阅读说明：本技术 一种红雨伞的无性繁殖的方法 (Asexual propagation method of umbrellas roses ) 是由 不公告发明人 于 2019-12-06 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种红雨伞的无性繁殖方法,包括：(1)外植体预处理；(2)将预处理后的外植体切割成若干个小外植体,每个小外植体带有1-3个茎节,将小外植体接种到诱导培养基上培养至丛生芽形成；(3)分离诱导培养基中的丛生芽,使丛生芽长度控制在2-3cm；将分离后的丛生芽接种至增殖培养基中培养,待新生芽生长至2-3cm,分离新生芽并将其插于增殖培养基中重复继代培养3-4次,获得大量扩繁后的丛生芽；(4)将扩繁后的丛生芽中长度3-5cm的丛生芽从基部自芽块上拆分下来,扦插并定植。该方法不受季节、温度、地域影响就能获得大量的新植株,从而快速建立红雨伞无菌繁殖体系,为保持红雨伞优良的种性提供技术支持,为广大的爱好者提供源源不断地无菌种苗。(The invention relates to a vegetative propagation method of umbrellas rosepellis, which comprises the following steps: (1) pretreating explants; (2) cutting the pretreated explant into a plurality of small explants, wherein each small explant is provided with 1-3 stem nodes, and inoculating the small explants onto an induction culture medium to be cultured until cluster buds are formed; (3) separating cluster buds in the induction culture medium, and controlling the length of the cluster buds to be 2-3 cm; inoculating the separated cluster buds into a multiplication culture medium for culture, separating the new buds when the new buds grow to 2-3cm, and inserting the new buds into the multiplication culture medium for repeated subculture for 3-4 times to obtain a large number of expanded cluster buds; (4) splitting the cluster buds with the length of 3-5cm from the base self-bud blocks after propagation, cutting and planting. The method can obtain a large amount of new plants without being influenced by seasons, temperature and regions, thereby quickly establishing a red umbrella sterile propagation system, providing technical support for keeping excellent seed properties of the red umbrella, and providing continuous sterile seedlings for vast enthusiasts.)

一种红雨伞的无性繁殖的方法

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，更具体地，涉及一种红雨伞的无性繁殖方法。

背景技术

红雨伞，双子叶植物，小二仙草科，挺水性水草。水上草与水中草不同型。水上草具有披针形互生叶，叶色翠绿，叶缘有锯齿。在水中栽培，会出现多种不同的变化。包括叶型可以从披针形转为卵形、不规则裂叶，以至羽状叶等。颜色可由绿色转为橙红，以至深红色。依栽培条件不同而异，其有变化多端的形态。喜好强光和较低水温，在水中生长较慢。物以稀为贵，因此红雨伞常被水草玩家视为红草中的经典，而且红雨伞随着栽培条件的不同，能够变换出不同的颜色，故更加吸引人。红雨伞属有茎类水草，在国内红雨伞组织培养领域还属于空白。

发明内容

针对现有技术存在的技术问题，本发明提出了一种红雨伞的无性繁殖方法，该方法是在无菌条件下，采取适宜培养环境、给予固定光照，诱导红雨伞新的幼苗，逐步形成无菌苗体系，后期可常年提供大量无菌幼苗。该方法易行，操作方便，产量高，克服了水族缸中不易繁殖、繁殖速度较慢的问题.

为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种红雨伞的无性繁殖方法，包括以下步骤：

(1)预处理：选择健壮、无伤残的红雨伞植株经灭菌处理、清洗，得到消毒灭菌后的外植体；

(2)诱导培养：在无菌培养皿中将消毒灭菌后的外植体切割成若干个小外植体，每个小外植体带有1-3个茎节，将小外植体接种到诱导培养基上进行诱导培养7-15天至丛生芽形成；

(3)继代培养：分离诱导培养基中的丛生芽，使丛生芽长度控制在2-3cm；将分离后的丛生芽接种至增殖培养基中进行继代培养，待新生芽生长至2-3cm，分离新生芽并将其斜插或者横置于增殖培养基中重复继代培养3-4次，获得大量扩繁后的丛生芽；

