阅读说明：本技术 一种包覆磷脂酶的多囊脂质体及其制备方法和应用 (Phospholipase-coated multivesicular liposome and preparation method and application thereof ) 是由 胡康洪 邹春芳 陆希 邹超强 于 2019-07-08 设计创作，主要内容包括：本发明提出了一种包覆磷脂酶的多囊脂质体及其制备方法和应用,包覆磷脂酶的多囊脂质体包括内水相、油相和外水相,内水相包括适合磷脂酶A2,油相包括添加剂和脂质,外水相包括增稠剂和水,混合内水相和油相,搅拌可以得到初乳,向初乳中加入外水相,搅拌即可得到复乳,除去复乳中的有机溶剂即可得到多囊脂质体,本发明利用多囊脂质体的包覆结构对磷脂酶A2进行有效保护,且有利于磷脂酶A2的人体吸收,进一步还可以利用进入人体皮肤细胞内的磷脂酶A2对细胞膜的酶解作用,增大细胞对其他有效成分的吸收效果,达到增强人体皮肤吸收率,克服了皮肤吸收率差的问题,具有良好的应用前景。(The invention provides a multi-vesicular liposome coating phospholipase, a preparation method and application thereof, the multi-vesicular liposome coating the phospholipase comprises an inner water phase, an oil phase and an outer water phase, the inner water phase comprises a suitable phospholipase A2, the oil phase comprises an additive and lipid, the outer water phase comprises a thickening agent and water, the inner water phase and the oil phase are mixed and stirred to obtain colostrum, the outer water phase is added into the colostrum and stirred to obtain multiple emulsion, and an organic solvent in the multiple emulsion is removed to obtain the multi-vesicular liposome, the invention utilizes the coating structure of the multi-vesicular liposome to effectively protect the phospholipase A2, is favorable for human body absorption of the phospholipase A2, further can utilize the enzymolysis of the phospholipase A2 entering human skin cells on cell membranes to increase the absorption effect of the cells on other effective components, achieves the aim of enhancing the human skin absorption rate, and overcomes the problem of poor skin absorption rate, has good application prospect.)

一种包覆磷脂酶的多囊脂质体及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及日化技术领域，尤其涉及一种包覆磷脂酶的多囊脂质体及其制备方法和应用。

背景技术

功能性化妆品作为日常生活中必不可少的日化用品，其具有重要的作用，可以实现美白、补水、抗皱纹、防紫外线等作用。

然而实现这些功能的有效成分稳定性均较差，在常规的保存条件下容易发生变质，不便于长期保存，且部分有效物质存在不良气味，直接应用会导致使用者的不适。为了提高这些有效物质的稳定性和保存时间，现有技术多采用脂质体作为载体，脂质体是指将有效成分包封于磷脂双分子层中形成微型泡囊，其不仅能够有效保护有效成分，降低变质的可能，而且还具有靶向性、缓释性和细胞的亲和性，脂质体能够同时包覆各种亲水或亲油的物质，并将有效物质送纸表皮和真皮之间。

然而脂质体的尺寸较大、容易发生破乳和絮凝，稳定性不高，不能将某些水溶性的有效成分高效地送入人体皮肤细胞内，影响了吸收效果。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种尺寸更小，更稳定，同时有助于人体皮肤吸收水溶性有效成分的包覆磷脂酶的多囊脂质体及其制备方法和应用。

本发明的技术方案是这样实现的：本发明提供了一种包覆磷脂酶的多囊脂质体，包括内水相、油相和外水相，所述内水相包括质量比为(50-2000)∶1的水和磷脂酶A2，油相包括质量比为(0.1-1)∶1的添加剂和脂质，外水相包括质量比为(0.1-0.3)∶1的增稠剂和水。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述内水相还包括人寡肽-1、蔗糖和壳聚糖，所述人寡肽-1∶蔗糖∶壳聚糖∶磷脂酶A2的质量比为(1-25)∶(1-5)∶(1-5)∶1。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述添加剂包括质量比为(50-55)∶(1-5)∶(1-2)∶(200-500)的胆固醇、尼泊金甲酯、2，6-二叔丁基对甲苯酚和有机溶剂。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述有机溶剂为卤代烃，具体优选包括二氯己烷、三氯甲烷和四氯化碳。

