阅读说明：本技术 一种杜仲总黄酮的提取方法及其在抗氧化剂和降糖剂中的应用 (Method for extracting total flavonoids of eucommia ulmoides and application of total flavonoids of eucommia ulmoides in antioxidant and hypoglycemic agent ) 是由 欧阳辉 于 2019-12-06 设计创作，主要内容包括：本发明涉及杜仲提取物的研究,具体涉及一种杜仲总黄酮的提取方法及其在抗氧化剂和降糖剂中的应用,本发明以杜仲为原料,微波辅助法提取杜仲中的总黄酮,总黄酮的最佳提取条件通过设置单因素实验和响应面优化来确定,并提供了总黄酮的抗氧化性及降糖活性的应用。(The invention relates to research of eucommia ulmoides extracts, in particular to an extraction method of total flavonoids of eucommia ulmoides and application of the total flavonoids of eucommia ulmoides in an antioxidant and a hypoglycemic agent.)

一种杜仲总黄酮的提取方法及其在抗氧化剂和降糖剂中的 应用

技术领域

本发明属于涉及杜仲提取物的研究，具体涉及一种杜仲总黄酮的提取方法及其在抗氧化剂和降糖剂中的应用。

背景技术

杜仲的果实由2个长圆形心皮发育而成，其实质为坚果，因其为薄革质的翅所包围，***，长椭圆形。周围有翅，翅革质，顶端微凹，果实生长期为4-10月份。子房柄相与果梗相接处有关节。种子扁平，线形，长1.4-2.5cm，宽5mm，厚约2mm，两端圆形，两端微凹。

杜仲是名贵古老的中药材，各国学者为了探明杜仲的治病机理，确定其活性物质，对杜仲的化学成分进行了大量的研究，主要成分有木脂素类、黄酮类等有机化合物，以及钙铁锰锌硒等矿物元素。

《制药技术》2011年第20卷第12期“杜仲总黄酮的提取工艺优化”公开了一种利用微波提取法对杜仲提取总黄酮的方法，其工艺为：称取杜仲粉末10g(过60目筛)，分别采用回流提取法(加60％乙醇200mL，水浴回流60min，过滤，提取2次，合并滤液，定容至100mL)、超声提取法(置500mL锥形瓶中，加60％乙醇200mL，室温下超声提取60min，过滤，滤液定容至100mL)、微波提取法(加60％乙醇200mL，在微波功率200W条件下加热提取120s，过滤，共提取2次，合并滤液，定容至100mL)提取。但是，该方法提取率不高，并且对提取物的应用没有进行研究。

发明内容

本发明为解决现有技术中的上述问题，通过研究，发明了一种新的从杜仲提取总黄酮的方法及其在抗氧化剂和降糖剂中的应用。

本发明的方案是，一种杜仲总黄酮的提取方法，包括如下步骤：

((1)取杜仲干燥、粉碎，然后过60-80目筛；

(2)取步骤(1)所得的杜仲粉末，与乙醇混合，在料液比1：20-60，乙醇浓度60％-80％，；

(3)微波提取15-35min，然后冷却分离。

本发明的另一优选方案是，所述杜仲的提取原材料为杜仲翅果。

本发明的另一优选方案是，所述乙醇浓度为70％。

本发明还提供所述提取方法所得提取物的应用，其应用是将所得提取物用于抗氧化剂。

本发明还提供所述提取方法所得提取物的另一应用，其应用是将所得提取物用于降糖剂。更优选地，将所得提取物与医药上可接受的辅料制成口服剂。

抗氧化剂多用于食品保鲜医学等方面，人工合成的抗氧化剂如BHT，TBHQ等，虽然具有较强的抗氧化能力，但经研究发现它们有一定的毒性，因而寻找安全、天然的食品抗氧化剂日益成为研究热点。本发明的抗氧化剂具有安全无毒的优势，能广泛应用于食品添加剂，作为抗氧化剂使用。

