一种抗衰老组合物阳离子纳米脂质体及其制备方法与应用
阅读说明：本技术 一种抗衰老组合物阳离子纳米脂质体及其制备方法与应用 (Anti-aging composition cationic nano-liposome and preparation method and application thereof ) 是由 王虹霞 刘宇航 陈玉燕 宋心宇 毕永贤 蒋丽刚 于 2020-04-29 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种抗衰老组合物阳离子纳米脂质体及其制备方法与应用,其特征在于由以下质量分数的组分组成：类脂：虾青素：亚麻木酚素：补骨脂酚：羟基频哪酮视磺酸酯：助溶剂：阳离子多聚物：甘油：去离子水=7-20：1-8：5-10：1-3：1-3：2-10：3-6：15-30：10-65；所述类脂由阳离子类脂和中性类脂组成；所述阳离子多聚物为生物糖胶—聚乙二醇(PEG)接枝共聚物。该脂质体同时负载虾青素、亚麻木酚素、补骨脂酚和羟基频哪酮视磺酸酯,具有稳定性好、粒径小而均一、负载含量和包封率高、肤感好、抗衰老效果好的优点,并且方便添加到化妆品中使用。(The invention relates to an anti-aging composition cationic nano-liposome and a preparation method and application thereof, which are characterized by comprising the following components in percentage by mass: lipid: astaxanthin: flax lignan: bakuchiol: hydroxy pinacolone retinoic acid ester: cosolvent: cationic polymer: glycerol: deionized water = 7-20: 1-8: 5-10: 1-3: 1-3: 2-10: 3-6: 15-30: 10-65 parts; the lipids consist of cationic lipids and neutral lipids; the cationic polymer is a biological carbohydrate gum-polyethylene glycol (PEG) graft copolymer. The liposome simultaneously loads astaxanthin, secoisolariciresinol diglucoside, bakuchiol and hydroxy pinacolone retinoic acid ester, has the advantages of good stability, small and uniform particle size, high loading content and encapsulation rate, good skin feel and good anti-aging effect, and is convenient to add into cosmetics for use.)
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，具体涉及一种抗衰老组合物阳离子纳米脂质体及其制备方法与应用。
背景技术
衰老问题一直是人类关注的焦点问题。近年来，科学技术的快速发展加快了功能性化妆品前进的步伐，从20纪末开始，以抗衰老为主导的美容科技领域变得炙手可热，抗衰老化妆品也越来越受到人们的青睐。
虾青素、亚麻木酚素、补骨脂酚和羟基频哪酮视磺酸酯是目前发现的抗衰老能力很强的活性物。
虾青素是目前发现的抗氧化能力最强的天然抗氧化剂，每个虾青素分子具有两个紫罗兰酮环，环上的羟基和酮基团在保护细胞膜时都要经过细胞膜，这使得虾青素分子可以贯穿整个细胞膜结构。虾青素的抗氧化能力明显高于其他抗氧化剂，虾青素的抗氧化能力是维生素E的1000倍，是β-胡萝卜素的10倍。虾青素的抗衰老性能表现在其抗氧化、抗紫外线、抗皱纹的作用上，保护皮肤细胞免于紫外线等不利因素导致的损伤。
