阅读说明：本技术 一种绣球的液体培养基组培快繁方法 (Hydrangea liquid culture medium tissue culture rapid propagation method ) 是由 胡春宏 季翔 常苹 王婷婷 于 2019-11-22 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种绣球的液体培养基组培快繁方法,属于植物组织培养技术领域,旨在提供一种繁殖周期短,效率高,成本低的绣球的液体培养基组培快繁方法,其技术方案要点是具体步骤如下：S1：外植体选择；S2：外植体消毒；S3：诱导培养；S4：增殖培养；S5：生根培养。本发明通过液体组织培养技术,以芽为原材料,获取方便,增殖倍率高达8～10倍,生根率达到95%以上,苗木规格整齐,性状保持稳定,同时节省成本,适合工厂化大规模生产优质绣球种苗。(The invention discloses a liquid culture medium tissue culture rapid propagation method of hydrangea, belongs to the technical field of plant tissue culture, and aims to provide a liquid culture medium tissue culture rapid propagation method of hydrangea with short propagation period, high efficiency and low cost, wherein the technical scheme is characterized by comprising the following steps: s1: selecting an explant; s2: sterilizing explants; s3: performing induction culture; s4: carrying out proliferation culture; s5: and (5) rooting culture. According to the method, the liquid tissue culture technology is adopted, the buds are used as raw materials, the method is convenient to obtain, the multiplication rate is up to 8-10 times, the rooting rate reaches more than 95%, the seedling size is neat, the character is stable, the cost is saved, and the method is suitable for industrial large-scale production of high-quality hydrangea seedlings.)

一种绣球的液体培养基组培快繁方法

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其是涉及一种绣球的液体培养基组培快繁方法。

背景技术

绣球(Hydrangea macrophylla)为虎耳草科绣球属落叶灌木,别名八仙花、紫阳花、粉团花、雪球花、草绣球等，是园林上应用广泛的观赏植物。原产于我国长江流域及以南，自然株高2m。叶对生，倒卵或椭圆形，边缘有锯齿，伞房花序顶生，直径20cm，近球形。花色多变，青白色，渐转粉红色，再转***，花色美艳。其花色又常随土壤的酸碱度而改变,土壤pH值4～6时，花色多呈蓝色；pH值7.5以上时，则呈红色。绣球花叶片翠绿，花色鲜艳，盛开时花团锦簇，美丽多姿，每簇花可开2个月之久，观赏期长。

由于绣球花的孕性花极为少数，所以不易结种，常用分株、压条或扦插方法繁殖，但分株、压条繁殖倍率低，速度慢，而扦插繁殖又会受到季节的限制，不能常年生产苗木，很难满足市场的需求。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的之一是提供一种繁殖周期短，效率高，成本低的绣球的液体培养基组培快繁方法。

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种绣球的液体培养基组培快繁方法，具体步骤如下：

S1：外植体选择；

S2：外植体消毒；

S3：诱导培养；

S4：增殖培养；

S5：生根培养，

其中，在S3中，将S2中消毒的外植体接入诱导培养基中培养，诱导培养基的配方为MS+6-BA 0.5mg/L+GA₃ 2.0mg/L+蔗糖30g/L，诱导培养基的pH值为5.80，

在S4中，将S3中的无菌外植体转接到增殖培养基中，增殖培养基的配方为MS+6-BA0.3～1.0mg/L+GA3 0.5～1.5mg/L+蔗糖30g/L，增殖培养基的pH值为5.80，

在S5中，将S4中的绣球组培苗放入生根培养基中，生根培养基的配方为1/2MS+IBA0.5～2.0mg/L+NAA 1.0～2.0mg/L+蔗糖15g/L，生根培养基pH值为5.80。

通过采用上述技术方案，通过液体组织培养技术，以芽为原材料，获取方便，增殖倍率高达8～10倍，生根率达到95％以上，苗木规格整齐，性状保持稳定，同时节省成本，适合工厂化大规模生产优质绣球种苗。诱导培养基萌芽率能达到90％，可以成功建立无菌再生体系。使用本增殖培养基，绣球组培苗增殖倍率能够达到8～10倍，组培苗高度一致，生长健壮。使用本生根培养基，绣球组培苗生根率能够达到95％，根系发达，健壮，可以成功用于移栽大棚。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在S3中，将S2中消毒的外植体接入诱导培养基中后的培养环境为在光照强度1500Lux条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养6～8周。

通过采用上述技术方案，在该培养条件下能够有效避免诱导培养阶段植物材料出现应激反应，植物材料能够快速适应诱导培养基，促使植物材料快速生长、芽体健壮。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在S4中，将S3中的无菌外植体接入增殖培养基中后的培养环境为在光照强度1500Lux条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养8～12周。

