间充质干细胞联合prp在制备用于治疗膝关节软骨损伤和骨关节炎药物中的应用
阅读说明：本技术 间充质干细胞联合prp在制备用于治疗膝关节软骨损伤和骨关节炎药物中的应用 (Application of mesenchymal stem cells in combination with PRP (platelet-rich plasma) in preparation of medicine for treating knee joint cartilage injury and osteoarthritis ) 是由 吴志新 李飚 李沛沛 樊小莉 于 2021-07-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了间充质干细胞联合PRP在制备用于治疗膝关节软骨损伤和骨关节炎药物中的应用,本发明采用间充质干细胞与富集血小板血浆联用用来治疗膝关节软骨损伤和骨关节炎,其中富集血小板血浆可在减轻膝关节损伤症状的同时,又可促进间充质干细胞在膝关节腔内成软骨分化,以实现对膝关节软骨损伤进行细胞修复与再生,且能够其能够极大的降低患者的症状,有利于患者更容易进行恢复。(The invention discloses application of mesenchymal stem cells combined with PRP (platelet rich plasma) in preparation of a medicine for treating knee joint cartilage injury and osteoarthritis.)
技术领域
本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及间充质干细胞联合PRP在制备用于治疗膝关节软骨损伤和骨关节炎药物中的应用。
背景技术
膝关节软骨属于透明软骨，由于软骨组织内没有血供，修复能力极差。在软骨损伤后几乎没有自身修复可能。目前临床治疗由于软骨损伤导致的膝关节疼痛及功能障碍时，多采用人工关节置换术，钻孔微骨折，自体或异体软骨移植或姑息治疗(膝关节腔内注射透明质酸)。费用高效果差，维持时间有限。膝关节损伤多发于中老年人和运动员，由于走路姿势不正确导致。
间充质干细胞(简称MCS)是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层，属于多能干细胞，存在于多种组织(如骨髓、脐带血和脐带组织、胎盘组织、脂肪组织等)。间充质干细胞具有多向分化潜力，是非造血干细胞的成体细胞，可以向多种间充质系列细胞(如成骨、成软骨及成脂肪细胞等)或非间充质系列细胞分化，并具有独特的细胞因子分泌功能。间充质干细胞能够迁移到损伤的确切部位，分化成各种细胞系，分泌对细胞生存和增殖至关重要的可溶性因子，调节免疫反应。间充质干细胞作为一种成体多功能干细胞，能够自我更新、多向分化，来源广泛，且容易体外分离培养和较低的免疫源性，具有组织损伤修复及免疫调节等作用，这些特性使其在急性放射损伤的治疗中具有潜在的应用价值。
血小板是存在于血液中的一种无核细胞，体积小，分静止相和功能相。静止相血小板没有作用，但是血管外胶原刺激下迅速由静止相转化为功能项，伸出伪足，形成网络阻止血细胞的逸出，起到止血作用。之后在组织中的血小板还能释放大量的细胞因子，促进血管内皮增生，促进组织修复。正常血小板在血液中的寿命大约为1-2周。PRP技术就是将静脉抽出的全血经无菌状态下离心后收集的其中的血小板，而得到富含血小板的血浆，其在局部注射可用于治疗局部损伤及其缓解疼痛。
发明内容
因此，基于以上背景，本发明提供了间充质干细胞联合PRP在制备用于治疗膝关节软骨损伤和骨关节炎药物中的应用。
本发明的技术方案为：
间充质干细胞联合PRP在制备用于治疗膝关节软骨损伤和骨关节炎药物中的应用；
进一步地，所述间充质干细胞来源于脐带组织或脐带血或骨髓或胎盘组织或自体脂肪组织。
进一步地，所述间充质干细胞来源于脐带组织。
本发明还提供一种用于治疗膝关节软骨损伤和骨关节炎的药物，所述药物包括有效量的间充质干细胞和自体富集血小板血浆。
进一步地，所述间充质干细胞来源于脐带组织或脐带血或骨髓或胎盘组织。
进一步地，所述间充质干细胞来源于脐带组织。
进一步地，所述药物剂型为注射剂型。
进一步地，所述药物采用膝关节腔内注射。
采用上述技术方案，具有的有益效果如下：
本发明采用间充质干细胞与富集血小板血浆联用以来膝关节软骨损伤和骨关节炎进行治疗，其治疗效果显著，且治疗周期短：其中的富集血小板血浆可在减轻膝关节损伤症状的同时，又可促进间充质干细胞在膝关节腔内成软骨分化，以实现在对膝关节软骨损伤进行细胞修复与再生，临床应用实验表明了间充质干细胞在膝关节软骨损伤修复中具有良好的防治作用，此对患者的恢复更为有利。
附图说明
图1为本发明实施例2的患者采用本发明进行治疗前的检测图片；
