引起的心、脑、肾靶器官的损害有一定的逆转作用。

芹菜叶，味甘苦性凉，有清热止血、平肝祛风等功效。现代药理学研究表明，芹菜中的芹菜素具有明显的降压作用，但鲜芹菜中的功效成分主要为芹菜苷，且主要集中在芹菜叶中，研究表明芹菜叶中的芹菜苷含量为芹菜茎的8～10倍，许多学者研究发现芹菜苷在一定条件下能够转化为芹菜素，可以极大提高芹菜中芹菜素的含量，目前转化芹菜苷的方法主要为酸解法，关于微生物发酵转化芹菜苷的研究尚未见报道。

发明内容

本申请的压片糖果利用天然新鲜芹菜叶与黄精提取物混合经乳酸菌特有发酵技术转化精制而成，为纯天然绿色功能食品。

本申请提供了：

1.一种芹菜黄精酵素压片糖果，其由原料粉和辅料经压片操作制成，其中原料粉是由芹菜粉、黄精提取物、菊粉、玉米淀粉经乳酸菌发酵制得，而辅料是在进行压片操作时再掺入。

2.根据项1所述的芹菜黄精酵素压片糖果，其中，每克压片糖果中包含：

黄精多糖350～450μg，

黄精黄酮120～180μg，以及

芹菜素20～40mg。

3.根据项1所述的芹菜黄精酵素压片糖果，其中，在制备所述原料粉时，被乳酸菌利用进行发酵的芹菜粉、黄精提取物、菊粉、玉米淀粉的以质量份数表示的使用比例如下：相对于10份玉米淀粉，使用芹菜粉50～80份，黄精提取物5～25份，菊粉10～15份。

4.根据项1所述的芹菜黄精酵素压片糖果，其中，辅料包括磷酸氢钙和硬脂酸镁，且它们的以质量份数表示的用量为：

当使用100份原料粉时，使用

碳酸氢钙1～4份，

硬脂酸镁0.5～1.5份。

5.根据项2所述的芹菜黄精酵素压片糖果，其中，单位剂量的压片糖果的质量为150mg至450mg，优选300mg。

6.根据项5所述的芹菜黄精酵素压片糖果，所述压片糖果的剂型选自口服片、***片、咀嚼片、口崩片、泡腾片中的任一种，优选为口服片。

7.根据项1至6的任一项所述的芹菜黄精酵素压片糖果在制备用于预防或治疗高血压的保健品及功能性食品中的用途。

8.根据项5所述的用途，其中，作为高血压保健品服用，当使用300mg的压片糖果时其有效用量为9片/人/天。

9.根据项8所述的用途，其中，当使用300mg的压片糖果作为治疗高血压的保健品时，用法为早中晚各服用一次，每次的用量相同。

10.一种制造根据项1至4的任意一项所述的芹菜黄精酵素压片糖果的方法，其具体步骤为：

-获取芹菜粉的步骤；

-制备种子液的步骤：使用植物乳杆菌来制备种子液，植物乳杆菌的保藏号为CGMCCNO：8198；

-制备黄精提取物的步骤：通过萃取黄精饮片制备；

-接种、发酵步骤：将上述制得的芹菜粉、黄精提取物和菊粉、玉米淀粉混合均匀加入水中，接种种子液进行发酵；

-均质、过滤步骤：将发酵完成后所得发酵产物经高压均质处理后，过滤，除去菌体残渣不溶物，得滤液；

-浓缩、干燥步骤：将发酵滤液经减压浓缩为浓缩液，上述浓缩液经喷雾干燥后，得原料粉；

-压片步骤：压片得到芹菜黄精酵素压片糖果。

11.根据项10所述的压片糖果的制备方法，其中，在所述获取芹菜粉的步骤中依次进行：收获芹菜叶；去除杂质；对芹菜叶灭菌消毒；将芹菜叶切碎；将细碎的芹菜叶冷冻干燥后再粉碎成芹菜粉。

12.根据项10所述的压片糖果的制备方法，其中，在所述制备种子液的步骤中依次进行：取-80℃冻存的植物乳杆菌，以1％的接种量接入一定量的MRS培养基中，32℃厌氧培养箱中培养至活菌数达到10⁸cfu/mL，按此方法活化3代，得到乳酸菌种子液。

13.根据项10所述的压片糖果的制备方法，其中，在所述接种、发酵步骤中，发酵基质的以质量份数表示的使用比例如下：相对于10重量份的玉米淀粉，使用芹菜粉50～80份，黄精提取物5～25份，菊粉10～15份，然后加入5～8倍的水，混合均匀后按25～35mL种子液/L混合汁液的量接入上述乳酸菌种子液，36～38℃搅拌发酵3～5天。

14.根据项10所述的压片糖果的制备方法，其中，在所述均质、过滤步骤中，所述高压为40～50MPa高压。

15.根据项10所述的压片糖果的制备方法，其中，在所述浓缩、干燥步骤中，所述浓缩液的密度为相对密度1.05～1.15。

16.根据项10所述的压片糖果的制备方法，其中，在所述压片步骤中，将原料粉与磷酸氢钙、硬脂酸镁混合均匀后进行压片处理，压制成的成品压片的质量为150mg至450mg，优选300mg，。

17.根据项10所述的压片糖果的制备方法，其中，

在所述制备黄精提取物的步骤中，依下述醇提-水煮法制备：

-醇提步骤：按照1:8～10的料液比(黄精饮片：乙醇)进行回流提取，提取时间1.5～2小时，乙醇浓度70％～80％，重复提取2次，分别收集滤液及滤渣；

-水煮步骤：按照1:15～20的料液比(醇提滤渣：水)进行提取，提取时间1.5～2小时，重复提取2次，弃掉滤渣，与醇提滤液合并得到混合滤液；

-制成步骤：将混合滤液减压浓缩至相对密度1.05～1.15的浸膏，经喷雾干燥后得黄精提取物。

本发明的技术方案所取得的有益效果可以总结为：

1依本申请制成的压片糖果产品的核心优势在于，采用将芹菜粉、黄精提取物、菊粉、玉米淀粉和乳酸菌一起发酵制得原料粉，出乎预料地在产品中获得了含量极高的芹菜素，根据分析，芹菜素含量可以高达40mg/g。

2采用将芹菜粉、黄精提取物、菊粉、玉米淀粉和乳酸菌一起发酵制得原料粉，出乎预料地取得了微甜的极佳口感。这使得该压片糖果可以作为含片供人使用，拓展了其作为保健品的应用场景，从而广受消费者欢迎。

