一种椰酵假单胞菌抑菌组合物及应用
阅读说明：本技术 一种椰酵假单胞菌抑菌组合物及应用 (Coco ferment pseudomonas antibacterial composition and application thereof ) 是由 黄琼叶 杨亚琼 张亚宜 于 2021-07-13 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种椰酵假单胞菌抑菌组合物及应用,所述组合物包含(1)葡萄糖氧化酶；(2)葡萄糖或产葡萄糖组合物；所述产葡萄糖组合物是指能反应产生葡萄糖的组合物。本发明提供的椰酵假单胞菌抑菌组合物对于椰酵假单胞菌具有良好的抑制效果,将其用于食品加工中,对椰酵假单胞菌有较强抑菌作用,也可抑制椰酵假单胞菌产米酵菌酸毒素,且本发明组合物的成分用于食品加工能与食物原味有良好的适配性,长时间食用也不会给身体带来副作用。为防止食品椰酵假单胞菌污染提供了一种新型、天然、安全的方案。(The invention provides a pseudomonas cocofermentum bacteriostatic composition and application, wherein the composition comprises (1) glucose oxidase; (2) glucose or a glucose-producing composition; by glucose-producing composition is meant a composition that reacts to produce glucose. The pseudomonas cocofermentum antibacterial composition provided by the invention has a good inhibition effect on pseudomonas cocofermentum, has a strong antibacterial effect on pseudomonas cocofermentum when being used for food processing, and can also inhibit the pseudomonas cocofermentum from producing zymophyte toxin, and the components of the composition can have good adaptability to the original taste of food when being used for food processing, and can not bring side effects to the body after being eaten for a long time. Provides a novel, natural and safe scheme for preventing the food from being polluted by the food of the coconut fermentation pseudomonas.)
技术领域
本发明属于天然抑菌剂
技术领域
，更具体地，涉及一种椰酵假单胞菌抑菌组合物及应用。背景技术
椰酵假单胞菌(pseudomonas cocovenenans)，为革兰氏阴性短杆菌两段钝圆，无牙孢，有鞭毛，在自然界分布广泛，椰酵假单胞杆菌为兼性厌氧，易在食品表面生长。米酵菌酸(Bongkrekic Acid)是由椰酵假单胞菌产生的一种可以引起食物中毒的毒素，米酵菌酸对酸、氧化剂和日光不稳定，但对热稳定，在100℃煮沸和高压(121℃)条件下，也不能被破坏，故被米酵菌酸污染的熟食也可引起人或动物中毒，重者可致死亡，一般发病症状最早出现在胃部不适，恶心呕吐，腹胀、腹痛等。呕吐时初为食物或黄绿色水样物，有的呈咖啡样物。继消化道症状后也可能出现肝肿大、肝功能异常等中毒性肝炎为主的临床表现，重症者出现肝昏迷，甚至死亡。