更进一步优选的，所述脂质包括质量比为(5-15)∶1的两亲性脂质和中性脂质。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述两亲性脂质为大豆磷脂、单硬脂酸甘油脂、16-18碳脂肪醇和棕榈酸异丙酯中的一种或几种。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述中性脂质为橄榄油。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述增稠剂为葡萄糖、氯化钠、海藻糖、环糊精、麦芽糖、三磷酸五钠、甘氨酸和赖氨酸中的一种或几种。

本发明还提供一种包覆磷脂酶的多囊脂质体的制备方法，包括如下步骤：

步骤一、按质量比混合水、磷脂酶A2、人寡肽-1、蔗糖和壳聚糖，常温搅拌5-10min，得到内水相；

步骤二、按质量比混合胆固醇、尼泊金甲酯、2，6-二叔丁基对甲苯酚、有机溶剂和脂质体，常温搅拌5-10min，得到油相；

步骤三、按质量比混合增稠剂和水，常温搅拌5-10min，得到外水相；

步骤四、将相同体积的内水相和油相混合，保持搅拌速度为10000-15000r/min，温度为30-50℃条件下搅拌5-15min得到W/O初乳；

步骤五、向W/O初乳中加入相同体积的外水相，保持搅拌速度为500-1000r/min，常温条件下搅拌1-5min，搅拌完毕得到复乳；

步骤六、在30-40℃条件下保持转速为10-50r/min，旋转蒸发，至无有机溶剂蒸出，得到包覆磷脂酶的多囊脂质体。

本发明的包覆磷脂酶的多囊脂质体可以在化妆品、护肤品、保健品等相关日化产品中进行应用。

本发明还提供一种基于包覆磷脂酶的多囊脂质体的护肤品，多囊脂质体的内水相包括维生素B1、维生素B6、维生素B12、维生素H、维生素C和丝氨酸，所述维生素B1∶维生素B6∶维生素B12∶维生素H∶维生素C∶丝氨酸∶磷脂酶A2的质量比为(10-15)∶(5-15)∶(1-6)∶(3-10)∶(45-60)∶(20-30)∶1。

以上技术方案中，外水相的水中添加增稠剂可以增加外水相的粘稠度，外水相粘稠度的增高有利于保持包裹膜层的稳定，降低内水相与外水相之间的表面张力差距，从而提高脂质体的稳定程度，利用增稠剂的乳化和分散作用，还可以加强脂质体的分散性能，避免脂质体相互之间絮凝团聚。

在以上技术方案中，内水相中还包覆有人寡肽-1、蔗糖和壳聚糖，蔗糖和壳聚糖不仅可以调节内水相的渗透压，防止内外水箱之间渗透压差过大，油膜不稳定，同时壳聚糖对人体具有良好的生物相容性，有助于磷脂酶A2的渗透，同时人寡肽-1在进入人体皮肤细胞内后，可以促进细胞的增殖分化，从而以新生细胞代替衰老细胞和死亡细胞的过程，达到抗衰老的效果。

以上技术方案中，内水相与包裹膜层混合形成初乳时采用10000-15000r/min的转速进行搅拌，可以促使内水相的脂质体更加细化，在进行二次乳化时，搅拌速度低，在形成复乳的过程中，初乳能够保持原始的形态，不会出现凝聚和聚集，从而形成更加均匀的复乳，复乳在出去有机溶剂形成多囊脂质体的粒径小，同时具备较高的稳定性。

本发明所制备的包覆磷脂酶的多囊脂质体可以应用在化妆品和护肤品领域。

本发明的包覆磷脂酶的多囊脂质体及其制备方法和应用相对于现有技术具有以下有益效果：

(1)本发明的包覆磷脂酶的多囊脂质体相比常规多囊脂质体而言，多囊脂质体乳滴的粒径更小，更加稳定，同时内水相包含磷脂酶A2，能够对表皮细胞膜进行酶解，使表皮细胞具备更好的通透性，从而有助于水性有效成分的吸收，油相采用的磷脂层具有良好的生物相容性，有助于磷脂酶A2渗透进表皮细胞内，同时磷脂还具有一定的人体细胞修复能力，起到了延缓衰老的作用；

(2)本发明还提供了包覆磷脂酶的多囊脂质体的制备方法，相比常规方法而言具有简单，容易操作的优点，所制备的多囊脂质体更加稳定，具有良好的应用前景；

(3)本发明还提供了一种利用包覆磷脂酶的多微囊脂质体制备的护肤品，相比常规的护肤品而言，本发明的护肤品具有更优的渗透能力，通过包覆的磷脂酶A2对表皮细胞的细胞膜进行酶解，扩大细胞膜的通道，从而让更多的护肤成分更容易进入表皮细胞，作用效果更好，人寡肽-1以及水溶性的维生素和丝氨酸有效地防止细胞的衰老，修复细胞受损。