亚麻木酚素的结构与人体雌激素的结构十分相似，可以促进人体内的胶原蛋白的合成和抑制皮脂腺的皮脂分泌。亚麻木酚素主要以开环异落叶松脂酚（SECO）的形式存在，而SECO多以开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷（SDG）的结构存在，SDG具有很强的抗氧化能力。因而，亚麻木酚素具有一定的抗衰老功效。
补骨脂酚能促进ESF-1细胞的增殖,促进胶原蛋白和基质金属蛋白酶抑制剂mRNA的表达，并能抑制基质金属蛋白酶mRNA的表达，从而发挥抗皮肤衰老的作用。
羟基频哪酮视黄酸酯是一种视黄醇类的衍生物，具有调节表皮及角质层新陈代谢的功能，可以抗衰老，能减少皮脂溢出，淡化表皮色素，起到预防皮肤衰老、预防痤疮、美白淡斑等作用。在保证视黄醇强大功效的同时又极大地降低了其刺激性，目前用于抗衰老和预防痤疮复发。
通过研究表明，它们分别从不同机理对人体的抗衰老均具有非常优异和显著的效果。但是这四种活性物都存在自身的使用缺陷。例如，虾青素和亚麻木酚素不溶于水，生物利用度低，在日常的条件下极易发生氧化而失去生物活性，所以难以储存和使用。而补骨脂酚和羟基频哪酮视磺酸酯属于维生素A的衍生物，溶解性差，并且直接使用对人体皮肤也有一定的刺激性。
阳离子脂质体是一个两性离子型表面活性剂，具有亲水性和疏水性，作为药物载体，其包裹范围非常广，可包裹水溶性物质、脂溶性物质及两性物质。构成阳离子脂质体的主要成分阳离子两亲性化合物主要常用带正电的脂质以及正电性聚合物等，其中使用聚合物载体来对脂质体的表面进行改性以设计更有效的药物递送系统被证明是一种有效的制剂方法。阳离子脂质体在一定浓度下在体内无免疫原性，安全可靠；药物由阳离子脂质体携带以后,能改进其在皮肤的透皮效应，降低毒副作用，提高和延长药物疗效。目前制备阳离子脂质体常用的阳离子类脂主要为DOTAP（（2,3-二油酰基-丙基）-三甲胺）、DOTMA（N-[1-（2,3-二油酰基）丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵）、DODMA（1,2-二油醇-3-二甲基氨基-丙烷）、DOAB（N,N-二甲基十八烷基烯丙基溴化铵）和DC-Chol（胆固醇），但是这些类脂均具有一定的细胞毒性或者制备得到的阳离子脂质体稳定性不好等缺陷。
微液滴技术是微流控技术的重要分支，是在微流控芯片上发展起来的一种全新的操控微小体积液体的技术。通过对芯片通道结构的优化和流体驱动方法的设计，能精确控制微通道网络中各相的流动速度、体积比例、混合顺序、位置和温度等，继而控制2种不相溶的液体 （如水和油，一种作为分散相，另一种作为连续相，分散相以微液滴单元的形式存在）的行为，利用流体间剪切力及表面张力作用，实现包括微液滴生成、驱动、分裂、融合、分选、 定位和捕获等功能。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种能同时负载虾青素、亚麻木酚素、补骨脂酚和羟基频哪酮视磺酸酯的阳离子纳米脂质体及其制备方法与应用，该制备方法得到负载虾青素、亚麻木酚素、补骨脂酚和羟基频哪酮视磺酸酯的阳离子纳米脂质体具有稳定性好、粒径小而均一、负载含量和包封率高、肤感好和抗衰老效果好的优点。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：一种抗衰老组合物阳离子纳米脂质体，其特征在于由以下质量分数的组分组成：类脂：虾青素：亚麻木酚素：补骨脂酚：羟基频哪酮视磺酸酯：助溶剂：阳离子多聚物：甘油：去离子水=7-20：1-8：5-10：1-3：1-3：2-10：3-6：15-30：10-65；所述类脂由阳离子类脂和中性类脂按照质量比7-11：9-13组成，所述阳离子类脂为N-[1（2，3-含氧十二烷基氨基甲酰）丙基]-N，N，N-三甲基色氨酸铵碘化物（DDCTMA）、N-（N’，N’-二甲基）丙基丁二酸单胆固醇酯单酰胺（DMAPA-CHEMSH）、神经酰胺按质量比3：1：0.5-1组成的混合物，所述中性类脂为二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、蛋黄卵磷脂、磷脂大豆卵磷脂或氢化卵磷脂中的一种或它们的混合物；所述阳离子多聚物为生物糖胶—聚乙二醇（PEG）接枝共聚物。
本发明所述的助溶剂为乙醇、丙二醇、二丙二醇和丁二醇中的一种或它们的混合物。
本发明所使用的虾青素、亚麻木酚素、补骨脂酚和羟基频那酮视黄酸酯的组合物分别通过抗氧化清除皮肤自由基，抵御紫外线照射损伤和炎症，植物性雌激素的调节和抑制基质金属蛋白酶mRNA的表达从而促进皮肤胶原的合成，通过皮肤上的内源性酶促反应转化为A 酸从而促进皮肤细胞的繁殖和生长等多方面协同增效了抗衰老功效。
