阅读说明：本技术 一种猴头菇小肽的制备方法 (Preparation method of hericium erinaceus small peptide ) 是由 刘�英 蔡建平 于 2019-11-05 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种猴头菇小肽的制备方法,涉及植物提取技术领域。其技术要点是：一种猴头菇小肽的制备方法,包括如下步骤：(1)粉碎,将猴头菇洗净干燥后粉碎处理,制得猴头菇超微粉；(2)将猴头菇超微粉加入到去离子水中,在45-55℃下充分搅拌均匀,得到猴头菇提取液；(3)将猴头菇提取液加热至80-90℃,搅拌1-3h,冷却至45-55℃,加入复合酶,酶解2-3h,灭酶,得到酶解液；(4)将酶解液在4500-5500r/min的转速下离心8-12min,收集上清液,得到猴头菇小肽粗液；(5)将猴头菇小肽粗液减压浓缩,喷雾干燥,得到猴头菇小肽。采用本发明中的制备方法制得的猴头菇小肽具有纯净、安全性高的优点。(The invention discloses a preparation method of hericium erinaceus small peptide, and relates to the technical field of plant extraction. The technical key points are as follows: a preparation method of hericium erinaceus small peptide comprises the following steps: (1) pulverizing, cleaning Hericium erinaceus, drying, and pulverizing to obtain Hericium erinaceus micropowder; (2) adding the hericium erinaceus superfine powder into deionized water, and fully and uniformly stirring at 45-55 ℃ to obtain a hericium erinaceus extracting solution; (3) heating Hericium erinaceus extract to 80-90 deg.C, stirring for 1-3 hr, cooling to 45-55 deg.C, adding complex enzyme, performing enzymolysis for 2-3 hr, and inactivating enzyme to obtain enzymatic hydrolysate; (4) centrifuging the enzymolysis liquid for 8-12min at the rotating speed of 4500-; (5) and (3) concentrating the crude hericium erinaceus small peptide liquid under reduced pressure, and performing spray drying to obtain the hericium erinaceus small peptide. The hericium erinaceus small peptide prepared by the preparation method disclosed by the invention has the advantages of purity and high safety.)

一种猴头菇小肽的制备方法

技术领域

本发明涉及植物提取技术领域，更具体地说，它涉及一种猴头菇小肽的制备方法。

背景技术

小肽，即小分子活性肽是介于氨基酸与蛋白质之间一种生化物质，它比蛋白质分子量小，又比氨基酸分子量大，是一个蛋白质的片段。两个以上的氨基酸之间以肽键相连，形成的“氨基酸链”或“氨基酸串”就叫做肽。其中，10个以上氨基酸组成的肽被称为多肽，而由2-9个氨基酸组成的就叫做寡肽，由2-4个氨基酸组成的就叫做小分子肽或小肽。

在公开号为CN107751702A的中国发明专利中公开了一种猴头菇小分子肽固体饮料及其制备方法，具体的制备流程有：1、预处理；2、微波杀菌；3、高压差提取；4、滤液和滤渣分离；5、酶解；6、分离纯化；7、干燥成干粉；8、制粒。上述提取猴头菇小分子肽的过程中会用到乙醇作为浸提溶剂进行提取，类似这种外加醇或有机溶剂的提取方法，提取物中可能会残留有机溶剂，后期处理难以分离，导致猴头菇小肽具有不洁净的缺点。

因此，需要提出一种新的方案来解决上述问题。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种猴头菇小肽的制备方法，采用本发明中的制备方法制得的猴头菇小肽具有纯净、安全性高的特点，且本发明中的制备方法，其工序较为节简、制备出的猴头菇小肽提取率较高。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

一种猴头菇小肽的制备方法，包括如下步骤：

(1)粉碎，将猴头菇洗净干燥后粉碎处理，制得猴头菇超微粉；

(2)将猴头菇超微粉加入到去离子水中，在45-55℃下充分搅拌均匀，得到猴头菇提取液；

(3)将猴头菇提取液加热至80-90℃，搅拌1-3h，冷却至45-55℃，加入复合酶，酶解2-3h，灭酶，得到酶解液；

(4)将酶解液在4500-5500r/min的转速下离心8-12min，收集上清液，得到猴头菇小肽粗液；

(5)将猴头菇小肽粗液减压浓缩，喷雾干燥，得到猴头菇小肽。

通过采用上述技术方案，猴头菇小肽能让亚健康和心脑血管疾病等70多种疾病患者获得健康，脱离抗生素、激素给人类生命带来的危害，其能够快速融入血液中，修复人类受损坏的细胞，加速生成新细胞，还具有促进血液循环、降低血液中的胆固醇含量、增强免疫力、安神助消化、抗胃癌、食道癌的作用。本发明采用超声波辅水提法，避免外加醇或有机溶剂，选取最优提取工艺条件，在保证高提取率和高提取速率的情况下，提取出的猴头菇小肽具有洁净、安全的特点。