现有技术“椰毒假单胞菌中毒机理及其预防措施研究，陈佳，2019”公开了椰酵假单胞菌分布于自然界，在发酵玉米面制品，变质银耳及其他变质淀粉类(糯米、小米、高粱米和马铃薯粉等)制品中易产生米酵菌酸毒素，严重影响米面及其制品的销售，给其生产厂家带来了巨大损失。有效防控椰酵假单胞菌污染以及米酵菌酸的产生，对于保障我国食品安全和维护国家经济利益具有重要意义。
现有技术“糖对椰酵假单胞菌产毒性能的影响研究，王静、刘秀梅，1996年7月”公开了葡萄糖和甘油的加入使椰酵假单胞菌的产毒能力大幅度提高，产毒量不低于在马铃薯葡萄糖琼脂中。蔗糖和淀粉对椰酵假单胞菌产毒性能影响不大，可能是由于椰酵假单胞菌不能分解利用蔗糖和淀粉。提示我们在食品加工过程中应回避该菌的产毒条件，创造抑制其产毒的条件，如高盐(1.5％以上)、低pH(5.5以下)等。
目前，对于控制食品中椰酵假单胞菌以及抑制其产米酵菌酸尤为重要，目前医学上没有针对米酵菌酸的特效解毒药，病情的严重程度和治愈情况只和摄入的米酵菌酸毒素有关。
发明内容
本发明针对现有技术中对椰酵假单胞菌的控制所存在的不足，旨在提供一种椰酵假单胞菌抑菌组合物及应用，本发明首次研究表明，葡萄糖氧化酶和葡萄糖混合后对于椰酵假单胞菌具有良好的抑制作用，因此，将其用于食品加工中，能有效抑制椰酵假单胞菌。
且葡萄糖氧化酶和葡萄糖成分源自天然，安全，用于食品加工可与食物原味有良好的适配性，长时间食用也不会给身体带来副作用。
本发明的首要目的是提供一种椰酵假单胞菌抑菌组合物。
本发明的另一目的是提供一种包含上述组合物的抑制椰酵假单胞菌产米酵菌酸的制剂。
本发明的再一目的是提供上述椰酵假单胞菌抑菌组合物在制备椰酵假单胞菌抑菌制剂中的应用。
本发明的再一目的是提供上述椰酵假单胞菌抑菌组合物在抑制椰酵假单胞菌产米酵菌酸中的应用。
本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：
本发明提供了一种椰酵假单胞菌抑菌组合物，包含如下所述(1)和(2)的组分；
(1)葡萄糖氧化酶；
(2)葡萄糖和/或产葡萄糖组合物；
所述产葡萄糖组合物是指能反应产生葡萄糖的组合物。
上述组合物中，葡萄糖氧化酶(glucos oxidase，GOD)分布于动植物和微生物体内，是食品工业中一种重要的工业用酶，广泛用于葡萄酒、啤酒、果汁、奶粉等食品脱氧、面粉改良、防止食品褐变等方面，在食品快速检测及生物传感器上也有广泛应用。本发明研究表明，葡萄糖氧化酶和葡萄糖混合后对于椰酵假单胞菌具有良好的抑制效果，因此，本发明请求保护上述葡萄糖氧化酶和葡萄糖的组合物，此外，基于葡萄糖也可由多种食品工业常用的多糖、寡糖与其相应的酶制剂反应得到，因此，对于此类可反应产生葡萄糖的组合物与葡萄糖的组合也在本发明的保护范围内。
进一步地，所述产葡萄糖组合物选自淀粉-淀粉酶组合物、纤维素-纤维素酶组合物、蔗糖-蔗糖酶组合物或麦芽糖-麦芽糖酶组合物中的一种或几种。
上述组合物成分源自天然，安全性高，在常规食品加工的温度条件下，酶可水解相应的多糖或寡糖产生葡萄糖，产生的葡萄糖进一步与葡萄糖氧化酶发挥对椰酵假单胞菌的抑制作用。
优选地，所述葡萄糖氧化酶和葡萄糖的质量比为0.1～20。
进一步优选地，所述葡萄糖氧化酶和葡萄糖的质量比为1：6～9。
最优选地，所述葡萄糖氧化酶和葡萄糖的质量比为1：9。
基于发明人进一步的研究结果表明，本发明上述组合物，不仅可抑制椰酵假单胞菌，还可有效抑制椰酵假单胞菌产米酵菌酸。因此，本发明还请求保护一种包含上述椰酵假单胞菌抑菌组合物的椰酵假单胞菌抑菌制剂；以及一种包含上述椰酵假单胞菌抑菌组合物的抑制椰酵假单胞菌产米酵菌酸的制剂。所述制剂除了包含上述椰酵假单胞菌抑菌组合物作为有效成分外，还包括食品中可接受的辅料和/或加工助剂。
此外，上述椰酵假单胞菌抑菌组合物在制备椰酵假单胞菌抑菌制剂中的应用，以及所述椰酵假单胞菌抑菌组合物在抑制椰酵假单胞菌产米酵菌酸中的应用也都在本发明的保护范围内。