本发明还提供了一种抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的制备方法，其特征在于：采用以下步骤：
A：按质量比7-20：1-8：5-10：1-3：1-3：2-10：3-6：15-30：10-65称取类脂、虾青素、亚麻木酚素、补骨脂酚、羟基频哪酮视磺酸酯、助溶剂、阳离子多聚物、甘油、去离子水，备用；所述类脂由阳离子类脂和中性类脂按照质量比7-11：9-13组成，所述阳离子类脂为N-[1（2，3-含氧十二烷基氨基甲酰）丙基]-N，N，N-三甲基色氨酸铵碘化物、N-（N’，N’-二甲基）丙基丁二酸单胆固醇酯单酰胺、神经酰胺按质量比3：1：0.5-1组成的混合物，所述中性类脂为二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、蛋黄卵磷脂、磷脂大豆卵磷脂或氢化卵磷脂中的一种或它们的混合物；所述阳离子多聚物为生物糖胶—PEG接枝共聚物；
B：将步骤A称取的类脂、虾青素、亚麻木酚素、补骨脂酚、羟基频哪酮视磺酸酯、助溶剂，利用IKA
分散机在500-1000rpm的转速下搅拌混合至均匀，得到澄清的液体，作为内相溶液；
C：将步骤A中称取的阳离子多聚物、甘油和去离子利用IKA分散机在500-1000rpm的转速下搅拌混合至均匀，得到澄清的液体，作为外相溶液；
E：将步骤B所得内相溶液装入注射器，并通过PE管接到微液滴装置的内相微量注射泵，将步骤C所得外相溶液装入注射器，并通过PE管接到微液滴装置的外相微量注射泵，设定内相流量Qi为0.5-2 mL/h，设定外相流量Q0为1-4 mL/h，快冲排气后，启动微量注射泵，收集微液滴装置出口端流出液体，经0.8μm滤膜过滤，即得抗衰老组合物阳离子纳米脂质体。
所述的微液滴装置为购买自苏州文颢微控流技术有限公司的WH-CF-05型集芯片与收集装置于一体的微液滴技术设备；该微射流装置的内置芯片为Y型混合芯片，并且芯片内的主通道中置有微珠，有利于料体的混合以及形成粒径更小更均一的纳米脂质体。
所述的微量注射泵为苏州文颢微控流技术有限公司生产的WH-SP-02型微量注射泵。
本发明制备的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的负载量为虾青素1%-8%、亚麻木酚素5%-10%、补骨脂酚1%-3%、羟基频哪酮视磺酸酯1%-3%，包封率为85%-99.5%，所述百分比为质量百分比。
本发明制备的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的粒径小于200 nm，粒径多分散指数PDI小于0.15。
本发明制备的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的表面带正电荷，脂质粒表面的Zeta电位为30 mV—60 mV。
本发明制备的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体作为功效成分应用于化妆品中。
本发明制备的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体直接添加到化妆水、精华液、护肤乳和护肤霜中，添加量优选为0.5%—10%。
本发明制备得到的阳离子脂质体表面带正电荷，而人体的细胞膜在生理中性（pH7.4）的条件下为带负电荷，因此易与负电荷的细胞膜发生静电作用，使得阳离子脂质体具有更好的靶向性。
本发明制备得到的阳离子脂质体的阳离子类脂为DDCTMA、阳离子胆固醇衍生物DMAPA-CHEMS 和神经酰胺质量比例为3：1：0.5-1的复配阳离子类脂。DDCTMA是目前制备阳离子脂质体比较优异的阳离子类脂，但是在一定的浓度条件下，它具有细胞毒性。DMAPA-CHEMS是将天然生物细胞膜的组成成分胆固醇衍生化后的阳离子胆固醇衍生物，该衍生物具有阳离子类脂的特性的同时又具有天然细胞膜成分胆固醇和细胞膜成分良好相容性的特点。神经酰胺是皮肤类脂的重要组成成分之一，其中神经酰胺1、神经酰胺2和神经酰胺3是和人类皮肤衰老最紧密相关的三个神经酰胺类型。DDCTMA、DMAPA-CHEMSH和神经酰胺复配的阳离子类脂具有使得得到的细胞相容性的嵌入式阳离子脂质体既具有良好的稳定性和优异的相容性特点。