进一步优选为，(1)中，所述猴头菇超微粉的粒径为0.5-1mm。

通过采用上述技术方案，猴头菇中的小肽通常分布于细胞内与细胞间质中，以细胞内为主，因此只有打破猴头菇细胞，才能使其中的小肽物质最大化和快速释放，通过粉碎猴头菇，制得超微粉，使得超微粉粒径处于0.5-1mm，从而在提取时，猴头菇中的小肽物质才能最大限度的释放，保证提取率较高；但是猴头菇小肽在粉碎过程中，并不是越细越好，而是应该控制在一定的范围内，因为猴头菇超微粉的颗粒粒径过小时，表面活性增强，颗粒间的相互作用增大，粉末易聚集并导致小肽物质的溶出量和溶出速率下降，影响提取率和提取效率。

进一步优选为，所述猴头菇超微粉还经过1-2h的浸泡处理，并采用微波对其进行杀菌。

通过采用上述技术方案，通过浸泡处理，可软化猴头菇细胞的细胞壁，使得后续提取过程中，猴头菇细胞易破碎，细胞中的活性肽物质能够通过细胞壁渗出，提高活性肽的提取效率和提取率。此外还采用了微波杀菌处理，以避免析出的小肽物质被细菌污染和利用，提高小肽提取纯度。

进一步优选为，(2)中，所述去猴头菇超微粉与去离子水的重量比为1:(10-20)。

通过采用上述技术方案，采用去离子水作为浸提溶剂，不用外加醇或有机溶剂，选取最优提取工艺条件，可在保证高提取率和高提取速率的情况下，提取出的猴头菇小肽具有洁净、无残留有机溶剂的特点，无需后续的溶剂处理工序。

进一步优选为，所述(2)的具体步骤设置为：将猴头菇超微粉加入到去离子水中，在45-55℃下超声浸提0.5-1h，得到猴头菇提取液，超声浸提时的超声波频率为25-50KHz。

通过采用上述技术方案，超声波是在弹性介质中传播的一种震动频率高于声波的机械波，能产生并传递较大的能量，给予固体小颗粒极大的加速度，当颗粒内部接受的能量足以克服结构的束缚能时，固体颗粒发生解聚，从而促使细胞内有效活性物质的溶出，控制超声频率，保证猴头菇细胞中的蛋白质等活性物质能够充分溶出，便于提取。

进一步优选为，所述复合酶是由蜗牛消化酶、胰蛋白酶、丝氨酸氨肽酶和羧肽酶A混合而成。

通过采用上述技术方案，蜗牛消化酶可分解真菌细胞壁，包括霉菌和蘑菇等，其可将真菌的细胞壁分解掉，形成原生质体，从而使得活性肽物质从猴头菇细胞中溶解出来；胰蛋白酶为内切酶，可作用于蛋白质分子内部肽键，将大分子量的多肽链从中间切断，形成较小的朊和胨；而丝氨酸氨肽酶和羧肽酶A属于外切酶，主要作用于氨基酸末端，采用多种酶复合，从多种位点对蛋白质和多肽链进行切断，使得猴头菇小肽的提取率大大提高。

进一步优选为，所述蜗牛消化酶、胰蛋白酶、丝氨酸氨肽酶和羧肽酶A的质量比为(0.2-0.6):(0.6-1):(0.8-1):(0.8-1.2)。

通过采用上述技术方案，采用合适的蛋白酶比例，使得蛋白质完全从猴头菇细胞中溶出，然后分解成小肽，制得的小肽物质含量大大提高。

进一步优选为，(5)中，所述减压浓缩具体设置为：于30℃、-0.07MPa条件下，将猴头菇小肽粗液减压浓缩至原来的1/4-1/2。

综上所述，与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(1)本发明采用超声波辅水提法，避免外加醇或有机溶剂，选取最优提取工艺条件，在保证高提取率和高提取速率的情况下，提取出的冬虫夏草提取物具有洁净、安全的特点；