糖尿病尚无理想的治疗方法,传统磺酰脲类和双胍类降糖药,长期食用会产生依赖性和毒副作用。α-葡萄糖苷酶抑制剂常被用于治疗Ⅱ型糖尿病,可有效降低餐后血糖水平和减少糖尿病并发症的发生。所以,从天然产物中寻找高效的α-葡萄糖苷酶抑制剂成为近年的研究热点,且已报道天然产物如柑橘皮、甘草、桑叶、地榆、胡柚、降香、普洱茶、苦瓜、银杏等大多富含黄酮、多酚、多糖等成分。因此研究从杜仲翅果中提取黄酮的优化工艺，对提高杜仲的经济价值具有较高的现实意义和广泛的应用前景。

为此，本实验采用微波提取总黄酮，在单因素实验基础上运用响应面实验方案设计(Box-Behnken试验设计)进行优化，获得总黄酮的最佳提取条件。通过DPPH、ABTS方法，观察杜仲翅果提取物清除DPPH自由基的能力、清除ABTS·+引起的吸光度变化能力来研究杜仲翅果提取物的抗氧化活性；通过对α-葡萄糖苷酶的抑制率来研究杜仲翅果总黄酮的体外降糖活性，为杜仲翅果保健功能的评价和开发利用提供重要数据。

附图说明

图1是本发明实施例微波时间对总黄酮提取率的影响曲线图；

图2是本发明实施例料液比对总黄酮提取率的影响曲线图；

图3是本发明实施例乙醇浓度对总黄酮提取率的影响曲线图；

图4是本发明实施例微波温度对总黄酮提取率的影响曲线图；

图5a是本发明实施例微波时间与料液比的交互作用曲面图；

图5b是本发明实施例微波时间与乙醇浓度的交互作用曲面图；

图5c是本发明实施例温度与微波时间的交互作用曲面图；

图5d是本发明实施例乙醇浓度与料液比的交互作用曲面图；

图5e是本发明实施例温度与料液比的交互作用曲面图；

图5a是本发明实施例温度与乙醇浓度的交互作用曲面图；

图6是不同Vc溶液浓度对DPPH的清除率曲线图；

图7是不同总黄酮浓度对DPPH的清除率曲线图；

图8是Trolox标准溶液对ABTS自由基的清除能力曲线图；

图9是总黄酮溶液对ABTS自由基的清除能力曲线图；

图10是不同阿卡波糖溶液浓度对α-葡萄糖苷酶的抑制率曲线图；

图11是不同总黄酮溶液浓度对α-葡萄糖苷酶的抑制率曲线图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。此外，本领域技术人员根据本文件的描述，可以对本文件中实施例中以及不同实施例中的特征进行相应组合。

实施例

1实验部分

1.1实验仪器和药品

1.1.1实验仪器

BJ-150多功能粉碎机(德清拜杰电器有限公司)；GB/T6003 1-2012标准检验筛(绍兴市上虞华丰五金仪器有限公司)；101-1AB型电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；FA2004电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；微波合成萃取系统(上海屹尧仪器科技发展有限公司)；SHB-III循环水式多用真空泵(巩义市中天仪器科技有限公司)；酶标仪(SPECTRA max PLUS384)；移液枪(Dragonlab100-1000)

1.1.2实验药品

杜仲翅果是2018年3月于湖南张家界采摘；无水乙醇(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)，芦丁样品(上海融禾医药科技有限公司20mg)，亚硝酸钠(分析纯，天津市永大化学试剂有限公司)，硝酸铝(分析纯，成都金山化学试剂有限公司)，氢氧化钠(分析纯，天津市永大化学试剂有限公司)，抗坏血酸(西陇科学股份有限公司10g)，DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，东京化成工业株式会社50mg)，ABTS试剂盒(碧云天生物技术有限公司)，磷酸氢二钠(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)，磷酸二氢钠(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)，50mmol/L、PH＝7.4的磷酸缓冲盐溶液(PBS,由0.2mol/L Na₂HPO₄溶液和0.2mol/L NaH₂PO₄溶液81：19配制)，葡萄糖苷酶(上海瑞永生物科技有限公司，Sigma-G5003)，4-硝基苯-a-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG，上海瑞永生物科技有限公司，Sigma-N1627)，阿卡波糖(上海瑞永生物科技有限公司，TCI-A2485)，碳酸钠(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)等均为国产分析纯试剂。