本发明制备得到的阳离子脂质体中所用的阳离子多聚物为生物糖胶-PEG接枝共聚物。生物糖胶是化妆品用天然的保湿剂，具有非常好的生物相容性以及对皮肤的角质层细胞具有非常好的长效保湿功效。生物糖胶-PEG接枝共聚物具有良好的生物相容性以及两亲性等性能，用它去修饰阳离子脂质体后，可以帮助提高阳离子脂质体的稳定性以及在生物体内的缓释性和生物稳定性。两者接枝结合的的多聚物就好比赋予了脂质体“隐形”的性质，降低了脂质体被RES清除的概率，提高了脂质体表皮细胞发挥作用的时间，从而使得更多的活性物可以人体细胞，而生物糖胶优异的保湿性能使得皮肤细胞处于良好的保湿环境中。
为证明本发明制备的得到的抗衰老阳离子纳米脂质体具有稳定好、粒径小而均一、负载含量高、肤感好和抗衰老效果好的优点，本发明进行了以下测试：
实验一：抗衰老组合物阳离子纳米脂质体稳定性测试
将实施例1所得阳离子类脂替换为单一的DDCTMA、单一的DOTMA、单一的DODMA、单一的DOTAP、复配比例为3:1:1的DOTMA/DMAPA-CHEMSH/神经酰胺3、复配比例为3:1的DODMA/DMAPA-CHEMSH/神经酰胺3、复配比例为3:1的DOTAP/ DMAPA-CHEMSH/神经酰胺3，制备得到样品1、样品2、样品3、样品4、样品5、样品6和样品7。另外，将实施例1中的生物糖胶-PEG接枝共聚物替换为单一的PEG或者其它天然的保湿剂透明质酸钠和葡聚糖分别接枝PEG的接枝共聚物，利用这三种阳离子多聚物修饰制备得到样品分别为样品8、样品9和样品10。将所有制备得到的样品进行外观确定是否制备得到均一的阳离子脂质体液体。将制备成功的阳离子脂质体液体的样品和实施例1的样品分别进行10000 rpm 条件下离心0、10、20、30、40min，观察样品的外观变化。
表1 不同阳离子脂质体的阳离子类脂和阳离子多聚物的组成成分
表2 不同阳离子脂质体的外观
表3 不同抗衰老组合物阳离子纳米脂质体在不同离心条件下的变化
从表1、表2和表3可以看出只有阳离子类脂为DDCTMA、DMAPA-CHEMSH、神经酰胺3和阳离子多聚物为生物糖胶-PEG的接枝共聚物这两个组分同时满足才可以形成所需要的稳定的抗衰老组合物阳离子脂质体。
实验二：抗衰老组合物阳离子纳米脂质体粒径测试
附图1和附图2是根据本发明实施例1得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体样品的透射电镜图和粒径分布图。从图1和图2所示，可以得知本发明制备得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的粒径为小于200 nm。
根据本发明实施例1的各组分比例分别采用低能耗的搅拌法和薄膜分散法制备得到抗衰老组合物阳离子纳米脂质体样品1和样品2，然后利用马尔文粒径分析仪进行脂质体的粒径分析。利用马尔文分析仪测得的各样品的粒径如下表：
表4 不同测试样品的平均粒径、Zeta电位和多分散指数PDI
从表4的平均粒径、Zeta电位和PDI的数据可以得出，使用本发明制备得到的实施例1所得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的粒径更小更均匀，而且因为Zeta电位较大，因此从理论上而言稳定性也会更好。
实验三：抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的负载含量和包封率测试
根据本发明实施例1的各组分比例分别采用低能耗的搅拌法和薄膜分散法制备得到抗衰老组合物阳离子纳米脂质体样品1和样品2，并且利用本发明制备方法将实施例1中的抗衰老活性物去除，根据实施1中各组分比例制备得到空白对比样品。采用紫光风光光度计分析测定所得的四种抗衰老活性物包裹体在室温下常规放置下的制备后当天和一个月的抗衰老活性物的含量。利用超滤离心法测定各样品的包封率。精密量取400μL 抗衰老组合物阳离子纳米脂质体于超滤离心管中，使用高速冷冻离心机进行离心，离心温度为4 ℃，转速为10000 rpm，时间为30 min，离心结束后取超滤离心管下层滤液于10 mL 容量瓶中，通过紫外分光光度计测定滤液中的抗衰老活性物的含量（Wf）。同时测定400μL 纳米脂质体中抗衰老活性物的总含量（Wt）。包封率（EE）的计算公式如下：
式中：EE—包封率；Wt—体系中虾青素的总含量；Wf—游离的虾青素含量。
表5 不同测试样品的虾青素含量及包封率
表6 不同测试样品亚麻木酚素含量及包封率
表7 不同测试样品补骨脂酚含量及包封率
表8 不同测试样品羟基频哪酮视黄酸酯（羟基频哪酮视磺酸酯）含量及包封率
