阅读说明：本技术 一种发酵饲料型复合维生素及其制备方法 () 是由 常艺海 常小利 秦留勇 于 2020-04-08 设计创作，主要内容包括：本发明提出了一种发酵饲料型复合维生素及其制备方法,包括维生素D<Sub>2</Sub>4500-4800IU/ml、维生素B<Sub>1</Sub>8-9mg/ml,维生素B<Sub>2</Sub>10-12mg/ml、维生素B<Sub>6</Sub>4-6mg/ml和维生素B<Sub>12</Sub>6-7mg/ml。本发明中发酵饲料型复合维生素富含维生素D<Sub>2</Sub>、B<Sub>1</Sub>,B<Sub>2</Sub>,B<Sub>6</Sub>,B<Sub>12</Sub>等多种微量元素等,从而能够提高动物的免疫力,减少疾病的发生和抗生素的用量,创造更大的经济效益。()

一种发酵饲料型复合维生素及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物技术发酵制造领域，具体为一种发酵饲料型复合维生素及其制备方法。

背景技术

酵母菌是单细胞真菌，圆形、卵圆形或圆柱形。酵母菌含有蛋白质及氨基酸、B族维生素、矿物质、多糖和其它活性成分如麦角固醇、谷胱甘肽等而使发酵后的果蔬汁具有更丰富的营养，同时更容易吸收。酵母菌中B族维生素含量相当丰富，并且酵母菌中的B族维生素一般都以磷酸酯类形式存在，故很容易被动物吸收。其中在维生素生产过程中，阿氏假囊酵母（Eremotheciuma shbyu）还用于维生素B₁₂的工业生产；卡尔斯伯酵母则是维生素D最好的产生菌等。

产朊假丝酵母（Candida utilis）又叫产朊圆酵母或食用圆酵母。其蛋白质和维生素B的含量都比啤酒酵母高，它能以尿素和硝酸作为氮源，在培养基中不需要加入任何生长因子即可生长。此外，产朊假丝酵母在发酵过程中可以产生麦角固醇，这是维生素D₂的前提物质，在含有紫外的光照下，转化成维生素D₂。

乳酸菌是发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌，其包含许多种属。大多数乳酸菌不运动，少数以周毛运动，菌体常排列成链。

乳酸菌通过发酵产生的有机酸、特殊酶系、必需氨基酸和各种维生素（维生素B族和K等)，还可提高矿物元素的生物活性，进而达到为宿主提必需营养物质、增强动物的营养代谢、直接促其生长的作用等物质具有生理功能。

屎肠球菌(Enterococcus Faecium)属于乳酸菌，由于它生长速度快，有较好的黏附能力，能产生乳酸及一些抗菌物质被广泛的用作为益生菌制剂。屎肠球菌在环境中广泛存在，并且属于肠道共生菌，在很多动物新出生的2-3d内占优势地位，并且是一种兼性厌氧的乳酸菌与厌氧、培养保存条件苛刻的双歧杆菌相比，更适合于生产和应用。

近年来，随着人们生活水平的提高，对绿色无污染食品需求也逐渐增加，无公害畜畜禽产品，因肉品质鲜美、不使用饲料添加剂，所生产的畜产品安全而普遍受到消费者的青睐。但是在只食用谷物不使用化学饲料添加剂的畜禽养殖过程中，常常因维生素缺乏而引起的生理机能异常；但是常规化学饲料添加剂均会造成药剂残留，影响消费者健康。生物发酵技术的兴起，利用菌群发酵生产维生素的技术也有相应的报道，但是其多数为利用某一微生物生产一种发酵产物，然后再将发酵后的产物进行配比得到复合发酵产物。

因此较为便捷快速的发酵生产出饲料型的复合维生素，且能够满足畜禽日常生长对维生素的需求，增强机体免疫力和减少应急反应，创造更大的经济效益，是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

本发明正是基于上述技术问题至少之一，提供了一种发酵饲料型复合维生素，包括维生素D₂ 4500-4800IU/ml、维生素B₁ 8-9mg/ml，维生素B₂ 10-12mg/ml、维生素B₆ 4-6mg/ml和维生素B₁₂ 6-7mg/ml。

本发明中发酵饲料型复合维生素富含维生素D₂、B₁，B₂，B₆，B₁₂等多种微量元素等，从而能够提高动物的免疫力，减少疾病的发生和抗生素的用量，创造更大的经济效益。

根据本发明第二个方向，提出了制备复合维生素的方法，包括以下步骤：

（1）将产朊假丝酵母菌和屎肠球菌共同接种至种子培养基中，摇床培养，制备成种子液；

（2）将步骤（1）中的种子液按照体积百分比为5%-10%的量接种至发酵培养基中，培养48h-72h，转速为80rpm-120rpm进行深层发酵，当pH值降低至4-4.5，停止发酵，得到发酵混合液；