(4)生根定植：分离步骤(3)中扩繁后的丛生芽，将其扦插至水族缸中生根并定植。

进一步地，步骤(1)中外植体灭菌处理、清洗的具体方法为：在自来水快速冲洗20分钟，剔除红雨伞的针形叶片，保护茎段表皮；然后将水流调成刚好成线继续冲洗40分钟；冲洗完成后将外植体置于双氧水中下消毒15-20分钟，再用无菌水漂洗3-5次。

进一步地，所述诱导培养基为：MS培养基+1-2mg/L 6-BA+6-8g/L琼脂+30g/L蔗糖+4-8g/L活性炭+1ml/L植物组织抗菌剂。

进一步地，所述增殖培养基为：MS培养基+1-5mg/L 6-BA+0.5-1mg/L吲哚乙酸+6-8g/L琼脂+30g/L蔗糖。

进一步地，所述诱导培养条件为：光照周期为14h/d，温度25℃，光照3000-5000lx。

进一步地，所述继代培养条件为：光照周期为14h/d，温度25℃，光照3000-5000lx。

进一步地，所述步骤(4)中扩繁后的丛生芽分离方法为：将扩繁后的丛生芽中长度3-5cm的丛生芽从基部自芽块上拆分下来，清洗后移栽。

因此，与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

(1)本发明提出的一种红雨伞的无性繁殖方法，是在无菌条件下，采取适宜培养环境，给予固定光照，直接诱导红雨伞幼芽的生长，可不受季节、温度、地域影响，获得大量的新植株，从而快速建立红雨伞无菌繁殖体系，为保持红雨伞优良的种性提供技术支持，为广大的爱好者提供源源不断地无菌种苗。经实验验证，经过一个月的培养，本发明的组织培养方法可使一个外植体快速获得20±5个新的子代植株。

(2)本发明的组织培养方法中所采用的各组培配方协同配合，组织繁殖周期短，繁殖率高，且通过本发明的组织培养方法无菌培养的红雨伞苗，在自然水体中生根率达90％，植物成活率高达95％以上，实现了红雨伞有效快速的无性繁殖，对于促进观赏水草的生产和新品种的培育、加快水族观赏水草产业的快速发展具有重要作用。

(3)本发明的红雨伞苗无菌苗的组织培养方法简单易行，操作方便，产量高，克服了水族缸中不易繁殖、繁殖速度较慢的问题。

具体实施方式

展示一下实例来具体说明本发明的某些实施例，且不应解释为限制本发明的范围。对本发明公开的内容可以同时从材料、方法和反应条件进行改进，所有这些改进，均应落入本发明的的精神和范围之内。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1

步骤1：配制诱导培养基、增殖培养基

1、本实施例中使用的诱导培养基、增殖培养基均是采用的MS培养基作为基础培养基，MS培养基配方如下：mg/L

表1MS培养基配方

序号	组分	含量(mg/L)	序号	组分	含量(mg/L)
						1	KNO<sub>3</sub>：	1900	11	CuSO<sub>4</sub>.5H<sub>2</sub>O	0.025
2	NH<sub>4</sub>NO<sub>3</sub>	1650	12	CoCL<sub>2</sub>.6H<sub>2</sub>O	0.025
						3	MgSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O	370	13	Na<sub>2</sub>-EDTA	37.3
4	KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>	170	14	FeSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O	27.8
						5	CaCl<sub>2</sub>·2H<sub>2</sub>O	440	15	甘氨酸	2.0
6	MnSO<sub>4</sub>·4H<sub>2</sub>O	22.3	16	盐酸吡哆醇	0.5
						7	ZnSO4·7H<sub>2</sub>O	8.6	17	盐酸硫铵素	0.1
8	H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub>	6.2	18	烟酸	0.5
						9	KI	0.83	19	肌酸	100
10	Na<sub>2</sub>MoO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O	0.25

2、诱导培养基配制

诱导培养基是以MS为基础培养基，并添加6-氨基嘌呤(6-BA)、琼脂粉和蔗糖、活性炭和植物组织抗菌剂(PPM)；诱导培养基的成分浓度为：MS基础培养基11.74g/L、1mg/L的6-BA、7.5g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、4g/L活性炭、1ml/LPPM。