本发明的上述组合物对于椰酵假单胞菌或其产物米酵菌酸的抑制，主要是在食品领域中对于该菌和毒素的防治和控制。具体是将所述椰酵假单胞菌抑菌组合物与食品原料混合进行加工，在加工过程中可有效抑制食品原料中的椰酵假单胞菌；在后期食品的储藏过程中，若因环境污染或储存不当导致食品被椰酵假单胞菌污染，还可有效抑制食品中椰酵假单胞菌产米酵菌酸。
优选地，所述椰酵假单胞菌抑菌组合物在食品中的添加量为0.1～0.5wt％。
通常，有3类食品被环境中的微生物污染容易产生椰酵假单胞菌：(1)谷类制品如发酵玉米面、糯玉米汤圆粉、玉米淀粉、发酵糯小米、吊浆粑、糍粑、醋凉粉、河粉等。(2)变质银耳、木耳。(3)薯类制品如马铃薯粉条、甘薯面、山芋淀粉等。因此，本发明的抑菌组合物可用于上述常见易被椰酵假单胞菌污染的食品当中。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明首次研究表明，本发明提供的椰酵假单胞菌抑菌组合物对于椰酵假单胞菌具有良好的抑制效果，将其用于食品加工中，能有效抑制椰酵假单胞菌以及抑制椰酵假单胞菌产米酵菌酸毒素，且组合物的成分用于食品加工能与食物原味有良好的适配性，长时间食用也不会给身体带来副作用。为防止食品椰酵假单胞菌污染提供了一种新型、天然、安全的方案。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非另有说明，本发明实施例采用的原料试剂为常规购买的原料试剂。
椰酵假单胞菌购自中国菌种资源库保藏中心，编号BMZ135745。
实施例1椰酵假单胞菌抑菌组合物
本实施例提供了5种由葡萄糖氧化酶和葡萄糖按不同质量比组合的椰酵假单胞菌抑菌组合物：
(1)组合物1：葡萄糖氧化酶和葡萄糖的质量比为1：0.1；
(2)组合物2：葡萄糖氧化酶和葡萄糖的质量比为1：1；
(3)组合物3：葡萄糖氧化酶和葡萄糖的质量比为1：6；
(4)组合物4：葡萄糖氧化酶和葡萄糖的质量比为1：9；
(5)组合物5：葡萄糖氧化酶和葡萄糖的质量比为1：20。
实施例2椰酵假单胞菌抑菌组合物抑菌试验
1、实验方法
按照国标《微生物源抗生素类次生代谢产物抗细菌活性测定抑菌圈法》(GB/T38483-2020)检测椰酵假单胞菌抑菌组合物对椰酵假单胞菌的抑制效果。试验平板中椰酵假单胞菌悬液的浓度设定为1×107CFU/mL。向试验平板中分别加入实施例1中的5种椰酵假单胞菌抑菌组合物1-5，调整试验平板中椰酵假单胞菌抑菌组合物的浓度分别是3mg/mL、1.5mg/mL、0.6mg/mL。试验平板在37℃下培养24小时后，观察抑菌圈的大小。
以不加椰酵假单胞菌抑菌组合物为空白对照组。
2、实验结果
表1不同椰酵假单胞菌抑菌组合物在不同浓度下对椰酵假单胞菌的抑制效果
从表1的结果可以看出，采用组合物1-4在3mg/mL、1.5mg/mL、0.6mg/mL的浓度下，其相比于组合物5对椰酵假单胞菌具有更显著的效果。
实施例3椰酵假单胞菌抑菌组合物对河粉中椰酵假单胞菌以及米酵菌酸的抑制实验
基于葡萄糖氧化酶和葡萄糖的组合物对椰酵假单胞菌有明显的抑制效果，因此发明人进一步研究葡萄糖氧化酶和葡萄糖的组合物对淀粉类食品中椰酵假单胞菌以及米酵菌酸的抑制作用。
1、实验方法
(1)试验分组：
实验组：按照常规的河粉生产工艺：大米→清洗→浸泡→磨浆→蒸浆→切条→冷却→河粉成品。在磨浆后，蒸浆前向米浆中加入0.3wt％的组合物4和0.1mL/L的椰毒假单胞菌菌悬液(活菌含量为107/mL)，将米浆放置过夜再蒸浆；
对照组1：同实验组的工艺，区别在于加工过程中不加组合物4；
对照组2：同实验组的工艺，区别在于蒸浆前向米浆中加入0.3wt％的葡萄糖氧化酶。
(2)将实验组和对照组制备的新鲜河粉分别在0～10℃条件下密闭放置15天，测试河粉中的椰酵假单胞菌以及米酵菌酸含量。
椰酵假单胞菌的检测方法：中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验(GB/T 4789.29-2003)。
米酵菌酸含量的测试方法：食品安全国家标准食品中米酵菌酸的测定(GB5009.189-2016)。
2、实验结果
表2河粉中椰酵假单胞菌数量(CFU/g)
