阅读说明：本技术 一种鲍鱼内脏提取物及其应用 (Abalone viscera extract and application thereof ) 是由 唐旭 汪彩进 吴鹏 徐长安 刘源森 林凌 于 2020-04-16 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种鲍鱼内脏提取物及其应用,该鲍鱼内脏提取物的制备包括以下步骤：新鲜鲍鱼内脏匀浆、冻干得鲍鱼内脏冻干粉；称取所述鲍鱼内脏冻干粉加入去离子水,超声辅助提取后,于恒温水浴磁力搅拌锅中提取4h,离心10min,取上清液；滤渣加入去离子水重复提取一次,离心10min,合并两次的上清液,减压浓缩,置于-20℃冰箱中过夜,过夜后置于冷冻干燥机上冷冻干燥,得鲍鱼内脏提取物。所得的鲍鱼内脏提取物经试验可以促进OVCAR-3细胞雌二醇的分泌,可以增加卵巢和子宫指数,可以提高小鼠体内雌二醇和孕酮的分泌水平,可以改善卵巢形态,保护小鼠的生殖系统。(The invention relates to an abalone viscera extract and application thereof, and the preparation method of the abalone viscera extract comprises the following steps: homogenizing fresh abalone viscera, and freeze-drying to obtain abalone viscera freeze-dried powder; weighing the abalone viscera freeze-dried powder, adding deionized water, extracting with the aid of ultrasound, extracting in a constant-temperature water bath magnetic stirring pot for 4h, centrifuging for 10min, and taking supernatant; adding deionized water into the filter residue, extracting for one time, centrifuging for 10min, mixing the two supernatants, concentrating under reduced pressure, placing in a refrigerator at-20 deg.C overnight, and freeze drying on a freeze dryer after overnight to obtain abalone viscera extract. The obtained abalone viscera extract can promote the secretion of OVCAR-3 cell estradiol, increase ovary and uterus index, improve the secretion level of estradiol and progesterone in mice, improve ovary morphology, and protect reproductive system of mice.)

一种鲍鱼内脏提取物及其应用

技术领域

本发明涉及食品技术领域，具体涉及一种鲍鱼内脏提取物及其应用。

背景技术

雌激素是促进雌性动物第二性征发育及性器官成熟的物质，由雌性动物卵巢和胎盘分泌产生。雌激素具有广泛而重要的生理作用，不仅有促进和维持女性生殖器官和第二性征的生理作用，并对内分泌、心血管、代谢系统、骨骼的生长和成熟，皮肤等均有明显的影响。

长期处于低雌激素的状态，容易出现代谢紊乱、皮肤衰老、骨质疏松及子宫内膜萎缩等现象，目前，补充雌激素仍然是临床治疗的主要方案，其可以在一定程度上改善低雌激素分泌水平引起的围绝经期症状，但是仍然不能解决排卵和生育问题，并且长期用药会发生一些副作用。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提供一种鲍鱼内脏提取物及其应用。该鲍鱼内脏提取物可改善卵巢雌二醇分泌水平，制备工艺简单。

为了实现上述目的，本发明第一方面的实施例采用的技术方案如下：

一种鲍鱼内脏提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

新鲜鲍鱼内脏匀浆、冻干得鲍鱼内脏冻干粉；

称取所述鲍鱼内脏冻干粉加入去离子水，超声辅助提取后，于恒温水浴磁力搅拌锅中提取4h，离心10min，取上清液；滤渣加入去离子水重复提取一次，离心10min，合并两次的上清液，减压浓缩，置于-20℃冰箱中过夜，过夜后置于冷冻干燥机上冷冻干燥，得鲍鱼内脏提取物。

根据本发明的实施例的鲍鱼内脏提取物的制备方法，工艺简单实用，制得的鲍鱼内脏提取物具有改善卵巢雌二醇分泌水平，适合长期食用，不会产生副作用，能够调经助孕，主要是针对低雌激素人群，实验结果显示，该鲍鱼内脏提取物可以促进OVCAR-3细胞雌二醇的分泌，可以增加卵巢和子宫指数，可以提高小鼠体内雌二醇和孕酮的分泌水平，可以改善卵巢形态，保护小鼠的生殖系统。

另外，根据本发明上述实施例提出的一种鲍鱼内脏提取物的制备方法，还可以具有如下附加的技术特征：

可选地，超声辅助时间为20～40min。

可选地，去离子水的体积为鲍鱼内脏冻干粉的20～40倍。

可选地，恒温水浴磁力搅拌锅中提取的温度为30～45℃。

在本发明的第二方面中，本发明的实施例提供了上述鲍鱼内脏提取物的制备方法制备得到的鲍鱼内脏提取物。该鲍鱼内脏提取物具有改善卵巢雌二醇分泌水平，适合长期食用，不会产生副作用，实验结果显示，该鲍鱼内脏提取物可以促进OVCAR-3细胞雌二醇的分泌，可以增加卵巢和子宫指数，可以提高小鼠体内雌二醇和孕酮的分泌水平，可以改善卵巢形态，保护小鼠的生殖系统。

在本发明的第三方面中，本发明实施例提供了上述鲍鱼内脏提取物在制备改善卵巢功能的食品中的应用。

进一步地，所述鲍鱼内脏提取物用于改善卵巢雌激素分泌水平。

进一步地，所述鲍鱼内脏提取物用于改善卵巢雌二醇分泌水平。

在本发明的第四方面中，本发明实施例提供了一种具有改善卵巢功能的食品，其由有效量的上述鲍鱼内脏提取物和食品学上可接受的辅料组成。该鲍鱼内脏提取物具有改善卵巢雌二醇分泌水平，适合长期食用，不会产生副作用。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