从表5、表6、表7和表8可以得出结论：本发明的制备方法得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的包封率明显高于其他两种低能耗制备得到的脂质体。通过30 days室温常规放置后的数据可以看出，在高负载量的情况下，其他两种方法的稳定性差，包封率低。因此其他两种方法并不能的得到高负载量的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体。
实验四：抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的肤感测试
根据本发明实施例1的各组分比例分别采用低能耗的搅拌法和薄膜分散法制备得到抗衰老组合物阳离子纳米脂质体样品1和样品2，对所得的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体进行感官评价。感官评价方法如下：选取专业感官评价测试者10名进入专业的测试房间，用规定洁面产品对前手臂进行清洁，擦干，静坐10 min。在此时间内，用卡纸在两前手臂的内侧坐上标记，固定好4个5cm×5cm的区域，每个手臂内侧各固定2个。待10min后，取50微升测试样品置于标记的区域内，让测试者在规定的区域内用食指打圈10次铺展产品，然后用食指和无名指在规定区域内轻拍直至产品吸收。产品测试结束后，让测试者对产品的铺展性、油份感、水份感、贴肤性、粘腻感、吸収速度、保湿感、柔软感和残留感这9个属性进行评分，评分方法采用10分制（0分表示测试产品没有该属性，10分表示测试产品该属性极强）
从表9以得出结论：本发明制备得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体更清爽，更柔软，油腻感低，贴肤性好，比其他的方法更加适用于化妆品产品。
表9 不同抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的肤感测试结果
实验五：抗衰老组合物阳离子纳米脂质体抗衰老效果测试
将实施例1组分中的活性物进行随机组合，但是组合的成分不能为四种同时存在，将制备得到的样品和实施例1制备得到的样品进行抗衰老功效测试。
表10 不同样品的活性物的随机组合方式
注：“○”代表没有该成分；“√”代表添加该成分
参照表11的配方，将根据表9中的活性物的组合方式制备得到的不同的阳离子纳米脂质体添加至面霜基质中，以考察添加抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的面霜在抗皱方面的功效。
表11 测试面霜配方
按照自愿原则选择360名身体健康的女性志愿者，无皮肤病史及化妆品过敏史。将360名志愿者分成12组，每组30名志愿者，每一组的编号分别为实施例1、样品1、样品2、样品3、样品4、样品5、样品6、样品7、样品8、样品9、样品10、样品11、样品12和样品13。
实施例1组的受试者左脸使用添加根据实施例1得到的含抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的面霜，右脸使用未添加抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的面霜作为空白对照，早晚各使用一次，使用前和使用4、8周随访一次，共计3次，随访为日间同一时间，试验期间不得使用其他相同类型产品。测试前受试者需要清洁面部，在恒温恒湿（室温22℃±2℃，相对湿度45%±5%）环境下，静坐20min之后，再利用CM825肌肤水分测试仪、MPA580皮肤弹性测试仪和PRIMOS PICO皮肤皱纹检测仪对左右脸使用前、4周、8周后皮肤水分、弹性以及皱纹情况进行测定和分析。以此类推，样品1组的志愿者使用的是含样品1的面霜，样品2、样品3、样品4、样品5、样品6、养品、样品8、样品9、样品10、样品11、样品12和样品13也是同理。
表12为左右脸使用不同样品不同时间后保湿功效的数据，由表12可知，随着使用时间的增加，左右脸皮肤含水量均逐渐提高，左脸使用含实施例1的面霜皮肤含水量高于右脸使用空白对照样品的含水量。并且，左脸使用含实施例1面霜的皮肤含水量也明显高于使用含样品1、样品2、样品3、样品4、样品5、样品6、样品7、样品8、样品9、样品10、样品11、样品12和样品13的面霜的左脸。说明实施例1 制备得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体可提高皮肤角质层水分，充足的水分可使皮肤呈现光泽饱满的健康状态。
