阅读说明：本技术 一种蝴蝶兰花序轴腋芽的离体诱导完整花序的方法 (Method for inducing complete inflorescence in vitro by axillary bud of inflorescence shaft of phalaenopsis ) 是由 许申平 袁秀云 张腾飞 张燕 梁芳 牛苏燕 王默霏 崔波 于 2019-11-07 设计创作，主要内容包括：本发明属于蝴蝶兰培育技术领域,具体涉及一种蝴蝶兰花序轴腋芽进行离体诱导完整花序的方法。该方法通过对蝴蝶兰的花序轴腋芽进行处理,然后将其基部置于诱导培养基上,结合温度与光照互作模式,成功诱导培育出完整的蝴蝶兰花序,且不受季节条件的限制,能够实现长期诱导培育,为研究蝴蝶兰开花机制节约了试验材料,而且,该技术是在离体条件下诱导的完成花序,可排除很多未知因素的干扰,是研究蝴蝶兰开花机制非常好的材料,对蝴蝶兰的生殖诱导培养奠定基础。(The invention belongs to the technical field of phalaenopsis culture, and particularly relates to a method for in vitro induction of complete inflorescences by axillary buds of inflorescences of phalaenopsis. The method successfully induces and cultivates a complete phalaenopsis inflorescence by treating the axil axillary bud of the phalaenopsis and placing the base part of the axil axillary bud on an induction culture medium in combination with a temperature and illumination interaction mode, is not limited by seasonal conditions, can realize long-term induction cultivation, saves test materials for researching the flowering mechanism of the phalaenopsis, can eliminate the interference of a plurality of unknown factors by completing the inflorescence under the in vitro condition, is a material for researching the flowering mechanism of the phalaenopsis, and lays a foundation for the reproductive induction cultivation of the phalaenopsis.)

一种蝴蝶兰花序轴腋芽的离体诱导完整花序的方法

技术领域

本发明属于蝴蝶兰培育技术领域，具体涉及一种蝴蝶兰花序轴腋芽进行离体诱导完整花序的方法。

背景技术

蝴蝶兰是兰科蝴蝶兰属植物，因其花色秀丽，品种繁多，花姿优美，花期长而备受人们青睐，近年来在花卉市场中极受欢迎，但是蝴蝶兰的自然花期较晚，一般在每年的4到5月份，无法满足人们周年对蝴蝶兰的需求，因此在蝴蝶兰栽培中常通过人工调控使其按需开花。

目前，关于蝴蝶兰组织培养的研究已非常深入，利用蝴蝶兰的叶片、根尖、茎尖和花序轴都能诱导完整的植株，但是在离体条件下诱导蝴蝶兰的完成花序目前并没有有效的方法。蝴蝶兰为年宵花卉，而其自然花期一般在每年的3月前后，通过人工调控花期使其按需开花是蝴蝶兰生产的关键环节。生产上通常通过空调降温或高山催花等手段控制温度以满足年宵蝴蝶兰的开花需求，但这大大增加了蝴蝶兰的生产成本，为探究蝴蝶兰成花的响应机制，每年需要大量的成熟苗以供进行相关试验。

以蝴蝶兰的花序轴为外植体，按照目前的方法需要将花序轴腋芽诱导成完整植株后，再将植株培育出完整花序，这个过程需要较长的时间，难以满足市场需求；而将花序轴腋芽直接离体诱导成完整花序目前还没有有效的方法，因此需要一种蝴蝶兰花序轴腋芽的离体诱导完整花序的方法来缩短蝴蝶兰的培育周期。

发明内容

针对目前还没有能够将蝴蝶兰花序轴腋芽离体诱导成完整花序的缺陷和问题，本发明提供一种蝴蝶兰花序轴腋芽的离体诱导完整花序的方法。

本发明解决其技术问题所采用的方案是：一种蝴蝶兰花序轴腋芽的离体诱导完整花序的方法，剪取蝴蝶兰的花序轴，将蝴蝶兰的花序轴消毒处理后接种于诱导培养基上进行诱导培养，培养温度为：昼、夜温度范围分别为22-26℃、15-20℃，培养光照为：光强 150-250μmol·m^-2·s^-1，光暗比12h/12h，培养25-30d，统计蝴蝶兰完整花序数量。