通过采用上述技术方案，在该培养条件下能够有效避免增殖培养阶段植物材料出现应激反应，植物材料能够快速适应增殖培养基，促使植物材料快速生长、芽体健壮。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在S4中，每隔8～12周转接入新的增殖培养基。

通过采用上述技术方案，经过8～12周后，增殖培养基的效果将会减弱，植物材料也会污染增殖培养基，需要及时更换。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在S5中，将S4中的绣球组培苗接入生根培养基中后的培养环境为在光照强度1500Lux条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养8～12周。

通过采用上述技术方案，在该培养条件下能够有效避免生根培养阶段植物材料出现应激反应，植物材料能够快速适应生根培养基，促使植物材料快速生长、芽体健壮。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在S2中，外植体消毒的具体步骤为将树莓外植体叶片剪去，自来水冲洗干净，在工作台上把已经冲洗干净的外植体浸入75％酒精中消毒30s，用无菌水冲洗3～4次，使用白猫漂白水和无菌水按1：4的体积比配制消毒液，将外植体放入消毒液浸泡40min。

通过采用上述技术方案，这种方式对外植体消毒方法简单，能够大大降低外植体的死亡率，消毒成活率较高。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在S1中，外植体选择为健康绣球的枝芽饱满的半木质化枝条茎尖部分。

综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：

本发明通过液体组织培养技术，以芽为原材料，获取方便，增殖倍率高达8～10倍，生根率达到95％以上，苗木规格整齐，性状保持稳定，同时节省成本，适合工厂化大规模生产优质绣球种苗。

附图说明

图1是绣球的液体培养基组培快繁方法的流程示意图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明作进一步详细说明。

实施例：参照图1，为本发明公开的一种绣球的液体培养基组培快繁方法，具体步骤如下：

(一)、试验材料：供试材料采自江苏东郁植物科技有限公司苗圃的健康绣球，品种为无尽夏(Endless summer“bloom struck”)，外植体选用当年生枝芽饱满的半木质化枝条茎尖部分。

(二)、试验方法：

绣球组织培养过程按以下步骤进行：初代培养、继代培养、生根培养。

(1)、初代培养：绣球外植体，将叶片剪去，自来水冲洗干净。在超净工作台上把已经冲洗干净的外植体浸入75％酒精中消毒30s，用无菌水冲洗3～4次。使用白猫漂白水和无菌水按1：4的体积比配制消毒液，将外植体放入消毒液浸泡40min，其中白猫漂白水为上海白猫(集团)有限公司生产的“白猫”牌家用漂白水。消毒完成，将外植体接种到诱导培养基中培养，建立无菌再生系统，诱导培养环境为光照强度1500Lx条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养6～8周。其中诱导培养基为MS+6-BA 0.5～1.5mg/L+GA₃ 1.0～3.5mg/L+蔗糖30g/L，诱导培养基的pH值为5.80。

(2)、继代培养：以建立的无菌再生系统为对象，将无菌外植体转接到增殖培养基，其中增殖培养基为MS+6-BA 0.3～1.0mg/L+GA3 0.5～1.5mg/L+蔗糖30g/L，培养环境为光照强度1500Lx条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养8～12周。每隔8～12周转接入新的增殖培养基，增殖培养基的pH值为5.80。

(3)、生根培养：经过继代培养的绣球组培苗，取2～3cm的顶芽，放入生根培养基，其中生根培养基为1/2MS+IBA0.5～2.0mg/L+NAA 1.0～2.0mg/L+蔗糖15g/L，生根培养基的pH值为5.80。诱导培养环境为光照强度1500Lx条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养8～12周。

(三)、试验结果：

初代培养：使用本发明的消毒方法，消毒成功率能达到80％，诱导培养基萌芽率能达到90％，可以成功建立无菌再生体系。

继代培养：使用本发明的增殖培养基，绣球组培苗增殖倍率能够达到8～10倍，组培苗高度一致，生长健壮。

生根培养：使用本发明的生根培养基，绣球组培苗生根率能够达到95％，根系发达，健壮，可以成功用于移栽大棚。

本发明所指MS培养基是Murashige和Skoog研制的培养基，其成分配方表见表1。

1/2MS培养基是指大量元素含量为MS培养基的一半，其他成分用量相同。

表1、MS培养基成分表

本发明涉及的植物生长调节剂有：6-BA—6-苄氨基嘌呤；GA₃—赤霉素；IBA—吲哚丁酸，NAA—萘乙酸。

本发明中的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基均为液体培养基。

本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。