（3）将步骤（2）中的发酵混合液灭菌后固液分离，收集固相物质；

（4）将步骤（3）中的固相物质在25-40℃下，浓缩10-15h，浓缩液即为复合维生素。

优选的，步骤（4）中浓缩过程中，空气湿度为92.5-95.3%，空气温度为33-38℃，风量为1000-1200m³/h，浓缩效率为5.88-6.38kg/h。

本发明中本发明充分结合了生物工程发酵和超微粉碎预处理技术，将产朊假丝酵母和屎肠球菌进行共生液体的深层发酵，制备出含有大量维生素D₂、B₁，B₂，B₆，B₁₂的多种维生素液体，能够满足畜禽日常生长对维生素的需求，增强机体免疫力和减少应急反应等，是天然来源多种维生素。不仅满足了畜牧行业对维生素的要求，而且产朊假丝酵母和屎肠球菌在发酵产生代谢产物的过程中，会产生大量生物活性酶、乳酸等有效的生物活性物质，能够减少畜禽疾病的发生和抗生素的用量，创造更大的经济效益。

进一步的，种子培养基包括葡萄糖10-15g，麦芽浸粉2-5g，酵母粉1-5g，醋酸钠3-5g，柠檬酸二胺1-2g，磷酸二氢钾0.5-1g，磷酸氢二钾0.5-1g，硫酸镁0.1-0.2g，吐温-801ml，溶于1000ml蒸馏水中，pH为6.0-6.5。

进一步的，摇床培养方法为32-34℃、110rpm-130rpm，摇床培养48h-72h制成种子液。

进一步的，发酵培养基包括质量百分数为5-12%的玉米粉与豆饼粉混合物，2-5%的麦芽浸粉，0.5-2%氯化钠，pH为6.0-6.5。

进一步的，玉米粉与豆饼粉混合物为将玉米与豆饼按照质量比为1：1.5-1.9，经过超微粉碎后，细度达到200-300目。

本发明中采用超微粉碎技术，对玉米和豆饼进行预处理，制备出玉米粉和豆饼粉混合物。以玉米粉和豆饼粉混合物为发酵培养基组分，配制高效的发酵培养基，进行工业化深层发酵，能够显著提高维生素D₂、B₁，B₂，B₆，B₁₂的含量。

玉米粉和豆饼粉经过超微粉碎后，溶解度增加，这两种原料中的碳源和氮源物质，更容易被产朊假丝酵母和屎肠球菌吸收、利用，促进这两种菌次级代谢功能，增加维生素D₂、B₁，B₂，B₆，B₁₂的合成

进一步的，发酵混合液的固液分离方法为5000-6000r/min，3-6min。

优选的，B族维生素和维生素D都不耐高温，在80℃以上容易分解，本发明采用叠式离心机进行固液分离和低温浓缩的方式，最大限度保护维生素的活力。

通过以上技术方案，本发明中本发明充分结合了生物工程发酵和超微粉碎预处理技术，将产朊假丝酵母和屎肠球菌进行共生液体的深层发酵，制备出含有大量维生素D₂、B₁，B₂，B₆，B₁₂的多种维生素液体，能够满足畜禽日常生长对维生素的需求；同时在能够在畜禽养殖过程中，因维生素缺乏而引起的生理机能异常，促进机体恢复至正常功能；增强机体免疫力和减少应急反应等。不仅满足了畜牧行业对维生素的要求，而且产朊假丝酵母和屎肠球菌在发酵产生代谢产物的过程中，会产生大量生物活性酶、乳酸等有效的生物活性物质，能够减少畜禽疾病的发生和抗生素的用量，创造更大的经济效益。

具体实施方式

为了能够更清楚地理解本发明的上述目的为特征和优点，具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是，本发明还可以采用其他不同于在此描述的其他方式来实施，因此，本发明的保护范围并不受下面公开的具体实施例的限制。

本发明中选取购自广东省微生物菌种保藏中心的产朊假丝酵母（GIM 2.148）和屎肠球菌（GIM 1.202）作为菌种，能够产生容易被畜禽利用的多种维生素。

实施例1

种子培养基的制备

种子培养基包括葡萄糖10-15g，麦芽浸粉2-5g，酵母粉1-5g，醋酸钠3-5g，柠檬酸二胺1-2g，磷酸二氢钾0.5-1g，磷酸氢二钾0.5-1g，硫酸镁0.1-0.2g，吐温-80 1ml，溶于1000ml蒸馏水中，pH为6.5。

实施例2

种子培养基的制备

种子培养基的制备：葡萄糖10g，麦芽浸粉5g，酵母粉5g，醋酸钠5g，柠檬酸二胺2g，磷酸二氢钾0.5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.2g，吐温-80 1ml，溶于1000ml蒸馏水中，混匀，pH6.5，121℃灭菌30min。

实施例3

种子液的制备

挑取产朊假丝酵母单菌落接种和屎肠球菌单菌落至实施例2制成的种子培养基装载量为200mL/500mL的三角瓶中，于32-34℃、110rpm-130rpm摇床培养48h-72h制成种子液，备用。

实施例4

种子液的制备

挑取产朊假丝酵母单菌落接种和屎肠球菌单菌落至实施例2制成的种子培养基装载量为200mL/500mL的三角瓶中，于32℃、110rpm摇床培养48h制成种子液，备用。