上述的一种蝴蝶兰花序轴腋芽的离体诱导完整花序的方法，所述昼、夜温度分别为24、18℃，所述光强为200μmol·m^-2·s^-1。

上述的一种蝴蝶兰花序轴腋芽的离体诱导完整花序的方法，所述诱导培养基为在MS培养基中添加0.1-0.2mg/LTDZ、0.8-1.2mg/L6-BA 和0.1-0.2mg/LNAA。

上述的一种蝴蝶兰花序轴腋芽的离体诱导完整花序的方法，所述诱导培养基中还含有20％椰汁、7.5g/L琼脂、20g/L蔗糖和1g/L活性炭。

上述的一种蝴蝶兰花序轴腋芽的离体诱导完整花序的方法，在诱导培养之前，还包括在花序轴两端斜切后，将花序轴基部置于 0.1-0.2mg/L的2，4-D溶液中浸泡10-30s。

上述的一种蝴蝶兰花序轴腋芽的离体诱导完整花序的方法，所述培养光照的光为散射光。

本发明的有益效果：本发明采用蝴蝶兰的花序轴为外植体，将蝴蝶兰的花序轴基部置于2,4-D溶液中浸泡处理，然后接种于特制培养基中，通过温度与光照的互作对其花序轴腋芽进行再生诱导，通过培养基营养成分、温度和光照的协同作用，成功诱导培养出蝴蝶兰完整花序，揭示了发育成完整花序最优的发育环境，可明显提高蝴蝶兰花序轴腋芽的离体诱导完整花序的诱导率，缩短诱导培养时间，且不受季节条件的限制，能够实现长期诱导培育，为研究蝴蝶兰开花机制节约了试验材料，而且，该技术是在离体条件下诱导的完成花序，可排除很多未知因素的干扰，对蝴蝶兰的生殖诱导培养奠定基础。

附图说明

图1为本发明蝴蝶兰花序轴腋芽离体诱导的完整花序照片；图中从左至右的花序轴腋芽长度分别为0.5cm、1cm、1.5cm、2cm。

图2为本发明对比例蝴蝶兰花序轴腋芽离体诱导的完整植株照片。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进一步说明，为了更好的说明本发明，本发明采用蝴蝶兰‘大辣椒’品种作为试验品种。

本研究利用开过花的蝴蝶兰花序轴，在离体条件下可成功诱导完整的花序，该技术的发明，为研究蝴蝶兰开花机制节约了大部分的试验材料，而且，该技术是在离体条件下诱导的完成花序，可排除很多未知因素的干扰，是研究蝴蝶兰开花机制非常好的材料。

实施例1：本实施例提供一种蝴蝶兰大辣椒花序轴腋芽进行离体诱导完整花序的方法，包括以下步骤：

第一步、将蝴蝶兰‘大辣椒’用剪刀剪取花序轴，取自上而下前两个腋芽，将花序轴以花序轴腋芽为中心切成3-4cm的小段；

第二步、将包裹着腋芽的鳞片去除，用酒精棉球擦拭3-5次；

第三步、在超净工作台上将花序轴用0.1％的升汞消毒10min，然后用无菌水冲洗3-5次；

第四步、将花序轴的两端进行斜切，将花序轴基部置于0.1mg/L 的2，4-D溶液中浸泡20s；将花序轴基部朝下无菌接种于诱导培养基(1/2MS+1mg/L6-BA+0.2mg/L TDZ+0.2mg/LNAA+20％椰汁 +7.5g/L琼脂+20g/L蔗糖+1g/L活性炭)上，每瓶接种蝴蝶兰花序轴休眠芽8个，合计10瓶为一组，放入人工气候培养箱中进行诱导培养，将昼夜温度分别设置为24℃与18℃，将培养光照设置为光强 200μmol·m^-2·s^-1，光暗比12h/12h，培养26d，统计诱导得到的蝴蝶兰大辣椒完整花序数量。

实施例2：本实施例提供一种蝴蝶兰大辣椒花序轴腋芽进行离体诱导完整花序的方法，包括以下步骤：

第一步、将蝴蝶兰‘大辣椒’用剪刀剪取花序轴，取自上而下前两个腋芽，将花序轴以花序轴腋芽为中心切成3-4cm的小段；

第二步、将包裹着腋芽的鳞片去除，用酒精棉球擦拭3-5次；

第三步、在超净工作台上将花序轴用0.1％的升汞消毒15min，然后用无菌水冲洗3-5次；

第四步、将花序轴的两端进行斜切，将花序轴基部置于0.1mg/L 的2，4-D溶液中浸泡10s；将花序轴基部朝下无菌接种于诱导培养基(1/2MS+1.2mg/L 6-BA+0.1mg/L TDZ+0.1mg/LNAA+20％椰汁+琼脂7.5g/L+20g/L蔗糖+1g/L活性炭)上，每瓶接种蝴蝶兰花序轴休眠芽8个，合计10瓶为一组，放入人工气候培养箱中进行诱导培养，将昼夜温度分别设置为22℃与15℃，将培养光照设置为光强 150μmol·m^-2·s^-1，光暗比12h/12h，培养30d，计算诱导得到的蝴蝶兰大辣椒完整花序数量。