1.2实验方法

1.2.1杜仲翅果总黄酮的提取

利用多功能粉碎机将干燥杜仲翅果粉碎，过60目筛，按微波时间(min)、乙醇浓度(％)、提取温度(℃)、料液比(mL/g)四个因素不同进行实验，提取后过滤量取滤液体积并记录，算出得率。

1.2.2总黄酮含量测定

精确称取芦丁对照品20mg,加70％乙醇溶液定容于100ml容量瓶中，得0.2mg/ml标准液。配制质量浓度梯度：分别为0.02、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20mg/ml。分别移取标准溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml芦丁标准液分置于6个10ml容量瓶中,用70％乙醇定容至刻度。准确移取上述样品溶液1.44mL，70％乙醇0.64mL,5％亚硝酸钠溶液0.16ml,混匀,放置6min,再加10％硝酸铝溶液0.16ml,混匀,放置6min,加4％氢氧化钠溶液1.6ml,摇匀,静置12min。以70％乙醇溶液为空白溶液,在510nm处用酶标仪测吸光度。以芦丁质量浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线及回归方程。

标准曲线方程为：A＝12.308C+0.0573，R2＝0.9911。

样品中总黄酮含量测定同上，总黄酮提取率计算公式如下：

X＝(C*V)/(1000*m)*100％

式中：X为总黄酮提取率(％)；C为根据标准曲线计算所得总黄酮质量浓度(mg/ml)；V为提取液的换算总体积(ml)；m为样品质量(g)。

1.2.3单因素实验

(1)微波时间对总黄酮提取率的影响

取5g样品，在料液比20:1，乙醇浓度60％，提取温度55℃的条件下，按微波时间15min、20min、25min、30min、35min依次提取,计算总黄酮提取率，考察微波时间对总黄酮提取率的影响。

(2)料液比对总黄酮提取率的影响

取一定样品，在微波时间15min，提取温度55℃，乙醇浓度60％条件下，按料液比20：1、30：1、40:1、50:1、60:1依次提取,计算总黄酮提取率，考察料液比对总黄酮提取率的影响。

(3)乙醇浓度对总黄酮提取率的影响

取5g样品，在料液比1:20，提取温度55℃，微波时间30min的条件下，按乙醇浓度60％、65％、70％、75％、80％依次提取,计算总黄酮提取率，考察乙醇浓度对总黄酮提取率的影响。

(4)提取温度对总黄酮提取率的影响

取5g样品，在料液比20:1，乙醇浓度60％，微波时间15min的条件下，按提取温度55℃、60℃、65℃、70℃、75℃依次提取,计算总黄酮提取率，考察提取温度对总黄酮提取率的影响。

1.2.4响应面优化实验

根据单因素实验的结果对影响杜仲翅果总黄酮得率的微波时间(A)、料液比(B)、乙醇浓度(C)和微波温度(D)四因素进行BoxBehnken试验设计。因素编码与水平见表1。

表1响应面因素与水平表

1.2.5DPPH自由基清除法

(1)DPPH测试液的配制：称取0.0246g DPPH溶于100mL无水乙醇中，充分振摇，配制成0.246mg/mL的DPPH溶液(避光保存，3.5h内用完)。取适量该DPPH溶液，在510nm处测吸光值A，使A＝1.2—1.3之间最佳。(DPPH溶液稀释5.5倍，吸光度A＝1.252)