3.通过在压片前对所述原料粉掺入磷酸氢钙及硬脂酸镁，良好地控制了在压片工艺中原料粉的粘结现象以及最后制成的压片糖果的润滑度口感。

4.通过用本申请的醇提-水煮法制成黄精提取物以及通过乳酸发酵进一步增加有效成分含量，出乎预料地在成品中得到了浓度较高的黄精多糖含量(最高达450μg/g)以及黄精黄酮含量(最高达180μg/g)。

具体实施方式

需要说明的是，在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定成分。本领域技术人员应可以理解，技术人员可能会用不同名词来称呼同一个成分。本说明书及权利要求并不以名词的差异来作为区分成分的方式，而是以成分在功能上的差异来作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式，然所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。

本申请在第一方面提供了芹菜黄精酵素压片糖果产品。

在一个实施方式中，提供了一种由芹菜黄精酵素压片糖果，其原料粉包括：芹菜粉、黄精提取物、乳酸菌、菊粉、玉米淀粉，且它们的质量份数如下：相对于10重量份的玉米淀粉，使用芹菜粉50～80份，黄精提取物5～25份，乳酸菌2～5份、菊粉10～15份。

在又一实施方式中，该原料粉是由芹菜粉、黄精提取物和乳酸菌、菊粉、玉米淀粉发酵制得。

在再一实施方式中，为了由该原料粉制出压片糖果，所述原料粉可选还掺入磷酸氢钙及硬脂酸镁，且它们的质量份数如下：相对于100份原料粉，使用磷酸氢钙1～4份，硬脂酸镁0.5～1.5份。

具体地，以原料粉中各个成分的干重计算，芹菜粉可以为50份、55份、60份、65份、70份、75份、80份；而黄精提取物可以为5份、10份、15份、20份、25份；而乳酸菌可以为2份、3份、4份、5份；而菊粉可以为10份、11份、12份、13份、14份、15份。

在本说明书的上下文中，“菊粉”是一种植物中储备性多糖。其主要来源于植物，其来源目前已发现有36000多种，包括双子叶植物中的菊科、桔梗科、龙胆科等11个科及单子叶植物中的百合科、禾木科。例如，在菊芋、菊苣的块茎、天竺牡丹(大理菊)的块根、蓟的根中都含有丰富的菊粉，其中菊芋的菊粉含量是最高的。菊粉分子约由31个β-D-呋喃果糖和1～2个吡喃菊糖残基聚合而成，果糖残基之间能通过β-2，1-键连接。是由D-果糖经β(1→2)糖苷键链接而成的线性直链多糖，末端常带有一个葡萄糖残基，聚合度(DP)为2～60，其中平均聚合度DP≤9的菊粉又称为短链菊粉，从天然植物中提取的菊粉同时含有长链与短链。菊粉的分子式表示为GFn，其中G代表终端葡萄糖单位，F代表果糖分子，n代表果糖的单位数。在本申请的技术方案中，菊粉经过发酵分解为单糖，可以增加压片糖果的甜度并为乳酸菌发酵提供碳源，改善了压片糖果的口感

在本说明书的上下文中，“乳酸菌”(lactic acid bacteria，LAB)是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的统称。这类细菌在自然界分布极为广泛，具有丰富的物种多样性，至少包含18个属，共200多种。除极少数外，其绝大部分都是人体内必不可少的、且具有重要生理功能的菌群，广泛存在于人体的肠道中。在本申请的技术方案中，乳酸菌经过厌氧发酵中的生物转化过程，可以将芹菜叶中富含的芹菜苷(本质是糖苷类)转化为芹菜素(本质为黄酮类)，从而大大提高具有明显降血压效果的芹菜苷的含量。经过乳酸菌发酵，压片糖果原料粉的口味为微酸甜，本申请的方法巧妙地将乳酸发酵过程、多糖降解过程和芹菜素生物转化过程在一次发酵过程中结合在一起，出乎预料地高效完成了芹菜素生物转化这一核心步骤。

具体地，在压制出压片糖果之前，向原料粉中加入的磷酸氢钙可以为1份、2份、3份、4份；而加入的硬脂酸镁可以为0.5份、0.7份、0.9份、1.1份、1.3份、1.5份。

在本说明书的上下文中，“磷酸氢钙”即通常可以商业购得的、作为膨松剂使用的磷酸氢钙粉末形式的食品添加剂。在本申请的技术方案中，碳酸氢钙有两方面作用，一方面可以在保健品中作为钙补充剂使用，另一方面可以作为膨松剂使用以改善生产工艺中经常出现的“结块”现象。本申请的技术方案巧妙地利用了磷酸氢钙的多方面作用并摸索出了其适宜用量以达到经济性和效果的平衡。

在本说明书的上下文中，“硬脂酸镁”即通常可以商业购得的、作为润滑剂使用的硬脂酸镁粉末形式的食品添加剂。在本申请的技术方案中，在本申请的技术方案中，碳酸氢钙有两方面作用，一方面可以作为润滑剂使用改进压片工艺的流畅度，另一方面可以作为增稠剂使用以改善压片糖果的口感。本申请的技术方案巧妙地利用了硬脂酸镁的多方面作用并摸索出了其适宜用量以达到经济性和效果的平衡。

在一个实施方式中，单位剂量的压片糖果的质量为150mg至450mg，优选300mg；单位剂量的压片糖果中检出的黄精多糖含量为350～450μg/g，黄精黄酮含量为120～180μg/g，芹菜素含量为20～40mg/g。

具体地，单位剂量的压片糖果的质量可以为150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg；而单位剂量的压片糖果中检出的黄精多糖含量可以为350μg/g、370μg、390μg/g、410μg/g、430μg/g、450μg/g，而黄精黄酮的含量可以为120μg/g、130μg/g、140μg/g、150μg/g、160μg/g、170μg/g、180μg/g；而芹菜素的含量可以为20mg、25mg、30mg、35mg、40mg。

在本说明书的上下文中，“压片”是使用干法成型制成片剂的一种工艺，即将原料粉末用压片机压成片状或环状。一般地，按照制法的不同，片剂可以分为压制片和模印片两种。本文的中“压片”可以和“压制片”互换使用。对于“压片”，用于成型的原料粉末可以是完全干燥的或是有一定湿度的。成型时粉末置于模子中，通常加入一些成型剂，以便于脱模和调节孔结构。压片时，粉末之间主要靠范德华力结合。有水存在时，毛细管压力也会增加黏结能力。成型压力不太大时，孔结构和比表面发生变化。压力非常大时，除物理结构变化外，化学结构也有可能改变。在本说明书的上下文中，“压片糖果”是保健品厂家对片剂QS产品的说明，并不是一般大众认为的糖果。可以理解为，压片糖果只是厂商对保健品在外观上的一个描述。“压片糖果”可以经造粒、黏合、压制成型等步骤制造出来。在本申请的技术方案中，规定单位剂量的压片糖果的质量为150mg至450mg，优选300mg；这个范围的压片糖果的大小适合人类口服，无论是咀嚼、含服还是吞服都非常方便，有利于提高使用者的接受度。

