阅读说明：本技术 海藻糖在制备重组人促红素液体制剂中的应用及重组人促红素液体制剂、制备方法和应用 (Application of trehalose in preparation of recombinant human erythropoietin liquid preparation, preparation method and application ) 是由 庞甲佩 解福生 郝向慧 马晓英 姜栋 徐兴贵 秦绪才 吴化斌 于 2020-05-27 设计创作，主要内容包括：本发明涉及海藻糖在制备重组人促红素液体制剂中的应用及重组人促红素液体制剂、制备方法和应用。一种重组人促红素液体制剂,包括重组人促红素,海藻糖,渗透压调节剂,pH缓冲体系和水。本发明所用海藻糖不存在潜在的病毒性污染,能保护重组人促红素药物的活性和稳定性,也能阻止玻璃容器将药物蛋白吸附至瓶壁上,而影响药物蛋白含量的稳定性,使得该药物制剂更易于保存和运输。本发明的药物制剂经过稳定性实验,在常温下也能很好保持蛋白质活性和稳定性；由于不使用人血白蛋白,消除了病毒血源性污染的可能；海藻糖容易获得,降低了重组人促红素成品的生产成本。(The invention relates to an application of trehalose in preparation of a recombinant human erythropoietin liquid preparation, the recombinant human erythropoietin liquid preparation, a preparation method and an application. A liquid preparation of recombinant human erythropoietin comprises recombinant human erythropoietin, trehalose, an osmotic pressure regulator, a pH buffer system and water. The trehalose used by the invention has no potential viral pollution, can protect the activity and stability of the recombinant human erythropoietin medicament, and can prevent the medicament protein from being adsorbed on the bottle wall by a glass container to influence the stability of the content of the medicament protein, so that the medicament preparation is easier to store and transport. The pharmaceutical preparation of the invention can well maintain the activity and stability of protein at normal temperature through stability experiments; because human serum albumin is not used, the possibility of virus blood-borne pollution is eliminated; the trehalose is easy to obtain, and the production cost of the recombinant human erythropoietin finished product is reduced.)

海藻糖在制备重组人促红素液体制剂中的应用及重组人促红 素液体制剂、制备方法和应用

技术领域

本发明属于生物制药工程领域，具体涉及海藻糖在制备重组人促红素液体制剂中的应用及重组人促红素液体制剂、制备方法和应用。

背景技术

人促红素(EPO)是一种糖蛋白，是一种由肾脏分泌的人体激素，其生理作用主要是刺激人骨髓中血红蛋白和红细胞的生成。重组人促红素(rhEPO)是应用基因工程的方法生产的药用蛋白，它与天然人促红素具有相同的体内外生理功能，临床主要用于肾功能不全病人所致贫血，包括透析与非透析病人治疗；外科围手术期红细胞动员的治疗；肿瘤放化疗病人贫血的治疗等。重组人促红素是目前为止人类开发最为成功的基因工程药物之一。

人血白蛋白是重组人促红素药物中常见和有效的保护剂(见专利US 4703008)。但人血白蛋白作为直接从人血中提取的血液制品，近年来供应日趋紧张，价格上涨很快，并且存在着受到外源病毒，如肝炎病毒、爱滋病毒污染的可能性；另外，临床上发现某些人会对人血白蛋白过敏，导致荨麻疹和皮肤疹，也限制了患者使用。

为了解决这些问题，人们致力于开发不含人血白蛋白的重组人促红素制剂。比如专利CN1247257C公开了一种新型重组人促红素制剂，包括甘露醇、金属螯合剂、L-组氨酸盐、pH缓冲液、氯化钠等渗液等。专利CN100502943C公开的一种药物制剂包括吐温80、吐温20、氯化钠、pH缓冲液等。这些专利尽管避免使用人血白蛋白，但金属螯合剂可能会引起低血钙，而吐温类表面活性剂可能会激发机体免疫系统，导致产生抗体。另外，这些专利制剂用辅料多，生产工艺复杂，由辅料引起的药品不良反应正日益引起人们的重视。

因此，开发一种配方和生产工艺简单，不含人血白蛋白，长期储存性质稳定，安全可靠的新型重组人促红素制剂具有重要的研究意义和应用价值。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中不含人血白蛋白的重组人促红素制剂存在安全可靠不佳、辅料多，生产工艺复杂的缺陷或不足，提供海藻糖作为重组人促红素的保护剂在制备重组人促红素液体制剂中的应用。本发明的研究发现，海藻糖可作为重组人促红素的保护剂，适宜用于制备重组人促红素液体制剂。