具体实施方式

下面将结合本发明实施方式，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。

制备包覆磷脂酶的多囊脂质体作为实施例材料进行试验和检测

实施例1

称取500g水、10g磷脂酶A2、10g人寡肽-1、10g蔗糖和10g壳聚糖，常温搅拌5min，得到内水相，备用；

称取50g胆固醇、1g尼泊金甲酯、1g2，6-二叔丁基对甲苯酚、200g二氯甲烷和50g大豆磷脂以及10g橄榄油，常温搅拌5min，得到油相，备用；

称取10g葡萄糖和100g水，常温搅拌5min，得到外水相，备用；

量取200ml内水相和200ml油相，保持30℃，混合搅拌，搅拌速度为10000r/min，搅拌5min，的得到W/O初乳；

量取100mlW/O初乳和100ml外水相，向W/O初乳中加入外水相，保持搅拌速度为500r/min，常温搅拌1min，得到复乳。

保持30℃条件下，将复乳加入到旋转蒸发器中，保持转速为10r/min，常温蒸发，直至无有机溶剂蒸出，得到包覆磷脂酶的多囊脂质体1。

实施例2

称取2000g水、1g磷脂酶A2、25g人寡肽-1、5g蔗糖和5g壳聚糖，常温搅拌10min，得到内水相，备用；

称取55g胆固醇、5g尼泊金甲酯、2g2，6-二叔丁基对甲苯酚、500g三氯甲烷和15g单硬脂酸甘油酯以及1g橄榄油，常温搅拌10min，得到油相，备用；

称取10g氯化钠、10g海藻糖和100g水，常温搅拌10min，得到外水相，备用；

量取200ml内水相和200ml油相，保持50℃，混合搅拌，搅拌速度为15000r/min，搅拌15min，的得到W/O初乳；

量取100mlW/O初乳和100ml外水相，向W/O初乳中加入外水相，保持搅拌速度为1000r/min，常温搅拌5min，得到复乳。

保持40℃条件下，将复乳加入到旋转蒸发器中，保持转速为50r/min，常温蒸发，直至无有机溶剂蒸出，得到包覆磷脂酶的多囊脂质体2。

实施例3

称取1000g水、1g磷脂酶A2、10g人寡肽-1、2g蔗糖和2g壳聚糖，常温搅拌7min，得到内水相，备用；

称取52g胆固醇、2g尼泊金甲酯、1g2，6-二叔丁基对甲苯酚、300g四氯化碳和20g16-18碳脂肪醇以及2.5g橄榄油，常温搅拌8min，得到油相，备用；

称取15g环糊精、15g麦芽糖和100g水，常温搅拌5min，得到外水相，备用；

量取200ml内水相和200ml油相，保持40℃，混合搅拌，搅拌速度为12000r/min，搅拌5min，的得到W/O初乳；

量取100mlW/O初乳和100ml外水相，向W/O初乳中加入外水相，保持搅拌速度为800r/min，常温搅拌3min，得到复乳。

保持35℃条件下，将复乳加入到旋转蒸发器中，保持转速为40r/min，常温蒸发，直至无有机溶剂蒸出，得到包覆磷脂酶的多囊脂质体3。

实施例4

称取500g水、1g磷脂酶A2、15g人寡肽-1、3g蔗糖和3g壳聚糖，常温搅拌5min，得到内水相，备用；

称取54g胆固醇、4g尼泊金甲酯、292，6-二叔丁基对甲苯酚、400g二氯甲烷和15g棕榈酸异丙酯以及1.25g橄榄油，常温搅拌5min，得到油相，备用；

称取10g三磷酸五钠、5g甘氨酸、5g赖氨酸和100g水，常温搅拌6min，得到外水相，备用；

量取200ml内水相和200ml油相，保持30℃，混合搅拌，搅拌速度为14000r/min，搅拌5min，的得到W/O初乳；

量取100mlW/O初乳和100ml外水相，向W/O初乳中加入外水相，保持搅拌速度为200r/min，常温搅拌1min，得到复乳。

保持45℃条件下，将复乳加入到旋转蒸发器中，保持转速为30r/min，常温蒸发，直至无有机溶剂蒸出，得到包覆磷脂酶的多囊脂质体4。

