阅读说明：本技术 一种含京尼平、绿原酸活性成分的杜仲提取物制备方法 (Preparation method of eucommia ulmoides extract containing genipin and chlorogenic acid active ingredients ) 是由 赵德刚 雷跃 宋莉 李民学 赵懿琛 于 2020-05-28 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种含京尼平、绿原酸活性成分的杜仲提取物制备方法,其特征在于：包括下列步骤：1)杜仲鲜叶烘干,粉碎过筛制成杜仲叶超微粉；2)取杜仲叶超微粉加入蒸馏水浸泡后水浴提取,提取物离心收集上清液,滤渣重复提取多次；3)取上清液进行干燥后即获得杜仲提取物；4)取杜仲提取物适量,通过气相色谱-质谱技术测定其活性成分。(The invention discloses a preparation method of an eucommia ulmoides extract containing active ingredients of genipin and chlorogenic acid, which is characterized by comprising the following steps of: comprises the following steps: 1) drying fresh folium Eucommiae, pulverizing, and sieving to obtain folium Eucommiae micropowder; 2) soaking folium Eucommiae micropowder in distilled water, extracting in water bath, centrifuging the extract, collecting supernatant, and repeatedly extracting the residue for several times; 3) drying the supernatant to obtain cortex Eucommiae extract; 4) taking a proper amount of eucommia ulmoides extract, and measuring active ingredients of the eucommia ulmoides extract by a gas chromatography-mass spectrometry technology.)

一种含京尼平、绿原酸活性成分的杜仲提取物制备方法

技术领域

本发明属于中药材提取物领域，具体涉及到一种含京尼平、绿原酸活性成分的杜仲提取物制备方法。

背景技术

杜仲（Eucommia ulmoedes oliver）又名思仲、丝棉树及玉丝皮等，是我国特有的名贵药用树种。杜仲皮和杜仲叶中含有木脂素类及苷类、环烯醚萜类（包括京尼平等）、苯丙素类（包括绿原酸等）、黄酮类、多糖类、杜仲胶、生物碱等多种活性成分，还含有维生素、微量元素、氨基酸、多糖等营养成分，具有消炎、抑菌、抗氧化、降血糖、增强免疫功能、抗疲劳等多重功效。杜仲作为皮用中药材，叶片弃之不用，导致资源浪费。建立快速、简便和有效的杜仲叶资源蕴藏的药用活性成分分离制备技术，对杜仲产业链发展具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是：提供一种同时含有京尼平、绿原酸活性成分的杜仲提取物制备方法，该方法与现有提取方法相比简单易行，成本低廉，无有机溶剂污染，且制备的杜仲提取物中京尼平、绿原酸含量较高，由于京尼平、绿原酸具有抗氧化、抗炎、抗菌、调节免疫等作用，因此用本方法制备的杜仲叶提取物具有较高的药用价值。

本发明是这样实现的：一种含京尼平、绿原酸活性成分的杜仲提取物制备方法，包括下列步骤：

1）杜仲鲜叶烘干，粉碎过筛制成杜仲叶超微粉；

2）取杜仲叶超微粉加入蒸馏水浸泡后水浴提取，提取物离心收集上清液，滤渣重复提取多次；

3）取上清液进行干燥后即获得杜仲提取物；

4） 取杜仲提取物适量，通过气相色谱-质谱技术测定其活性成分。

步骤1）中所述的杜仲鲜叶采摘于5月份，在烘箱中烘干，堆积厚度为2cm，烘干温度为80℃~90℃，烘干时间为5h，粉碎后过筛目数为80目；

步骤2）中所述的溶剂体积为杜仲叶粉的32倍，水浴提取时间为2h，水浴温度为80-90℃；

步骤3）中所述的离心机转数为10000rpm，离心时间为5min，重复提取次数为5次，合并1-5次提取的滤液；

步骤4）中所述上清液体积为30-40ml，烘干温度为50-70℃，烘干时间为48h；

步骤5）色谱条件条件为：色谱仪器为：岛津 LC-30A；色谱柱为C18(1.8μm，2.1*100mm)；柱温为35℃；流速为0.3ml/min；进样量为5μl；流动相采用乙腈-0.1%甲酸水溶液的梯度洗脱程序；