图1为根据本发明实施例的鲍鱼内脏提取物对小鼠卵巢切片形态的影响；

图2为根据本发明实施例的鲍鱼内脏提取物对小鼠子宫切片形态的影响；

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的技术方案。应理解，本发明提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。

为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本发明的示例性实施例。虽然显示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。

下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。

实施例1鲍鱼内脏提取物的制备

新鲜鲍鱼内脏匀浆、冻干得鲍鱼内脏冻干粉。

鲍鱼内脏冻干粉与去离子水按照料液比39.37:1mL/g混合，超声辅助提取39.17min后，于42.41℃的恒温水浴磁力搅拌锅中提取4h，4℃条件下6000r/min离心10min，取上清液；滤渣加入10～20倍去离子水水浴搅拌重复提取一次，4℃条件下6000r/min离心10min，合并两次的上清液，置于旋转蒸发仪45℃减压浓缩，移至培养皿中于-20℃冰箱中过夜，过夜后置于冷冻干燥机上冷冻干燥，得鲍鱼内脏提取物。

实施例2体外细胞试验作用效果

以人卵巢癌OVCAR-3细胞为受试细胞，香菇多糖为阳性对照，来探究实施例1制得的鲍鱼内脏提取物对卵巢细胞雌二醇分泌水平的影响。试验分为空白对照组、鲍鱼内脏提取物组以及阳性对照香菇多糖组。处于对数生长期的人卵巢癌OVCAR-3细胞分别以2x10⁴个/孔接种于96孔板，培养24h后加入不同药物组刺激，37℃、5％CO₂条件下孵育48h，收集上清液，采用ELISA试剂盒测定OVCAR-3细胞培养上清液中的E₂的浓度，试验结果见表1。

表1鲍鱼内脏提取物对OVCAR-3细胞雌二醇分泌水平的影响(n＝3，x±s)

注:与空白组比较，**:P＜0.01。n＝细胞孔数。

由上表可知，与阳性对照香菇多糖相比，实施例1制得的鲍鱼内脏提取物可以促进OVCAR-3细胞雌二醇的分泌，从而改善卵巢雌二醇分泌水平，改善低雌激素状态。

实施例3动物试验水平作用效果

将30只雌性昆明小鼠随机分为6组：实施例1制备的鲍鱼内脏提取物低、中、高(150、300、600mg/Kg·bw)剂量组、戊酸雌二醇组(0.085mg/Kg·bw)、模型组和空白对照组。每天1次，连续5天注射环磷酰胺制造卵巢早衰小鼠模型，同时，各治疗组连续30天灌胃不同剂量的药物1次。

1)计算卵巢和子宫脏器指数。在小鼠最后一次给药24h后称量小鼠体质量，眼球采血后注入麻醉剂脱颈处死。收集血液后解剖小鼠，将小鼠卵巢、子宫、脾、胸腺、肝、肾以及腹部脂肪等完整取出，迅速用滤纸将脏器表面的血液及体液吸去，然后置分析天平上精密称重，试验结果见表2。

表2各组小鼠脏器指标的比较(n＝5，x±s)

注：A:P<0.01与空白组比较，B:P<0.01与模型组比较，b:P<0.05与模型组比较。

由上表可知：实施例制备的鲍鱼内脏提取物可以增加卵巢和子宫指数，其效果与戊酸雌二醇相当，但相对于戊酸雌二醇，该鲍鱼提取物在长期使用时不会产生副作用，且在使用较少的剂量时即可较好地增加卵巢和子宫指数。

2)检测血清中雌二醇含量。在小鼠最后一次给药24h后，眼球采血后注入麻醉剂脱颈处死，注意釆血过程中应防止小鼠毛等其他杂物落入EP管从而引起溶血，收集血夜时注意不要震荡EP管。在血液采集完毕后应当立即将其放置于37℃水浴中孵育2h，然后3000r/min低速离心10min，取上清液，用于测定血清中雌二醇和孕酮的含量，试验结果如表3所示。

表3鲍鱼内脏提取物对小鼠体内雌二醇含量的影响(n＝5，x±s)

注：A:P<0.01与空白组比较，B:P<0.01与模型组比较。

由上表可知：实施例1制备的鲍鱼内脏提取物可以提高小鼠体内雌二醇和孕酮的分泌水平，其效果与戊酸雌二醇相当，但相对于戊酸雌二醇，该鲍鱼提取物在长期使用时不会产生副作用，且在使用较少的剂量时即可较好地提高小鼠体内雌二醇和孕酮的分泌水平，从而改善卵巢的雌激素。

3)观察卵巢、子宫组织形态。在小鼠最后一次给药24h后，眼球采血后注入麻醉剂脱颈处死。解剖小鼠，将小鼠卵巢和子宫完整取出储存在10％福尔马林中固定，将固定好的组织用徕卡切片机切出6μm厚的组织切片，苏木素-伊红(H&E)染色，在显微镜下对切片进行观察，并拍照记录，试验结果如图1、图2所示，其中A为空白组，B-模型组，C-低剂量组，D-中剂量组，E-高剂量组，F-阳性药物组。

由如图1和图2可知，实施例1制备的鲍鱼内脏提取物可以改善卵巢形态，保护小鼠的生殖系统。

综上，本发明实施例鲍鱼内脏提取物的制备方法，工艺简单实用，制得的鲍鱼内脏提取物具有改善卵巢雌二醇分泌水平，适合长期食用，不会产生副作用，能够调经助孕，主要是针对低雌激素人群，实验结果显示，该鲍鱼内脏提取物可以促进OVCAR-3细胞雌二醇的分泌，可以增加卵巢和子宫指数，可以提高小鼠体内雌二醇和孕酮的分泌水平，可以改善卵巢形态，保护小鼠的生殖系统。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不应理解为必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。