表12 左右脸不同时间水分测试数据
表13为左右脸使用不同样品不同时间后皮肤弹性数据，R2和R5是代表皮肤弹性的参数，数值越接近1代表皮肤弹性越好。由表中数据可知，随着使用时间的增加，左右脸的R2和R5值均增大，左脸使用含根据实施例1制备得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的面霜后R2和R5值都高于右脸使用空白对照样品，更接近1。并且，左脸使用含实施例1面霜后的R2和R5值得增加量明显高于使用含样品1、样品2、样品3、样品4、样品5、样品6、样品7、样品8、样品9、样品10、样品11、样品12和样品13的面霜的左脸。说明实施例1 制备得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体可有效提高皮肤弹性。
表13 左右脸不同时间弹性测试数据
表14为左右脸使用不同样品不同时间后皮肤皱纹测试数据，左脸涂抹含抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的面霜，右脸涂抹空白对照样品，其中Sa、Sq、SV用于表征皱纹深浅，被定义为皱纹深度因子。由表中数据可知，随着使用时间的增加，左脸使用含实施例1制备的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的面霜的Sa、Sq降低最多，与皱纹严重程度负相关的SV提高最多，而使用空白对照面霜的14组测试者的右脸各参数变化均不大，皱纹测试结果表明实施例1 制备得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体可有效改善皮肤皱纹情况。
表14 左右脸不同时间皱纹测试数据（3D皮肤检测方法）
根据皱纹形成原理和过程，皮肤含水量、皮肤弹性以及皮肤皱纹改变情况可以综合评价产品的抗皱功效，结合上述测试数据和图表，说明添加实施例1制备得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的化妆品具有显著的抗皱效果。
实验六：阳离子脂质体安全性测试
使用人的表皮层细胞HaCaT和人的真皮层细胞NHDFs检测根据实施例1制备得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体对人皮肤细胞的细胞毒性作用。将正常培养稳定的细胞消化后计数，并铺于96孔板，每孔10000个细胞，待24h后形成单层细胞层，加入含不同浓度受试物的培养基继续培养24h和48h，之后使用CCK-8试剂盒，并使用不含受试物的培养基处理的细胞作为阴性对照，以吸光值（OD值）作为检测指标检测受试物处理后细胞的相对活性。细胞相对活性按下式进行计算。
使用CCK-8法对实施例1制备得到的抗衰老阳离子纳米脂质体溶液进行表皮细胞及真皮细胞的细胞毒性研究结果见表15。由表15可以看出，10%以下的质量浓度的实施例1制备得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体溶液对HaCaT细胞和NHDFs细胞均无明显细胞毒性（细胞存活率大于70%），当实施例1制备得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体溶液作用于表皮细胞48 h后，虽然细胞的相对存活率有所下降，但并未低于70%，故其并不表现为细胞毒性作用。同时从表15中可以看出实施例1制备得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体溶液对 NHDFs细胞具有明显的促进增殖作用，NHDFs细胞是皮肤真皮层的主要效应细胞，能合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白、连接蛋白以及透明质酸等细胞外基质，因此促成纤维细胞增殖的物质常被作为是抗衰老活性原料使用，从侧面也证明该抗衰老组合物阳离子纳米脂质体溶液没有细胞毒性，并且具有抗衰老功效。
表15表皮细胞及真皮细胞的细胞毒性研究结果
综上所述，本发明制备的抗衰老阳离子纳米脂质体能同时负载虾青素、亚麻木酚素、补骨脂酚和羟基频哪酮视磺酸酯，具有稳定性好、粒径小而均一、负载含量和包封率高、肤感好、抗衰老效果好的优点，并且方便添加到化妆品中使用。