本申请在第二方面提供了该压片糖果作为保健食品的用途。

在一个实施方式中，提供了芹菜黄精酵素压片糖果在制备用于预防或治疗高血压的保健品及功能性食品中的用途。其中，当使用300mg的压片糖果作为治疗高血压的保健品时，用量可以为3片、6片、9片、12片、15片/人/天；最优选9片/人/天。其中，当使用300mg的压片糖果作为治疗高血压的保健品时，用法为早中晚各服用一次，每次的用量相同。在本申请的技术方案中，该压片糖果可以为普通吞服使用的片剂、咀嚼片、含服使用的片剂、泡腾片等，其剂型可以为任何常用的药剂学剂型而并不做特殊限制，只要其使用剂量符合其作为保健食品的用途即可；但是，根据所制成的剂型不同，所使用的片剂辅料会有所不同，这些辅料符合一般药剂学领域的认识，并且可以通过商业途径购得。对于普通吞服使用的片剂，常用辅料通常由填充剂、粘合剂、润滑剂。对于咀嚼片，还另外地使用甜味剂。对于***片，还更另外地使用诸如薄荷的矫味剂。对于泡腾片，还更另外地使用崩解剂。在制为泡腾片时，需在产品外包装和说明书给予明显标识，以免使用者误将其直接口服。根据本申请的压片糖果配方，最佳的剂型是口服片。根据本申请压片糖果配方，针对降血压保健作用，除了公知的芹菜苷转化为芹菜素发挥降血压作用，还包括乳酸菌发酵过程带来的黄精多糖以及黄酮含量增加以起到协同增效作用。

本申请在第三方面提供了芹菜黄精酵素压片糖果的制造方法。

在一个实施方式中，提供了制造前述芹菜黄精酵素压片糖果的方法，其具体步骤为：

-获取芹菜粉的步骤：收获芹菜叶；去除杂质；对芹菜叶灭菌消毒；将芹菜叶切碎；将细碎的芹菜叶冷冻干燥后再粉碎成芹菜粉；

-制备种子液的步骤：取-80℃冻存的植物乳杆菌，其保藏号为CGMCC NO：8198，以0.5-1.5％的接种量接入一定量的MRS培养基中，32℃厌氧培养箱中培养至活菌数达到10⁸cfu/mL，按此方法活化至少3代，得到乳酸菌种子液；

-接种、发酵步骤：将上述制得的芹菜粉、黄精提取物、菊粉、玉米淀粉混合均匀，加入5～8倍的水，混合均匀后按25～35mL种子液/L混合汁液的量接入上述乳酸菌种子液，36～38℃下搅拌发酵3～5天；

-均质、过滤：将发酵完成后所得发酵产物经40～50MPa高压均质处理后，过滤，除去菌体残渣不溶物，得滤液；

-浓缩、喷雾干燥：将发酵滤液经减压浓缩为相对密度1.05～1.15的浓缩液，上述浓缩液经喷雾干燥后，得到原料粉；

-压片步骤：将原料粉与磷酸氢钙、硬脂酸镁混合均匀后，压片得到芹菜黄精酵素压片糖果。在压片步骤中，所压制成的成品压片的质量为150mg至450mg，优选300mg。

具体地，所述接种量可以为0.5％、0.7％、0.9％、1.1％、1.3％、1.5％，所述百分数均为质量百分比。

具体地，活化可以进行3代、4代、5代、6代，最优选3代。

具体地，发酵时的温度可以采用36℃、36.2℃、36.4℃、36.6℃、36.8℃、37℃、37.2℃、37.4℃、37.6℃、37.8℃、38℃。

具体地，在进行高压均质处理时，所使用的高压可以为40MPa、42MPa、44MPa、46MPa、48MPa、50MPa。

在本说明书的上下文中，CGMCC NO即指中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏编号。该中心位于中国科学院微生物研究所。具体地，本申请的技术方案采用了保藏号为CGMCC NO：8198的植物乳杆菌。“植物乳杆菌”是乳酸菌的一种，其最适生长温度为30～35℃,厌氧或兼性厌氧,菌种为直或弯的杆状，单个、有时成对或成链状，最适pH6.5左右，属于同型发酵乳酸菌。此菌与其他乳酸菌的区别在于此菌的活菌数比较高，能大量的产酸，使水中的PH值稳定不升高，而且其产出的酸性物质能降解重金属；由于此菌是厌氧细菌(兼性好氧)，在繁殖过程中能产出特有的乳酸杆菌素。“植物乳杆菌”可以用于保健品领域，其已知的作用如下：①有一定的免疫调节作用；②对致病菌有抑制作用；③降低血清胆固醇含量和预防心血管疾病；④维持肠道内菌群平衡；⑤促进营养物质吸收；⑥缓解乳糖不耐症；⑦抑制肿瘤细胞的形成等。在本申请的技术方案中，既利用了上述已知的乳酸菌保健作用，也利用了其在现有技术中未知的作用：本申请的方法巧妙地将乳酸发酵过程、多糖降解过程和芹菜素生物转化过程在一次发酵过程中结合在一起，出乎预料地高效完成了芹菜素生物转化这一核心步骤。在本说明书书的上下文中，“活化”是指菌种复苏。

在本说明书的上下文中，“36～38℃搅拌发酵3～5天”意指在低溶氧条件进行乳酸菌的发酵。所谓“低溶氧”是指水中的溶解氧低于5mg/L。一般地，溶解氧跟空气里氧的分压、大气压、水温和水质有密切的关系，在20℃、100kPa下，纯水里大约溶解氧9mg/L。有些有机化合物在喜氧菌作用下发生生物降解，要消耗水里的溶解氧。水温和搅拌是影响溶解氧的主要因素，水温愈低，水中溶解氧的含量愈高。溶解于水中的分子态氧称为溶解氧，通常记作DO，用每升水里氧气的毫克数表示。在本申请的技术方案中，也是主要使用调节发酵温度和搅拌速率来调整DO值。

在本说明书的上下文中，“喷雾干燥”意指于干燥室中将稀料经雾化后，在与热空气的接触中，水分迅速汽化，即得到干燥产品。该法能直接使溶液、乳浊液干燥成粉状或颗粒状制品，可省去蒸发、粉碎等工序。在本申请的技术方案中，压片所使用的“原料粉”是通过喷雾干燥法制得。通过此法得到的原料粉含水量极低，细度可以达到…非常适合于后续的压片工艺。

