阅读说明：本技术 一种纯化透皮肽的方法 (Method for purifying transdermal peptide ) 是由 张鹏成 于 2019-11-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种纯化透皮肽的方法,其方法包括以下步骤：步骤1：将透皮肽粗品溶解混合溶液中获得粗肽溶液,其中透皮肽粗品与混合溶液重量份之比为1：20-30,过滤；步骤2：取所述粗肽溶液,用C4相硅胶短柱进行梯度洗脱纯化,流动相为两相,流动相：A相：是含体积浓度为0.25-0.4％甲酸水溶液,B相：是体积浓度为0.25-0.4％甲酸乙腈溶液,进行梯度洗脱分离纯化,收集目的峰值的肽溶液；步骤3：将分离纯化后的纯度99％以上浓度目的所述肽溶液进行减压旋蒸浓缩,浓缩液收集,得到纯化的透皮肽；利用所提供的方法,获得99％的透皮肽,收率为72％及其以上,克服传统纯化透皮肽的方法纯化效率低,得到的透皮肽纯度低的问题。(The invention discloses a method for purifying transdermal peptide, which comprises the following steps: step 1: dissolving the transdermal peptide crude product into the mixed solution to obtain a crude peptide solution, wherein the weight ratio of the transdermal peptide crude product to the mixed solution is 1: 20-30, filtering; step 2: taking the crude peptide solution, and performing gradient elution purification by using a C4 phase silica gel short column, wherein the mobile phase is two phases: phase A: is a formic acid aqueous solution with the volume concentration of 0.25-0.4%, phase B: performing gradient elution, separation and purification on 0.25-0.4% formic acid acetonitrile solution, and collecting a peptide solution of a target peak value; and step 3: carrying out reduced pressure rotary evaporation concentration on the separated and purified peptide solution with the purity of more than 99% and the target concentration, and collecting the concentrated solution to obtain purified transdermal peptide; by utilizing the provided method, 99% of transdermal peptide is obtained, the yield is 72% or more, and the problems of low purification efficiency and low purity of the obtained transdermal peptide in the traditional transdermal peptide purification method are solved.)

一种纯化透皮肽的方法

技术领域

本发明属于透皮肽纯化领域，具体涉及一种纯化透皮肽的方法。

背景技术

透皮肽是一些具有细胞膜穿透能力的小分子多肽，可有效携带比其分子质量大倍的外源性疏水大分子进入细胞，并对宿主细胞没有显著毒副作用。透皮肽存在多种穿膜机制，诸如直接渗透到细胞膜，通过易位形成的一个暂时性的结构和内吞作用介导入膜等。具体的穿膜机制还不清楚，但普遍认为透皮肽与细胞表面负电荷物质的直接接触是必不可少的。透皮肽的穿膜性质，使其在分子生物学、药学、细胞生物学、疫苗学甚至影像学上有广泛的应用前景。

透皮肽作为原料时HPLC纯度≥99％，然而通过合成得到的透皮肽粗品中含有很多杂质，需要进一步提纯。传统纯化透皮肽的方法纯化效率低，得到的透皮肽纯度低。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种纯化透皮肽的方法，解决了现有技术中传统纯化透皮肽的方法纯化效率低，得到的透皮肽纯度低的问题。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种纯化透皮肽的方法，其方法包括以下步骤：

步骤1：将透皮肽粗品溶解混合溶液中获得粗肽溶液,其中透皮肽粗品与混合溶液重量份之比为1：20-30，过滤；

步骤2：取所述粗肽溶液，用C4相硅胶短柱进行梯度洗脱纯化，流动相为两相，流动相：A相：是含体积浓度为0.25-0.4％甲酸水溶液，B相：是体积浓度为0.25-0.4％甲酸乙腈溶液，进行梯度洗脱分离纯化，收集目的峰值的肽溶液；

步骤3：将分离纯化后的纯度99％以上浓度目的所述肽溶液进行减压旋蒸浓缩，浓缩液收集，得到纯化的透皮肽。

进一步地，在步骤1中，所述混合溶液为***和戊烷按照质量比1：2的混合，混合溶液的质量浓度为30％。

进一步地，浸提的条件包括，在步骤1中，所述溶解条件为：在35-40℃下溶解0.5-0.8h。

进一步地，所述C4硅胶柱尺寸为：5μm，4.6×250mm。

进一步地，在步骤2中，所述流动相梯度选择0到20分钟A：B由100：0到45：55，20到40分钟A：B由45：55到70：30，然后按A：B为70：30恒流。

进一步地，所述流动相的流速为6～8mL/分钟。

本发明的有益效果：

本发明利用所提供的方法，获得99％的透皮肽，收率为72％及其以上，克服传统纯化透皮肽的方法纯化效率低，得到的透皮肽纯度低的问题。

具体实施方式

下面将本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一

一种纯化透皮肽的方法，其方法包括以下步骤：

步骤1：将透皮肽粗品溶解混合溶液中获得粗肽溶液,其中混合溶液采用***和戊烷按照质量比1：2的混合，混合溶液的质量浓度为30％，其中透皮肽粗品与混合溶液重量份之比为1：20-30，其中溶解条件为：在35-40℃下溶解0.5-0.8h，溶解完成后进行过滤，取得粗肽溶液；