附图说明：
图1为实施例1制备得到的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的透射电镜图；
图2为抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的粒径分布图。
具体实施方式
实施例1：
一种抗衰老组合物阳离子纳米脂质体的制备方法，其特征在于采用以下步骤：
A：按质量比10:6:8:2:2:7:5:25:35称取类脂、虾青素、亚麻木酚素、补骨脂酚、羟基频哪酮视磺酸酯、助溶剂、阳离子多聚物、甘油、去离子水，备用；所述类脂由阳离子类脂和中性类脂按照质量比7:13组成，所述阳离子类脂为N-[1（2，3-含氧十二烷基氨基甲酰）丙基]-N，N，N-三甲基色氨酸铵碘化物、N-（N’，N’-二甲基）丙基丁二酸单胆固醇酯单酰胺、神经酰胺按质量比3：1：0.5组成的混合物，所述中性类脂为二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱；所述所述阳离子多聚物为生物糖胶—聚乙二醇接枝共聚物；
B：将步骤A称取的类脂、虾青素、亚麻木酚素、补骨脂酚、羟基频哪酮视磺酸酯、助溶剂，用IKA的分散机在转速为700rpm的转速下搅拌至均匀，得到澄清的液体，作为内相溶液；
C：将步骤A中称取的阳离子多聚物、甘油和去离子水，用IKA的分散机在转速为900rpm的转速下搅拌至均匀搅拌至均匀，得到澄清的液体，作为外相溶液；
E：将步骤B所得内相溶液装入注射器，并通过PE管接到微液滴装置的内相微量注射泵，将步骤C所得外相溶液装入注射器，并通过PE管接到微液滴装置的外相微量注射泵，设定内相流量Qi为1.2 mL/h，设定外相流量Q0为2.5 mL/h，快冲排气后，启动微量注射泵，收集微液滴装置出口端流出液体，经0.8μm滤膜过滤，即得抗衰老组合物阳离子纳米脂质体。
将制备所得的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体利用马尔文粒径分析仪进行分析测定得到平均粒径为98 nm，PDI 为0.07，Zeta电位为44 mV；按照实验三中的方法测试得到的各活性物的包封率分别为：虾青素99.0%，亚麻木酚素99.5%，补骨脂酚98.2%，羟基频哪酮视磺酸酯 98.9%；并且所得的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体溶液在10000rpm的高速离心条件下离心10 min、20 min、30 min和40 min后均没有出现分层或者底部析出的现象，可见稳定性很好。
实施例2：
一种化妆水：
按照上表中的比例称取A相、B相和C相，将A相中的原料在IKA分散机转速为500-1500rpm下进行分散混合均匀；然后将称取好的B相原料依次投入A相，在IKA分散机转速为800-1500rpm的条件下将两相混合均匀；最后依次投入C相中的原料，在IKA分散机转速为800-1500rpm的条件下混合均匀。其中，该护肤水配方中实施例1所制备的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体添加量为1.0%。
实施例3
一种护肤霜:
按照上表称取A相、B相和C相的原料。将A相中的原料在IKA分散机转速为500-1500rpm下进行分散混合均匀，随后加热至80℃；然后将称取好的B相原料加热至82℃熔化；然后将B相熔化的原料加入A相，在IKA均质机均质速度为5000 rpm的条件下进行乳化，乳化时间为5min’；待乳化结束后，降温至50℃，然后依次投入C相中的原料，在IKA分散机转速为800-1500rpm的条件下混合均匀。其中，该护肤霜配方中实施例1所制备的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体添加量为10.0%。
实施例4
一种护肤乳液:
按照上表称取原料A相、B相和C相，将A相中的原料在IKA分散机转速为500-1500rpm下进行分散混合均匀，随后加热至80℃；然后将称取好的B相原料加热至82℃熔化；然后将B相熔化的原料加入A相，在IKA均质机均质速度为5000 rpm的条件下进行乳化，乳化时间为5min’；待乳化结束后，降温至50℃，然后依次投入C相中的原料，在IKA分散机转速为800-1500rpm的条件下混合均匀。其中，该护肤乳配方中实施例1所制备的抗衰老组合物阳离子纳米脂质体添加量为5.0%。