在本说明书的上下文中，“压片”是使用干法成型制成片剂的一种工艺，即将原料粉末用压片机压成片状或环状。一般地，按照制法的不同，片剂可以分为压制片和模印片两种。本文的中“压片”可以和“压制片”互换使用。对于“压片”，用于成型的原料粉末可以是完全干燥的或是有一定湿度的。成型时粉末置于模子中，通常加入一些成型剂，以便于脱模和调节孔结构。压片时，粉末之间主要靠范德华力结合。有水存在时，毛细管压力也会增加黏结能力。成型压力不太大时，孔结构和比表面发生变化。压力非常大时，除物理结构变化外，化学结构也有可能改变。在本申请的技术方案中，规定单位剂量的压片糖果的质量为150mg至450mg，优选300mg；这个范围的压片糖果的大小适合人类口服，无论是咀嚼、含服还是吞服都非常方便，有利于提高使用者的接受度，而且这个质量范围的压片容易制得。除了压片机使用的压力、压片糖果的质量，影响压片工艺的因素主要还有压片糖果所使用的辅料。对于本申请的技术方案中的最优选剂型为口服片。从有利于压片工艺以及使用者的服用时的口感角度出发，推荐使用的辅料诸如为磷酸氢钙、硬质酸镁、玉米淀粉以及微晶纤维素等。

在另一实施方式中，在接种、发酵步骤中使用的黄精提取物由下述采用黄精饮片为原料的醇提-水煮法制得：

-醇提步骤：按照1:8～10的料液比(黄精饮片：乙醇)进行回流提取，提取时间1.5～2小时，乙醇浓度70％～80％，重复提取至少2次，分别收集滤液及滤渣；

-水煮步骤：按照1:15～20的料液比(醇提滤渣：水)进行提取，提取时间1.5～2小时，重复提取2次，弃掉滤渣，与醇提滤液合并得到混合滤液；

-制成步骤：将混合滤液减压浓缩至相对密度1.05～1.15的浸膏，经喷雾干燥后得黄精提取物。

具体地，在醇提步骤中，料液比(黄精饮片：乙醇)可以为1:8、1:8.5、1:9、1:9.5、1:10；而提取时间可以为1.5小时、1.6小时、1.7小时、1.8小时、1.9小时、2小时；而乙醇浓度可以为70％、72％、74％、76％、78％、80％；提取次数可以为2次、3次、4次、5次，最优选2次。

具体地，在水煮步骤中，料液比(醇提滤渣：水)可以为1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20；而提取时间可以为1.5小时、1.6小时、1.7小时、1.8小时、1.9小时、2小时；提取次数可以为2次、3次、4次、5次，最优选2次。

在本说明书的上下文中，“醇提-水煮”法符合化工领域的一般定义，其本质为萃取过程。在本申请的技术方案中，“黄精提取物”的主要目标提取物为黄精多糖和黄精黄酮，它们都是偏极性的分子，因此采取乙醇和水作为萃取过程的液相介质是合适的，并且可以实现在较为温和的条件下在不破坏目标提取物化学结构的前提下将它们提取出(黄精黄酮主要溶于乙醇，而黄精多糖主要溶于水)。在本说明书的上下文中，“喷雾干燥”意指于干燥室中将稀料经雾化后，在与热空气的接触中，水分迅速汽化，即得到干燥产品。该法能直接使溶液、乳浊液干燥成粉状或颗粒状制品，可省去蒸发、粉碎等工序。在本申请的技术方案中，黄精提取物是由上述萃取工艺得到的滤液通过喷雾干燥法制得。通过此法得到的黄精提取物含水量极低，细度比较合理，非常适合于后续的接种、发酵工艺。

通过实施例可以对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。本申请的实施例部分由“制备例”和“测试例”组成。各个实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下面将详细地描述本发明的具体实施例。虽然在此显示了本发明的具体实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。

制备例1芹菜黄精酵素压片糖果的制备

根据本发明，所述的芹菜黄精酵素压片糖果中黄精提取物的制备，通过以下步骤实现：

1)取黄精饮片(购自安徽元亨农业有限责任公司，一级品)按料液比1:8的乙醇比例进行回流提取，提取时间1.5小时，乙醇浓度70％，重复提取2次，分别收集滤液及滤渣。

2)将上述1)中醇提后的滤渣与水按料液比1:15的比例进行提取，提取时间1.5小时，重复提取2次，弃掉滤渣，与步骤1)中的醇提滤液合并得到混合滤液。

3)将上述2)中的混合滤液减压浓缩至相对密度1.05的浸膏，经喷雾干燥后得黄精提取物。

根据本发明的芹菜黄精酵素压片糖果，所述的制备方法，通过以下步骤实现：

1)检验：收获新鲜芹菜叶，去除草杂，清水洗去污泥等杂质，检验合格后使用。

2)消毒：将清洗后的新鲜芹菜叶用紫外线杀菌消毒。

3)切碎：取消毒后的新鲜芹菜叶切碎至0.6cm宽。

4)干燥粉碎：将步骤3)中的切碎芹菜叶冷冻干燥后粉碎成芹菜叶粉。

5)乳酸菌种子液的制备：取-80℃冻存的植物乳杆菌CGMCC8198，以1％的接种量接入一定量的MRS培养基中，32℃厌氧培养箱中培养至活菌数达到10⁸cfu/mL，按此法活化3代，得到乳酸菌种子液。

6)接种、发酵：将步骤4)中的芹菜粉50份，与黄精提取物5份、菊粉10份、玉米淀粉8份混合均匀，加入5倍的水，混合均匀后按26mL种子液/L混合汁液的量接入步骤5)所得种子液，36.5℃搅拌发酵4天。

7)一次均质、过滤：将步骤6)中发酵完成后所得发酵产物经45MPa高压均质处理后，过滤，除去菌体残渣不溶物，得滤液。

8)浓缩、喷雾干燥：将步骤7中的发酵滤液经减压浓缩至相对密度1.05的浓缩液，上述浓缩液经喷雾干燥后，得到压片前原料粉。

9)将8)中的原料粉(设100份)与1.5份磷酸氢钙、0.6份硬脂酸镁混合均匀后，造粒、压片得到芹菜黄精酵素压片糖果1，用于后续的测试例。

上述步骤4)中芹菜叶粉经高效液相色谱法未检测到芹菜素。

上述步骤9)中芹菜黄精酵素压片糖果经高效液相色谱法检测芹菜素含量25mg/g，经苯酚-硫酸法检出黄精多糖含量370μg/g，经分光光度法检测出黄精总黄酮含量140μg/g。