(2)样品液的配制：V_C溶液(0.25mg/mL)

称取V_C 0.01125g溶于45mL乙醇溶液。

(3)预试：取DPPH溶液2mL，往其中加少量样品液，加样时，先少后多逐渐滴加边混合，观察溶液的褪色情况，当溶液颜色基本褪去时，记下样品的加样量。(此加样量为样品最大用量，在此最大用量的基础上设置5个用量，使之成等差数列。)(4)测量：

A₀：2mL DPPH溶液+1mL无水乙醇的吸光值；(A₀＝0.903)

A：2mL DPPH溶液+1mL样品溶液的吸光值；

DPPH自由基清除率(S％)＝[(A₀—A)/A₀]×100％^[21]

1.2.6 ABTS自由基清除法

(1)ABTS工作液的配置

①ABTS工作母液 200μL ABTS溶液+200μL氧化剂溶液于棕色小样品瓶中，室温避光存放12-16小时后方可使用，2-3天内稳定。

②ABTS工作液 将ABTS工作母液用70％乙醇稀释35-55倍，使得ABTS工作液在734nm时的吸光度减去相应的70％乙醇空白对照后，吸光度A为0.7±0.05.(2)标准曲线的绘制

①依次取10mM的Trolox标准溶液15μL、30μL、60μL、90μL、120μL、150μL于小样品瓶中，再相应的加70％乙醇985μL、970μL、940μL、910μL、880μL、850μL配置成1mL的溶液，稀释成0.15、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5mM。

②96孔板的每个检测孔中加入200μL ABTS工作液，空白对照孔中加入10μL70％乙醇，标准曲线检测孔内加入10μL各种浓度的Trolox标准溶液，轻轻摇匀。

③室温分别孵育1、3、5、10分钟测定A734，绘制标准曲线。如果测定A734有困难，也可以在725-745范围内进行测定。

(3)样品的测定

①96孔板的每个检测孔中加入200μL ABTS工作液，空白对照孔中加入10μL70％乙醇，样品检测孔内加入10μL各种样品，轻轻摇匀。

②室温分别孵育1、3、5、10分钟，用绘制标准曲线时的波长测定吸光度。

(4)数据处理

ABTS自由基清除率(S％)＝[(A₀—A)/A₀]×100％

式中A ₀为ABTS溶液的吸光度，A为加药液后的吸光度。

1.2.7体外降糖活性测定

(1)溶液配制

①0.1mol/LPH6.9磷酸盐缓冲溶液：称取NaH₂PO₄0.2000g，Na₂HPO₄0.2300g至100ml容量瓶中，去离子水定容。

②4.8mmol/LPNPG(4-硝基苯-a-D-吡喃葡萄糖苷)：称取0.0145g葡萄糖苷溶于PH6.9磷酸盐缓冲溶液，至10ml容量瓶，用缓冲溶液定容。

③6U/ml葡萄糖苷酶：将总量100U的葡萄糖苷酶溶于缓冲溶液中，至10ml容量瓶，用缓冲溶液定容，浓度为10U/ml。再移取10U/ml的葡萄糖苷酶溶液3000μL至小样品瓶中，加2000μL磷酸缓冲溶液，此时浓度为6U/ml。

④1mg/ml阿卡波糖：称取0.0010g阿卡波糖溶于缓冲溶液，至10ml容量瓶，用缓冲溶液定容。

⑤1.5mol/LNa₂CO₃溶液：称取1.5899g无水碳酸钠溶于去离子水，至10ml容量瓶，用去离子水定容。

(2)实验

A.阿卡波糖阳性对照

①依次移取1mg/ml阿卡波糖20μL、40μL、80μL、120μL、200μL，400μL再加入缓冲溶液380μL、360μL、320μL、280μL、200μL，0μL配制成400μL浓度为0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、1mg/ml的溶液。