3、增殖培养基配制

增殖培养基是以MS为基础培养基，并添加6-BA、吲哚乙酸(IBA)、琼脂粉和蔗糖；增殖培养基的成分浓度为：MS基础培养基11.74g/L、1mg/L的6-BA、0.5mg/LIBA、7.5g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖。

步骤2：外植体的清洗与消毒

将红雨伞采购回来后，在实验室水族缸培养3-5天，然后取其中健壮、无伤残的植株作为对象，在自来水下冲洗1个小时，前20分钟快速冲洗，剔除红雨伞的针形叶片，保护茎段表皮；然后将水流调成刚好成线继续冲洗40分钟，待用。再将外植体置于双氧水中消毒15分钟，然后用无菌水漂洗3-5次。

步骤3：诱导培养

无菌环境下，将外植体两端各切去0.2cm，再将外植体切成带有1-3个茎节的外植体，生理下端切口向下斜插接种到诱导培养基上；接种后置于恒温光照培养箱中，培养7-15天至丛生芽形成。诱导培养条件为：光照周期为14h/d，温度25℃，光照3000l x。

步骤4：继代培养

将形成的丛生芽沿基部2-3mm处切除，并接种到增殖培养基上，待新生芽生长至2-3cm，斜插或者横置于增殖培养基中重复继代培养3-4次，获得大量扩繁后的丛生芽。增殖培养条件为：光照周期为14h/d，温度25℃，光照3000lx。

步骤5：

在不损害生长点的情况下，将3-5cm的丛生芽从基部自芽块上拆分下来，经清水冲洗掉培养基后，将新的无根植株直接扦插到水族缸中，培养10天后，植物会自行长出根，同时实现定植。成活率大于98％。

本实施例可以由一个红雨伞外植体直接诱导出新植株，通过不断的分离增殖培养供应源源不断的红雨伞种苗，一棵红雨伞经过30天继代培养可以培育出20棵新的子代植株，转入水族箱后存活率大于98％。

实施例2

步骤1：配制诱导培养基和增殖培养基

1、本实施例中配制的诱导、增殖培养基是采用的MS培养基作为基础培养基，MS培养基配方同实施例1所示。

2、诱导培养基配制

诱导培养基是以MS为基础培养基，并添加6-氨基嘌呤(6-BA)、琼脂粉和蔗糖、活性炭和植物组织抗菌剂(PPM)；诱导培养基的成分浓度为：MS基础培养基11.74g/L，1.5mg/L的6-BA、6g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、4g/L活性炭、1ml/LPPM。

3、增殖培养基配制

增殖培养基是以MS为基础培养基，并添加6-BA、吲哚乙酸(IBA)、琼脂粉和蔗糖；增殖培养基的成分浓度为：MS基础培养基11.74g/L，5mg/L的6-BA、0.75mg/LIBA，6g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖。

步骤2：外植体的清洗与消毒

将红雨伞采购回来后，在实验室水族缸培养3-5天，然后取其中健壮、无伤残的植株作为对象，在自来水下冲洗1个小时，前20分钟快速冲洗，剔除红雨伞的针形叶片，保护茎段表皮；然后将水流调成刚好成线继续冲洗40分钟，待用。再将外植体置于双氧水中消毒15分钟，然后用无菌水漂洗3-5次。

步骤3：诱导培养

无菌环境下，将外植体两端各切去0.2cm，再将外植体切成带有1-3个茎节的外植体，生理下端切口向下斜插接种到诱导培养基上；接种后置于恒温光照培养箱中，培养7-15天至丛生芽形成。诱导培养条件为：光照周期为14h/d，温度25℃，光照5000l x。

步骤4：继代培养

将形成的丛生芽沿基部2-3mm处切除，并接种到增殖培养基上，待新生芽生长至2-3cm，斜插或者横置于增殖培养基中重复继代培养3-4次，获得大量扩繁后的丛生芽。增殖培养条件为：光照周期为14h/d，温度25℃，光照5000lx。