在此，上述三种化学分析方法的方法条件为：

A)高效液相色谱法(用来检测芹菜素含量)

-色谱柱：Orca C18 5μm 250mm×4.6mm(内径)或相当者；

-流动相：甲醇+水(60+40)；

-流速：1mL/min；

-检测波长：268nm；

-进样量：10μL。

B)苯酚-硫酸法(用来检测黄精多糖含量)

标准曲线的绘制：取20mL刻度试管11支，从0－5分别编号，分别加入标准葡萄糖溶液0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8，其余部分用蒸馏水补齐(总量2mL)，然后按顺序向试管内加入1mL9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5－20s。加入5mL浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8mL，在恒温下放置30min。显色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。

样品测定：吸取0.5mL样品液于试管中(重复2次)，加蒸馏水1.5mL，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定吸光度值。由标准线性方程求出糖的量，再计算测试样品中糖含量。

C)分光光度法(用来检测黄精总黄酮含量)

标准曲线的绘制：准确吸取芦丁标准溶液0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00ml(相当于芦丁0、75、150、300、450、600ug)，移入10ml刻度比色管中，加入30％乙醇溶液至5ml，各加5％亚硝酸钠溶液0.3ml，振摇后放置5min，加入10％硝酸铝溶液0.3ml摇匀后放置6min，加1.0mol/L氢氧化钠溶液2ml，用30％乙醇定容至刻度。摇匀，放置15min，于510nm波长处测定吸光度，以零管为空白，以芦丁含量(ug)为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，计算相关系数(r)。

样品测定：根据样品中总黄酮含量高低，取适宜体积待测液，按标准曲线制备操作步骤于510nm处进行吸光度的测定(样液如有沉淀，应过滤后测定)。

结果计算：根据标准工作曲线，求出相当于样品吸光度的芦丁含量，按下式求出总黄酮含量：

式中：X-样品中总黄酮含量，g/100g或g/100ml；

m₁-根据标准曲线计算出待测液中黄酮的量，μg；

m-样品质量或样品体积，g或ml；

V₁-样品提取液测定用体积，ml；

V₂-样品提取液总体积，ml。

在下文中，对这三种化学物质的分析也是采用以上工作条件。

将未发酵的芹菜粉与未发酵的黄精提取物按照制备例1述及的比例混匀造粒压片，以得到制备例1-对照压片。

制备例2芹菜黄精酵素压片糖果的制备

根据本发明，所述的芹菜黄精酵素压片糖果中黄精提取物的制备，通过以下步骤实现：

1)取黄精饮片按料液比1:8的乙醇比例进行回流提取，提取时间2小时，乙醇浓度75％，重复提取2次，分别收集滤液及滤渣。

2)将上述1)中醇提后的滤渣与水按料液比1:18的比例进行提取，提取时间1.5小时，重复提取2次，弃掉滤渣，与步骤1)中的醇提滤液合并得到混合滤液。

3)将上述2)中的混合滤液减压浓缩至相对密度1.08的浸膏，经喷雾干燥后得黄精提取物。

根据本发明的芹菜黄精酵素压片糖果，所述的制备方法，通过以下步骤实现：

1)检验：收获新鲜芹菜叶，去除草杂，清水洗去污泥等杂质，检验合格后使用。

2)消毒：将清洗后的新鲜芹菜叶用紫外线杀菌消毒。

3)切碎：取消毒后的新鲜芹菜叶切碎至0.8cm宽。

4)干燥粉碎：将步骤3)中的切碎芹菜叶冷冻干燥后粉碎成芹菜叶粉。

5)乳酸菌种子液的制备：取-80℃冻存的植物乳杆菌CGMCC8198，以1％的接种量接入一定量的MRS培养基中，32℃厌氧培养箱中培养至活菌数达到10⁸cfu/mL，按此法活化3代，得到乳酸菌种子液。

6)接种、发酵：将步骤4)中的芹菜粉60份，与黄精提取物8份、菊粉12份、玉米淀粉10份混合均匀，加入6倍的水，混合均匀后按28mL种子液/L混合汁液的量接入步骤5)所得种子液，37℃搅拌发酵3天。

7)一次均质、过滤：将步骤6)中发酵完成后所得发酵产物经45MPa高压均质处理后，过滤，除去菌体残渣不溶物，得滤液。

8)浓缩、喷雾干燥：将步骤7中的发酵滤液经减压浓缩至相对密度1.1的浓缩液，上述浓缩液经喷雾干燥后，得到压片前原料粉。

9)将8)中的原料粉(设100份)与2份磷酸氢钙、0.8份硬脂酸镁混合均匀后，造粒、压片得到芹菜黄精酵素压片糖果2，用于后续的药效试验。

上述步骤4)中芹菜叶粉经高效液相色谱法未检测到芹菜素。

上述步骤9)中芹菜黄精酵素压片糖果经高效液相色谱法检测芹菜素含量30mg/g，经苯酚-硫酸法检出黄精多糖含量390μg/g，经分光光度法检测出黄精总黄酮含量150μg/g。

将未发酵的芹菜粉与未发酵的黄精提取物按照制备例2述及的比例混匀造粒压片，以得到制备例2-对照压片。

制备例3芹菜黄精酵素压片糖果的制备

根据本发明，所述的芹菜黄精酵素压片糖果中黄精提取物的制备，通过以下步骤实现：

1)取黄精饮片按料液比1:9的乙醇比例进行回流提取，提取时间2小时，乙醇浓度75％，重复提取2次，分别收集滤液及滤渣。

2)将上述1)中醇提后的滤渣与水按料液比1:20的比例进行提取，提取时间2小时，重复提取2次，弃掉滤渣，与步骤1)中的醇提滤液合并得到混合滤液。

3)将上述2)中的混合滤液减压浓缩至相对密度1.1的浸膏，经喷雾干燥后得黄精提取物。

根据本发明的芹菜黄精酵素压片糖果，所述的制备方法，通过以下步骤实现：

1)检验：收获新鲜芹菜叶，去除草杂，清水洗去污泥等杂质，检验合格后使用。

2)消毒：将清洗后的新鲜芹菜叶用紫外线杀菌消毒。

3)切碎：取消毒后的新鲜芹菜叶切碎至0.8cm宽。

4)干燥粉碎：将步骤3)中的切碎芹菜叶冷冻干燥后粉碎成芹菜叶粉。

5)乳酸菌种子液的制备：取-80℃冻存的植物乳杆菌CGMCC8198，以1％的接种量接入一定量的MRS培养基中，32℃厌氧培养箱中培养至活菌数达到10⁸cfu/mL，按此法活化3代，得到乳酸菌种子液。