本发明的另一目的在于提供一种重组人促红素液体制剂。本发明提供的重组人促红素液体制剂配方简单，不含人血白蛋白，长期储存性质稳定，安全可靠。

本发明的另一目的在于提供上述重组人促红素液体制剂的制备方法。

本发明另一目的在于提供上述重组人促红素液体制剂在制备促血红蛋白或红细胞生成的药物中的应用。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

海藻糖作为重组人促红素的保护剂在制备重组人促红素液体制剂中的应用。

海藻糖是一种安全、可靠的天然糖类。海藻糖是由两个葡萄糖分子以1,1- 糖苷键构成的非还原性糖，有3种异构体即海藻糖(α，α)、异海藻糖(β，β) 和新海藻糖(α，β)，并对多种生物活性物质具有非特异性保护作用。

本发明研究发现，海藻糖能保护重组人促红素药物的活性和稳定性，可作为重组人促红素的保护剂添加至重组人促红素液体制剂中，其安全无毒，不存在潜在的病毒性污染；另外，海藻糖能阻止玻璃容器将药物蛋白吸附至瓶壁上，而影响药物蛋白含量的稳定性，使得该药物制剂更易于保存和运输。

本发明所指的保护剂是指稳定以及保护蛋白生物活性的物质。

优选地，所述海藻糖为药用海藻糖。

更为优选地，所述海藻糖为注射级的药用海藻糖。

优选地，所述重组人促红素液体制剂中海藻糖的质量浓度为1～5％g/mL。

一种重组人促红素液体制剂，包括如下组分：

重组人促红素2000～12000IU/mL，

海藻糖1～5％g/mL，

渗透压调节剂50～200mmol/L，

pH缓冲体系5～50mmol/L，pH为5～8，

水。

本发明利用海藻糖作为重组人促红素液体制剂的保护剂，在不添加人血白蛋白的情况下，在常温下也能很好保持蛋白质活性和稳定性；由于不使用人血白蛋白，消除了病毒血源性污染的可能；商品化药用海藻糖容易获得，降低了重组人促红素成品的生产成本。

优选地，所述重组人促红素的含量为2000～5000IU/mL。

本领域常规的渗透压调节剂、pH缓冲体系均可用于本发明中。

优选地，所述渗透压调节剂为氯化钠。

更为优选地，所述渗透压调节剂为注射用氯化钠。

优选地，所述渗透压调节剂的浓度为80mmol/L。

优选地，所述pH缓冲体系为磷酸二氢钠/磷酸氢二钠缓冲体系。

本发明药物制剂可以是水针剂，也可以是冻干制剂，但优选是水针剂。

优选地，所述重组人促红素液体制剂为水针剂或冻干制剂。

更为优选地，所述重组人促红素液体制剂为水针剂。

本发明还请求保护上述重组人促红素液体制剂的制备方法，包括如下步骤：将重组人促红素、海藻糖、渗透压调节剂、pH调节体系和水混合，即得。

本发明的制备方法工艺简单，适宜批量生产。

具体地，按配方量称取海藻糖、渗透压调节剂(例如氯化钠)、pH缓冲体系 (例如磷酸二氢钠和磷酸氢二钠)，用一定量注射用水溶解，检测并微调pH值；量取并缓慢加入重组人促红素原液，再补加注射用水定容，混合均匀后即为半成品溶液；配制好的半成品溶液用灭菌后的0.22μm微孔滤膜除菌过滤，并取样检测内毒素和无菌；内毒素检测合格后进行灌装，灌装时再用灭菌的0.22μm囊式滤器在线除菌过滤，灌装时进行压塞和轧盖，即得到重组人促红素制剂成品。

上述重组人促红素液体制剂在制备促血红蛋白或红细胞生成的药物中的应用也在本发明的保护范围内。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明所用海藻糖不存在潜在的病毒性污染，能保护重组人促红素药物的活性和稳定性，也能阻止玻璃容器将药物蛋白吸附至瓶壁上，而影响药物蛋白含量的稳定性，使得该药物制剂更易于保存和运输。

本发明的药物制剂经过稳定性实验，在常温下也能很好保持蛋白质活性和稳定性；由于不使用人血白蛋白，消除了病毒血源性污染的可能；海藻糖容易获得，降低了重组人促红素成品的生产成本。