②在96孔板中加样，样品组：依次加入160μLPBS缓冲液(pH6.9)，20μLα-葡萄糖苷酶溶液(6U/mL)和20μL不同浓度阿卡波糖溶液，37℃恒温15min，加入40μLPNPG溶液(4.8mmol/L)，37℃恒温30min，加入80μLNa₂CO₃溶液(1.5mol/L)中止反应，在405nm波长下，应用酶标仪测定吸光度。样品空白组：以20μLPBS缓冲液代替酶液，其它试剂同样品组。阴性对照组：以20μLPBS缓冲液代替样品溶液，其它试剂同样品组。空白组：以40μLPBS缓冲液代替酶液和样品溶液，其它试剂同样品组。以上实验每组做三次，取平均值，计算抑制率，并绘制相关曲线。

B.样品测定

①依次移取已知质量浓度的最佳提取条件下的样品1000μL、200μL、100μL、67μL、50μL，再分别移取0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液稀释0μL、800μL、900μL、933μL、950μL，配制成稀释0倍、5倍、10倍、15倍、20倍的样品溶液。

②在96孔板中加样，样品组：依次加入160μLPBS缓冲液(pH6.9)，20μLα-葡萄糖苷酶溶液(6U/mL)和20μL不同浓度样品溶液，37℃恒温15min，加入40μLPNPG溶液(4.8mmol/L)，37℃恒温30min，加入80μLNa₂CO₃溶液(1.5mol/L)中止反应，在405nm波长下，应用酶标仪测定吸光度。样品空白组：以20μLPBS缓冲液代替酶液，其它试剂同样品组。阴性对照组：以20μLPBS缓冲液代替样品溶液，其它试剂同样品组。空白组：以40μLPBS缓冲液代替酶液和样品溶液，其它试剂同样品组。以上实验每组做三次，取平均值，计算抑制率，并绘制相关曲线。

(3)数据处理

抑制率(％)＝[(A₃-A₄)-(A₁-A₂)]/(A₃-A₄)*100

式中：A₁、A₂、A₃和A₄分别为样品组、样品空白组、阴性对照组和空白组的吸光度。

2结果与讨论

2.1单因素试验结果

2.1.1微波时间对总黄酮提取率的影响

图1是微波时间对总黄酮提取率的影响曲线图，由图1可知，当微波时间为15-30min时，随着微波时间延长，总黄酮得率也增大，这是因为微波时间的延长，杜仲翅果总黄酮能够更充分地溶出，使得得率增大；但当微波时间超过大于30min时，过长的微波时间作用下，杜仲翅果细胞结构受损，胞内其他杂质溶出，并与总黄酮产生溶出竞争，使得得率下降，因此微波时间选择为30min。2.1.2料液比对总黄酮提取率的影响

图2是料液比对总黄酮提取率的影响曲线图，由图2可知，当料液比在20:1-50:1mL/g时，随着料液比增大，总黄酮得率也增大，这是因为料液比的增大，增加了杜仲翅果总黄酮的绝对溶解能力，使得得率增大；但当料液比过大时，杜仲翅果颗粒内其他非黄酮类成分溶出量增大，导致了总黄酮得率的下降，因此料液比选择为50:1mL/g。

2.1.3乙醇浓度对总黄酮提取率的影响

图3是乙醇浓度对总黄酮提取率的影响曲线图，由图3可知，当乙醇浓度在60％-75％时，随着乙醇浓度增大，总黄酮得率也增大，这是因为乙醇浓度的增大，溶剂的极性降低，使得溶剂极性与杜仲翅果总黄酮的极性更加接近，促进了杜仲翅果总黄酮在溶剂中的溶解，使得得率增大；但当乙醇浓度过大时，极性较小的一些醇溶剂杂质会与黄铜产生溶出竞争，导致了总黄酮得率的下降，因此乙醇浓度选择为75％。