6)接种、发酵：将步骤4)中的芹菜粉70份，与黄精提取物12份、菊粉13份、玉米淀粉12份混合均匀，加入8倍的水，混合均匀后按30mL种子液/L混合汁液的量接入步骤5)所得种子液，37℃搅拌发酵4天。

7)一次均质、过滤：将步骤6)中发酵完成后所得发酵产物经50MPa高压均质处理后，过滤，除去菌体残渣不溶物，得滤液。

8)浓缩、喷雾干燥：将步骤7中的发酵滤液经减压浓缩至相对密度1.05的浓缩液，上述浓缩液经喷雾干燥后，得到压片前原料粉。

9)将8)中的原料粉(设100份)与3份磷酸氢钙、1份硬脂酸镁混合均匀后，造粒、压片得到芹菜黄精酵素压片糖果3，用于后续的药效试验。

上述步骤4)中芹菜叶粉经高效液相色谱法未检测到芹菜素。

上述步骤9)中芹菜黄精酵素压片糖果经高效液相色谱法检测芹菜素含量35mg/g，经苯酚-硫酸法检出黄精多糖含量400μg/g，经分光光度法检测出黄精总黄酮含量145μg/g。

将未发酵的芹菜粉与未发酵的黄精提取物按照制备例3述及的比例混匀造粒压片，以得到制备例3-对照压片。

将芹菜粉单独按照制备例3述及的比例混匀造粒压片，以得到制备例3-1芹菜单独发酵压片；将黄精提取物单独按照制备例3述及的比例混匀造粒压片，以得到制备例3-2黄精单独发酵压片。

制备例4芹菜黄精酵素压片糖果的制备

根据本发明，所述的芹菜黄精酵素压片糖果中黄精提取物的制备，通过以下步骤实现：

1)取黄精饮片按料液比1:9的乙醇比例进行回流提取，提取时间1.5小时，乙醇浓度80％，重复提取2次，分别收集滤液及滤渣。

2)将上述1)中醇提后的滤渣与水按料液比1:16的比例进行提取，提取时间1.5小时，重复提取2次，弃掉滤渣，与步骤1)中的醇提滤液合并得到混合滤液。

3)将上述2)中的混合滤液减压浓缩至相对密度1.08的浸膏，经喷雾干燥后得黄精提取物。

根据本发明的芹菜黄精酵素压片糖果，所述的制备方法，通过以下步骤实现：

1)检验：收获新鲜芹菜叶，去除草杂，清水洗去污泥等杂质，检验合格后使用。

2)消毒：将清洗后的新鲜芹菜叶用紫外线杀菌消毒。

3)切碎：取消毒后的新鲜芹菜叶切碎至1cm宽。

4)干燥粉碎：将步骤3)中的切碎芹菜叶冷冻干燥后粉碎成芹菜叶粉。

5)乳酸菌种子液的制备：取-80℃冻存的植物乳杆菌CGMCC8198，以1％的接种量接入一定量的MRS培养基中，32℃厌氧培养箱中培养至活菌数达到10⁸cfu/mL，按此法活化3代，得到乳酸菌种子液。

6)接种、发酵：将步骤4)中的芹菜粉80份，与黄精提取物18份、菊粉15份、玉米淀粉15份混合均匀，加入6倍的水，混合均匀后按32mL种子液/L混合汁液的量接入步骤5)所得种子液，38℃搅拌发酵5天。

7)一次均质、过滤：将步骤6)中发酵完成后所得发酵产物经45MPa高压均质处理后，过滤，除去菌体残渣不溶物，得滤液。

8)浓缩、喷雾干燥：将步骤7中的发酵滤液经减压浓缩至相对密度1.1的浓缩液，上述浓缩液经喷雾干燥后，得到压片前原料粉。

9)将8)中的原料粉(设100份)与4份磷酸氢钙、1份硬脂酸镁混合均匀后，造粒、压片得到芹菜黄精酵素压片糖果4，用于后续的药效试验。

上述步骤4)中芹菜叶粉经高效液相色谱法未检测到芹菜素。

上述步骤9)中芹菜黄精酵素压片糖果经高效液相色谱法检测芹菜素含量35mg/g，经苯酚-硫酸法检出黄精多糖含量420μg/g，经分光光度法检测出黄精总黄酮含量155μg/g。

将未发酵的芹菜粉与未发酵的黄精提取物按照制备例4述及的比例混匀造粒压片，以得到制备例4-对照压片。

将芹菜粉单独按照制备例4述及的比例混匀造粒压片，以得到制备例4-1芹菜单独发酵压片；将黄精提取物单独按照制备例3述及的比例混匀造粒压片，以得到制备例4-2黄精单独发酵压片。

制备例5芹菜黄精酵素压片糖果的制备

根据本发明，所述的芹菜黄精酵素压片糖果中黄精提取物的制备，通过以下步骤实现：

1)取黄精饮片按料液比1:10的乙醇比例进行回流提取，提取时间2小时，乙醇浓度75％，重复提取2次，分别收集滤液及滤渣。

2)将上述1)中醇提后的滤渣与水按料液比1:20的比例进行提取，提取时间1.5小时，重复提取2次，弃掉滤渣，与步骤1)中的醇提滤液合并得到混合滤液。

3)将上述2)中的混合滤液减压浓缩至相对密度1.15的浸膏，经喷雾干燥后得黄精提取物。

根据本发明的芹菜黄精酵素压片糖果，所述的制备方法，通过以下步骤实现：

1)检验：收获新鲜芹菜叶，去除草杂，清水洗去污泥等杂质，检验合格后使用。

2)消毒：将清洗后的新鲜芹菜叶用紫外线杀菌消毒。

3)切碎：取消毒后的新鲜芹菜叶切碎至0.8cm宽。

4)干燥粉碎：将步骤3)中的切碎芹菜叶冷冻干燥后粉碎成芹菜叶粉。

5)乳酸菌种子液的制备：取-80℃冻存的植物乳杆菌CGMCC8198，以1％的接种量接入一定量的MRS培养基中，32℃厌氧培养箱中培养至活菌数达到10⁸cfu/mL，按此法活化3代，得到乳酸菌种子液。

6)接种、发酵：将步骤4)中的芹菜粉70份，与黄精提取物15份、菊粉15份、玉米淀粉10份混合均匀，加入8倍的水，混合均匀后按35mL种子液/L混合汁液的量接入步骤5)所得种子液，37℃搅拌发酵5天。