实施例3：本实施例提供一种蝴蝶兰大辣椒花序轴腋芽进行离体诱导完整花序的方法，包括以下步骤：

第一步、将蝴蝶兰‘大辣椒’用剪刀剪取花序轴，取自上而下前两个腋芽，将花序轴以花序轴腋芽为中心切成3-4cm的小段；

第二步、将包裹着腋芽的鳞片去除，用酒精棉球擦拭3-5次；

第三步、在超净工作台上将花序轴用0.1％的升汞消毒12min，然后用无菌水冲洗3-5次；

第四步、将花序轴的两端进行斜切，将花序轴基部置于0.15mg/L 的2，4-D溶液中浸泡12s；将花序轴基部朝下无菌接种于诱导培养基(1/2MS+0.8mg/L 6-BA+0.3mg/L TDZ+0.3mg/LNAA+20％椰汁+琼脂7.5g/L+20g/L蔗糖+1g/L活性炭)上，每瓶接种蝴蝶兰花序轴休眠芽8个，合计10瓶为一组，放入人工气候培养箱中进行诱导培养，将昼夜温度分别设置为26℃与20℃，将培养光照设置为光强 250μmol·m-²·s-¹，光暗比12h/12h，培养28d，计算诱导得到的蝴蝶兰大辣椒完整花序数量。

实施例4-6

实施例4-6提供的蝴蝶兰大辣椒花序轴腋芽进行离体诱导完整花序的方法与实施例1大致相同，不同的是诱导培养基和培养环境略有不同，不同之处见表1。

表1本发明实施例4-6所用培养基与培养环境

对比例

对比例提供的蝴蝶兰大辣椒花序轴进行离体诱导的方法，包括以下步骤：

第一步、将蝴蝶兰‘大辣椒’用剪刀剪取花序轴，取自上而下前两个腋芽，将花序轴以花序轴腋芽为中心切成3-4cm的小段；

第二步、将包裹着腋芽的鳞片去除，用酒精棉球擦拭3-5次；

第三步、在超净工作台上将花序轴用0.1％的升汞消毒10min，然后用无菌水冲洗3-5次；

第四步、将花序轴的两端进行斜切，将花序轴基部朝下无菌接种于诱导培养基(1/2MS+10mg/L6-BA+20％椰汁+7.5g/L琼脂+20g/L蔗糖+1g/L活性炭)上，每瓶接种蝴蝶兰花序轴休眠芽8个，合计10 瓶为一组，放入人工气候培养箱中进行诱导培养，将昼夜温度分别设置为30℃与28℃，将培养光照设置为光强30μmo1·m^-2.s^-1，光暗比 12h/12h，培养25d，观察诱导结果。

通过对对比例蝴蝶兰大辣椒花序轴的诱导的外观形态进行观察，结果如图2所示，发现采用对比例的方法对蝴蝶兰花序轴进行离体诱导，在发育过程中，花序轴诱导发育成完整植株，并未朝着发育成完整花序的方向进行发育。

诱导结果

实施例1-6的诱导结果，详见表2。

表2本发明离体诱导完整花序轴统计结果

组别	休眠芽(个)	花序轴(个)	诱导率(％)
				实施例1	80	78	97.5
实施例2	80	77	96.25
				实施例3	80	75	93.75
实施例4	80	75	93.75
				实施例5	80	76	95
实施例6	80	73	91.25

由表2可以看出，采用本发明方法诱导蝴蝶兰花序轴的诱导率均超过91％，而采用实施例1的方法花序轴的诱导率高达97.5％，说明使用本发明提供的培养基，结合温度与光照的互作模式能够高效、快速的将蝴蝶兰花序轴外植体离体为完整花序轴。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不限制本发明，凡在本发明的精神和原则范围内所做的任何修改、等同替换和改进，均应包含在本发明的保护范围之内。