步骤6）质谱条件条件为：离子化模式为电喷雾正离子模式，离子源温度为600℃，雾化气体为氮气，一级质谱母离子扫描范围为50～1000，子离子扫描范围为50～1000；离子化模式为电喷雾负离子模式，离子源温度为500℃，雾化气体为氮气，一级质谱母离子扫描范围为50～1000，子离子扫描范围为50～1000。

本发明的有益效果：由于采用了以上技术方案，与现有技术相比，本发明通以超微粉为提取材料，以水为溶剂提取杜仲叶中的活性成分，所制得杜仲提取物具有较高含量的京尼平、绿原酸。本发明方法简单易行，高效便捷、成本低廉，超微粉可当季采收后制备待用，不受季节限制。

具体的CN200910147928.1这件专利中后续处理过程较本专利繁琐，且可能存在有机溶剂的污染，本专利采用水为提取溶剂，水是一种很好的溶剂，杜仲中大部分物质都溶于水，本专利提取方法简单，无有机溶剂污染，提取后的残渣不用处理，可直接丢弃，不会对环境产生污染。

说明书附图

图1为所制得的杜仲提取物粉碎过80目筛后为褐色粉末；

图2为样品提取物与空白正离子模式下总离子流图；

图3为样品提取物与空白负离子模式下总离子流图。

具体实施方式

实施例：

一种含京尼平、绿原酸活性成分的杜仲提取物制备方法。

1）杜仲叶处理：杜仲叶于春季采摘，在80~90℃下烘干，用粉碎机粉碎后过80目筛，制得杜仲叶超微粉；

2）浸提：向1）中所得杜仲叶超微粉加入32倍体积的蒸馏水，常温浸泡2h，途中搅拌数次；

3）水浴提取：把2）中所得溶液放在水浴锅中水浴提取2h，水浴提取温度为80-90℃，提取过程中搅拌数次；

4）离心，重复提取：把3）中所得提取液在常温、10000rpm离心5min，滤渣重复5次提取，合并1-5次滤液；

5）干燥：取4）中所得滤液30-40ml，在50-70℃条件下干燥，制得杜仲提取物；

6）杜仲提取物活性成分测定：取5）中杜仲提取物0.2g于10ml 离心管内,加入8ml 50%甲醇水溶液,45℃超声提取40min后,静置5 min 后，取上清液于1 ml离心管中，放入高速离心机中13000r/min 离心10 min，过0.22um 微孔滤膜后装入1.5ml自动进样瓶内，得到提取液。同样条件得到空白对照样品。将样品放入 4℃冰箱保存，在分析前取出（保存时间不能超过24h）；色谱条件为：色谱柱为 C18(1.8μm，2.1*100mm)；柱温为35℃；流速为0.3ml/min；进样量为5μl；流动相采用乙腈-0.1%甲酸水溶液的梯度洗脱程序；离子化模式为电喷雾正离子模式，离子源温度为600℃，雾化气体为氮气，一级质谱母离子扫描范围为50～1000，子离子扫描范围为50～1000；离子化模式为电喷雾负离子模式，离子源温度为500℃，雾化气体为氮气，一级质谱母离子扫描范围为50～1000，子离子扫描范围为50～1000。

表1流动相梯度洗脱程序

Time（min）	A（0.1%甲酸水）	B（乙腈）
			0.01	95	5
15	75	30
			30	5	95
32	5	95
			32.1	95	5
35	stop

（二）结果

1.步骤 5)中所制得的杜仲提取物粉碎过80目筛后为褐色粉末（图1）；

2.通过气相色谱-质谱连用的方法，得杜仲提取物与空白正、负离子模式下总离子流图，如图2、图3；

3.通过本方法，从杜仲叶中提取的京尼平、绿原酸，分别为56.20mg/g、36.76mg/g。

本发明所述并不限于具体实施方式中所述的实施例，本领域技术人员根据本发明的技术方案得出其他的实施方式，同样属于本发明的技术创新范围。显然本领域的技术人员可以对本发明进行各种参数改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术范围内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。