7)一次均质、过滤：将步骤6)中发酵完成后所得发酵产物经50MPa高压均质处理后，过滤，除去菌体残渣不溶物，得滤液。

8)浓缩、喷雾干燥：将步骤7中的发酵滤液经减压浓缩至相对密度1.1的浓缩液，上述浓缩液经喷雾干燥后，得到压片前原料粉。

9)将8)中的原料粉(设100份)与3份磷酸氢钙、1份硬脂酸镁混合均匀后，造粒、压片得到芹菜黄精酵素压片糖果5，用于后续的药效试验。

上述步骤4)中芹菜叶粉经高效液相色谱法未检测到芹菜素。

上述步骤9)中芹菜黄精酵素压片糖果经高效液相色谱法检测芹菜素含量40mg/g，经苯酚-硫酸法检出黄精多糖含量440μg/g，经分光光度法检测出黄精总黄酮含量175μg/g。

将未发酵的芹菜粉与未发酵的黄精提取物按照制备例5述及的比例混匀造粒压片，以得到制备例5-对照压片。

制备例1-5的制备条件和分析结果在下表中列出。

表1制备例1-5的条件和化学分析结果总结

测试例1芹菜黄精酵素压片糖果的服用试验

将实施例1～5得到芹菜黄精酵素压片糖果进行服用试验，将未发酵的芹菜粉与未发酵的黄精提取物按照各实施例比例混匀造粒压片得到对应对照压片，共征集300名高血压(高压≤160mmHg)志愿者，平均分为10组，试用量9片/人/天，服用周期30天。

服用试验结果统计如下：

试验开始前，患者服用常规降压药每日2次，早晚各一次，能够控制血压在理想范围。试验开始的10天之内，本发明产品每天早、中、晚分三次食用，第11天开始，常规降压药早晨正常服用，晚上减少1片，本发明产品继续每日三次服用。分别于第2周末、第3周末、第4周末测量血压控制情况，血压控制在理想范围判定为有效，结果记录于表2。

表2芹菜黄精酵素压片糖果的服用试验结果

表2表明，本产品具有辅助降血压效果，合理使用本产品能减少化学降压药的使用量，本产品经过特有发酵技术转化，其降压效果显著优于发酵前。

另外，针对制备例3、4，分别设置芹菜和黄精单独发酵组，即一组只用芹菜发酵(3-1、4-1)，另一组只用黄精发酵(3-2、4-2)，其余物料按对应实施例比例混匀造粒压片得到对照压片，评价二者是否有协同增效作用。共征集180名高血压(高压≤160mmHg)志愿者，平均分为6组，试用量9片/人/天，试用周期30天。

试用结果统计如下：

试验开始前，患者服用常规降压药每日2次，早晚各一次，能够控制血压在理想范围。试验开始的10天之内，本发明产品每天早、中、晚分三次食用，第11天开始，常规降压药早晨正常服用，晚上减少1片，本发明产品继续每日三次服用。分别于第2周末、第3周末、第4周末测量血压控制情况，血压控制在理想范围判定为有效，同时分别计算芹菜和黄精两种原料组合发酵的相互作用指数CI＝AB/(A×B)，T为每组的总例数，C为每组试用不同时间段的有效例数，AB为两种原料组合发酵联用的(T-C)/T值，A、B为芹菜和黄精单独发酵作用组的(T-C)/T值。CI＜1时，两种原料组合发酵有协同作用，CI≤0.7时，协同作用非常显著，结果记于表3。

表3芹菜黄精酵素压片糖果的试验结果

由表3可知，芹菜和黄精二者合用降压效果均优于单独作用，CI指数显示二者联用具有明显的协同增效作用。

测试例2芹菜黄精酵素压片糖果服用试验

将制备例1～5得到芹菜黄精酵素压片糖果进行服用试验，同时将未发酵的芹菜粉与未发酵的黄精提取物按照各实施例比例混匀造粒压片得到对应对照压片，共征集300名高血压(160mmHg≤高压≤190mmHg)志愿者，且伴有头疼头晕等并发症状，平均分为10组，试用量9片/人/天，服用周期30天。

服用试验结果统计如下：试验开始前，患者服用常规降压药每日2次，早晚各一次，能够控制血压在理想范围。试验开始的10天之内，本发明产品每天早、中、晚分三次食用，第11天开始，常规降压药早晨正常服用，晚上减少1片，本发明产品继续每日三次服用。分别于第2周末、第3周末、第4周末测量血压控制情况，血压控制在理想范围且头疼头晕症状减轻判定为有效，结果记录于表4。

表4芹菜黄精酵素压片糖果的服用试验结果

表4表明，本产品具有辅助降血压效果，并能同时减轻高血压引起的头疼头晕等症状，经特有发酵技术转化后，其治疗效果显著优于发酵前，因此，合理使用本产品能减少化学降压药的使用量。

另外，针对制备例3、4，分别设置芹菜和黄精单独发酵组，即一组仅用芹菜发酵(3-1、4-1)，另一组仅用黄精发酵(3-2、4-2)，其余物料按对应实施例比例混匀造粒压片得到对照压片，评价二者是否有协同增效作用。共征集180名高血压(160mmHg≤高压≤190mmHg)志愿者，且伴有头疼头晕等并发症状，平均分为6组，试用量9片/人/天，试用周期30天。

试用结果统计如下：

试验开始前，患者服用常规降压药每日2次，早晚各一次，能够控制血压在理想范围。试验开始的10天之内，本发明产品每天早、中、晚分三次食用，第11天开始，常规降压药早晨正常服用，晚上减少1片，本发明产品继续每日三次服用。分别于第2周末、第3周末、第4周末测量血压控制情况，血压控制在理想范围且头疼头晕症状减轻判定为有效，同时分别计算芹菜和黄精两种原料组合发酵的相互作用指数CI＝AB/(A×B)，T为每组的总例数，C为每组试用不同时间段的有效例数，AB为两种原料组合发酵联用的(T-C)/T值，A、B为芹菜和黄精单独发酵作用组的(T-C)/T值。CI＜1时，两种原料组合发酵有协同作用，CI≤0.7时，协同作用非常显著。结果记录于表5。

表5芹菜黄精酵素压片糖果的服用试验结果

由表5可知，芹菜和黄精二者合用降压效果及高血压并发症状减轻效果均优于单独作用，CI指数显示二者联用具有明显的协同增效作用。

测试例3芹菜黄精酵素压片糖果降血压的动物实验

根据测试例1、测试例2的人群试用结果，选择制备例4中的组合物(不经造粒压片)进行降血压动物实验，同时设置芹菜和黄精单独发酵组(4-1、4-2)，其余物料按实施例4比例混匀(同样不经造粒压片)，试验方法及结果如下：

