阅读说明：本技术 一种荷叶总黄酮的提取方法 (Method for extracting total flavonoids from lotus leaves ) 是由 吕颖捷 崔璀 彭培立 赵永梅 李元元 吴妍 霍娜娜 李锦� 张娜娜 唐贝 于 2020-07-14 设计创作，主要内容包括：本发明属于黄酮提取方法领域,特别涉及一种荷叶总黄酮的提取方法。包括荷叶粉制备,乙醇提取,超声波提取,酶解,浓缩干燥。本发明的乙醇-超声波-酶提取的三级提取顺序能够高效的提取荷叶总黄酮。(The invention belongs to the field of flavone extraction methods, and particularly relates to an extraction method of lotus leaf total flavone. Comprises the steps of lotus leaf powder preparation, ethanol extraction, ultrasonic extraction, enzymolysis, concentration and drying. The three-stage extraction sequence of ethanol-ultrasonic-enzyme extraction can efficiently extract the lotus leaf total flavonoids.)

一种荷叶总黄酮的提取方法

技术领域

本发明属于黄酮提取方法领域，特别涉及一种荷叶总黄酮的提取方法。

背景技术

生物总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄(醇)、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。由于自由基生命科学的进展，使具有很强的抗氧化和消除自由基作用的类黄酮受到空前的重视。

荷叶是睡莲科植物莲的叶片，在食用与药用两方面均有广泛的应用，荷叶之所以有存在药理作用是因为其含有多种具备药性的物质，其中，荷花黄酮类化合物含量相对较大具有抗病毒、抗氧化、降血脂和抗癌等功效。目前，对于荷花黄铜类化合物的提取方法主要是溶剂提取法，微波提取法、超声提取法、酶解法等，对于荷花黄酮类化合物的提取率较低，大部分在1-5％之间，浪费原料，很少有人结合不同方法对荷花黄酮类化合物进行提取，因此，本发明提供一种荷叶总黄酮的提取方法。

发明内容

本发明提供的荷叶总黄酮的提取方法，能够高效的提取荷叶总黄酮，极具应用前景。

本发明提供了一种荷叶总黄酮的提取方法，包括以下步骤：

S1，取荷叶干燥、粉碎过30-50目筛，获得荷叶粉；

S2，将体积浓度为60-80％的乙醇预热至45-65℃，然后与S1中获得的荷叶粉按照用量比3g：40-80ml混合，搅拌30-60min，获得一级提取液；

S3，在一级提取液中加入α-生育酚，混合均匀后置于超声波50-80W功率下45-65℃辐射10-40s，获得二级提取液；

所述α-生育酚与一级提取液的用量比为0.5mg：40-80ml；

S4，待二级提取液自然降温至30-45℃后保温，然后加入提取酶，调节pH为5-6，酶解2-4h后获得三级提取液；

所述提取酶与二级提取液用量比为1-4mg：40-80ml；

S5，将三级提取液进行过滤，获得第一次滤液和第一次滤渣，将滤渣继续与提前预热的乙醇溶液混合，搅拌后进行第二次过滤，获得第二次滤液和第二次滤渣，合并第一次滤液和第二次滤液，浓缩干燥后获得提取物，回收乙醇；

S6，在S5中获得的提取物中加入蒸馏水，获得总黄酮水溶性提取物；

提取物与蒸馏水的用量比为1-3g：10ml。

优选地，S1中，所述荷叶干燥温度为50-80℃。

优选地，S4中，所述提取酶为纤维素酶和果胶酶中的任意一种。

优选地，S5中，所述乙醇溶液浓度为60-80％，温度为45-65℃。

优选地，S5中，所述第一次滤液和第二次滤液合并后浓缩干燥方式为真空干燥、喷雾干燥和冷冻干燥中的一种。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

1、本发明提供的技术方案通过对荷花进行三级提取、两次过滤，获得的总黄酮的平均提取率高达15.02％。

2、本发明中按照乙醇-超声波-酶提取的三级顺序对荷花进行提取，该顺序大大提高了荷叶总黄酮的提取率，乙醇-超声波-酶提取的三级顺序是其他顺序提取率的3-9倍。

3、在超声波下提取总黄酮时通过添加α-生育酚，能够缓解超声波对总黄酮活性的破坏，从而提高提取率。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明各实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

实施例1

一种荷叶总黄酮的提取方法，包括以下步骤：

S1，将荷叶置于恒温干燥箱中60℃下干燥至恒重后粉碎，过40目筛，获得荷叶粉；

S2，取荷叶粉3g置于烧杯中，加入60ml提前预热至50℃的乙醇溶液，连续搅拌40min，获得一级提取液；

所述乙醇溶液体积浓度为70％；

S3，在一级提取液中加入α-生育酚0.5mg，混合均匀后置在超声波清洗机中于60W功率下50℃辐射30s，获得二级提取液；

S4，待二级提取液自然降温至40℃后保温，然后加入果胶酶3mg，调节pH为5，酶解3h后获得三级提取液；

S5，将三级提取液进行抽滤，获得第一次滤液和第一次滤渣，将滤渣继续加入60ml提前预热至50℃的乙醇溶液，搅拌40min后进行第二次抽滤，获得第二次滤液和第二次滤渣，合并第一次滤液和第二次滤液喷雾干燥获得提取物，回收乙醇；

