阅读说明：本技术 一种环保真菌保存液及其制备方法 (Environment-friendly fungus preservation solution and preparation method thereof ) 是由 不公告发明人 于 2019-10-24 设计创作，主要内容包括：本发明提出了一种环保真菌保存液,由以下原料制备而成：中药抗菌水提物、维生素C、稳定剂、固定剂、丙三醇、乙酸和去离子水；所述环保真菌保存液的pH在3.8-4.2之间。本发明通过添加中药抗菌水提物,该组合抗菌中药材得到的水提物具有较好的杀死细菌的效果,具有广谱高效的效果,但对真菌的威力不大,适宜作为真菌的保存液添加物。(The invention provides an environment-friendly fungus preservation solution which is prepared from the following raw materials: traditional Chinese medicine antibacterial water extract, vitamin C, stabilizer, fixative, glycerol, acetic acid and deionized water; the pH value of the environment-friendly fungus preservation solution is between 3.8 and 4.2. According to the invention, by adding the traditional Chinese medicine antibacterial aqueous extract, the aqueous extract obtained by combining the antibacterial traditional Chinese medicines has a good effect of killing bacteria, has a broad-spectrum and efficient effect, has little power on fungi, and is suitable for being used as a preservation solution additive of the fungi.)

一种环保真菌保存液及其制备方法

技术领域

本发明涉及真菌保存技术领域，具体涉及一种环保真菌保存液及其制备方法。

背景技术

自然界真菌种类众多，很多种类可形成子实体，其形态复杂，形状因菌类不同而各异，有伞状、笔状、头状、耳状、舌状、球状、花朵状、树枝状等，其中绝大多数属于外形像伞的种类，常常叫做伞菌，如蜡伞科、鹅膏菌科、蘑菇科等；少数属于非伞形的多孔菌类和子囊菌类，如木耳科、马勃科、羊肚菌科、麦角菌科等。

真菌子实体标本的保存方法主要有两种，一种是传统的干标本保存方法，标本干燥后，子实体形态变化较大，子实体的形态和颜色变化明显，且易虫蛀或霉变，不利于标本保存或后续研究；另外一种方法是采用保存液进行保存，主要是采用甲醛溶液保存，真菌子实体的形态基本不改变，标本得到较好的保存。真菌子实体浸泡标本溶液多以甲醛溶液为主，但由于甲醛易挥发，并可发生氧化、聚合沉淀，导致浓度下降而不利于标本保存，重要的是对人体毒性作用大，配制一种既能长期保存真菌子实体标本，又安全无毒的标本保存液显得格外重要。

发明内容

本发明提供一种环保真菌保存液及其制备方法，其目的在于，提供一种环保真菌保存液，通过添加中药抗菌水提物，该组合抗菌中药材得到的水提物具有较好的杀死细菌的效果，具有广谱高效的效果，但对真菌的威力不大，适宜作为真菌的保存液添加物。

本发明提供一种环保真菌保存液，由以下原料制备而成：中药抗菌水提物、维生素C、稳定剂、固定剂、丙三醇、乙酸和去离子水；所述环保真菌保存液的pH在3.8-4.2之间。

作为本发明进一步的改进，由以下原料按重量份制备而成：中药抗菌水提物2-5份、维生素C 2-7份、稳定剂1-3份、固定剂1-2份、丙三醇10-20份、乙酸适量和去离子水100-150份，所述乙酸用于调节保存液的pH值。

作为本发明进一步的改进，由以下原料按重量份制备而成：中药抗菌水提物3-4份、维生素C 3-6份、稳定剂2-3份、固定剂1.2-1.7 份、丙三醇12-18份、乙酸适量和去离子水120-130份，所述乙酸用于调节保存液的pH值。

作为本发明进一步的改进，由以下原料按重量份制备而成：中药抗菌水提物3.2份、维生素C 5份、稳定剂2.4份、固定剂1.5份、丙三醇16份、乙酸适量和去离子水125份，所述乙酸用于调节保存液的pH值。

作为本发明进一步的改进，所述中药抗菌水提物由以下原料制备而成：五倍子、板蓝根、蒲公英、柴胡、五指毛桃、连翘、贝母、苍术、兔耳草和甘青乌头。

作为本发明进一步的改进，所述中药抗菌水提物由以下原料按重量份制备而成：五倍子5-10份、板蓝根10-15份、蒲公英5-15份、柴胡5-10份、五指毛桃10-15份、连翘10-15份、贝母5-10份、苍术10-15份、兔耳草5-10份和甘青乌头5-15份。

作为本发明进一步的改进，所述中药抗菌水提物由以下方法制备：按比例称取各原料中药材，洗净，干燥，粉碎，混合均匀后，按固液比1:10浸泡到去离子水中，500-700W微波加热提取1-2h，过滤，液体减压蒸馏浓缩至密度为1.2-1.5g/cm³，得到中药抗菌水提物。