2.1.4微波温度对总黄酮提取率的影响

图4是微波温度对总黄酮提取率的影响曲线图，由图4可知,当提取温度在55～70℃时,随着温度升高,总黄酮得率增大,这是因为温度升高,加快了溶剂与杜仲翅果总黄酮分子之间的溶解与渗透能力,使得总黄酮得率增大；但当提取温度大于70℃时,过高的温度会破坏部分不稳定的黄酮分子结构，造成得率降低，因此提取温度应选择70℃。

2.2响应面优化实验结果

2.2.1模型与方差分析

以杜仲翅果总黄酮得率为响应值，应用Box－Behnken试验设计原理，选择微波时间(A)、料液比(B)、乙醇浓度(C)和微波温度(D)为影响因素得出实验结果如表2，微波辅助提取杜仲翅果总黄酮得率数据模型的方差分析见表3。2.2.2模型的建立与分析

利用Design－Expert10软件对表2中的试验结果进行响应面分析，得到以微波时间(A)料液比(B)、乙醇浓度(C)和微波温度(D)为工艺参数，杜仲翅果总黄酮得率为响应值的二次多项式回归方程：Y＝0.65+0.00035*A+0.036*B+0.003092*C-0.00245*D+0.00225*AB-0.008575*AC-0.018*AD-0.001075*BC+0.0015*BD-0.007075*CD-0.017A²-0.04*B²-0.004211*C²-0.015*D²

表2响应面实验方案及实验结果

表3方差分析

注:**表示差异极显著(p＜0.01)；*表示差异显著(p＜0.05)。

根据表3的响应面方差分析可知，该回归模型P<0.0001，说明该模型达到了极显著水平，失拟项P＝0.3119>0.05，不显著，说明该模型的可信度较高，拟合度好。模型的决定系数R²＝0.9957，说明该模型可靠，有99.57％的实验值可以利用预测值来描述。由方差F值及P值可知，影响杜仲翅果总黄酮得率的因素中，其主次顺序为料液比(B)>乙醇浓度(C)>微波温度(D)>微波时间(A)，其中B、C、AC、AD、A²、B²、C²、D²对总黄酮得率影响极显著，D对总黄酮得率影响显著，其他因素对总黄酮得率影响不显著。

2.2.3响应曲面图分析

图5a-图5f是两两因素的交互作用对杜仲翅果总黄酮得率影响的响应面曲面图。图5a是微波时间与料液比的交互作用曲面图，由图5a可知，料液比、微波时间对应的3D图曲面变化陡峭,表明乙醇浓度与提取次数的交互作用显著,两者对杜仲翅果总黄酮得率的影响明显；图5b是微波时间与乙醇浓度的交互作用曲面图，由图5b可知，乙醇浓度、微波时间对应的3D图曲面变化较平缓,表明乙醇浓度与微波时间比的交互作用不显著,两者对杜仲翅果总黄酮得率的影响较小；图5c是温度与微波时间的交互作用曲面图，由图5c可知，温度、微波时间对应的3D图曲面变化较平缓,表明乙醇浓度与微波时间比的交互作用不显著,两者对杜仲翅果总黄酮得率的影响较小；图5d是乙醇浓度与料液比的交互作用曲面图，由图5d可知，乙醇浓度、料液比对应的3D图曲面变化陡峭,表明乙醇浓度与提取次数的交互作用显著,两者对杜仲翅果总黄酮得率的影响明显；图5e是温度与料液比的交互作用曲面图，由图5e可知，温度、料液比对应的3D图曲面变化陡峭,表明乙醇浓度与提取次数的交互作用显著,两者对杜仲翅果总黄酮得率的影响明显；图5f是温度与乙醇浓度的交互作用曲面图，由图5f可知，温度、乙醇浓度对应的3D图曲面变化较平缓,表明乙醇浓度与微波时间比的交互作用不显著,两者对杜仲翅果总黄酮得率的影响较小。