具体实施方式

下面结合实施例进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域常规条件或按照制造厂商建议的条件；所使用的原料、试剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场等商业途径得到的原料和试剂。本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

实施例1

本实施例提供一种重组人促红素注射液，其配制过程如下，具体配制得到 5000支2000IU/1ml/支的重组人促红素注射液。

1、配方组成：

2、配制：

按配方量称取150g海藻糖，23.4g氯化钠，11.3g磷酸二氢钠二水和2.4g磷酸氢二钠，用一定量注射用水溶解，量取并缓慢加入重组人促红素原液，再补加注射用水定容至5000mL，混合均匀后即为半成品溶液；配制好的半成品溶液用灭菌后的0.22μm微孔滤膜除菌过滤至无菌容器内，并取样检测内毒素和无菌。

3、分装：

内毒素检测合格后进行分装，分装时再用灭菌的0.22μm囊式滤器在线除菌过滤，每支药用西林瓶分装1mL，分装时进行压塞和轧盖，即得到2000IU/1mL/ 支的重组人促红素成品。

实施例2

本实施例提供一种重组人促红素注射液，其配制过程如下，具体配制得到 5000支5000IU/1mL/支的重组人促红素注射液。

1、配方组成：

2、配制：

按配方量称取150g海藻糖，23.4g氯化钠，11.3g磷酸二氢钠二水和2.4g磷酸氢二钠，用一定量注射用水溶解，量取并缓慢加入重组人促红素原液，再补加注射用水定容至5000mL，混合均匀后即为半成品溶液；配制好的半成品溶液用灭菌后的0.22μm微孔滤膜除菌过滤至无菌容器内，并取样检测内毒素和无菌。

3、分装：

内毒素检测合格后进行分装，分装时再用灭菌的0.22μm囊式滤器在线除菌过滤，每支药用西林瓶分装1mL，分装时进行压塞和轧盖，即得到5000IU/1mL/ 支的重组人促红素成品。

实施例3

本实施例提供一种重组人促红素注射液，其配制过程中，除配方中选用的海藻糖的用量不同外，其余均与实施例1一致。具体地，本实施例的重组人促红素注射液中海藻糖的浓度为1％g/mL，其用量为50g。

实施例4

本实施例提供一种重组人促红素注射液，其配制过程中，除配方中选用的海藻糖的用量不同外，其余均与实施例1一致。具体地，本实施例的重组人促红素注射液中海藻糖的浓度为5％g/mL，其用量为250g。

通过调整各组分的用量，可制备得到其它配方组成的重组人促红素注射液，在此就不再赘述。

性能测试

对实施例1～4提供的重组人促红素注射液的稳定性进行测定，具体测试过程及结果如下。

(1)高温和光照稳定性实验

将样品分别置于45℃和3000Lx光照环境下，在5天和10天分别取样检查外观、 pH值和活性，并与样品初始检测值比较，判断样品的稳定性。

如表1，为以实施例1～4提供的重组人促红素注射液作为样品测定的结果。

表1高温和光照稳定性实验测定结果

由上述实验结果可知，上述样品在45℃和3000Lx光照环境下，在10天之内性质保持稳定，说明该制剂配方稳定性较好，能耐受短期的高温和光照条件。

(2)常温(25℃)加速实验

将样品置于25℃环境下，在第1、2、3、6月分别取样检查外观、pH值和活性，并与样品初始检测值比较，判断样品的稳定性。

如表2，为实施例1～4提供的重组人促红素注射液作为样品测定的结果。

表2常温(25℃)加速实验的测定结果

由上述实验结果可知，上述样品在25℃常温环境下，在6个月之内性质保持稳定，说明该制剂配方稳定性较好，在常温下药物性质能保持稳定。

(3)储存条件(2～8℃)长期实验

将样品置于2～8℃环境下，在第3、6、9、12、18月分别取样检查外观、pH 值和活性，并与样品初始检测值比较，判断样品的稳定性。

如表3和4，为实施例1～4提供的重组人促红素注射液作为样品测定的结果。

表3实施例1～2储存条件(2～8℃)长期实验的测定结果

表4实施例3～4储存条件(2～8℃)长期实验的测定结果

由上述实验结果可知，上述样品在在2～8℃储存环境下，在18个月之内外观、pH和活性等性质保持稳定，说明该制剂配方稳定性较好，能满足药品储存和运输条件。

上述实施例和应用实验例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。