作为本发明进一步的改进，所述稳定剂选自MgSO₄、NaCl、MgCl₂、甘露醇、山梨醇或蔗糖中的一种或几种。

作为本发明进一步的改进，所述固定剂选自戊二醛、丙烯醛、丹宁酸或高锰酸钾中的一种或几种。

本发明进一步保护一种制备上述的环保真菌保存液的方法，包括以下步骤：将中药抗菌水提物和维生素C溶于去离子水中，加入稳定剂、固定剂和丙三醇，超声分散均匀后，滴加乙酸调节溶液pH值在 3.8-4.2之间即可。

本发明具有如下有益效果：本发明通过添加中药抗菌水提物，该组合抗菌中药材得到的水提物具有较好的杀死细菌的效果，具有广谱高效的效果，但对真菌的威力不大，适宜作为真菌的保存液添加物；

本发明通过添加稳定剂和固定剂，有效保持真菌的形态不被改变，有助于后期研究工作，同时保存液不添加任何有毒的挥发性物质，以环保的水为溶剂，使用安全无毒副作用，且便于保存和贮藏，具有广阔的应用前景。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

原料组成(重量份)：中药抗菌水提物2份、维生素C 2份、稳定剂1份、固定剂1份、丙三醇10份、乙酸适量和去离子水100份，所述乙酸用于调节保存液的pH值在3.8。

中药抗菌水提物由以下原料按重量份制备而成：五倍子5份、板蓝根10份、蒲公英5份、柴胡5份、五指毛桃10份、连翘10份、贝母5份、苍术10-15份、兔耳草5份和甘青乌头5份。

中药抗菌水提物由以下方法制备：按比例称取各原料中药材，洗净，干燥，粉碎，混合均匀后，按固液比1:10浸泡到去离子水中，500W微波加热提取1h，过滤，液体减压蒸馏浓缩至密度为1.2g/cm³，得到中药抗菌水提物。

环保真菌保存液的制备方法包括以下步骤：将中药抗菌水提物和维生素C溶于去离子水中，加入稳定剂、固定剂和丙三醇，超声分散均匀后，滴加乙酸调节溶液pH值在3.8。

实施例2

原料组成(重量份)：中药抗菌水提物5份、维生素C 7份、稳定剂3份、固定剂2份、丙三醇20份、乙酸适量和去离子水150份，所述乙酸用于调节保存液的pH值为4.2。

中药抗菌水提物由以下原料按重量份制备而成：五倍子10份、板蓝根15份、蒲公英15份、柴胡10份、五指毛桃15份、连翘15 份、贝母10份、苍术15份、兔耳草10份和甘青乌头15份。

中药抗菌水提物由以下方法制备：按比例称取各原料中药材，洗净，干燥，粉碎，混合均匀后，按固液比1:10浸泡到去离子水中， 700W微波加热提取2h，过滤，液体减压蒸馏浓缩至密度为1.5g/cm³，得到中药抗菌水提物。

环保真菌保存液的制备方法包括以下步骤：将中药抗菌水提物和维生素C溶于去离子水中，加入稳定剂、固定剂和丙三醇，超声分散均匀后，滴加乙酸调节溶液pH值在4.2。

实施例3

原料组成(重量份)：中药抗菌水提物3份、维生素C 3份、稳定剂2份、固定剂1.2份、丙三醇12份、乙酸适量和去离子水120 份，所述乙酸用于调节保存液的pH值在3.9。

中药抗菌水提物由以下原料按重量份制备而成：五倍子6份、板蓝根11份、蒲公英7份、柴胡6份、五指毛桃11份、连翘11份、贝母6份、苍术10-15份、兔耳草7份和甘青乌头8份。

中药抗菌水提物由以下方法制备：按比例称取各原料中药材，洗净，干燥，粉碎，混合均匀后，按固液比1:10浸泡到去离子水中， 550W微波加热提取1h，过滤，液体减压蒸馏浓缩至密度为1.25g/cm³，得到中药抗菌水提物。

环保真菌保存液的制备方法包括以下步骤：将中药抗菌水提物和维生素C溶于去离子水中，加入稳定剂、固定剂和丙三醇，超声分散均匀后，滴加乙酸调节溶液pH值在3.9。

实施例4

原料组成(重量份)：中药抗菌水提物4份、维生素C 6份、稳定剂3份、固定剂1.7份、丙三醇18份、乙酸适量和去离子水130 份，所述乙酸用于调节保存液的pH值在4.1。

中药抗菌水提物由以下原料按重量份制备而成：五倍子9份、板蓝根13份、蒲公英12份、柴胡8份、五指毛桃13份、连翘14份、贝母8份、苍术14份、兔耳草8份和甘青乌头12份。

中药抗菌水提物由以下方法制备：按比例称取各原料中药材，洗净，干燥，粉碎，混合均匀后，按固液比1:10浸泡到去离子水中， 650W微波加热提取2h，过滤，液体减压蒸馏浓缩至密度为1.45g/cm³，得到中药抗菌水提物。