步骤5：

在不损害生长点的情况下，将3-5cm的丛生芽从基部自芽块上拆分下来，经清水冲洗掉培养基后，将新的无根植株直接扦插到水族缸中，培养15天后，植物会自行长出根，同时实现定植。成活率大于95％。

本实施例可以由一个红雨伞外植体直接诱导出新植株，通过不断的分离增殖培养供应源源不断的红雨伞种苗，一棵红雨伞经过30天继代培养可以培育出30棵新的子代植株，转入水族箱后存活率大于95％。

实施例3

步骤1：配制诱导培养基和增殖培养基

2、本实施例中配制的诱导、增殖培养基是采用的MS培养基作为基础培养基，MS培养基配方同实施例1所示。

2、诱导培养基配制

诱导培养基是以MS为基础培养基，并添加6-氨基嘌呤(6-BA)、琼脂粉和蔗糖、活性炭和植物组织抗菌剂(PPM)；诱导培养基的成分浓度为：MS基础培养基11.74g/L，2mg/L的6-BA、8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、8g/L活性炭、1ml/LPPM。

3、增殖培养基配制

增殖培养基是以MS为基础培养基，并添加6-BA、吲哚乙酸(IBA)、琼脂粉和蔗糖；增殖培养基的成分浓度为：MS基础培养基11.74g/L，2.5mg/L的6-BA、1mg/LIBA，8g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖。

步骤2：外植体的清洗与消毒

将红雨伞采购回来后，在实验室水族缸培养3-5天，然后取其中健壮、无伤残的植株作为对象，在自来水下冲洗1个小时，前20分钟快速冲洗，剔除红雨伞的针形叶片，保护茎段表皮；然后将水流调成刚好成线继续冲洗40分钟，待用。再将外植体置于双氧水中消毒15分钟，然后用无菌水漂洗3-5次。

步骤3：诱导培养

无菌环境下，将外植体两端各切去0.2cm，再将外植体切成带有1-3个茎节的外植体，生理下端切口向下斜插接种到诱导培养基上；接种后置于恒温光照培养箱中，培养7-15天至丛生芽形成。诱导培养条件为：光照周期为14h/d，温度25℃，光照4000l x。

步骤4：增殖培养

将形成的丛生芽沿基部2-3mm处切除，并接种到增殖培养基上，待新生芽生长至2-3cm，斜插或者横置于增殖培养基中重复继代培养3-4次，获得大量扩繁后的丛生芽。增殖培养条件为：光照周期为14h/d，温度25℃，光照4000lx。

步骤5：

在不损害生长点的情况下，将3-5cm的丛生芽从基部自芽块上拆分下来，经清水冲洗掉培养基后，将新的无根植株直接扦插到水族缸中，培养12天后，植物会自行长出根，同时实现定植。成活率大于97％。

本实施例可以由一个红雨伞外植体直接诱导出新植株，通过不断的分离增殖培养供应源源不断的红雨伞种苗，一棵红雨伞经过30天继代培养可以培育出25棵新的子代植株，转入水族箱后存活率大于97％。

对比例

目前红雨伞的培育主要集中在观赏植物培育基地或者商店，主要方法为：在透明玻璃水缸中扦***一定长度的植株，加水淹没植物至少5厘米，给予一定光照，通过循环水泵保持缸内水体的流动性，待植物长到一定长度后，通过打顶、截短、分枝的方式获得新的无性枝条，进行下一轮繁殖，经过一轮生长的时间在30-40天左右，植物约生长出5-8个新的侧芽，在扦插10天后开始生根，生根数5根左右，根长度不一，经过30天生长，根平均长度可以达到4厘米左右。该方法培育的红雨伞苗移栽到生态缸中后的成活率是90％。

实施例1-3的试验结果详见表2。

表2实施例1-3和对比例的试验结果

由表2可知，本发明的组织培养方法中所采用的各组培配方协同配合，组织繁殖周期短，繁殖率高，且通过本发明的组织培养方法无菌培养的红雨伞苗，在自然水体中生根率达90％，植物成活率高达95％以上，实现了红雨伞有效快速的无性繁殖。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。