步骤2：取所述粗肽溶液，用C4相硅胶短柱进行梯度洗脱纯化，其中C4硅胶柱尺寸为：5μm，4.6×250mm，流动相为两相，流动相：A相：是含体积浓度为0.25％甲酸水溶液，B相：是体积浓度为0.25％甲酸乙腈溶液，流动相梯度选择0到20分钟A：B由100：0到45：55，20到40分钟A：B由45：55到70：30，然后按A：B为70：30恒流，流动相的流速为6～8mL/分钟，进行梯度洗脱分离纯化，收集目的峰值的肽溶液；

步骤3：将分离纯化后的纯度99％以上浓度目的所述肽溶液进行减压旋蒸浓缩，浓缩液收集，得到纯化的透皮肽。

经上述步骤得到纯度大于99％的透皮肽，收率为72％。

实施例二

一种纯化透皮肽的方法，其方法包括以下步骤：

步骤1：将透皮肽粗品溶解混合溶液中获得粗肽溶液,其中混合溶液采用***和戊烷按照质量比1：2的混合，混合溶液的质量浓度为30％，其中透皮肽粗品与混合溶液重量份之比为1：20-30，其中溶解条件为：在35-40℃下溶解0.5-0.8h，溶解完成后进行过滤，取得粗肽溶液；

步骤2：取所述粗肽溶液，用C4相硅胶短柱进行梯度洗脱纯化，其中C4硅胶柱尺寸为：5μm，4.6×250mm，流动相为两相，流动相：A相：是含体积浓度为0.4％甲酸水溶液，B相：是体积浓度为0.4％甲酸乙腈溶液，流动相梯度选择0到20分钟A：B由100：0到45：55，20到40分钟A：B由45：55到70：30，然后按A：B为70：30恒流，流动相的流速为6～8mL/分钟，进行梯度洗脱分离纯化，收集目的峰值的肽溶液；

步骤3：将分离纯化后的纯度99％以上浓度目的所述肽溶液进行减压旋蒸浓缩，浓缩液收集，得到纯化的透皮肽。

经上述步骤得到纯度大于99％的透皮肽，收率为73.5％。

实施例三

一种纯化透皮肽的方法，其方法包括以下步骤：

步骤1：将透皮肽粗品溶解混合溶液中获得粗肽溶液,其中混合溶液采用***和戊烷按照质量比1：2的混合，混合溶液的质量浓度为30％，其中透皮肽粗品与混合溶液重量份之比为1：20-30，其中溶解条件为：在35-40℃下溶解0.5-0.8h，溶解完成后进行过滤，取得粗肽溶液；

步骤2：取所述粗肽溶液，用C4相硅胶短柱进行梯度洗脱纯化，其中C4硅胶柱尺寸为：5μm，4.6×250mm，流动相为两相，流动相：A相：是含体积浓度为0.25％甲酸水溶液，B相：是体积浓度为0.4％甲酸乙腈溶液，流动相梯度选择0到20分钟A：B由100：0到45：55，20到40分钟A：B由45：55到70：30，然后按A：B为70：30恒流，流动相的流速为6～8mL/分钟，进行梯度洗脱分离纯化，收集目的峰值的肽溶液；

步骤3：将分离纯化后的纯度99％以上浓度目的所述肽溶液进行减压旋蒸浓缩，浓缩液收集，得到纯化的透皮肽。

经上述步骤得到纯度大于99％的透皮肽，收率为73％。

实施例四

一种纯化透皮肽的方法，其方法包括以下步骤：

步骤1：将透皮肽粗品溶解混合溶液中获得粗肽溶液,其中混合溶液采用***和戊烷按照质量比1：2的混合，混合溶液的质量浓度为30％，其中透皮肽粗品与混合溶液重量份之比为1：20-30，其中溶解条件为：在35-40℃下溶解0.5-0.8h，溶解完成后进行过滤，取得粗肽溶液；

步骤2：取所述粗肽溶液，用C4相硅胶短柱进行梯度洗脱纯化，其中C4硅胶柱尺寸为：5μm，4.6×250mm，流动相为两相，流动相：A相：是含体积浓度为0.4％甲酸水溶液，B相：是体积浓度为0.25％甲酸乙腈溶液，流动相梯度选择0到20分钟A：B由100：0到45：55，20到40分钟A：B由45：55到70：30，然后按A：B为70：30恒流，流动相的流速为6～8mL/分钟，进行梯度洗脱分离纯化，收集目的峰值的肽溶液；

步骤3：将分离纯化后的纯度99％以上浓度目的所述肽溶液进行减压旋蒸浓缩，浓缩液收集，得到纯化的透皮肽。

经上述步骤得到纯度大于99％的透皮肽，收率为74％。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。