环保真菌保存液的制备方法包括以下步骤：将中药抗菌水提物和维生素C溶于去离子水中，加入稳定剂、固定剂和丙三醇，超声分散均匀后，滴加乙酸调节溶液pH值在4.1。

实施例5

原料组成(重量份)：中药抗菌水提物3.2份、维生素C 5份、稳定剂2.4份、固定剂1.5份、丙三醇16份、乙酸适量和去离子水 125份，所述乙酸用于调节保存液的pH值在4。

中药抗菌水提物由以下原料按重量份制备而成：五倍子7份、板蓝根12份、蒲公英10份、柴胡7份、五指毛桃12份、连翘12份、贝母7份、苍术12份、兔耳草7份和甘青乌头10份。

中药抗菌水提物由以下方法制备：按比例称取各原料中药材，洗净，干燥，粉碎，混合均匀后，按固液比1:10浸泡到去离子水中， 600W微波加热提取1-2h，过滤，液体减压蒸馏浓缩至密度为 1.35g/cm³，得到中药抗菌水提物。

环保真菌保存液的制备方法包括以下步骤：将中药抗菌水提物和维生素C溶于去离子水中，加入稳定剂、固定剂和丙三醇，超声分散均匀后，滴加乙酸调节溶液pH值在4。

对比例1

与实施例5相比，未添加中药抗菌水提物，其他原料相同。

对比例2

与实施例5相比，未添加稳定剂，其他原料相同。

对比例3

与实施例5相比，未添加固定剂，其他原料相同。

对比例4

与实施例5相比，中药抗菌水提物原料为蒲公英10份、柴胡7 份、五指毛桃12份、连翘12份、贝母7份、苍术12份、兔耳草7 份和甘青乌头10份。

对比例5

与实施例5相比，中药抗菌水提物原料为五倍子7份、板蓝根 12份、蒲公英10份、贝母7份、苍术12份、兔耳草7份和甘青乌头10份。

对比例6

与实施例5相比，原料的配比不同。

原料组成(重量份)：中药抗菌水提物1份、维生素C1份、稳定剂10份、固定剂10份、丙三醇20份、乙酸适量和去离子水150 份，所述乙酸用于调节保存液的pH值在4。

对比例7

与实施例5相比，乙酸用于调节pH值为6.5。

测试例1

将本发明实施例5和对比例1-7以及市售同类产品进行保存的较有代表性的植物病原真菌标本镜检结果，结果见表1-9。

采集并选择病征显著,无杂菌的植物病害新鲜标本，用单面刀片在病部刮取所需的病原真菌，然后用挑针将刀片上的病原物刮洗入盛有环保真菌保存液的表面皿中(可根据所需病原物的多少反复刮取)。最后用吸管将表面皿中的病原真菌连同环保真菌保存液一起吸入已洗净晾干备用的试剂瓶中,盖好瓶盖,贴上标签。置于室温下保存。使用时,随取随用。为证实环保真菌保存液保存植物病原真菌标本的可靠性,每半年镜检一次。在镜检过程中,分别观察各个亚门真菌制作成的标本,主要观察其形态特征的变化情况。每个标本镜检完毕后,及时将镜检结果和时间记录下来。

表1实施例5保存液保存情况表

表2对比例1保存液保存情况表

表3对比例2保存液保存情况表

表4对比例3保存液保存情况表

表5对比例4保存液保存情况表

表6对比例5保存液保存情况表

表7对比例6保存液保存情况表

表8对比例7保存液保存情况表

表9市售同类保存液保存情况表

注：-表示标本形态模糊或已变形；+表示标本形态清晰略变形； ++表示清晰不变形；+++表示最清晰，完好如初。

由上表可知，本发明实施例5制备的环保真菌保存液相较于市售同类产品，真菌保存时长与清晰度明显优于市售同类产品。

对比例1中未添加中药抗菌水提物，真菌的保存时长明显减少，杂菌增多，且清晰度不佳；对比例2中未添加稳定剂，对比例3中未添加固定剂，两者的真菌保存清晰度较差，大部分标本形态模糊或已变形；对比例4和对比例5中中药抗菌水提物中药材种类与少于实施例5中中药抗菌水提物，其抑菌效果明显较差，真菌的保存时长明显减少，杂菌增多，且清晰度不佳；可见，中药抗菌水提物中各原料药之间具有协同增效的作用。对比例6中原料的配比不同，其对于真菌的保存效果较差。对比例7中保存液的pH值为6.5，不适合真菌保存。

与现有技术相比，本发明通过添加中药抗菌水提物，该组合抗菌中药材得到的水提物具有较好的杀死细菌的效果，具有广谱高效的效果，但对真菌的威力不大，适宜作为真菌的保存液添加物；

本发明通过添加稳定剂和固定剂，有效保持真菌的形态不被改变，有助于后期研究工作，同时保存液不添加任何有毒的挥发性物质，以环保的水为溶剂，使用安全无毒副作用，且便于保存和贮藏，具有广阔的应用前景。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。