实施例5

种子液的制备

挑取产朊假丝酵母单菌落接种和屎肠球菌单菌落至实施例2制成的种子培养基装载量为200mL/500mL的三角瓶中，于34℃、130rpm摇床培养72h制成种子液，备用。

实施例6

发酵培养基的制备

发酵培养基包括质量百分数为5-12%的玉米粉与豆饼粉混合物，2-5%的麦芽浸粉，0.5-2%氯化钠，pH为6.0-6.5。

玉米粉与豆饼粉混合物为将玉米与豆饼按照质量比为1：1.5-1.9，经过超微粉碎后，细度达到200-300目。

实施例7

发酵培养基的制备

以玉米粉与豆饼粉混合物5%，麦芽浸粉2%，氯化钠0.5%，pH值6.0配制发酵培养基，121℃灭菌30min。

其中玉米粉与豆饼粉混合物制备方法：将玉米与豆饼放入超微粉碎机中，其中玉米粉与豆饼粉的质量比为1：1.5，经过超微粉碎机处理后，使玉米粉与豆饼粉混合物的细度达到200目，备用。

实施例8

发酵培养基的制备

以玉米粉与豆饼粉混合物12%，麦芽浸粉5%，氯化钠2%，pH值6.5配制发酵培养基，121℃灭菌30min。

其中玉米粉与豆饼粉混合物制备方法：将玉米与豆饼放入超微粉碎机中，其中玉米粉与豆饼粉的质量比为1：1.9，经过超微粉碎机处理后，使玉米粉与豆饼粉混合物的细度达到300目，备用。

实施例9

制备复合维生素的方法

将实施例3中的种子液按照体积百分比为5%-10%的量接种至实施例6得到的发酵培养基中，培养48h-72h，转速为80rpm-120rpm进行深层发酵，当pH值降低至4-4.5，停止发酵，得到发酵混合液；

发酵混合液灭菌后进行叠式离心机固液分离，其中转速为5000-6000r/min，时间为3-6min，收集固相物质备用。

收集固相物质；再将固相物质在25-40℃下，浓缩10-15h，浓缩液即为复合维生素。经过检查和罐装后贴标签和包装，成为成品。

实施例10

制备复合维生素的方法

将实施例5中的种子液按照体积百分比为10%的量接种至实施例8得到的发酵培养基中，培养72h，转速为120rpm进行深层发酵，当pH值降低至4.5，停止发酵，得到发酵混合液；

发酵混合液巴氏灭菌后进行叠式离心机固液分离，其中转速为6000r/min,时间为6min，收集固相物质备用。

收集固相物质；再将固相物质在40℃，浓缩时间为10h，其中维生素D₂含量4644IU/ml、维生素B₁含量8.8mg/ml，维生素B₂含量10.8mg/ml、维生素B₆含量4.9mg/ml，维生素B₁₂含量6.4mg/ml。经过检查和罐装后贴标签和包装，成为成品。

实施例11

制备复合维生素的方法

将实施例4中的种子液按照体积百分比为5%的量接种至实施例7得到的发酵培养基中，培养48h，转速为80rpm进行深层发酵，当pH值降低至4，停止发酵，得到发酵混合液；

发酵混合液巴氏灭菌后进行叠式离心机固液分离，其中转速为5000r/min，时间为3min，收集固相物质备用。

收集固相物质；再将固相物质在25℃，浓缩时间为15h，浓缩后的液体中维生素D₂含量4633IU/ml、维生素B₁含量8.2mg/ml，维生素B₂含量11.2mg/ml、维生素B₆含量为4.8mg/ml，维生素B₁₂含量为6.9mg/ml。经过检查和罐装后贴标签和包装，成为成品。

实施例12

2018年8月濮阳市南乐县元村镇蛋鸡场，300日龄，该鸡场养殖规模是6000只。主要存在维生素维生素B₁缺乏症病状：生长不良，食欲减少，体重减轻，羽毛松乱缺乏光彩，特征性的病状是颈部肌肉发生痉挛，头向背后极度弯转，发生所谓角弓反张的现象，有的发生进行性瘫痪，不能行动。于此同时还伴有维生素D缺乏症状，蛋壳薄，蛋壳硬度很低，容易破。

该鸡场使用实施例10制备的复合维生素，每1吨饮水加复合维生素30g，按照含量比例进行混合均匀。一个疗程4－6天，每个疗程间隔2－3天；一个疗程后各种症状基本消失，恢复健康水平95%，产蛋率恢复正常水平，采食量增加10-20%，蛋壳硬度恢复正常。

实施例13

2018年6月焦作市温县祥云镇养鸡场，200日龄，该鸡场养殖规模是5800只。主要存在维生素B2缺乏症，病状表现：趾爪蜷缩，两脚发生瘫痪，病鸡用膝关节走路或用一支脚走路。同时还伴有B₁₂缺乏，主要变现为种采食量降低10-15%，产蛋率下降15-20%。该鸡场使用实施例11制备的复合维生素，每1吨饮水加复合维生素30g，一个疗程后，卷缩和膝关节走路症状基本消失，采食量增加恢复正常，蛋壳硬度恢复正常。

以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改为等同替换为改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。