S6，在S5中获得的提取物中加入蒸馏水定容至10ml，获得总黄酮水溶性提取物。

实施例2

一种荷叶总黄酮的提取方法，包括以下步骤：

S1，将荷叶置于恒温干燥箱中60℃下干燥至恒重后粉碎，过30目筛，获得荷叶粉；

S2，取荷叶粉3g置于烧杯中，加入40ml提前预热至45℃的乙醇溶液，连续搅拌30min，获得一级提取液；

所述乙醇溶液体积浓度为60％；

S3，在一级提取液中加入α-生育酚0.5mg，混合均匀后置在超声波清洗机中于50W功率下45℃辐射10s，获得二级提取液；

S4，待二级提取液自然降温至30℃后保温，然后加入果胶酶3mg，调节pH为5，酶解2h后获得三级提取液；

S5，将三级提取液进行抽滤，获得第一次滤液和第一次滤渣，将滤渣继续加入60ml提前预热至45℃的乙醇溶液，搅拌40min后进行第二次抽滤，获得第二次滤液和第二次滤渣，合并第一次滤液和第二次滤液喷雾干燥获得提取物，回收乙醇；

S6，在S5中获得的提取物中加入蒸馏水定容至10ml，获得总黄酮水溶性提取物。

实施例3

一种荷叶总黄酮的提取方法，包括以下步骤：

S1，将荷叶置于恒温干燥箱中60℃下干燥至恒重后粉碎，过50目筛，获得荷叶粉；

S2，取荷叶粉3g置于烧杯中，加入80ml提前预热至65℃的乙醇溶液，连续搅拌60min，获得一级提取液；

所述乙醇溶液体积浓度为80％；

S3，在一级提取液中加入α-生育酚0.5mg，混合均匀后置在超声波清洗机中于80W功率下65℃辐射40s，获得二级提取液；

S4，待二级提取液自然降温至45℃后保温，然后加入果胶酶3mg，调节pH为5，酶解4h后获得三级提取液；

S5，将三级提取液进行抽滤，获得第一次滤液和第一次滤渣，将滤渣继续加入60ml提前预热至65℃的乙醇溶液，搅拌40min后进行第二次抽滤，获得第二次滤液和第二次滤渣，合并第一次滤液和第二次滤液喷雾干燥获得提取物，回收乙醇；

S6，在S5中获得的提取物中加入蒸馏水定容至10ml，获得总黄酮水溶性提取物。

对比例1

一种荷叶总黄酮的提取方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：

首先进行超声波提取，然后进行乙醇提取，最后进行酶提取，即操作顺序为S1-S3-S2-S4-S5-S6。

对比例2

一种荷叶总黄酮的提取方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：

首先进行酶提取，然后进行乙醇提取，最后进行超声波提取，即操作顺序为S1-S4-S2-S3-S5-S6。

对比例3

一种荷叶总黄酮的提取方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：

首先进行乙醇提取，然后进行酶提取，最后进行超声波提取，即操作顺序为S1-S2-S4-S3-S5-S6。

对比例4

一种荷叶总黄酮的提取方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：

首先进行超声波提取，然后进行酶提取，最后进行乙醇提取，即操作顺序为S1-S3-S4-S2-S5-S6。

对比例5

一种荷叶总黄酮的提取方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：

首先进行酶提取，然后进行超声波提取，最后进行乙醇提取，即操作顺序为S1-S4-S3-S2-S5-S6。

对比例6

一种荷叶总黄酮的提取方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：

S3中，并未添加α-生育酚。

以上实施例1-3为本发明提供的技术方案的具有代表性的具体实施例，对比例1-5按照不同顺序进行提取，本发明对实施例1-3和对比例1-5获得的总黄酮提取物进行检测，按照中国药典法2010版标准测定，检测结果如下；

表1实施例1-3总黄酮提取率

由表1可知，本发明提供的技术方案对荷花总黄酮的平均提取率高达15.02％，本发明中通过乙醇-超声波-酶提取的三级顺序对荷花粉进行提取，大大提高了荷花总黄酮的提取率，与对比例1-5相比，本申请的技术方案的提取率是按照其他顺序提取的3-9倍，通过与对比例6相比，发现超声波提取过程中添加α-生育酚能够提高总黄酮提取率。

需要说明的是，本发明权利要求书中采用的步骤方法与上述实施例相同，为了防止赘述，本发明的描述了优选的实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。