表3河粉中米酵菌酸的含量(μg/g)
如表2和表3所示，基于发明人进一步的研究结果表明，将本发明的椰酵假单胞菌抑菌组合物加入到河粉等淀粉类食品中，不仅可有效抑制河粉在生产或储藏过程中被污染所产生的椰酵假单胞菌，还可有效抑制椰酵假单胞菌产米酵菌酸。而单独加入葡萄糖氧化酶对河粉中椰酵假单胞菌的抑制效果不佳，虽然未检出米酵菌酸，但是菌的增长是很显著的，随着存放时间的延长，必然会产生米酵菌酸。
实施例4椰酵假单胞菌抑菌组合物对木耳中椰酵假单胞菌以及米酵菌酸的抑制实验
发明人进一步研究葡萄糖氧化酶和葡萄糖的组合物对木耳中椰酵假单胞菌以及米酵菌酸的抑制作用。
1、实验方法
(1)试验分组：
实验组：将干东北黑木耳分成三份分别放在三个容器中，并加入10倍的温水并按照0.1mL/L的比例加入椰毒假单胞菌菌悬液(活菌含量为107/mL)。
第一个容器中加入组合物4，添加量为0.1wt％，并搅拌均匀，记为实验组；
第二个容器中什么也不加，记为对照组1；
第三个容器中加入葡萄糖氧化酶，添加量为0.1wt％，并搅拌均匀，记为对照组2；
以上操作完成后静置浸泡3个小时，捞出沥干水分，放入保鲜袋中密封保存。
(2)将实验组和对照组得到的木耳分别在0～10℃条件下密闭放置15天，测试木耳中的椰酵假单胞菌以及米酵菌酸含量。
椰酵假单胞菌的检测方法：中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验(GB/T 4789.29-2003)。
米酵菌酸含量的测试方法：食品安全国家标准食品中米酵菌酸的测定(GB5009.189-2016)。
2、实验结果
表4木耳中椰酵假单胞菌数量(CFU/g)
表5木耳中米酵菌酸的含量(μg/g)
如表4和表5所示，将本发明的椰酵假单胞菌抑菌组合物加入到木耳中，不仅可有效抑制其中的椰酵假单胞菌，还可有效抑制椰酵假单胞菌产米酵菌酸。而单独加入葡萄糖氧化酶对木耳中椰酵假单胞菌的抑制没有效果。
实施例5椰酵假单胞菌抑菌组合物对马铃薯粉条中椰酵假单胞菌以及米酵菌酸的抑制实验
发明人进一步研究葡萄糖氧化酶和葡萄糖的组合物对马铃薯粉条中椰酵假单胞菌以及米酵菌酸的抑制作用。
1、实验方法
(1)试验分组：
实验组：按照常规的马铃薯粉条生产工艺：选料提粉→配料打芡→加矾和面→沸水漏条→冷浴晾条→打捆包装。在5kg的水中加入1kg的马铃薯粉，然后加入0.5wt％组合物3和1mL的椰毒假单胞菌菌悬液(活菌含量为107/mL)，浸泡12小时后，滤去水分，并将淀粉压干水分用于制作粉条。
对照组1：与实验组的区别在于不加组合物3；
对照组2：与实验组的区别在于，加入0.5wt％的葡萄糖氧化酶。
(2)将实验组和对照组得到的马铃薯粉条分别在0～10℃条件下密闭放置15天，测试马铃薯粉条中的椰酵假单胞菌以及米酵菌酸含量。
椰酵假单胞菌的检测方法：中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验(GB/T 4789.29-2003)。
米酵菌酸含量的测试方法：食品安全国家标准食品中米酵菌酸的测定(GB5009.189-2016)。
2、实验结果
表6马铃薯粉条中椰酵假单胞菌数量(CFU/g)
表7马铃薯粉条中米酵菌酸的含量(μg/g)
如表6和表7所示，将本发明的椰酵假单胞菌抑菌组合物加入到马铃薯粉条中，不仅可有效抑制其中的椰酵假单胞菌，还可有效抑制椰酵假单胞菌产米酵菌酸。而单独加入葡萄糖氧化酶对马铃薯粉条中椰酵假单胞菌的抑制效果不佳。
可见，本发明的椰酵假单胞菌组合物用于谷类食品、薯类食品、木耳等常见的易被椰酵假单胞菌污染的食品中，可有效抑制其中的椰酵假单胞菌，还可有效抑制椰酵假单胞菌产米酵菌酸。且该组合物成分用于食品加工能与食物原味有良好的适配性，长时间食用也不会给身体带来副作用。为防止食品椰酵假单胞菌污染提供了一种新型、天然、安全的方案。
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
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