2.2.4最优条件验证

根据响应面方程进行分析得到杜仲翅果总黄酮的最佳提取工艺为微波时间30.087min，料液比54.461:1(mL/g)，乙醇浓度77.162％，微波温度69.156℃，预测总黄酮得率0.6560％。为了方便对实验结果的验证，将优化条件修正为微波时间30min，料液比54:1(mL/g)，乙醇浓度77％，微波温度69℃，并进行3次平行试验，得到杜仲翅果总黄酮的得率为0.6611％，与预测的相对误差为0.78％。说明该回归方程对杜仲翅果总黄酮得率的预测准确率高，可靠性强，具有一定的指导意义。

2.3DPPH自由基清除率

2.3.1不同Vc溶液浓度对DPPH自由基清除率的影响

不同Vc溶液浓度对DPPH自由基清除能力如图6所示。可见，Vc溶液浓度越大，对DPPH自由基清除能力越大。

2.3.2不同总黄酮溶液浓度对DPPH自由基清除率的影响

不同总黄酮溶液浓度对DPPH自由基清除率如图7所示。可见，随着浓度增大，样品对DPPH自由基清除率能力增大。由此可知杜仲翅果总黄酮对DPPH自由基的清除能力小于VC溶液。

2.4ABTS自由基清除率

2.4.1不同Trolox溶液浓度对ABTS·+自由基清除能力的影响

不同Trolox溶液浓度对ABTS·+自由基清除率如图8所示。可见，Trolox溶液浓度越大，对ABTS·+自由基清除能力越大；时间越长，Trolox溶液对ABTS·+自由基清除能力越大。

2.4.2不同总黄酮溶液浓度对ABTS·+自由基清除能力的影响

不同浓度的杜仲翅果总黄酮提取液对ABTS·+自由基清除率如图9所示。可见，浓度越大，提取液对ABTS自由基清除率能力增大，时间越长，提取液对ABTS自由基清除率能力增大。由此可知杜仲翅果总黄酮对ABTS自由基的清除能力小于Trolox溶液。

2.5体外降糖活性

2.5.1不同阿卡波糖溶液浓度对α-葡萄糖苷酶抑制率的影响

不同浓度阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率，如图10所示。可知，阿卡波糖浓度越大，对α-葡萄糖苷酶的抑制率越大。

2.5.2不同总黄酮溶液浓度对α-葡萄糖苷酶抑制率的影响

不同浓度总黄酮提取液对α-葡萄糖苷酶的抑制率如图11所示。可知，提取液浓度越大，对α-葡萄糖苷酶的抑制率越大，但比阿卡波糖的抑制率低。

3结论

实验结果表明，提取温度、料液比、提取时间、溶剂浓度对杜仲翅果总黄酮的提取率都有影响，其中料液比和乙醇浓度的影响最大。响应面实验设计可得最佳工艺条件为微波时间30min，料液比54：1mL/g，乙醇浓度77％，微波温度69℃，在此条件下杜仲叶总黄酮提取率为0.6611％与理论值0.6560％相差不大，说明本实验的模型拟合程度高，准确有效，可用于杜仲翅果总黄酮工艺的优化。

在体外抗氧化活性实验中，杜仲翅果总黄酮提取液(0.01363mg/mL)对DPPH自由基的清除率为70.50％，低于VC溶液对DPPH自由基的清除率86.39％；对ABTS自由基的清除率在10min中时达到最高为59.24％，略高于Trolox标准溶液对ABTS自由基在10min中时的清除率36.59％。杜仲翅果中的黄酮类化合物可能是其主要活性物质，但杜仲翅果富含油脂类，对实验产生一定的影响，可经进一步分离纯化后，开发为天然抗氧化剂。对杜仲翅果总黄酮提取物进行体外降糖活性抑制检测，研究结果发现杜仲翅果总黄酮提取液对α-葡萄糖苷酶的抑制率达到了78.63％，虽低于阳性对照阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率87.57％，但也具有良好的抑制效果，可成为降糖活性药物，与医药上可接受的辅料制备成降糖剂。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。