对包覆磷脂酶的多囊脂质体1-4进行粒径测定，采用光学显微镜观察样品的结构，并在光镜下测定100个也低粒径，评估包覆磷脂酶的多囊脂质体的平均粒径。

分别取一定量的包覆磷脂酶的多囊脂质体1-4，置于带刻度的离心管中，离心15min，观察分层情况，读取管内乳液的总体积以及吸出外水相的体积，计算乳层的保留率。

分别取一定量的包覆磷脂酶的多囊脂质体1-4，置于4℃条件下静置2个月，观察乳层的保留率。

取25ml包覆磷脂酶的多囊脂质体，用去离子水稀释5倍后，离心20min，吸取上层乳液5ml，加入乙醇-环己烷(1∶1)，振摇至包裹膜层完全析出，再离心20min，吸取水层1ml，采用液相色谱法检测其中的磷脂酶A2、蔗糖、壳聚糖和人寡肽-1的总含量，并计算包埋率。

各项检测结果如下表所示：

以上数据不难看出，本发明的包覆磷脂酶的多囊脂质体的粒径小，可以有效避免奥氏熟化效应，稳定程度更高，无论是在离心条件下还是静置条件下，均具有较高的乳层保留率，不易破乳，内水相包覆的维生素和人寡肽-1可以长时间保持活性，本发明中采用的配比能够使包裹膜层形成的膜厚度适中，在粒径较小的情况下保持更大的包埋率，保证单位体积的多囊脂质体内具有更多的有效成分。

实施例5

称取1000g水、1g磷脂酶A2、10g人寡肽-1、2g蔗糖、2g壳聚糖、10g维生素B1、5g维生素B6、1g维生素B12、3g维生素H、45g维生素C和20g丝氨酸，常温搅拌6min，得到内水相，备用；

称取52g胆固醇、2g尼泊金甲酯、1g2，6-二叔丁基对甲苯酚、300g二氯甲烷和20g16-18碳脂肪醇以及2.5g橄榄油，常温搅拌8min，得到油相，备用；

称取15g环糊精、15g麦芽糖和100g水，常温搅拌5min，得到外水相，备用；

量取200ml内水相和200ml油相，保持40℃，混合搅拌，搅拌速度为12000r/min，搅拌5min，的得到W/O初乳；

量取100mlW/O初乳和100ml外水相，向W/O初乳中加入外水相，保持搅拌速度为800r/min，常温搅拌3min，得到复乳。

保持35℃条件下，将复乳加入到旋转蒸发器中，保持转速为40r/min，常温蒸发，直至无有机溶剂蒸出，得到包覆磷脂酶的多囊脂质体5。

实施例6

称取1000g水、1g磷脂酶A2、10g人寡肽-1、2g蔗糖、2g壳聚糖、15g维生素B1、15g维生素B6、6g维生素B12、10g维生素H、60g维生素C和30g丝氨酸，常温搅拌6min，得到内水相，备用；

称取52g胆固醇、2g尼泊金甲酯、1g2，6-二叔丁基对甲苯酚、300g二氯甲烷和20g16-18碳脂肪醇以及2.5g橄榄油，常温搅拌8min，得到油相，备用；

称取15g环糊精、15g麦芽糖和100g水，常温搅拌5min，得到外水相，备用；

量取200ml内水相和200ml油相，保持40℃，混合搅拌，搅拌速度为12000r/min，搅拌5min，的得到W/O初乳；

量取100mlW/O初乳和100ml外水相，向W/O初乳中加入外水相，保持搅拌速度为800r/min，常温搅拌3min，得到复乳。

保持35℃条件下，将复乳加入到旋转蒸发器中，保持转速为40r/min，常温蒸发，直至无有机溶剂蒸出，得到包覆磷脂酶的多囊脂质体6。

对比例：采用某市售护肤品。

征集30名年龄在22-28岁的女性志愿者，分别将实施例5-6和对比例应用于10名不同的志愿者手背，每日早晚各使用一次，连续使用10天，使用菲斯凯尔测试仪对手背肌肤进行水分测试以及外观记录，结果如下：

以上数据结果表明，采用本发明的包覆磷脂酶的多微囊脂质体制备的护肤品具有良好的使用效果，相比目前常规护肤品而言，效果尤为明显。

以上所述仅为本发明的较佳实施方式而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。