图2为本发明实施例2的患者采用本发明进行治疗后的检测图片。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。下述实施例中所用未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1：间充质干细胞联合PRP在制备用于治疗膝关节软骨损伤和骨关节炎药物中的应用，
本实施例选取2021年8月至2022年12月经MR影像和临床医生确诊膝关节软骨损伤的患者210例。
选取对象排除标准：①半年内有透明质酸注射史；②近期有病毒感染史及大量吸烟饮酒患者。
S1：间充质干细胞制备
经父母同意后取得出生后新鲜婴儿脐带，去除脐动静脉后残余组织剪碎成0.5-1.5mm的组织块，加入Ⅱ型胶原酶(2mg/ml)置37℃恒温振荡培养箱振荡消化3-4h，70μm滤网过滤。将细胞悬液在4℃、2000r/min 离心30min后洗涤，重悬于完全培养液中。以1×104/cm2密度将细胞接种于培养基中，置37℃、饱和湿度、 5％CO2培养箱中培养。72h后去除非贴壁细胞，每隔3-4d换液。细胞融合至80％加入胰酶消化传代。流式细胞仪检测CD14、CD31、CD34、CD45、CD73、CD90、CD105和HLA-DR的表达，行WJ-MSCs体外诱导分化实验鉴别细胞特性。所有治疗应用采用第3-5代细胞进行。
S2：将步骤S2制备的间充质干细胞加入生理盐水，配制成悬浮液。
S3：PRP的制备，皮肤消毒，采集患者自体外周静脉血10ml，肝素管容纳摇匀，2500转/分钟，离心 5分钟。管内液体分层，上层为血浆，下层为红细胞，中间薄层为血小板。小心抽取中间层和上层血浆，弃去下层红细胞。转移至无菌离心管进行二次离心，3500转/分钟，离心8分钟。后抽取底层富集血小板血浆约1ml。即完成制备PRP。
S4：将S3制备好的MSC与S4制备好的PRP混合制成5ml混合细胞制剂。用于膝关节腔内注射。
S5:膝关节腔内注射采用标准临床膝关节腔内注射方法。
S6:对治疗效果的评估，采用膝关节局部MR成像技术，术前检测膝关节软骨厚度，以及术后3个月软骨厚度，从而确定通过该技术对膝关节局部软骨损伤的修复情况，并结合患者主诉的临床症状缓解程度经采用国际通用WOMAC进行疼痛症状的评分，对治疗效果进行评估。
对本组患者进行局部注射治疗3月后，根据对患者的局部软骨损伤的修复情况及其WOMAC评分结果，本实施例的采用来源于脐带的间充质干细胞联合PRP对于膝关节软骨损伤的总有效率达到88％，症状缓解率76％，MR提示软骨有不同程度的修复，修复有效性达到51.2％。
实施例2：病患1，男，63岁。主诉：双膝关节疼痛伴行走困难5年，加重伴膝关节肿胀3年。患者退休后喜爱爬山运动，每周爬山一次，约4小时。5年前出现双侧膝关节肿胀，伴行走困难。口服芬必得， 1片/日，可缓解。仍坚持爬山，3年前，出现晨起双膝关节肿胀，疼痛，口服芬必得效果不佳，单次行走不足5分钟，步履缓慢。在我院骨科门诊，行膝关节MR检测。结论：双膝关节骨关节炎伴重度关节软骨损伤。给与透明质酸膝关节腔内注射，制动休息后，可缓解。3月后膝关节肿胀再次发生，再行透明质酸关节腔内注射后效果不显著。由于患者不接受人工膝关节置换手术，因此确诊并排除禁忌症后，给予患者异源性脐带间充质干细胞联合PRP进行局部注射治疗。
其中PRP共1ml，取自患者自体血10ml经无菌离心操作，纯化并分离血小板血浆后完成。脐带间充质干细胞，取自足月顺产胎儿脐带，排除各项传染病，在GMP实验室制备，经流式细胞检测符合间充质干细胞鉴定标准。1X10E8，3ml细胞悬液，与PRP混合后共4ml。
注射时，患者屈膝，悬足。取膝关节外侧窝45°进针。落空感出现，回抽无血，缓慢推注。2分钟完成治疗。
患者治疗4个月后，进行膝关节镜和MR检查，结果见图2，与图1(治疗前检测图片)相比较。
从图1可以明显看出患者股骨关节头可见软骨缺损，关节腔内有炎性渗出，软骨面厚度减少明显，而与图1相比较，图2则明显显示患者股骨头关节面光滑，关节软骨得到修复，软骨损伤程度明显减轻，并且患者自述其走平路可坚持15分钟，且没有明显疼痛，膝关节肿胀消失。
本发明中采用的MSC具有损伤修复和分化成软骨的能力，在膝关节腔内注射MSC可以有效修复已经损伤的软骨，克服了软骨自身难以修复的缺陷。PRP富含功能项血小板，可以释放大量促进损伤修复的细胞生长因子，并且有良好的止痛效果。两者联合应用可以迅速减轻患者疼痛，远期则能修复软骨，从而达到修复软骨损伤的效果，而不仅仅是缓解症状。
现市面多是采用局部注射透明质酸来对膝关节损伤和骨关节炎进行治疗，但是此药物进行治疗只能对症状进行缓解，而无法对软骨的修复起到积极的作用，也就是无法达到根本治疗的目的，并且随着注射次数的增加，其对症状的缓解疗效是逐渐递减的，最后甚至可能无效。而与其相比较，本方明不仅可对膝关节损伤和骨关节炎进的症状进行缓解，并且很明显根本的治疗效果，可实现标本兼治的治疗效果。
以上对本发明及其实施方式进行了描述，这种描述没有限制性，上述实施例中所示的也只是本发明的实施方式之一，实际的结构并不局限于此。总而言之如果本领域的普通技术人员受其启示，在不脱离本发明创造宗旨的情况下，不经创造性的设计出与该技术方案相似的结构方式及实施例，均应属于本发明的保护范围。