1.材料与方法

1.1样品来源：由实施例4发酵制备，分为芹菜+黄精发酵组、芹菜发酵组(4-1)、黄精发酵组(4-2)。

1.2实验动物：SHR大鼠，雄性，SPF级，体重210～230g，北京维通利华实验动物技术有限公司。

1.3实验试剂：戊巴比妥钠试剂购自美国sigma公司。

1.4实验仪器：无创测血压系统(MD3000)，移液器(Eppendorf)，电子天平(ME104E)，注射器，灌胃针，手术器械，AngII酶联免疫(ELISA)测定试剂盒(R&D公司)，IL-10酶联免疫(ELISA)测定试剂盒(R&D公司)。

2.实验方法

2.1实验分组及给药剂量

实验动物见1.2，每6只大鼠为1组，共4组。设芹菜+黄精发酵组、芹菜发酵组、黄精发酵组三个试验组，具体给药量如下：①芹菜+黄精发酵组：芹菜素35mg/kg·bw、黄精多糖420μg/kg·bw、黄精黄酮含量155μg/kg·bw；②芹菜发酵组：芹菜素35mg/kg·bw；③黄精发酵组：黄精多糖420μg/kg·bw、黄精黄酮含量155μg/kg·bw。同时设一个模型对照组。分别给予相应剂量组动物灌胃，灌胃体积为0.2mL/10gbw，模型对照组给予等体积的空白溶液，每天灌胃一次，连续灌胃30天。

2.2检测指标及方法

灌胃给药治疗，每天给药1次，试验周期4周，分别于实验前、给药后每两周通过无创血压测量系统测量各组大鼠收缩压(SBP)、舒张压(DBP)并记录。

试验结束时，用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，腹主动脉取血，静置后离心分离血清，-80℃保存，用于AngII水平和IL-10血清学检测，迅速摘取心脏，称量各组大鼠体质量，取心脏并称重，剥离左心室并称重，计算心脏系数CWI和左室肥厚指数MPI：CWI＝(心质量/体质量)×100％，MPI＝(左室质量/心质量)×100％。

3.结果及分析

3.1不同组合物对SHR大鼠SBP的影响

分别在实验前、给药后每两周测定SHR大鼠的SBP，计算整个给药周期的血压降低率＝(初始血压值-最终血压值)/初始血压值×100％，同时芹菜和黄精两种原料组合发酵的相互作用指数CI＝AB/(A×B)，T为模型对照组的最终血压，C为各组的最终血压值，AB为两种原料组合发酵的C/T值，A、B为芹菜和黄精单独发酵作用组的C/T值。CI＜1时，两种原料联用有协同作用，CI≤0.7时，协同作用非常显著，结果记录于表6。

表6不同组对SHR大鼠SBP的影响

由表6可知，给予受试组合物前，SHR各组实验动物之间的SBP无显著性差异(P>0.05)，经口给予大鼠不同组合物干粉30d，各组大鼠的SBP均比模型对照组低，芹菜+黄精发酵组与模型对照差异具有显著性(P<0.05)，表明芹菜及黄精发酵后均有降血压的作用，CI指数显示二者联用具有协同增效作用。

3.2不同组合物对SHR大鼠DBP的影响

分别在实验前、给药后每两周测定SHR大鼠的DBP，计算整个给药周期的血压降低率＝(初始血压值-最终血压值)/初始血压值×100％，同时计算芹菜和黄精两种原料组合发酵的相互作用指数CI＝AB/(A×B)，T为模型对照组的最终血压，C为各组的最终血压值，AB为两种原料组合发酵联用的C/T值，A、B为芹菜和黄精单独发酵作用组的C/T值。CI＜1时，两种原料组合发酵有协同作用，CI≤0.7时，协同作用非常显著，结果记于表7。

表7不同组合物对SHR大鼠DBP的影响

由表7可知，给予受试组合物前，SHR各组实验动物之间的DBP无显著性差异(P>0.05)，经口给予大鼠不同组合物干粉30d，各组大鼠的DBP均比模型对照组低，且芹菜+黄精发酵组与模型对照差异具有显著性(P<0.05)，表明芹菜及黄精发酵后均有降血压的作用，CI指数显示二者联用具有协同增效作用。

3.3不同组合物对SHR大鼠CWI和MPI的影响

试验结束时，称量各组大鼠体质量，取心脏并称重，剥离左心室并称重，计算CWI和MPI值，同时计算芹菜和黄精两种原料组合发酵的相互作用指数CI＝AB/(A×B)，T为模型对照组的最终的CWI和MPI，C为各组最终的CWI和MPI，AB为两种原料组合发酵联用的C/T值，A、B为芹菜和黄精单独发酵作用组的C/T值。CI＜1时，两种原料组合发酵有协同作用，CI≤0.7时，协同作用非常显著，结果记录于表8。

表8不同组合物对SHR大鼠CWI和MPI的影响

由表8可知，经口给予大鼠不同组合物干粉30d，各组大鼠的CWI、MPI值均比模型对照组低，且芹菜+黄精发酵组与模型对照组差异具有显著性(P<0.05)，表明芹菜及黄精发酵后均有降低心脏系数和左心室肥厚指数的作用，两种指标CI指数均显示二者联用具有协同增效作用。

3.4不同组合物对SHR大鼠血清AngII水平的影响

试验结束时，用AngII酶联免疫(ELISA)测定试剂盒及IL-10酶联免疫(ELISA)测定试剂盒测定大鼠血清中的AngII水平及IL-10水平，结果记录于表9。

表9不同组合物对SHR大鼠AngII水平及IL-10水平的影响

由表9可知，经口给予大鼠不同组合物干粉30d，各组大鼠的AngII水平均比模型对照组低，且芹菜+黄精发酵组、芹菜发酵组与模型对照差异具有显著性(P<0.05)，表明芹菜素是通过调节机体肾素-血管紧张素系统(RAS)进而实现对血压的调控，推测芹菜素可能抑制了血管紧张素转换酶(ACE)的活性，降低ACE对AngI的转化进而降低了AngII水平；各组大鼠的IL-10水平均比模型对照组高，且芹菜+黄精发酵组、黄精发酵组与模型对照差异具有显著性(P<0.05)，表明黄精黄酮及多糖是通过调节机体的免疫功能进而起到降血压的功效，有研究表明，高血压患者多数存在免疫功能紊乱的现象，主要体现是细胞免疫功能紊乱，因此推断出细胞免疫功能紊乱是高血压发病机理之一，IL-10具有组止炎症反应的功能，它能抑制炎症细胞产生IL-1等多种炎症因子，减轻炎症损伤，发挥对血管内皮和心脏的保护作用。

尽管以上对本发明的实施方案进行了描述，但本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，上述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本发明保护之列。