(2)本发明中的制备方法，其工序较为节简，在具有较高提取效率的基础上，制备出的猴头菇小肽提取率较高；

(3)本发明采用多种酶复合，从多种位点对蛋白质和多肽链进行切断，使得猴头菇小肽的提取率大大提高。

附图说明

图1为本发明的工艺流程图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明进行详细描述。值得说明的是，其中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件下进行，所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1：一种猴头菇小肽的制备方法，通过如下步骤制备获得：

(1)粉碎，将猴头菇洗净干燥后粉碎处理，制得粒径分布在0.5-1mm之间的猴头菇超微粉；

(2)将猴头菇超微粉加入到10倍重量的去离子水中，在45℃下充分搅拌均匀，然后浸泡2h，并采用微波杀菌处理，然后采用25KHz的超声频率对其超声浸提1h，得到猴头菇提取液；

(3)将猴头菇提取液加热至80℃，搅拌3h，冷却至45℃，加入复合酶，酶解3h，然后升温至90℃并保持8min，进行灭酶，得到酶解液；

(4)将酶解液在4500r/min的转速下离心12min，收集上清液，得到猴头菇小肽粗液；

(5)于30℃、-0.07MPa条件下，将猴头菇小肽粗液减压浓缩至原来的1/4，采用气流式喷雾干燥法对其进行喷雾干燥，得到猴头菇小肽。

其中复合酶采用质量比为0.2:0.6:0.8:1.2的蜗牛消化酶、胰蛋白酶、丝氨酸氨肽酶和羧肽酶A混合而成。

实施例2：一种猴头菇小肽，与实施例1的不同之处在于，步骤(2)具体设置为：将猴头菇超微粉加入到20倍重量的去离子水中，在55℃下充分搅拌均匀，然后浸泡1h，并采用微波杀菌处理，然后采用50KHz的超声频率对其超声浸提0.5h，得到猴头菇提取液。

实施例3：一种猴头菇小肽，与实施例1的不同之处在于，步骤(3)具体设置为：将猴头菇提取液加热至90℃，搅拌1h，冷却至55℃，加入复合酶，酶解2h，然后升温至90℃并保持8min，进行灭酶，得到酶解液。

实施例4：一种猴头菇小肽，与实施例1的不同之处在于，步骤(4)具体设置为：将酶解液在5500r/min的转速下离心8min，收集上清液，得到猴头菇小肽粗液。

实施例5：一种猴头菇小肽，与实施例1的不同之处在于，步骤(5)具体设置为：于30℃、-0.07MPa条件下，将猴头菇小肽粗液减压浓缩至原来的1/2，采用气流式喷雾干燥法对其进行喷雾干燥，得到猴头菇小肽。

实施例6：一种猴头菇小肽，与实施例1的不同之处在于，复合酶采用质量比为0.4:0.8:0.9:1的蜗牛消化酶、胰蛋白酶、丝氨酸氨肽酶和羧肽酶A混合而成。

实施例7：一种猴头菇小肽，与实施例1的不同之处在于，复合酶采用质量比为0.6:1:1:1.2的蜗牛消化酶、胰蛋白酶、丝氨酸氨肽酶和羧肽酶A混合而成。

对比例1：一种猴头菇小肽，与实施例1的不同之处在于，猴头菇超微粉未经过浸泡处理。

对比例2：一种猴头菇小肽，与实施例1的不同之处在于，猴头菇超微粉未经过超声浸提。

对比例3：一种猴头菇小肽，与实施例1的不同之处在于，复合酶中未加入蜗牛消化酶。

性能测试以质量浓度为0.3mg/mL的牛血清蛋白为对照品，采用福林酚法，测定实施例1-7和对比例1-3制得的猴头菇小肽的含量并计算收率，将测试结果计入下列表1中。

由表1中测试结果可知，采用本发明中的制备方法制得的猴头菇小肽，其收率可达到91％以上，且本发明未采用醇或有机溶剂进行浸提，所得猴头菇小肽较纯净、绿色安全。

表1性能测试结果

测试项目	收率(％)
		实施例1	91.51
实施例2	91.28
		实施例3	92.01
实施例4	92.06
		实施例5	91.51
实施例6	91.25
		实施例7	92.43
对比例1	76.86
		对比例2	68.63
对比例3	43.21

以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。